NCKH

LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình học tập trường Đại học Tây Đô nhận nhiều quan tâm, giúp đỡ, hỗ trợ từ quý Thầy Cơ, gia đình bạn bè Tơi vơ biết ơn người giành tất tình yêu thương, tình cảm góp phần sức lực để tơi vượt qua qng đường dài học tập đầy khó khăn thử thách Trước tiên tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Thị Thu Hương tận tình bảo, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi giúp hồn thành đề tài Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới Ban Giám Hiệu, môn, Thầy Cô Trường Đại học Tây Đô giảng dạy trang bị cho kiến thức bản, tận tình giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi suốt q trình học tập Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Ban Giám Đốc, tập thể anh chị em phòng Lab Trung tâm Sâm Dược Liệu nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện tốt cho tơi hồn thành đề tài Cuối cùng, tơi xin kính chúc q Thầy Cô trường Đại học Tây Đô thật dồi sức khỏe, niềm tin để tiếp tục thực sứ mệnh cao đẹp truyền đạt kiến thức cho hệ mai sau, Cô, Chú, Anh, Chị Y Dược sĩ Trung tâm Sâm Dược Liệu vui vẻ, mạnh khỏe thành công công việc lẫn sống Tôi xin chân thành cảm ơn! LỜI CAM KẾT Tôi xin cam kết luận văn dựa kết nghiên cứu hướng dẫn Cô PGS.TS Nguyễn Thị Thu Hương Các số liệu kết có luận văn hoàn toàn trung thực chưa cơng bố luận văn trước Cán hướng dẫn Sinh viên thực PGS.TS Nguyễn Thị Thu Hương DS Nguyễn Việt Quang DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Từ viết tắt Ý nghĩa AVEs Advanced Glycation End CAT DNA Catalase Deoxyribonucleic acid 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl DPPH GPX PKC RNA ROS RSS RNS Glutathione peroxidase Protein kinase C Ribonucleic acid Reactive oxygen species Reactive sulfua species Reactive nitrogen species DANH SÁCH HÌNH Hình 2.1 Cây Trứng Cá (Muntingiaceae) Hình 2.2 Cơ chế hoạt động chất chống oxy hóa Hình 2.3 Cấu trúc vitamin C phản ứng oxy hóa Hình 2.4 Cấu trúc vitamin E phản ứng oxy hóa Hình 2.5 Cấu trúc gan DANH SÁCH BẢNG MỤC LỤC CHƯƠNG GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề Gan đóng vai trị quan trọng q trình chuyển hóa thực hiên số chức khác thể dự trữ glycogen, tổng hợp protein huyết tương thải độc Gan điều hòa nhiều phản ứng hóa sinh mà phản ứng xảy số tổ chức đặc biệt thể Những bệnh lý liên quan đến gan thường loại virus (A, B, C,…), thuốc, rượu hóa chất xâm nhập vào gan Theo thống kê vào năm 2006 WHO, Việt Nam chiếm 5% tỉ lệ người bị bệnh gan, đến năm 2011 Việt Nam đứng hàng thứ 53 chiếm 15,7% số người mắc bệnh gan Gan tổn thương có nhiều tác nhân bên ngồi như: nhiễm môi trường, lạm dụng thuốc, ăn uống không điều độ, stress, uống nhiều rượu bia chất kích thích khác… Những tác động làm gan bị suy yếu làm việc sức dẫn đến tình trạng stress oxy hóa Stress oxy hố ngun nhân cho phát triển nhiều bệnh làm