Đánh giá hiệu lực của vắc xin avimex knew h5 sử dụng ở gà để chống lại vi rút cúm gia cầm h5n1 clade 2 3 2 1 và h5n6 clade 2 3 4 4 phân lập tại việt nam năm 2017

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGÔ THỊ HƢƠNG ĐÁNH GIÁ HIỆU LỰC CỦA VẮC XIN AVIMEX KNEW-H5 SỬ DỤNG Ở GÀ ĐỂ CHỐNG LẠI VI RÚT CÚM GIA CẦM H5N1 CLADE 2.3.2.1 VÀ H5N6 CLADE 2.3.4.4 PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM NĂM 2017 Chuyên ngành: Thú y Mã số: 8640101 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Chu Đức Thắng NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2019 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tôi, kết nghiên cứu đƣợc trình bày luận văn trung thực, khách quan chƣa dùng để bảo vệ lấy học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn đƣợc cám ơn, thơng tin trích dẫn luận văn đƣợc rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Tác giả luận văn Ngô Thị Hƣơng i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn, tơi nhận đƣợc hƣớng dẫn, bảo tận tình thầy cô giáo, giúp đỡ, động viên bạn bè, đồng nghiệp gia đình Nhân dịp hồn thành luận văn, cho phép tơi đƣợc bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Chu Đức Thắng tận tình hƣớng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian tạo điều kiện cho suốt trình học tập thực đề tài Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới Ban Giám đốc, Ban Quản lý đào tạo, Bộ môn Nội – Chẩn – Dƣợc – Độc chất, Khoa Thú y – Học viện Nông nghiệp Việt Nam tận tình giúp đỡ tơi q trình học tập, thực đề tài hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn tập thể lãnh đạo, cán viên chức Trung tâm Chẩn đoán Thú y Trung ƣơng giúp đỡ tạo điều kiện cho suốt trình thực đề tài Xin chân thành cảm ơn gia đình, ngƣời thân, bạn bè, đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi mặt, động viên khuyến khích tơi hồn thành luận văn./ Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Tác giả luận văn Ngô Thị Hƣơng ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vi Danh mục bảng vii Trích yếu luận văn x Thesis abstract xii Phần Mở đầu 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Phạm vi nghiên cứu 1.4 Những đóng góp mới, ý nghĩa khoa học thực tiễn Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Sơ lƣợc bệnh cúm gia cầm 2.1.1 Khái niệm bệnh cúm gia cầm 2.1.2 Lịch sử bệnh giới 2.1.3 Tình hình dịch cúm gia cầm Việt Nam 2.1.4 Dịch tễ học bệnh cúm gia cầm 2.1.5 Triệu chứng, bệnh tích bệnh cúm gia cầm 11 2.1.6 Phƣơng pháp chẩn đoán cúm gia cầm 13 2.2 Vi rút cúm gia cầm 13 2.2.1 Đặc điểm hình thái, cấu trúc vi rút cúm type A 13 2.2.2 Nguồn gốc, cấu trúc phân bố vi rút cúm A/H5N1 clade 2.3.2.1 17 2.2.3 Nguồn gốc, cấu trúc phân bố vi rút cúm A/H5N6 clade 2.3.4.4 18 2.2.4 Đặc tính kháng nguyên vi rút cúm 18 2.2.5 Độc lực vi rút 19 2.2.6 Sức đề kháng vi rút 20 2.2.7 Cơ chế xâm nhiễm gây bệnh vi rút cúm A tế bào vật chủ 20 2.2.8 Nuôi cấy lƣu trữ vi rút 22 2.3 Phòng bệnh cúm gia cầm 22 iii 2.3.1 Các loại vắc xin đƣợc dùng 22 2.3.2 Tình hình sử dụng vắc xin cúm gia cầm giới 23 2.3.3 Tình hình sử dụng vắc xin cúm gia cầm Việt Nam 24 2.3.4 Những điểm ý sử dụng vắc xin cúm gia cầm 26 Phần Vật liệu phƣơng pháp nghiên cứu 27 3.1 Địa điểm nghiên cứu 27 3.2 Thời gian nghiên cứu 27 3.3 Đối tƣợng, vật liệu nghiên cứu 27 3.4 Nội dung nghiên cứu 28 3.5 Phƣơng pháp nghiên cứu 28 3.5.1 Phƣơng pháp điều tra hồi cứu 28 3.5.2 Phƣơng pháp lấy mẫu bảo quản mẫu 28 3.5.3 Phƣơng pháp mổ khám 29 3.5.4 