nghiên cứu bào chế thuốc dán thấm qua da scopolamin 1,5 mg

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH VŨ THỊ HUỲNH HÂN NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ THUỐC DÁN THẤM QUA DA SCOPOLAMIN 1,5 mg Chuyên ngành: Bào chế Mã số: 62.73.01.05 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC TP HỒ CHÍ MINH - 2013 Cơng trình hồn thành tại: KHOA DƯỢC ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS LÊ HẬU GS.TS LÊ QUAN NGHIỆM Phản biện 1: PGS.TS NGUYỄN THANH HẢI ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI Phản biện 2: PGS.TS PHẠM THỊ MINH HUỆ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI Phản biện 3: PGS.TS MAI PHƯƠNG MAI ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH Luận án bảo vệ Hội đồng chấm luận án cấp Trường họp tại: ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH vào lúc 30 ngày tháng 10 năm 2013 Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Quốc gia Việt Nam - Thư viện Khoa học Tổng hợp TPHCM - Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU CỦA TÁC GIẢ ĐÃ CƠNG BỐ CĨ LIÊN QUAN ĐẾN ĐỀ TÀI LUẬN ÁN Vũ Thị Huỳnh Hân, Lê Quan Nghiệm, Lê Hậu, Nguyễn Thiện Hải, Hà Thị Hằng Nga (2011), Ảnh hưởng chất tăng thấm lên tính thấm scopolamin qua da chuột, Tạp chí Y học TP Hồ Chí Minh, tập 15, số 1, trang 74 Vũ Thị Huỳnh Hân, Lê Quan Nghiệm, Lê Hậu, Nguyễn Thiện Hải, (2011), Ảnh hưởng dính lên tính thấm scopolamin qua da chuột cống trắng, Tạp chí Y học TP Hồ Chí Minh, tập 15, số 1, trang 80 Vũ Thị Huỳnh Hân, Lê Quan Nghiệm, Lê Hậu, Nguyễn Thiện Hải, (2012), Nghiên cứu xây dựng công thức bào chế hệ trị liệu qua da chứa scopolamin, Tạp chí Dược học Bộ Y Tế, số 439 năm 52, trang 6-9 Vũ Thị Huỳnh Hân, Nguyễn Ngọc Sao Mai, Nguyễn Quang Nam, Trần Hùng, Lê Hậu, Lê Quan Nghiệm (2013), Đánh giá tương đương sinh học thuốc dán hấp thu qua da chứa scopolamin 1,5 mg, Tạp chí Dược học Bộ Y Tế, số 441 năm 53, trang 5-8 GIỚI THIỆU LUẬN ÁN Đặt vấn đề Hệ trị liệu qua da với dạng bào chế thuốc dán, gọi thuốc dán thấm qua da (TTS) thiết kế cho dược chất giải phóng, hấp thu qua da theo mức độ tốc độ xác định để có tác động tồn thân kéo dài với ưu điểm: hấp thu thuốc qua da loại bỏ bất lợi ảnh hưởng yếu tố sinh lý ống tràng vị pH, thực phẩm, nước uống, nhu động ruột Thuốc đưa trực tiếp vào tuần hồn chung, khơng bị chuyển hóa qua gan lần đầu, tiện lợi hữu hiệu so với đường uống đường tiêm, linh động sử dụng, giảm nồng độ thuốc máu cách gỡ bỏ lớp thuốc dán Năm 1980, Transderm - Scop công ty dược phẩm ALZA, Mỹ sản xuất, dạng thuốc TTS chứa hoạt chất scopolamin có tác dụng chống nơn di chuyển, đến có thêm số biệt dược Scopoderm TTS, Transderm scop, Transderm-V (Novartis) Các TTS chứa scopolamin sử dụng phổ biến Việt Nam Ariel (Caleb pharma Taiwan) Kimite (Myung Moon Korea) Ưu điểm dạng thuốc kiểm sốt tốc độ phóng thích theo thời gian nên trì ổn định nồng độ thuốc máu, giảm tác dụng phụ tác dụng kéo dài 72 Mục tiêu luận án Nghiên cứu bào chế thuốc dán thấm qua da scopolamin (scopolamin TTS) 1,5 mg đạt tiêu chuẩn sở Nội dung nghiên cứu luận án Bào chế scopolamin TTS 1,5 mg phóng thích kéo dài 72 Xây dựng tiêu chuẩn sở scopolamin TTS Nghiên cứu độ ổn định ước tính tuổi thọ sản phẩm Sơ đánh giá sinh khả dụng scopolamin TTS 1,5 mg với Ariel TDDS (Caleb pharmaceutical Inc.