trầm trọng thêm triệu chứng bệnh nguy hiểm bệnh Alzheimer, bệnh tiểu đường, Parkinson, bệnh ung thư, nhồi máu tim, viêm loét dày v.v Hiện nay, bệnh gan chưa có thuốc đặt trị, bệnh nhân chủ yếu điều trị bằng thuốc làm tăng khả phục hồi bảo vệ gan Một số thuốc bảo vệ gan nhập vào Việt Nam Silymarin, Biphenyldimethyl dicarboxylat có tác dụng tương đối tốt giá thành cao, không phù hợp với điều kiện kinh tế đa số người bệnh phải dùng thuốc dài ngày Vì việc nghiên cứu thuốc bảo vệ gan từ nguồn nhiên liệu nước điều cần thiết Với phong phú đa dạng sinh học bậc khu vực Đơng Nam Á nước ta có nguồn thảo dược dồi Những dược liệu chữa bệnh gan có nhiều sử dụng rộng rãi actiso, nghệ vàng,… Việc tìm kiếm, bổ sung vào danh mục dược liệu việc cần thiết mang ý nghĩa thực tiễn Cây Trứng Cá (Muntingiaceae) lồi thực vật có khả kháng oxy hóa, kháng khuẩn, trị bệnh ung thư, loét dày,… Đặc biệt, số bệnh liên quan đến gan Đây loài thực vật mọc hoang nhiều vùng, gần ao hồ, hầu hết tỉnh đồng bằng sơng Cửu Long Cây Trứng Cá thu hoạch quanh năm, dễ trồng vùng nhiệt đới Việt Nam Mặc dù vậy, nghiên cứu khả điều trị bệnh Cây Trứng Cá hạn chế Cây Trứng Cá dùng dân gian, điều trị bệnh theo kinh nghiệm người mà chưa có nghiên cứu, chứng minh khoa học Vì vậy, nghiên cứu “Khảo sát hiệu kháng oxy hóa bảo vệ gan cao methanol Trứng Cá (Muntingiaceae) in vivo chuột tổn thương gan” điều cần thiết 1.2 Mục tiêu đề tài Khảo sát khả kháng oxy hóa cao chiết bằng dung môi methanol Trứng Cá gan chuột bị tổn thương CCl4 CHƯƠNG LƯỢT KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan Trứng Cá (Muntingiaceae) 2.1.1 Phân loại Giới: Plantae Bộ: Malvales Họ: Muntingiaceae Chi: Muntingia Lồi: M calabura 2.1.2 Đặc điểm phân loại Hình 2.1 Cây Trứng Cá (Muntingiaceae) Cây Trứng Cá thân thảo, thuộc loại thực vật tiểu mộc thuộc họ Acanthaceae Ở Ở Thân gỗ nhỏ cao 7-12 m, cành xếp chồng lên rủ xuống Nó có có mép khía cưa, dài 2,5-15 cm rộng 1-6,5 cm Các hoa nhỏ màu trắng, tạo chín có màu đỏ nhạt đường kính khoảng 11,5 cm Quả ăn được, có vị mọng nước, chứa nhiều hạt nhỏ (0,5 mm) màu vàng trông trứng cá Hoa Trứng Cá trắng, xếp thành cánh, đối xứng với Hoa dài khoảng cm, hoa hình xoan Đài hoa màu xanh dài 1,5 cm Cánh hoa màu trắng, môi, môi màu xanh nhạt, tràng hoa hợp thành ống ngắn có nhiều tiểu nhụy ngắn so với vành hoa Quả dạng hình trịn màu đỏ chín xanh chưa chín, bóng, xốp, mọng nước có vị thanh, đường kính khoảng cm, hình trịn chứa nhiều hạt 2.1.3 Phân bố sinh thái Cây thích hợp phát triển tốt đất nghèo dinh dưỡng, có khả chịu điều kiện chua mặn khô hạn Việt Nam, Cây Trứng Cá mọc vùng ven sông, gần ao hồ nước ngọt, vùng đất phèn, Cây có mặt hầu hết tình đồng bằng sơng Cửu Long, có nhiều Long An, Hậu Giang, An Giang, Kiên Giang 2.1.4 Thành phần hóa học cơng dụng Theo tạp chí Dược học số: 509- tháng 9/2018 – Trang 54- 56 Thành phần hóa học trứng