Phƣơng pháp công cƣờng độc đánh giá hiệu lực vắc xin 29 3.5.5 Phƣơng pháp phát kháng nguyên 30 3.5.6 Phƣơng pháp xử lý số liệu 34 Phần Kết thảo luận 35 4.1 Tình hình dịch cúm gia cầm Việt Nam năm gần 35 4.1.1 Tình hình dịch cúm gia cầm Việt Nam năm 2015 35 4.1.2 Tình hình dịch cúm gia cầm Việt Nam năm 2016 35 4.1.3 Tình hình dịch cúm gia cầm Việt Nam năm 2017 36 4.1.4 Tình hình dịch cúm gia cầm Việt Nam năm 2018 37 4.1.5 Sự phân bố lƣu hành chủng cúm gia cầm Việt Nam năm 2018 38 4.2 Kết kiểm tra hiệu giá kháng thể gà tiêm phòng vắc xin Avimex Knew-H5 mũi mũi 40 4.3 Đánh giá hiệu lực bảo hộ vắc xin avimex knew-h5 chống lại vi rút cúm gia cầm H5n1 clade 2.3.2.1c H5n6 2.3.4.4b phân lập năm 2017 42 4.3.1 Kết thí nghiệm cơng cƣờng độc với vi rút cúm H5N1 Clade 2.3.2.1c 43 4.3.2 Kết thí nghiệm cơng cƣờng độc với vi rút cúm H5N6 Clade 2.3.4.4b 48 4.4 Kết đinh lƣơng vi rút bai thai 54 iv 4.4.1 Mức độ thải vi rút gà sau công cƣờng độc vi rút cúm gia cầm H5N1 clade 2.3.2.1c 54 4.4.2 Mức độ thải vi rút gà sau công cƣờng độc vi rút cúm gia cầm H5N6 clade 2.3.4.4b 59 4.5 Đánh giá triệu chứng, bệnh tích cơng cƣờng độc 62 4.5.1 Bệnh tích đại thể gà sau cơng cƣờng độc vi rút cúm gia cầm H5N1 clade 2.3.2.1c 63 4.5.2 Bệnh tích đại thể gà sau công cƣờng độc vi rút cúm gia cầm H5N6 clade 2.3.4.4b 64 Phần Kết luận kiến nghị 70 5.1 Kết luận 70 5.2 Kiến nghị 70 Tài liệu tham khảo 71 Phụ lục 75 v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt ADN DNA Axit deoxyribonucleic (Acid Deoxyribo Nucleic) AI (Avian influenza) Bệnh Cúm gia cầm ARN RNA Axit ribonucleic (Acid Ribonucleic) Phản ứng miễn dịch gắn men ELISA (Enzyme-Linked immunosorbent assay) GMT (Geometic Mean Titer) Hiệu giá kháng thể trung bình HA (Haemagglutination assay) Phản ứng ngƣng kết hồng cầu HI (Haemagglutination inhibition assay) Phản ứng ngăn trở ngƣng kết hồng cầu HPAI Cúm gia cầm thể độc lực cao (Highly pathogenic avian influenza) Cúm gia cầm thể độc lực thấp LPAI (Low pathogenic avian influenza) PBS (Phosphate-Bufferred Saline) Dung dịch đệm phốt phát RDE Enzym phá hủy điểm tiếp nhận (Receptor destroying enzyme) Realtime RT-PCR (Reverse Trancription – Phản ứng chuỗi Polyme phiên mã Polymerase Chain Reation) ngƣợc theo thời gian thực CEF Tế bào xơ phôi gà vi DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Bố trí thí nghiệm kiểm tra hiệu lực vắc xin 30 Bảng 3.2 Primer probe để phát vi rút cúm gia cầm 32 Bảng 3.3 Thành phần phản ứng realtime PCR 32 Bảng 3.4 Chu triǹ h nhiệt phản ứng realtime RT-PCR 32 Bảng 4.1 Tình hình dịch bệnh qua giai đoạn 2015-2018 37 Bảng 4.2 Hiệu giá kháng thể gà sau tiêm vắc xin mũi mũi với kháng nguyên đồng chủng vắc xin 41 Bảng 4.3 Kết theo dõi theo dõi lầm sàng q trinh thí nghiệm cơng cƣờng độc vi rút cúm gia cầm H5N1 (vắc xin mũi 1) 44 Bảng 4.4 Kết theo dõi theo dõi lầm sàng trinh thí nghiệm cơng cƣờng độc vi rút cúm gia cầm H5N1 (vắc xin mũi 2) 46 Bảng 4.5 Kết theo dõi thu thập đƣợc sau thí nghiệm cơng cƣờng độc vi rút cúm gia cầm H5N6 (vắc xin mũi 1) 48 Bảng 4.6 Kết theo dõi thu thập đƣợc sau thí nghiệm cơng cƣờng độc vi rút cúm gia cầm H5N6 (vắc xin mũi 2) 50 Bảng 4.7 Bảng điểm lâm sàng tỷ lệ bảo hộ đàn gà sau công cƣờng độc tỷ lệ bảo hộ đàn gà sau công cƣờng độc 52 Bảng 4.8 Kết thử nghiệm hiệu lực các loại vắc xin virus phân lập năm 2017 53 Bảng 4.9 Mức độ thải vi rút nhóm gà sau công cƣờng độc vi rút cúm H5N1 clade 2.3.2.1c với liệu trình mũi 55 Bảng 4.10 Mức độ thải vi rút nhóm gà sau cơng cƣờng