Đài Loan) 2 Tính cấp thiết đề tài Do ưu điểm triển vọng phát triển dạng thuốc này, việc nghiên cứu bào chế dạng thuốc dán thấm qua da với hoạt chất có nhu cầu trị liệu cao, có danh mục thuốc thiết yếu Việt Nam, thay dược phẩm ngoại nhập, yêu cầu thiết góp phần thúc đẩy ngành công nghiệp dược Việt Nam phát triển dạng bào chế Tại Việt Nam, chưa có chế phẩm dạng thuốc dán thấm qua da có chứa hoạt chất scopolamin sản xuất nước Những đóng góp luận án Thuốc dán thấm qua da nghiên cứu với thiết kế dược chất tan dính Duro-tak® (DT) có cấu trúc lớp Công thức xây dựng với dược chất scopolamin hydrobromid (SH) bền với nhiệt độ acid scopolamin base, có sử dụng chất tăng thấm DMSO với nồng độ thấp mà đạt hiệu tăng nồng độ dược chất thấm qua da, đảm bảo an toàn cho người sử dụng, thành công lĩnh vực bào chế Đề tài xây dựng phương pháp định lượng SH huyết tương người phương pháp HPLC đầu dò ghép lần khối phổ phù hợp với điều kiện sản xuất Việt Nam Các giá trị LLOQ 0,1 ng/ml giới hạn phát 0,02 ng/ml đủ để xác định nồng độ scopolamin huyết tương NTN sử dụng scopolamin TTS Phương pháp ứng dụng thành công đánh giá sinh khả dụng scopolamin TTS 1,5 mg Bố cục luận án Luận án gồm: 146 trang, đặt vấn đề trang, tổng quan 34 trang, đối tượng phương pháp nghiên cứu 24 trang, kết nghiên cứu 73 trang, bàn luận 10 trang, kết luận đề nghị trang, đóng góp trang Luận án có 55 bảng, 28 hình, 92 tài liệu tham khảo, gồm 12 tài liệu tiếng Việt 80 tài liệu tiếng Anh, 14 phụ lục thể kết thực nghiệm Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Trình bày số vấn đề dạng bào chế thuốc dán hấp thu qua da; thành phần TTS có cấu trúc lớp; biện pháp làm tăng tính thấm qua da scopolamin hydrobromid 1.2 Scopolamin giới thiệu cấu trúc, tính chất, tác dụng, số chế phẩm TTS chứa scopolamin thị trường 1.3 Nêu tóm tắt phương pháp đánh giá chất lượng TTS cụ thể với tính kích ứng thuộc tính kết dính 1.4 Tổng quan độ phóng thích thấm qua da in vitro TTS Ngoài phương pháp đánh giá sinh khả dụng dạng TTS nêu tóm tắt Chương NGUYÊN LIỆU, THIẾT BỊ VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu thiết bị 2.1.1 Nguyên liệu Nguyên liệu, hóa chất, tá dược đạt tiêu chuẩn nhà sản xuất phân tích Dung môi để định lượng SH loại dùng cho HPLC Da chuột cô lập lấy từ chuột Sprague Dawley®, bảo quản điều kiện lạnh (-20oC) Thuốc đối chiếu thuốc dán Ariel TDDS công ty Caleb pharmaceutical, Inc Đài Loan Số lô: PBA 9038, hạn dùng: 9/2012 sử dụng để nghiên cứu bào chế từ tháng 7-12 /2010 Số lô: PBA 0073, hạn dùng: 11/2013 sử dụng để nghiên cứu sinh khả dụng từ tháng 3-8/2011 2.1.2 Thiết bị Sử dụng thiết bị bào chế phân tích tin cậy trang bị phịng thí nghiệm Khoa Dược Đại học Y Dược, Viện Kiểm Nghiệm Thuốc, Trung Tâm Kiểm Nghiệm Thuốc TP HCM, Khoa Dược Đại học Sungkyunkwan Hàn Quốc 2.1.3 Người tình nguyện (NTN) 12 NTN khỏe mạnh (5 nam, nữ) tuổi từ 24-41 tuổi, cân nặng từ 4266 kg, số BMI từ 19,4 - 23,1 NTN có kết xét nghiệm đạt giới hạn bình thường 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Phương pháp bào chế scopolamin TTS 2.2.1.1 Bào chế scopolamin TTS Scopolamin TTS bào chế phương pháp hòa tan bốc dung môi với thiết kế dược chất tan dính có cấu trúc lớp Để lựa chọn cơng thức tốt xây dựng quy trình bào chế phù hợp, cần khảo sát ảnh