cá flavonoid.Ngồi flavonoid, trứng cá cịn có chứa acid hữu cơ, methyl gallat, β–sitosterol, stigmasterol Từ xưa Việt Nam trứng cá sắc uống để lợi kinh trị bệnh gan Trên giới có nhiều nghiên cứu tác dụng trứng cá hợp chất phân lập từ trứng cá kháng khuẩn, kháng viêm, độc tế bào hoạt tính chống oxy hóa Ba flavonoid phân lập từ phân đoạn ethyl acetat trứng cá (Muntingia calabura L.) xác định kaempferol, tilirosid, kaempferol 3-O-(6”-O-galloyl)-β-Dglucopyranosid Riêng hợp chất kaempferol 3-O-(6”-O-galloyl)-β-Dglucopyranosid (3) lần phân lập từ trứng cá 2.1.5 Các nghiên cứu nước Trứng Cá nước ta, nghiên cứu Cây Trứng Cá ứng dụng chủ yếu để điều trị bệnh dân gian viêm gan, ung thư gan, sát trùng, tê thấp, nhức mỏi, bảo vệ dày, … (Võ Văn Chi, 1997; Phạm Hoàng Hộ, 2003) Một số nghiên cứu chứng minh Cây Trứng Cá có khả kháng oxy hóa (Đái Thị Xuân Trang, 2014), phòng ngừa ung thư (Đỗ Thị Thảo, 2005) Những nghiên cứu ứng dụng Cây Trứng Cá cịn Nhiều cơng trình nghiên cứu giới liên quan đến Cây Trứng Cá thực để minh hoạt động dược lý Trứng Cá Hoạt động bảo vệ dày từ Cây Trứng Cá (Muntingiaceae) nghiên cứu (BMC Complement Altern Med 2016) Hoạt động kháng khuẩn chống nhiễm trùng Cây Trứng Cá chứng minh (Evid Based Complement Alternat Med 2013) Hoạt động bảo vệ gan chống lại nhiễm độc Paracetamol dịch chiết từ Cây Trứng Cá ( Pharmacol 2017) Flavonoid từ Cây Trứng Cá ức chế phản ứng viêm nhiễm (Molecules 2014) 2.2 Tổng quan stress oxy hóa gốc tự 2.2.1 Stress oxy hóa Stress oxy hóa trạng thái hủy hoại tế bào, mô, quan cách liên tục bằng oxy hóa gây dạng oxy phản ứng (ROS Reactive oxygen species) Sự hủy hoại tác động đến loại phân tử đặc hiệu thể tác động đến toàn thể quan Các dạng oxy phản ứng, gốc tự peroxide, lớp phân tử bắt nguồn từ q trình chuyển hóa oxy sinh vật Sự cân bằng gốc tự chất kháng oxy hóa thể nguyên nhân gây stress oxy hóa Các gốc tự phân tử có hay số điện tử riêng lẻ hay lớp ngồi Cấu hình khơng ổn định ln có xu hướng lấy điện tử phân tử liền kề protein, chất béo, carbohydrate acid nucleic Trong hệ thống sinh học, gốc tự có nguồn gốc từ nitơ, oxy phân tử lưu huỳnh Những gốc tự nhóm gọi dạng oxy hóa phản ứng (ROS: Reactive oxygen species), dạng nitơ phản ứng (RNS: Reactive nitrogen species) dạng lưu huỳnh phản ứng (RSS: Reactive sulfur species) ROS bao gồm gốc tự superoxide (O2.-), hydroxyl (-OH), nitric oxide (NO) loài khác hydrogen peroxide (H2O2), acid hypochlorous (HOCl) peroxyl nitrite (ONOO) RNS bắt nguồn từ NO thông qua phản ứng với (O 2.