độc vi rút cúm H5N1 clade 2.3.2.1c với liệu trình mũi 56 Bảng 4.11 Kết phát vi rút cúm A/H5N1 clade 2.3.2.1c 57 Bảng 4.12 Mức độ thải vi rút nhóm gà sau cơng cƣờng độc vi rút cúm H5N6 clade 2.3.4.4b với liệu trình mũi 59 Bảng 4.13 Mức độ thải vi rút nhóm gà sau công cƣờng độc vi rút cúm H5N6 clade 2.3.4.4b với liệu trình mũi 60 Bảng 4.14 Kết phát vi rút cúm A/H5N6 clade 2.3.4.4b 61 vii Bảng 4.15 Kết mổ khám nhóm gà đƣợc cơng cƣờng độc vi rút cúm gia cầm H5N1 clade 2.3.2.1c 63 Bảng 4.16 Kết mổ khám nhóm gà đƣợc công cƣờng độc vi rút cúm gia cầm H5N6 clade 2.3.4.4b 65 viii DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Cấu tạo vi rút cúm gia cầm 14 Hình 4.1 Biểu đồ so sánh dịch cúm gia cầm từ năm 2015 – 2018 38 Hình 4.2 Cây phả hệ vi rút cúm subtype H5 Việt Nam năm 2018 39 Hình 4.3 Biểu đồ tỷ lệ phân bố mức hiệu giá kháng thể sau tiêm vắc xin mũi mũi 41 Hình 4.4 Biểu đồ khả bảo hộ sau cơng cƣờng độc vi rút cúm H5N1 clade 2.3.2.1c gà thí nghiệm với liệu trình tiêm 47 Hình 4.5 Biểu đồ khả bảo hộ sau công cƣờng độc vi rút cúm H5N6 clade 2.3.4.4b 52 Hình 4.6 Biểu đồ diễn biến mức độ thải vi rút nhóm gà sau công cƣờng độc vi rút cúm H5N1 clade 2.3.2.1c với liệu trình tiêm mũi 57 Hình 4.7 Biểu đồ diễn biến mức độ thải vi rút nhóm gà sau cơng cƣờng độc vi rút cúm H5N1 clade 2.3.2.1c với liệu trình tiêm mũi 58 Hình 4.8 Biểu đồ diễn biến mức độ thải vi rút nhóm gà sau công cƣờng độc vi rút cúm H5N6 clade 2.3.4.4b với liệu trình tiêm mũi 61 Hình 4.9 Biểu đồ diễn biến mức độ thải vi rút nhóm gà sau cơng cƣờng độc vi rút cúm H5N6 clade 2.3.4.4b với liệu trình tiêm mũi 62 ix điểm 10 ngày sau cơng, gà sống sót hầu nhƣ khơng cịn thải vi rút Nhóm gà đối chứng: vào ngày thứ có gà cho kết dƣơng tính với vi rút cúm A/H5N1 số gà xét nghiệm với giá trị ct trung bình 21.36 quy nồng độ vi rút cao đạt 105,2 TCID50/ml Vào ngày chết tất gà xét dƣơng tính với vi rút cúm A/H5N1 - Liệu trình mũi: Cũng tƣơng tự nhƣ liệu trình mũi, Có thể thấy rõ lƣợng virus thải từ gà đƣợc tiêm phòng thấp nhiều so với gà đối chứng ngày thứ sau cơng cƣờng độc có 11 gà nhóm vắc xin dƣơng tính với vi rút cúm A/H5N1 tổng số 20 gà xét nghiệm với giá trị Ct trung bình 20 mẫu gà lấy swab 35,41 tƣơng đƣơng với nồ ng đô ̣ vi rút đa ̣t 101.2 TCID50/ml, sang đến ngày thứ 10 không cịn gà dƣơng tính với vi rút cúm A/H5N1 với giá trị ct trung bình 39.17 tƣơng đƣơng 100.1 TCID50/ml Trong suốt thời gian theo dõi có gà đƣợc tiêm vắc xin bị chết vào ngày chết gà cho kết giá trị Ct 33.58 tƣơng đƣơng 101,7 TCID50/ml Nhóm gà đối chƣ́ng: vào ngày thứ có gà cho kết dƣơng tính với vi rút cúm A/H5N1 số gà xét nghiệm với giá trị ct trung bình 18.58 tƣơng đƣơng 106 TCID50/ml Vào ngày chết tất gà xét dƣơng tính với vi rút cúm A/H5N1 với nồ ng đô ̣ vi rút đạt 106.3 TCID50/ml Nhƣ vậy, với liệu trình tiêm mũi vắc xin VIMEX Knew-H5 giúp cho tỷ lệ thải vi rút cúm H5N1 clade 2.3.2.1c giảm so với liệu trình tiêm mũi Hình 4.7 Biểu đồ diễn biến mức độ thải vi rút nhóm gà sau công cƣờng độc vi rút cúm H5N1 clade 2.3.2.1c với liệu trình tiêm mũi 58 4.4.2 Mức độ thải vi rút gà sau công cƣờng độc vi rút cúm gia cầm H5N6 clade 2.3.4.4b Mức độ thải vi rút cúm H5N6 clade 2.3.4.4b với liệu trình tiêm mũi mũi đƣợc trình bày ở bảng 4.11 4.12 Bảng 4.12 Mức độ thải vi rút nhóm gà sau cơng cƣờng độc vi rút cúm H5N6 clade 2.3.4.4b với liệu trình mũi Nhóm Gà vắc xin 1 10 19 22 29 34 36 48 55 10 86 11 88 12 89 13 94 14 95 15 99 16 104 17 112 18 113 19 115 20 119 Gà đối chứng 