hưởng chất tăng thấm, dính, ảnh hưởng thời gian lên khả thấm SH TTS qua da chuột cô lập 2.2.1.2 Phương pháp đánh giá tốc độ thấm SH qua da chuột cô lập Tốc độ thấm dược chất yếu tố quan trọng định đến chất lượng thuốc dán Thực nghiệm đánh giá tốc độ thấm qua da chuột tiến hành thơng qua tế bào khuếch tán Franz (diện tích tiếp xúc 3,14 cm2, thể tích khoang nhận 15,5 ml), mơi trường khuếch tán dung dịch đệm phosphat pH 7,4, ổn định nhiệt độ 32 ± 0,5 oC, định lượng hàm lượng SH phương pháp HPLC Tốc độ thấm ngoại suy từ đồ thị phóng thích dược chất theo thời gian Dựa vào tốc độ này, xác định hàm lượng dược chất kích thước thuốc dán 2.2.1.3 Xây dựng quy trình định lượng (SH) HPLC Độ tan SH, hàm lượng SH scopolamin TTS định lượng phương pháp HPLC Điều kiện sắc ký: Cột Knauer ZC 81 (250 mm x 4,6 mm; 5µm); Pha động: methanol : đệm phosphat pH 7,4 (40:60), Tốc độ dòng: 1,0 ml/phút; Detector UV-Vis đặt bước sóng 215 nm; Thể tích tiêm mẫu 100 µl 2.2.2 Phương pháp đánh giá tiêu chuẩn chất lượng scopolamin TTS 2.2.2.1 Yêu cầu chất lượng scopolamin TTS Tính chất: dựa vào cảm quan, scopolamin TTS phải đồng nhất, khơng có bọt khí, dược chất khơng bị kết tinh Độ đồng diện tích: thử theo DĐVN IV-2009, phụ lục 1.9 Độ đồng bề dày: đo bề dày thuốc dán vị trí khác Bề dày sản phẩm phải nằm giới hạn quy định Định lượng: phương pháp HPLC, hàm lượng scopolamin miếng thuốc dán phải đạt từ 90,0 - 120,0% so với hàm lượng ghi nhãn Định tính: Trên sắc ký đồ phần định lượng, thời gian lưu pic dung dịch thử sai lệch không 1,0% so với thời gian lưu pic SH dung dịch chuẩn Phải cho phản ứng đặc trưng ion bromid Độ đồng hàm lượng: thử theo DĐVN IV-2009, phụ lục 1.9 2.2.2.2 Đánh giá tính kích ứng da scopolamin TTS Phương pháp thử: dựa xuất màu phẩm xanh Evans, dùng phẩm màu thuộc loại keo, xanh lam Evans để phát sớm dễ dàng hư hại mao mạch sau bị kích ứng Đánh giá tính kích ứng da scopolamin TTS thực da thỏ: quan sát da bụng thỏ từ 15-120 phút sau tiêm xuất màu xanh Evans Chế phẩm khơng gây kích ứng da, tương ứng với điểm kích ứng khơng q 0,5 2.2.2.3 Đánh giá thuộc tính kết dính scopolamin TTS Thuộc tính kết dính TTS đánh giá so sánh phương pháp vòng lặp dịch chuyển nhanh máy (Chatillon DFM 10, scale Co InC New york) (8 Bank oven shear HT-8 ChemInstruments Fairfield, Ohio, USA) 2.2.2.4 Thử độ hòa tan scopolamin TTS Dùng trắc nghiệm hòa tan với thiết bị số Tham khảo Dược điển Mỹ (USP 29), u cầu tốc độ phóng thích SH scopolamin TTS, thời điểm: thứ 6, 24 36 phải đạt 7,5 đến 16 µg/giờ/cm2, 1,5 đến 6,5 µg/giờ/ cm2 1,5 đến 6,5 µg/giờ/cm2 2.2.3 Phương pháp nghiên cứu độ ổn định scopolamin TTS Nghiên cứu độ ổn định dự tính tuổi thọ thuốc thực theo quy định ASEAN lô thực nghiệm scopolamin TTS 1,5 mg sản xuất qui mô 1000 miếng dán Nghiên cứu xác định tuổi thọ thực theo phương pháp lão hóa cấp tốc, sản phẩm bảo quản nhiệt độ 40 ± oC, độ ẩm 75 ± 5% khảo sát thời gian tháng Phương pháp theo dõi điều kiện thực khảo sát nhiệt độ 30 ± oC, độ ẩm 75 ± 5% thời gian 18 tháng Các tiêu khảo sát bao gồm cảm quan, định tính, định lượng, độ hịa tan sản phẩm Dự đốn tuổi thọ thuốc theo phương trình Van’t Hoff 2.2.4 Phương pháp đánh giá sinh khả dụng scopolamin TTS Các nghiên cứu thử nghiệm NTN tiến hành sở đề cương Hội đồng đạo đức nghiên cứu y sinh học chấp