-) để hình thành ONOO RSS dễ dàng hình thành từ phản ứng ROS (Sies and Helmut, 1997; Lại Thị Ngọc Hà Vũ Thị Thư, 2009 Phần lớn gốc tự hoạt động mạnh gây nhiều tổn hại cho thể ROS Oxy biết đến nguyên tố thiếu để đảm bảo cho sống, tế bào cần đến oxy để chuyển hóa chất dinh dưỡng thành lượng tượng thực bào, tượng hô hấp tế bào chế giải độc gan Oxy sử dụng hô hấp chất cần thiết trở thành gốc tự ROS tạo q trình chuyển hóa tế bào hoạt động chức ROS có vai trò quan trọng biểu gen vận chuyển ion ROS ln sinh có vai trị tích cực thể sinh vật biểu gen vận chuyển ion, điều hòa phân ly tế bào, kích hoạt yếu tố phiên mã (NFkB, p38-MAP kinase,…) cho gen tham gia trình miễn dịch, kháng viêm; điều hịa biểu gen mã hóa (Favier, 2003; Pincemail & et al.,1998; Pincemail, 2006) Bên cạnh lợi gốc tự có ảnh hưởng mạnh mẽ đến thể số lượng tăng lên nhiều ROS phát sinh q trình chiếu xạ ánh sáng tia cực tím, tia X tia gamma, phản ứng xúc tác kim loại, chất ô nhiễm khơng khí, sản xuất hạch cầu trung tính đại thực bào q trình viêm nhiêmm̃ srn phẩm ty thể xúc tác phản ứng vận chuyển điện tử , sản phẩm căng thẳng , mêṭmỏi , thuốc lá, dươcc̣ phẩm vànhƣm̃ng thối quen ăn uống không khoa hocc̣, thưcc̣ phẩm cóhóa màu tổng hơpc̣, nước cónhiều chlorine (Amstrong, 2002) Gốc tự tạo nên từ vô số phản ứng hóa học thể chủ yếu hình thành trình giảm electron phân tử oxy Gốc tự tạo nhân tố mơi trường như: tia cực tím, khói thuốc lá, chất béo bão hịa, viêm nhiễm mãn tính, dược phẩm, thực phẩm có chất màu tổng hợp, nước có nhiều chlorine, ảnh hưởng thuốc trừ cỏ, stress, thói quen ăn uống không khoa học chất ô nhiễm khác…(Amstrong, 2002) Gốc tự nguyên tử, phân tử ion có điện tử lẻ đơi vịng ngồi nên mang điện tích âm có khả ơxy hóa tế bào, phân tử, nguyên tử khác Các gốc tự liên quan đến nhiều phản ứng mô sống với vai trị chất trung gian có hoạt tính mạnh thời gian ngắn, ví dụ tượng quang hợp Các gốc tự công tất cấu trúc tế bào thể, đặc biệt tế bào chứa nhiều chất lipid Trong hệ thần kinh, não quan chứa 60% acid béo, não nơi dễ chịu tác động gốc tự Đây vấn đề quan trọng não có khối lượng bằng 2% khối lượng thể não lại tiêu thụ tới khoảng 20% glucose oxy máu cung ứng Khi tuổi cao, cung cấp máu đến não tiêu thụ oxy não giảm Sự oxy hóa glucose não bị kìm hãm chu trình Krebs (chuyển hóa tế bào) gây giảm dự trữ lượng Adenosine Triphosphat (ATP) giảm lượng cần cho phản ứng tổng hợp vận chuyển ion tế bào Mặt khác, lắng đọng lipofuscin tích tụ bào tương tế bào tuổi cao, liên quan tới tăng q trình oxy hóa acid béo khơng bão hịa Gốc tự nồng độ cao thể oxy hóa đại phân tử sinh học gây nên đột biến DNA; biến tính protein; oxy hóa lipid (Favier, 2003) Là nguyên nhân nhiều bệnh nguy hiểm Sự oxy hóa lipoprotein có tỷ trọng thấp dẫn đến hình thành vạch lipid thành mạch máu gây nên bệnh huyết áp cao số bệnh tim mạch khác Gốc tự cịn cơng phospholipid màng tế bào làm thay đổi tính linh động, chức nhiều thụ thể màng, ảnh hưởng đến tính thẩ m thấu màng trao đổi thông tin tế bào môi trường ROS tác động lên DNA gây nên biến dị di truyền nguy phát triển bệnh ung thư; tác động đến hoạt động nhiều enzyme, protein gây vô hoạt; tham gia vào trình gây bệnh suy giảm hệ thần kinh Alzheimer, Pakinson Sự tích lũy