215 231 234 249 251 258 265 268 270 10 278 Ngày thứ 33.04 31.30 33.16 33.86 28.99 30.63 40.00 31.01 29.60 28.50 32.44 Giá trị Ct Ngày thứ 10 35.61 Ngày chết 22.12 17.61 35.72 36.75 21.53 35.62 35.31 20.18 18.25 20.05 40.00 28.20 32.62 30.13 32.46 35.57 40.00 40.00 36.88 33.26 27.26 21.95 20.44 21.62 24.29 20.30 21.07 22.06 23.84 59 34.62 24.44 23.94 29.33 33.17 23.82 25.10 40.00 20.15 17.76 18.14 17.94 16.39 17.91 17.77 17.47 18.75 16.59 18.74 17.89 Bảng 4.13 Mức độ thải vi rút nhóm gà sau cơng cƣờng độc vi rút cúm H5N6 clade 2.3.4.4b với liệu trình mũi Giá trị Ct Nhóm Gà vắc xin Ngày thứ Ngày thứ 10 34.28 38.85 4 14 40.00 32.66 30.40 34.27 40.00 39.21 40.00 40.00 15 18 24 28 37.63 32.16 30.49 35.01 38.55 34.61 39.27 40.00 10 11 12 13 14 41 43 44 47 53 60 31.48 29.71 31.90 35.62 36.89 40.00 34.85 15 16 17 18 19 20 61 68 90 106 110 118 33.55 31.63 35.48 31.84 40.00 34.92 37.86 39.08 40.00 Gà đối chứng 201 205 206 223 229 245 248 253 269 10 276 21.09 26.30 17.49 60 Ngày chết 26.86 22.35 32.11 40.00 38.44 40.00 29.09 39.70 23.89 16.80 16.63 18.64 17.47 17.79 15.68 18.97 17.53 15.83 17.26 12.22 Từ kết bảng 4.12 4.13 có kết phát vi rút cúm gia cầm A/H5N6 clade 2.3.4.4b sau công cƣờng độc đƣợc trình bày bảng 4.14 Bảng 4.14 Kết phát vi rút cúm A/H5N6 clade 2.3.4.4b H5N6 clade 2.3.4.4b Liệu trình mũi Liệu trình mũi Gà vắc xin Realtime RT- PCR (phát vi rút) Số dƣơng tính / số xét nghiệm Ngày thứ Ngày thứ 10 Ngày chết 14/19 3/9 11/11 Gà đối chứng 7/7 0/0 10/10 Gà vắc xin 12/20 2/16 4/4 Gà đối chứng 2/2 0/0 10/10 Qua bảng 4.14 ta thấy rằng: tƣơng tự nhƣ với vi rút cúm H5N1, vắc xin AVIMEX Knew-H5 có tác dụng làm thải vi rút liệu trình mũi mũi - Liệu trình mũi: Với nhóm gà thí nghiệm, vào ngày thứ có 14/19 gà dƣơng tính với vi rút cúm H5N1 với giá trị ct trung bình 33.04 tƣơng đƣơng nờ ng ̣ vi rút đa ̣t 101.9 TCID50/ml, ngày thứ 10 có 3/19 gà dƣơng tính với vi rút cúm H5N1 với giá trị ct trung bình 35.61 tƣơng đƣơng 101.1 TCID50/ml Vào ngày chết 11/11 gà dƣơng tính với vi rút cúm H5N1 với giá trị ct trung bình 22.12 tƣơng đƣơng 105 TCID50/ml Với nhóm gà đối chứng lƣơ ̣ng vi rút bài thải ngồi mơi trƣờng lớn, vào ngày thứ có 7/7 gà dƣơng tính với vi rút cúm H5N1 với giá trị ct trung bình 21.95 tƣơng đƣơng 105 TCID50/ml ngày chết có 10/10 gà dƣơng tính vỉ rút cúm H5N1 Hình 4.8 Biểu đồ diễn biến mức độ thải vi rút nhóm gà sau cơng cƣờng độc vi rút cúm H5N6 clade 2.3.4.4b với liệu trình tiêm mũi 61 - Liệu trình mũi: Với nhóm gà thí nghiệm, vào ngày thứ có 12/20 gà dƣơng tính với vi rút cúm H5N1 với giá trị ct trung bình 34.28 tƣơng đƣơng nờ ng ̣ vi rút đa ̣t 101.5 TCID50/ml, ngày thứ 10 có 2/16 gà dƣơng tính với vi rút cúm H5N1 vớinờ ng ̣ vi rút thấ p 100.2 TCID50/ml Vào ngày chết 4/4 gà dƣơng tính với vi rút cúm H5N1 với giá trị ct trung bình 26.86 tƣơng đƣơng 103.6 TCID50/ml Với nhóm gà đối chứng, vào ngày thứ có 2/2 gà dƣơng tính với vi rút cúm H5N1 với giá trị ct trung bình 21.09 tƣơng đƣơng với nờ ng đô ̣ vi rú t cao 105 TCID50/ml ngày chết có 10/10 gà dƣơng tính vỉ rút cúm H5N1 với giá trị ct trung bình 16.80 tƣơng đƣơng 106.5 TCID50/ml Hình 4.9 Biểu đồ diễn biến mức độ thải vi rút nhóm gà sau cơng cƣờng độc vi rút cúm H5N6 clade 2.3.4.4b với liệu trình tiêm mũi Các phân tích cho thấy vắc xin AVIMEX Knew-H5 có tác dụng làm giảm lƣợng nhƣ thời gian thải virus từ động vật tiêm phòng Những gà chết thải lƣợng lớn vi rút Gà đƣợc tiêm vắc xin sau gây nhiễm thải vi rút với mức độ thấp giảm dần theo