Đang tải... (xem toàn văn)
[r]
(1)Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Giáo trình thực tập vi sinh vật chuyên ngành ………1
BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO
TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI
***
NGUYỄN XUÂN THÀNH (Chủ biên) VŨ THỊ HOÀN
NGUYỄN THẾ BÌNH - ðINH HỒNG DUYÊN
Chủ biên & hiệu đính
PGS.TS NGUYỄN XUÂN THÀNH
THỰC TẬP VI SINH VẬT
Chuyên ngành Chuyên ngành Chuyên ngành Chuyên ngành
(2)
MỤC LỤC
Nội dung Trang
Bài số 1: Trang thiết bị cần thiết nghiên cứu vi sinh vật Bài số 2: Phương pháp cốñịnh tiêu nhuộm tế bào vi sinh vật 12
Bài số 3: Chuẩn bị dụng cụ môi trường nuôi cấy vi sinh vật 16
Bài số 4: Nuôi cấy vi sinh vật 26 Bài số 5: Phương pháp lấy mẫu để phân tích vi sinh vật 31 Bài số 6: Phương pháp phân tích vi sinh vật 33
Bài số 7: đánh giá ựặc tắnh sinh học vi sinh vật 37 Bài số 8: Phân lập tuyển chọn Azotobacter từựất 40 Bài số 9: Phương pháp lấy mẫu phân lập tuyển chọn vi khuẩn
Rhizobium
42 Bài số 10: Phương pháp xác ñịnh nhanh trao ñổi chất vi sinh vật 46 Bài số 11: Vi sinh vật môi trường 50
Bài số 12: Phương pháp xác ñịnh nấm men, nấm mốc, tảo nguyên sinh ñộng vật
53 Bài số 13: Quá trình chuyển hoá nitơ tác dụng vi sinh vật 60 Bài số 14: Chuyển hoá lưu huỳnh tác dụng vi sinh vật 63 Bài số 15: Vi sinh vật phân giải lân (phospho) 65
Bài số 16: Enzym q trình trao đổi nitơ, phospho, lưu huỳnh 67 Bài số 17: Xác ñịnh sinh khối vi sinh vật ñất 75 Bài số 18: Sinh trưởng vi sinh vật 83 Bài số 19: Thăm quan kiến tập vi sinh vật 86
Phụ lục 88
(3)Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Giáo trình thực tập vi sinh vật chuyên ngành………1 Bài số
TRANG THIẾT BỊ CẦN THIẾT TRONG NGHIÊN CỨU VI SINH VẬT
Mục đích u cầu:
+ Nắm máy móc, trang thiết bị cần thiết nghiên cứu
vi sinh vật
+ Biết sử dụng thành thạo số máy móc thơng dụng phịng nghiên cứu + Hiểu tầm quan trọng cơng tác tiêu ñộc, khử trùng
+ Sử dụng thành thạo kính hiển vi
+ Phân biệt dạng hình thái vi sinh vật
Nội dung :
+ Giới thiệu trang thiết bị cần thiết phòng nghiên cứu vi sinh vật
+ Giới thiệu dụng cụ nguyên liệu cần thiết ñể nghiên cứu vi sinh vật: dụng cụ lọc, khử trùng, dụng cụ quang học, dụng cụ đo lường, mơi trường ni cấy
+ Thao tác vận hành sử dụng trang thiết bị phòng nghiên cứu vi sinh vật
+ Cấu tạo sử dụng, bảo quản kính hiển vi + Quan sát hình thái vi sinh vật
I MÁY MĨC
1 Tủ ni cấy vi sinh vật (Incubator)
Tủ nuôi cấy hay cịn gọi tủđịnh ơn thiết bị quan trọng dùng công tác nghiên cứu vi sinh vật, nhiệt độ tủ thay đổi từ 00 – 900 C tuỳ
theo ý muốn người nghiên cứu nhiệt ñộ tủ sau xác định ln ln trạng thái ổn định suốt thời gian ni cấy
1.1 Cấu tạo
Cấu tạo vỏ tủ nuôi cấy có lớp: lớp kim loại dẫn nhiệt ñể giữ nhiệt
ñộ bên tủ, lớp ngồi kim loại dày bọc phía chất cách nhiệt (amiant) Giữa lớp lớp ngồi khoảng trống để giữ
cho nhiệt độ tủ bị biến đổi
Trong tủ có phận cảm nhiệt để báo nhiệt độ lên xuống cho rơ-le hoạt
động quạt gió ñược lắp phần thân ñểñiều hoà nhiệt ñộ bên Phần ngồi tủ ni có hệ thống bảng ñiện tử ñể ñiều chỉnh nhiệt ñộ theo
yêu cầu nghiên cứu Phía tủđược lắp van an tồn, nhiệt độ tủ
vượt q dao ñộng biên ñộ, van an toàn tự ngắt
1.2 Cách sử dụng
đóng mạch ựiện, bấm nút mở cơng tắc tủ (có thể giữ vài giây ựến xuất
(4)ứng mũi tên lên xuống Nhiệt ñộ tủấm tăng dần ñạt tới nhiệt ñộñã
xác ñịnh
Nhiệt ñộ trì suốt thời gian ni cấy ñã ñịnh sẵn Trên bảng ñiện tử xuất số báo nhiệt ñộ thực tế tủ Khi ñủ thời gian nuôi cấy, tủ phát tiếng báo hiệu rơ le tự ngắt ñể tựñộng tắt chế độ làm việc
Nếu muốn ni cấy liên tục lâu dài khơng cần đặt chế độ thời gian, chỉñặt nhiệt ñộ Khi muốn kết thúc bấm nút tắt cơng tắc nguồn
1.3 Khi sử dụng máy cần ý ñiểm sau ñây
+ Hiệu chỉnh thiết bị trước sử dụng
+ Phải nối tủ với dây ñất kiểm tra ñiện máy với ñiện nơi
đặt máy xem có giống khơng, trường hợp không giống phải dùng biến
+ Khi sử dụng tủ ấm lần ñầu, phải kiểm tra phận điều chỉnh nhiệt độ
xem có xác khơng, nhiệt độ tủ có khơng
+ Cửa tủ ln ln phải đóng kín, trừ lấy cho nguyên liệu vào nuôi cấy khơng mở cửa tủ rộng lâu
+ Ln ln phải đảm bảo cho tủ ấm khơ ráo, sẽ, phải cho tủ
hoạt ñộng thường xun hơm trời ẩm Khi làm đổ chất dịch nuôi cấy làm bẩn tủ, phải lau chùi sát trùng
+ Nên ñặt tủ cốc nước vô trùng trình ni cấy để giúp cho quạt gió hoạt động tốt
+ Khi khơng dùng, tắt cơng tắc điện rút phích cắm điện
2 Tủ sấy khô (Drying oven) 2.1 Tác dụng
Dùng tủ sấy khơ để khử trùng dụng cụ thủy tinh, ñồ sứ nhưống nghiệm, xi lanh, hộp lồng, cốc, phễu, cối chầy sứ , đồ kim khí dao, kéo, panh dụng cụ khác khơng có nước khác bông, băng, vải Trừ vật liệu làm từ
cao su môi trường nuôi cấy khơng khử trùng tủ sấy khơ
Ngun lý cấu tạo tủ sấy khô gần giống tủ ấm, khác tiệt trùng nhiệt ñộ 175 - 200o C
2.2 Cách sử dụng tủ sấy khô
Các dụng cụ phải rửa sạch, để khơ, bao gói cẩn thận trước cho vào tủ, sau xếp thứ vào tủ đóng kín cửa đóng lỗ thơng khí Bật cơng
tắc điện, đặt chếñộ làm việc cho tủ (ñiều chỉnh nhiệt ñộ thời gian giống với tủđịnh ơn) Thơng thường dụng cụ ni cấy phân tích vi sinh vật khử trùng