nhiều sản phẩm oxy hóa gây nên tượng lão hóa sớm (Lại Thị Ngọc Hà Vũ Thị Thư, 2009) 2.2.2 Khái niệm kháng oxy hóa Chất kháng oxi hóa giúp ngăn chặn làm chậm q trình oxi hóa chất khác Các chất kháng oxy hóa hoạt động theo phương thức sau: (1) Các chất trực tiếp trung hòa gốc tự bằng cách cho điện tử (e -) để kết hợp với điện tử lẻ gốc tự (2) Làm giảm nồng độ peroxyde sửa chữa màng bị oxy hóa (3) Tác động đến hệ thống kháng oxy hóa nội sinh để làm tăng hoạt động kháng oxy hóa thể (Berger 2005) Dựa nguyên tắc hoạt động, chất kháng oxy hóa phân thành hai loại: Các chất kháng oxy hóa bậc chất kháng oxy hóa bậc hai Các chất kháng oxy hóa bậc khử kết hợp với gốc tự làm kìm hãm pha khởi phát bẻ gãy dây chuyền phản ứng q trình oxy hóa Các chất kháng oxy hóa bậc hai kìm hãm tạo thành gốc tự (hấp thụ tia cực tím; tạo phức với kim loại kích hoạt tạo gốc tự Cu, Fe; bất hoạt oxy đơn) (Rolland, 2004; Singh and Rajini, 2004) Ở mức độ tế bào, chất kháng oxy hóa làm giảm gốc tự bằng cách làm hoạt động biểu enzyme tạo gốc tự nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidate (NADPH), nitro oxidase (NOx) xanthine oxidase (XO) bằng cách tăng cường hoạt động biểu enzyme kháng oxy hóa superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) glutathione peroxidase (GPX) Tế bào động vật có chứa enzyme SOD chuyển đổi hai O thành H2O2 O2 Tiếp theo đó, H2O2 enzyme catalase chuyển đổi thành H 2O O2 Các chất kháng oxy hóa phản ứng trực tiếp với gốc tự phá hủy chúng Sau đó, chất kháng oxy hóa trở thành gốc tự hoạt động nguy hiểm so với gốc tự mà vơ hiệu hóa Chất kháng oxy hóa hiệu thể enzyme PGX, CAT, SOD (Mates, 1999) Hình 2.2 Cơ chế hoạt động chất chống oxy hóa Các chất kháng oxy hóa gồm chất oxy hóa nội sinh ngoại sinh Các chất kháng oxy hóa nội sinh bao gồm protein (ferritine, tranaferrine, albumin) enzyme kháng oxy hóa (superoxide dimautase, glutathione peroxidase) Các chất ngoại sinh phân tử nhỏ đưa vào thể bao gồm vitamin C, vitamin E, carotenoid hợp chất phenolic (Lachman, 2000) 2.2.3 Các chất chống oxy hóa phổ biến Các chất kháng oxy hóa có nguồn gốc từ thực vật đóng vai trò quan trọng bảo vệ sức khỏe Các chất làm giảm nguy bệnh mãn tính ung thư, bệnh tim Vitamin C: Vitamin C có khả vô hoạt gốc tự tốt chuyển cho gốc tự hai nguyên tử Hydro trở thành dehydroascorbic acid (Pricemail, 1998) (Hình 2.4) - Hình 2.3 Cấu trúc vitamin C phản ứng oxy hóa Vitamin C cịn có khả hoạt động hiệp lực với chất kháng oxy hoá khác thể như: Vitamin E, carotenoid flavonoid Khi tiếp xúc vitamin E gốc tự peroxyde acid béo, vitamin E chuyển điện tử cho gốc tự đồng thời vitamin E trở thành gốc tự tocopheryl (vitamin E dạng oxy hoá).Vitamin C tiến hành khử gốc tocopheryl-O- thành tocopherol-OH vitamin E nguyên dạng, sẵn sàng bất hoạt hoá gốc tự peroxyde Các carotenoid flavonoid bất hoạt gốc tự hoàn nguyên với chế tương tự với