thời gian đến thời điểm 10 ngày sau cơng, gà sống sót hầu nhƣ khơng cịn thải vi rút Gà tiêm vắc xin với liệu trình mũi thải vi rút so với gà tiêm vắc xin với liệu trình mũi 4.5 ĐÁNH GIÁ TRIỆU CHỨNG, BỆNH TÍCH KHI CƠNG CƢỜNG ĐỘC Để đánh giá độc lực vi rút gà thí nghiệm đánh giá 62 mức độ giảm triệu chứng bệnh tích bệnh cúm gà đƣợc tiêm vắc xin Chúng tiến hành lấy mẫu với gà chết gà sống sót nhóm gà thí nghiệm để mổ khám kiểm tra bệnh tích đại thể Kiểm tra bệnh tích đại thể: mổ khám kiểm tra xoang mũi, miệng, cơ, quan nội tạng, não Giữa liệu tiêm mũi mũi vắc xin khơng có khác nhiều triệu chứng bệnh tích gà đƣợc cơng cƣờng độc 4.5.1 Bệnh tích đại thể gà sau cơng cƣờng độc vi rút cúm gia cầm H5N1 clade 2.3.2.1c Qua mổ khám ta thấy: gà ốm chết nhóm đối chứng nhóm vắc xin có chung bệnh tích đặc trƣng cúm gia cầm nhƣ phù dƣới da; phổi viêm, phù, xuất huyết; tim xung huyết, xuất huyết; mỡ vành tim xuất huyết; ruột non, tụy xuất huyết; não xung huyết… Giữa gà đối chứng gà vắc xin chết, bệnh tích tƣơng đối giống Những gà có triệu chứng kéo dài thƣờng có bệnh tích rõ ràng, đa dạng Bảng 4.15 Kết mổ khám nhóm gà đƣợc công cƣờng độc vi rút cúm gia cầm H5N1 clade 2.3.2.1c Cơng cƣờng độc với H5N1 clade 2.3.2.1c Liệu trình mũi Nhóm STT Chỉ tiêu Nhóm đối vắc xin chứng Mào, tích thâm tím, phù nề 1/20 10/10 Liệu trình mũi Nhóm Nhóm đối vắc xin chứng 0/20 10/10 Khí quản viêm, xuất huyết 1/20 7/10 1/20 8/10 Phổi viêm, tụ huyết, xuất huyết 0/20 7/10 0/20 7/10 Xuất huyết tim, mỡ vành tim 1/20 6/10 0/20 5/10 Bao tim tích nƣớc vàng 0/20 5/10 0/20 4/10 Gan sƣng, tụ huyết, xuất huyết 0/20 3/10 0/20 4/10 Dạ dày tuyến xuất huyết 1/20 6/10 0/20 6/10 Ruột viêm, xuất huyết 1/20 7/10 1/20 7/10 Tuỵ biến màu, xuất huyết 0/20 5/10 0/20 4/10 10 Thận sƣng, tụ huyết, xuất huyết 0/20 4/10 1/20 5/10 11 Túi Fabricius sƣng 0/20 2/10 0/20 2/10 12 Lách sƣng, xuất huyết, biến màu 0/20 4/10 0/20 5/10 13 Não xung huyết 1/20 9/10 1/20 8/10 14 Xuất huyết da chân 1/20 7/10 0/20 7/10 63 Nhóm gà đối chứng Sau gây nhiễm với virus cúm H5N1 clade 2.3.2.1c gà đối chứng chết có triệu chứng điển hình cúm gia cầm Bệnh tích xuất hầu khắp quan thể với đặc trƣng mào, tích thâm tím, phù nề; khí quản , phở i viêm, xuấ t huyế t ; dày , ruô ̣t viêm , xuấ t huyế t , xuất huyết da chân, não xung huyết; xuất huyết tim, mỡ vành tim Các triệu chứng bệnh tích quan khác thƣờng biểu mức độ nhẹ nhƣ: bao tim tích nƣớc vàng, gan, thâ ̣n sƣng, tụ huyết, xuất huyết, tụy, lách biế n màu , xuấ t huyế t ; túi Fabricius sung Hầu nhƣ tất quan xuất huyết nhƣng lại khác có quan xuất huyết tràn lan có quan xuất huyết thành đám, xuất huyết dải Nhóm gà vacxin: Những chết nhóm đƣợc tiêm vacxin có bệnh tích tƣơng tự với nhóm gà đối chứng Những sống sót có bệnh tích mức độ nhẹ Đặc biệt gà bị ốm nhƣng khỏi có bệnh tích nặng so với khỏe mạnh bình thƣờng nhƣ phổi viêm, tụy biến màu Từ kết thấy tổn thƣơng đại thể quan sát đƣợc quan gà bệnh lý giải đƣợc triệu chứng gà mắc cúm gia cầm Bên cạnh đó, thấy đƣợc công vi rút cúm gia cầm H5N1 clade 2.3.2.1c gây biểu có tính tồn thân mắc bệnh biểu bệnh lý thƣờng nặng nề dẫn đến tỷ lệ chết cao Mặt khác, thấy triệu chứng bệnh tích đại thể nhóm gà vắc xin mức độ nhẹ đối nhóm gà đối chứng , triệu chứng bệnh tích đại thể nhóm gà vắc xin với liê ̣u trình mũi nhẹ so với nhó m gà đƣơ ̣c tiêm vắ c xin với liê ̣u trình mũi Nhƣ thấy vắc xin có tác dụng làm giảm triệu chứng bệnh tích bệnh cúm gia cầm rõ rệt nhóm gà đƣợc tiêm vắc xin, điều đƣợc thể rõ tỷ lệ sống sót gà sau cơng cƣờng độc 4.5.2 Bệnh tích đại thể gà sau công cƣờng độc vi rút cúm gia cầm H5N6 clade 2.3.4.4b Kết triệu chứng, bệnh tích gà sau công cƣờng độc vi rút cúm gia cầm H5N6 clade 2.3.4.4b đƣợc thể bảng 4.16 64 Bảng 4.16 Kết mổ khám nhóm gà đƣợc công cƣờng độc vi rút cúm gia cầm H5N6 clade 2.3.4.4b Công cƣờng độc với H5N6 clade 2.3.4.4b Liệu trình mũi Chỉ tiêu Liệu trình mũi Nhóm vắc xin Nhóm đối chứng Nhóm vắc xin Nhóm đối chứng Mào, tích thâm tím, phù nề 1/20 9/10 4/20 8/10 Khí quản viêm, xuất huyết 0/20 8/10 3/20 7/10 Phổi viêm, tụ huyết, xuất huyết 1/20 10/10 3/20 9/10 Xuất huyết tim, mỡ vành tim 0/20 5/10 2/20 6/10 Bao tim tích nƣớc vàng 0/20 7/10 1/20 5/10 Gan sƣng, tụ huyết, xuất huyết 0/20 4/10 1/20 5/10 Dạ dày tuyến xuất huyết 0/20 7/10 3/20 7/10 Ruột viêm, xuất huyết 1/20 7/10 3/20 8/10 Tuỵ biến màu, xuất huyết 0/20 5/10 1/20 6/10 10 Thận sƣng, tụ huyết, xuất huyết 0/20 5/10 1/20 6/10 11 Túi Fabricius sƣng 0/20 3/10 1/20 3/10 12 Lách sƣng, xuất huyết, biến màu 0/20 4/10 1/20 6/10 13 Não xung huyết 0/20 10/10 4/20 10/10 14 Xuất huyết da chân 1/20 7/10 3/20 9/10 STT Nhóm gà đối chứng: Sau gây nhiễm với virus cúm H5N6 clade 2.3.4.4b bệnh tích xuất hầu khắp quan thể với đặc trƣng phù, xung huyết xuất huyết Trong đó, bệnh tích trầm trọng tập trung phổi, não với 100 % số 65 có đặc điểm Nhóm gà tiêm vacxin: Những chết bệnh tích giống với nhóm gà đối chứng nhƣng triê ̣u chƣ́ng nhẹ Từ kết thấy tổn thƣơng đại thể quan sát đƣợc quan gà mắc cúm gia cầm H5N1 clade 2.3.2.1c H5N6 clade 2.3.4.4b giống Một số hình ảnh triê ̣u chƣ́ng, bệnh tích đại thể gà sau gây nhiễm với virus H5N1 clade 2.3.2.1c H5N6 clade 2.3.4.4b Xuấ t huyế t da chân Ủ rũ, mêṭ mỏi Ruột non xuất huyết Phổi phù, viêm, xuất huyết 66 Xuấ t huyế t tim, mỡ vành tim Não xung huyết Dạ dày tuyến xuất huyết 67 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu thu đƣợc, rút số kết luận nhƣ sau: (1) Trong năm 2018, toàn quốc xảy 07 ổ dịch cúm A/H5N6 07 hộ chăn nuôi gia cầm thuộc 05 tỉnh, thành phố Vi rút cúm gia cầm subtype H5N1 năm 2018 thuộc clade 2.3.2.1c khơng có biến đổi nhiều di truyền, vi rút H5N6 clade 2.3.4.4b phân chia thành nhiều nhánh phụ có nhánh xuất (2) Vắc xin vơ hoạt nhũ dầu AVIMEX KNew-H5 có khả kích thích kháng thể cúm A/H5 với mức hiệu giá kháng thể trung bình đạt 6.6 log2 sau tiêm mũi, đạt 8.2 log2 sau tiêm mũi (3) Thử nghiệm thử thách cƣờng độc thời điểm tuần sau tiêm mũi cho kết vắc xin có khả bảo hộ lâm sàng cho 95% gà đƣợc tiêm chống lại virus cúm gia cầm H5N1 clade 2.3.2.1c 45% gà đƣợc tiêm chống lại virus cúm gia cầm H5N6 clade 2.3.4.4b Thử nghiệm thử thách cƣờng độc thời điểm tuần sau tiêm mũi cho kết vắc xin có khả bảo hộ lâm sàng cho 95% gà đƣợc tiêm chống lại virus cúm gia cầm H5N1 clade 2.3.2.1c 80% gà đƣợc tiêm chống lại virus cúm gia cầm H5N6 clade 2.3.4.4b Khả bảo hộ lâm sàng chống lại virus H5N6 tăng cao rõ rệt sử dụng vắc xin với liệu trình mũi (4) Vắc xin AVIMEX KNew-H5 có tác dụng làm giảm rõ rệt khả thải vi rút môi trƣờng gà sau công cƣờng độc (5) Vắc xin AVIMEX KNew-H5 có tác dụng làm giảm triệu chứng, bệnh tích bệnh cúm gia cầm nhóm gà đƣợc tiêm vắc xin 5.2 KIẾN NGHỊ (1) Căn vào phân bố chủng vi rút để sử dụng loại vắc xin phòng bệnh phù hợp cho khả bảo hộ cao (2) Định kỳ lấy mẫu giám sát vi rút cúm gia cầm để tìm hiểu biến đổi vi rút 68 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu tiếng Việt: Bùi Quang Anh Văn Đăng Kỳ (2004) Bệnh cúm gia cầm: lƣu hành