thuận 2.2.4.1 Bố trí thí nghiệm Tiến hành thử nghiệm người tình nguyện theo thiết kế chéo đôi, đơn liều Hai giai đoạn cách 10 ngày 2.2.4.2 Định lượng SH huyết tương Mẫu huyết tương chứa SH sau xử lý định lượng phương pháp LC-MS/MS, với điều kiện sắc ký sau: đầu dò khối phổ ba tứ cực (Quatro Micro API), chế độ vận hành (ESI+); Ion sơ cấp 304,17 (m/z); cột sắc ký: Supelco C18 (150 mm x 4,6 mm; µm); pha động: nước-acetonitril (15:85); tốc độ dịng: 1,1 ml/phút, thể tích tiêm mẫu: 20 μl 2.2.4.3 Xác định thông số dược động học Dùng phép phân tích phương sai để đánh giá ảnh hưởng yếu tố thử nghiệm trình tự, thời kỳ, đối tượng thuốc Giá trị Tmax đánh giá phương pháp thống kê phi tham số liệu chưa chuyển dạng Dữ liệu nồng độ (AUC, Cmax) chuyển sang dạng logarit Tính so sánh giá trị trung bình trắc nghiệm “Two one sided t - test” Sinh khả dụng tương đối thuốc thử thuốc đối chiếu tỷ lệ phần trăm diện tích đường cong tồn thể thuốc thử so với thuốc đối chiếu Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Nghiên cứu bào chế scopolamin TTS 3.1.1 Nghiên cứu quy trình định lượng SH HPLC Quy trình định lượng SH sắc ký lỏng hiệu cao thẩm định đạt yêu cầu Với điều kiện sắc ký chọn thời gian lưu SH khoảng 8,3 phút Phương pháp đạt tính phù hợp hệ thống với thời gian lưu, diện tích đỉnh, hệ số bất đối, hệ số phân giải số đĩa lý thuyết đỉnh SH có RSD% < 2% Tính đặc hiệu, thể pic SH tách rõ so với pic khác mẫu trắng khơng có pic vị trí Phương pháp đạt độ cần thiết với tỷ lệ phục hồi tất mẫu khoảng 98% - 102% đạt độ xác với RSD nhỏ 2% định lượng mẫu SH nồng độ 20 µg/ml Các mẫu chuẩn SH đệm pH 7,4 khoảng nồng độ khảo sát 0,1-500 µg/ml cho thấy có tương quan tuyến tính với diện tích đỉnh có hệ số tương quan R2 = 0,999 16 3.4.3 Xác định lượng thuốc máu người tình nguyện Nồng độ scopolamin cá thể dán thuốc thử nghiệm thuốc đối chiếu trình bày hình 3.28 Nồng độ scopolamin (ng/ml) 0.16 0.14 0.12 Thuốc đối chiếu 0.1 Thuốc thử nghiệm 0.08 0.06 0.04 0.02 0 10 20 30 40 50 60 70 80 Thời gian (giờ) Hình 3.28 Nồng độ scopolamin huyết tương theo thời gian thuốc thử nghiệm thuốc đối chiếu 3.4.4 Tính tốn thông số dược động học Dựa vào số liệu thực với mẫu thử nghiệm mẫu đối chiếu, tính thơng số dược động học (Cmax, Tmax, AUC0-72, AUC0-∞) cá thể hai chế phẩm thuốc khác Các kết trình bày bảng 3.51 Bảng 3.51 Các thơng số dược động học trung bình thuốc thử nghiệm thuốc đối chiếu Thông số Thuốc Thử Cmax (ng/ml) Đối chiếu AUC0-t Thử nghiệm (ng.giờ/ml) Đối chiếu Thử AUC0-∞ (ng.giờ/ml) Đối chiếu Trung bình ± CL 0,1215 ± 0,0044 0,1318 ± 0,0028 5,0138 ± 0,0804 5,5036 ± 0,0859 7,1402 ± 0,2137 7,9086 ± 0,3173 16 Độ lệch chuẩn 0,0076 0,0048 0,1393 0,1487 0,3701 0,5495 CV% 6,26 3,67 2,78 2,70 5,18 6,95 17 3.4.5 Phân tích thống kê - xác định sinh khả dụng Các thông số dược động học Cmax, AUC0-72 AUC0-∞ phân tích thống kê phương pháp phân tích phương sai, đánh giá ảnh hưởng yếu tố: trình tự, đối tượng, thời kỳ thuốc Kết cho thấy ảnh hưởng nguồn biến thiên đối tượng, thời kỳ thử với thông số dược động học AUC0-∞, AUC0-72, Cmax, mức khơng có ý nghĩa thống kê (P>0,05) Như vậy, nghiên cứu sinh khả dụng kiểm sốt tốt điều kiện tuyển chọn NTN, bố trí giai đoạn thử nghiệm, đồng hợp lý Ảnh hưởng thuốc nghiên cứu tới thông số dược động học có ý nghĩa thống kê (P