vitamin C Góp phần hạn chế kích hoạt oxy hố (pro-oxydante) gốc vitamin E flavonoid (Jovanovic and Simic, 2000; Burke et al., 2001) - Vitamin E: Vitamin E tồn tám dạng tự nhiên: bốn dạng tocopherol bốn dạng tocotrienol Tính chất hịa tan chất béo vitamin E giúp chúng có khả thâm nhập sâu vào màng sinh học vốn chứa nhiều acid béo không no ngăn cản chuỗi phản ứng oxy hóa lipid Các vitamin E chuyển hydro cho gốc tự peroxyde Gốc tocopheryl tạo thành khử trạng thái ban đầu nhờ vitamin C (Niki et al., 1995; Huang et al., 2002; Pincemail, 2006) Hình 2.4 Cấu trúc vitamin E phản ứng oxy hóa Khả kháng oxy hoá vitamin E phụ thuộc vào mức độ cản trở khơng gian nhóm methyl vị trí ortho nhóm hydroxyl vịng thơm Nhóm hydroxyl bị cản trở khả kháng oxy hoá cao (Huang et al., 2002) Carotenoid: Carotenoid hợp chất màu hữu có thực vật số sinh vật có khả quang hợp, có khả bất hoạt gốc tự Trong thể, carotenoid hoạt động với chất kháng oxy hóa khác Các gốc tocopheryl khử thành dạng hoạt động tocopherol nhờ nhận hydro từ vitamin C với chất vận chuyển trung gian carotenoid (Niki et al., 1995; Stahl and Sies, 2003) - - Silymarin: Sylimarin có khả vơ hiệu hóa gốc tự sinh nhiều gan bị viêm, bị tổn thương Sylimarin có tác dụng ổn định màng tế bào, ngăn cản trình xâm nhập chất độc vào bên tế bào gan, giúp cho tế bào không bị chất độc xâm nhập huỷ hoại, làm bền vững màng tế bào, trì cấu trúc, chức tế bào bằng cách ổn định tính thấm màng thơng qua ức chế lipid peroxyde ngăn ngừa suy giảm glutathione (Skottova et al., 2003) Đây chế giải độc gan Sylimarin Trong nhiều nghiên cứu dùng mơ hình thử chuột, Sylimarin có tác dụng bảo vệ mô gan từ nhiễm độc chất gây độc gan paracetamol, rượu, CCl4… Ngoài ra, chất kháng oxy hóa có nguồn gốc tự nhiên acid phenoid, phytate, estrogen thực vật chứng minh làm giảm nguy mắc bệnh Đặc điểm chất có khả làm phục hồi gốc tự Hiện nay, chất kháng oxy hóa tự nhiên quan tâm sử dung rộng rãi giới tính an tồn, hiệu bị tác dụng phụ sản phẩm tổng hợp Việc thể sản sinh gốc tự trình trao đổi chất tránh khỏi Điều quan trọng thể khoẻ mạnh, gốc tự sinh có giới hạn, không thừa để gây hại Các chất kháng oxy hóa, có nhiệm vụ cân bằng lại, vơ hiệu hố gốc tự có hại Chỉ gốc tự sinh nhiều hệ thống chất chống oxy hố nội sinh khơng đủ sức cân bằng sinh rối loạn bệnh lý Khi đó, thể người cần bổ sung chất kháng oxy hóa Đó vitamin A, C E; Beta carotene, lutein, acid alpha lipoic, selen, carotenoid hay Coenzyme Q10 Các chất gọi chất kháng o xy hóa chứa phân tử có nhiều electron dự trữ, có khả làm cân bằng gốc tự do, giúp giữ ổn định chức cấu trúc tế bào khỏe mạnh (Prakash, 2000; Zin, 2002) - Flavonoid: Flavonoid nhóm hợp chất, nhờ vào khả sửa chữa phản ứng thể chống lại hợp chất khác dị ứng nguyên, virus chất sinh ung thư Nhờ chúng có đặc tính kháng viêm, kháng dị ứng, chống virus ung thư Hơn nữa, flavonoid chất chống