bệnh, chẩn đoán kiểm sốt dịch bệnh Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y tr 69 -75 Công văn Trung tâm Chẩn đốn Thú y TW (2014) Báo cáo thí nghiệm đánh giá độc lực vi rút cúm H5N6 hiệu lực vắc xin với vi rút H5N1 H5N6 gà, Công văn số 164/CĐ-VR ngày 04/9/2014 gửi Cục Thú y báo cáo kết thử nghiệm hiệu lực vắc xin cúm Cơng văn Trung tâm Chẩn đốn Thú y TW (2015) Báo cáo thí nghiệm đánh giá hiệu lực vắc xin cúm gia cầm chống lại vi rút H5N6 vịt Cơng văn Trung tâm Chẩn đốn Thú y TW (2016) Báo cáo thí nghiệm đánh giá hiệu lực vắc xin cúm gia cầm vi rút H5N1 H5N6 gà Công văn Trung tâm Chẩn đoán Thú y TW (2018) Báo cáo kết giải trình tự gen CGC Cục Thú y (2004) Bệnh cúm gia cầm biện pháp phòng chống Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội Cục Thú y (2015) Báo cáo tóm tắt kết cơng tác thú y 2015 kế hoạch công tác năm 2016 tr 81 Cục Thú y (2016) Hội nghị tổng kết công tác năm 2016 triển khai kế hoạch năm 2017 tr 79 Cục Thú y (2017) Hội nghị tổng kết công tác năm 2017 triển khai nhiệm vụ năm 2018 tr 82 10 Cục Thú y (2018): Báo cáo tổng kết cơng tác phịng, chớ ng dich ̣ bê ̣nh gia súc , gia cầ m năm 2018 triển khai nhiệm vụ năm 2019 tr 31 11 Lê Thanh Hòa (2006) Chiến lƣợc nghiên cứu ứng d ng vi rút vector tái tổ hợp sản xuất vaccine hệ Tạp chí Cơng nghệ Sinh học (4) tr 397 - 416 12 Lê Văn Năm (2004) Bệnh cúm gà Tạp chí Khoa học Thú y 12 tr 81-86 13 Lê Văn Năm (2007) Đại dịch cúm gia cầm nguyên tắc phòng chống Tạp chí khoa học kỹ thuật Thú y tr 91-94 14 Nguyễn Tiến Dũng, Đào Thanh Vân , Bùi Ngọc Anh, Kenjiro Inui, Bùi Nghĩa Vƣợng, Nguyễn Thế Vinh, Nguyễn Bá Thành Phạm Thị Kim Dung (2005) Giám sát tình trạng nhiễm vi rút cúm gia cầm đồng Sơng Cửu Long cuối năm 2004 Tạp chí khoa học kỹ thuật Thú y 12 (2) tr 13-18 69 15 Nguyễn Tiến Dũng (2008) Vài nét cúm gia cầm H5N1 Tạp chí Khoa học Thú y tr 80 - 86 16 Nguyễn Đăng Thọ, Nguyễn Hoàng Đăng, Đỗ Thị Hoa Đàm Thị Vui, Mai Thùy Dƣơng, Nguyễn Thị Điệp, Nguyễn Viết Không Tô Long Thành (2016) Vi rút cúm gia cầm độc lực cao H5N6 Việt Nam năm 2014 Tạp chí Khoa học Thú y tr 18 - 28 17 Phạm Sỹ Lăng (2004) Diễn biến bệnh cúm gia cầm Châu Á hoạt động phịng chống bệnh Tạp chí khoa học kỹ thuật Thú y (311) tr 91-94 18 Tô Long Thành (2007) Các loại vaccine cúm gia cầm đánh giá hiệu tiêm phịng Tạp chí Khoa học Thú y tr 84- 90 19 Trần Xuân Hạnh (2012) Sản xuất vắc xin cúm gia cầm Navet-vifluvac, chủng NIBGR-14 Việt Nam Tạp chí khoa học Thú y tr 89-92 20 Trần Xuân Hạnh, Tô Thị Phấn, Đỗ Thanh Thủy, Phạm Sĩ Tú, Tô Long Thành, Tống Hữu Hiến, Nguyễn Hoàng Đăng Đàm Thị Vui (2013) Thử hiệu lực vắc xin Navet-vifluvac phòng bệnh cúm A/H5N1 clade 1.1 2.3.2.1c phƣơng pháp công cƣờng độc tiếp xúc trực tiếp Tap chí Khoa học Thú y tr.22-29 21 Trƣơng Văn Dung Nguyễn Viết Không (2004) Một số hoạt động nghiên cứu khoa học Viện Thú y Quốc gia bệnh Cúm gia cầm giải pháp khoa học công nghệ thời gian tới Tạp chí Khoa học Thú y tr 62 - 68 II Tài liệu tiếng Anh: 22 Alexander D.J., McFerran J.B., McNulty M S and Horzinek M.C (1993) Orthomyxo virus Infections‖, In Viral Infections of Vertebrates, Volume 3: Viral Infections of Birds pp 287- 316 23 Beard, M Brugh and RG Webster (1987) Emergence of amantadine-resistant H5N2 avian influenza virus during a simulated layer flock treatment program Avian diseases pp 533-537 24 Castrucci, Maria R, Kawaoka and YOSHIHIRO (1993) Biologic importance of neuraminidase stalk length in influenza A virus Journal of virology 67 (2) pp 