ở 160-180oC Với dụng cụ, như: pipét, xi lanh,… khơng sấy q 60oC nhiệt độ cao làm giãn nở thuỷ tinh dẫn đến độ xác dụng
(5)Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Giáo trình thực tập vi sinh vật chuyên ngành………3
hơn nhiều dễ làm cháy giấy gói nút bơng, khơng nên xếp dụng cụ q khít
nhau để khơng khí lưu thơng làm nóng vật cần khử trùng Sau ngắt mạch ñiện, chờ nhiệt ñộ hạ dần xuống nhiệt độ phịng đuợc mở cửa tủ để lấy dụng cụ sấy Dụng cụ lấy phải ñể giá gỗ, giấy vải, không ñược ñể gạch men, sàn gạch sàn xi măng dụng cụđang nóng gặp lạnh dễ vỡ làm ảnh hưởng đến tính vơ trùng
của dụng cụ
3 Nồi hấp hơi nước cao áp (Autoclave) 3.1 Nguyên lý
Nồi hấp nước cao áp (hình 1) làm kim loại chịu nhiệt độ cao (ít 135o C) dùng điện, dùng củi dùng than đun cho nước sôi, nước nén dần lại nồi tiếp tục nước sơi áp lực
trong nồi tăng dần, áp lực tăng nhiệt độ nước nồi cao, nhiệt ñộ t0 nước áp lực P có liên quan với nhau, khơng phải theo tỷ lệđường thẳng (xem ñồ thị)
Khi áp lực kế số có nghĩa là: áp lực P nồi hấp = áp lực P khơng khí Cho nên áp lực kế 1kg/cm2 hiệu số áp lực bên với áp lực không khí tồn nồi
1kg/cm2 = P (trong nồi) - P (khơng khí nồi)
Do áp lực P nồi không phù hợp với P áp lực kế hay nói cách
khác, nhiệt ñộ nồi không tương ứng với nhiệt ñộ áp lực kế Vì
muốn cho nhiệt độ nồi phù hợp với áp lực kế phải loại bỏ hết khơng khí nồi (1kg/cm2 = 1atm = phoud)
Bảng So sánh mối liên quan áp suất ghi áp kế nồi hấp biểu thị atmosphere nhiệt ñộ nồi loại hết khơng khí
Áp suất (atm)
Nhiệt
ñộ (oC) Áp suất
(atm)
Nhiệt
ñộ (oC) Áp suất
(atm)
Nhiệt
ñộ (oC) Áp suất
(atm)
Nhiệt
ñộ (oC)
(6)+ Viện Sinh học Viện khoa học Việt Nam
+ Nhà máy (phân xưởng) phân hữu vi sinh vật (Sông Gianh tỉnh Nghệ
An, Tiến Nơng tỉnh Thanh Hóa, Văn ðiển Hà Nội, Việt Trì tỉnh Phú Thọ …và
các tỉnh tồn quốc)
+ Viện chăn ni thú y, xưởng sản xuất thức ăn gia súc, gia cầm, thuốc thú y
ở tỉnh
+ Các trang trại, công ty nuôi trồng thuỷ, hải sản tồn quốc
+ Xí nghiệp xử lý phế thải thịở thành phố tỉnh
Nội dung:
+ Xem cách thiết kế phòng nghiên cứu ứng dụng vi sinh vật
+ Quan sát tìm hiểu quy trình sản xuất xử lý ô nhiễm môi
trường sởứng dụng công nghệ vi sinh vật
+ Tiến hành lấy mẫu ñể kiểm tra chất lượng sản phẩm chế phẩm VSV
Bài số 19
THĂM QUAN KIẾN TẬP MÔN HỌC
* Câu hỏi ôn tập:
(7)Trường ðại học Nơng nghiệp Hà Nội – Giáo trình thực tập vi sinh vật chuyên ngành………98 PHỤ LỤC
BẢNG 1: PHA DUNG DỊCH ðỆM SORENSEN I VÀ DUNG DỊCH
Na2HPO4 1/15M VÀ KH2PO4 1/15M - SỐ LƯỢNG DUNG DỊCH (Ml)
pH Na2HPO4 1/15
M
KH2PO4 1/15 M