oxy hóa mạnh giúp thể chống lại tổn thương oxy hóa gốc tự cách hữu hiệu Nhờ flavonoid cịn có tác dụng bảo vệ hệ tim mạch, giảm nguy tử vong bệnh lý tim mạch thiếu máu tim, đau thắt ngực, nhồi máu tim, xơ vữa động mạch nhờ khả chống ôxy hóa khơng hồn tồn cholesterol (cũng giống chất chống ơxy hóa khác vitamin C, E, ) Nếu lượng flavonoid cung cấp hàng ngày giảm đi, nguy bệnh lý tăng lên rõ rệt Khả chống ơxy hóa flavonoid cịn mạnh chất khác vitamin C, E, selenium kẽm Mỗi loại flavonoid mang lại lợi ích riêng, chúng thường hoạt động hỗ trợ phổ tác dụng thường chồng chéo lên 2.3 CÁC BỆNH LIÊN QUAN ĐẾN STRESS OXY HĨA 2.3.1 Bệnh lão hóa Lão hóa suy giảm khả hoạt động quan thể Lão hóa biểu giảm khả chống chọi với stress, dần cân bằng nội môi tăng nguy mắc bệnh tật Do đó, sư c̣chết kết cục cuối lão hóa Cơ bản, q trình oxi hóa giải phóng gốc tự Gốc tư c̣do gây tổn hại cho tế bào bằng cách chiếm đoạt điện tử phân tử bên cạnh chúng, gây tổn hại chức tế bào, đẩy nhanh q trình lão hóa gây nên nhiều chứng bệnh khác Cuộc sống đại với ô nhiễm môi trường, thuốc lá, stress, thói quen ăn uống khơng khoa học Các gốc tự có mối liên hệ với q trình lão hóa nhà khoa chấp nhận lời giải thích phản ứng hóa học có liên quan đến gốc tự nguyên nhân lão hóa Một mơ hình tam giác bên tế bào mô tả bao gồm: cân bằng oxy hóa, q trình oxy hóa, chất chống oxy hóa phân tử sinh học đặt đỉnh tam giác Trong tình trạng sức khỏe bình thường, ba yếu tố giữ trạng thái cân bằng Đến gốc tự sinh nhiều dẫn đến xảy trình oxy hóa tiếp tục góp phần làm suy giảm chức tế bào (Carmeli el at., 2002) Ngày nay, cơng trình nghiên cứu khoa học giới hướng tới nhằm làm giảm q trình lão hóa người, hạn chế gốc tự thể Việc làm kéo dài tuổi thọ người, mà kéo dài tuổi trẻ người 2.3.2 Bệnh Alzheimer Bệnh Alzheimer (AD, SDAT) bệnh thối hóa, não khơng hồi phục, gây nên chứng sa sút trí tuệ người cao tuổi Tổn thương tế bào thần kinh vỏ não cấu trúc xung quanh làm sa sút trí nhớ, giảm phối hợp vận động, giảm cảm giác, nhận cảm sai , cuối trí nhớ chức tâm thần Sự xuất gốc tự tế bào thần kinh ngun nhân gây lão hóa thối hóa thần kinh não Biểu bệnh Alzeimer: trí nhớ (đây triệu chứng sớm Alzheimer người cao tuổi), trí nhớ hồn tồn, tập trung tư tưởng, sụt cân khơng giải thích được, khó khăn việc lại Các yếu tố lâm sàng bệnh Alzheimer không đồng nên khó xác định nguyên nhân tiến triển bệnh Nhiều bằng chứng gần xác định trình oxy hóa ngun nhân tiềm tàng bệnh Alzheimer Do đó, để phịng ngừa bệnh Alzheimer chủ yếu tăng cường chất kháng oxy hóa chế độ dinh dưỡng, sử dụng thuốc, vaccin tập thể dục thể thao (Waldemar G, 2007; Forstl, 1999) 2.3.3 Bệnh ung thư Nguyên nhân gây ung thư sai hỏng DNA, tạo nên đột biến gene thiết yếu điều khiển trình phân bào chế quan trọng khác Một nhiều đột biến tích lũy lại gây tăng sinh - khơng kiểm sốt tạo thành khối u Khối u khối mơ bất