759-764 25 De Vries, Erik, Hongbo Guo, Meiling Dai, Peter JM Rottier, Frank JM van Kuppeveld and Cornelis AM de Haan (2015) Rapid emergence of highly pathogenic avian influenza subtypes from a subtype H5N1 hemagglutinin variant Emerging infectious diseases 21 (5) pp 842 26 E Centanni and O Savonuzzi (1965) cited by Stubbs EL:" Fowl plague." Diseases of poultry 70 27 F Y Wong, P Phommachanh, W Kalpravidh, C Chanthavisouk, J Gilbert, J Bingham, K R Davies, J Cooke, D Eagles, S Phiphakhavong, S Shan, V Stevens, D T Williams, P Bounma, B Khambounheuang, C Morrissy, B Douangngeun and S Morzaria (2015) Reassortant highly pathogenic influenza A (H5N6) virus in Laos 10.3201/eid2103.141488: 10.3201/eid2103.141488 Emerg Infect Dis 21 (3) pp 511-6 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25695754 28 Liu, Chun-Guo, Ming Liu, Fei Liu, Rang Lv, Da-Fei Liu, Lian-Dong Qu and Yun Zhang (2013) Emerging multiple reassortant H5N5 avian influenza virus in ducks, China, 2008 Veterinary microbiology 167 (3) pp 296-306 29 Luo, Guangxiang and Peter Palese (1992) Genetic analysis of influenza virus Current opinion in genetics & development (1) pp 77-81 30 Murphy, B and R Webster (1996) Orthomyxo viruses BN Fields, DM: Knipe, PM: Howley et al Virology 3rd edition, Raven Publishers, Philadelphia pp 1424-1429 31 Nguyen Tung, Pierre Rivailler, C Todd Davis, Amanda Balish, Nguyen Hoang Dang, Joyce Jones, Dam Thi Vui, Natosha Simpson, Ngo Thu Huong and Bo Shu (2012) Evolution of highly pathogenic avian influenza (H5N1) virus populations in Vietnam between 2007 and 2010 Virology 432 (2) pp 405-416 32 Suarez, DL and S Schultz-Cherry (2000) Immunology of avian influenza virus: a review Developmental & Comparative Immunology 24 (2) pp 269-283 33 T Dung Nguyen (2008) Multiple Sublineages of Influenza A Virus (H5N1), Vietnam, 2005− 2007-Volume 14, Number 4—April 2008-Emerging Infectious Disease journal-CDC 34 Tumpey, Terrence M, Suarez, David L , Perkins, Laura EL, Senne, Dennis A, Jaegil Lee, Youn-Jeong Lee, In-Pil Mo, Haan-Woo Sung and David E Swayne (2002) Characterization of a highly pathogenic H5N1 avian influenza A virus isolated from duck meat Journal of virology 76 (12) pp 6344-6355 35 Wanasawaeng, Wisanu, Bunpapong, Napawan, Leelamanit, Wichet, Thanawongnuwech and Roongroje (2009) Growth characteristics of the H5N1 avian influenza virus in chicken embryonic eggs and MDCK cells The Thai Journal of Veterinary Medicine 39 (3) pp 281-286 36 WHO (2014) WHO China statement on H5N6: http://www.wpro.who.int/china/mediacentre/releases/2014/20140507/en/ 71 PHỤ LỤC Mô ̣t số hin ̀ h ảnh của đề tài Gà tuầ n tuổ i Tiêm vắ c xin mũi vào lúc gà tuầ n tuổ i Kiể m tra hiêụ giá kháng thể sau tiêm phòng 72 Công cƣờng độc ... Knew- H5 sử dụng gà để chống lại vi rút cúm gia cầm H5N1 clade 2. 3 .2. 1 H5N6 clade 2. 3. 4. 4 phân lập Vi? ??t Nam năm 20 17 ” 1 .2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU Đánh giá hiệu lực vắc xin AVIMEX Knew- H5 (clade 1) sử dụng. .. dụng gà để chống lại vi rút cúm gia cầm H5N1 clade 2. 3 .2. 1c H5N6 clade 2. 3. 4. 4b phân lập Vi? ??t Nam năm 20 17 1 .3 PHẠM VI NGHIÊN CỨU Đánh giá hiệu lực vắc xin vô hoạt AVIMEX Knew- H5 sử dụng gà Sử dụng. .. A/Dk/Vietnam/BacNinh/NCVD -17 A3 84 /20 17 (H5N1) + H5N6 clade 2. 3. 4. 4b phân lập từ mẫu gà Lào Cai tháng 4 /20 17 – Tên chủng vi rút: A/Ck/Vietnam/LaoCai/NCVD -17 A2 61 /20 17 (H5N6) - Kháng nguyên chuẩn H5N1: A/Vietnam/ 12 0 3 /20 04 (H5N1)