thường, ác tính, tức ung thư lành tính, tức khơng ung thư Chỉ khối u ác tính xâm lấn mô khác di Ung thư bệnh nguy hiểm, chia làm giai đoạn gốc tự tác động tất giai đoạn ung thư Giai đoạn đầu: ung thư chỗ Các gốc tự sinh nhiều gây tổn hại đến DNA, tạo đột biến gen bằng tác động gây thay đổi cấu trúc DNA tự thúc đẩy chuyển đổi gây ung thư - Giai đoạn I, II, III: khối u lớn dần hoăcc̣ lan khỏi quan ban đầu đến mạch bạch huyết quan kế cận Gốc tự tạo nhiều gây tắc nghẽn hệ thống thông tin thứ cấp làm tăng tế bào ung thư làm giảm tế bào khỏe mạnh - Giai đoạn IV: ung thư lan sang nhiều quan khác Gốc tự tiếp tục làm thay đổi DNA làm gia tăng tế bào ung thư Người bị ung thư điều trị bằng phẫu thuật, hóa trị xạ trị liệu Đã có nghiên cứu chứng minh rằng số chất kháng oxy hóa có khả làm giảm tỉ lệ mắc bệnh ung thư Tác dụng vitamin E chứng minh làm giảm tỷ lệ mắc ung thư vú, phổi, đại tràng tuyến tiền liệt (Gaziano et al, 2009) 2.3.4 Bệnh đái tháo đường Bệnh đái tháo đường đươcc̣ chia làm hai loaị bệnh đái tháo đường type bệnh đái tháo đường type Bệnh đái tháo đường typ tế bào β bị phá hủy, gây nên thiếu hụt insulin tuyệt đối thể Đái tháo đường type chiếm chiếm khoãng 5-10% bệnh đái tháo đường giới Bệnh đái tháo đường type phụ thuộc nhiều vào yếu tố di truyền thường phát trước 40 tuổi, Đa số trường hợp chuẩn đoán bệnh đái tháo đường type thường người trạng gầy Người bệnh đái tháo đường type có đời sống phụ thuộc hồn toàn vào insulin Bệnh đái tháo đường type bệnh kháng insulin quan đích kèm theo giảm chức tế bào β suy giảm chức tế bào β kèm theo kháng insulin quan đích Bệnh đái tháo đường type chiếm tỷ lệ 90% đái tháo đường giới Đái tháo đường type không phụ thuộc vào yếu tố di truyền, thường phát sau 40 tuổi Người bệnh đái tháo đường typ điều chình lượng đường bằng cách thay đổi thói quen kết hợp dùng thuốc để kiểm soát glucose máu Tuy nhiên q trình thực khơng tốt bệnh nhân phải điều trị bằng cách dùng insulin (Zimmet, 2001; Nguyễn Thị Baỵ, 2007) Stress oxy hóa xem nguyên nhân bệnh đái tháo đường Tăng glucose huyết gây stress oxy hóa thơng qua hình thành AVEs (Advanced Glycation End Product-AGEs), gia tăng hoạt hóa protein kinase C (PKC) gia tăng vận chuyển dẫn xuất acid amin đường hexose AGEs sinh ROS, gắn vào thụ thể thúc đẩy oxy hóa kích thích chế làm sản sinh chất oxy hóa nội bào Sự hoạt động ROS dẫn đến rối loạn chức nội môi, tiền chất dẫn đến phát triển bệnh tim mạch Vì vậy, việc kiểm soát hoạt động ROS xem cách hợp lý để kháng lại biến chứng mạch máu phức tạp bệnh tiểu đường Tăng đường huyết mãn tính dẫn đến tăng gốc oxy tự gây nhiều q trình oxy hóa (Tripathi, 2009) 2.3.5 Bệnh cao huyết áp Theo hội tim mạch Quốc gia Việt Nam, bệnh cao huyết áp vấn đề thường gặp cộng đồng Tỷ lệ người mắc bệnh ngày tăng tuổi bị mắc bệnh ngày trẻ Vào năm 2000, theo thống kê Tổ chức Y tế Thế giới (WHO), toàn thể giới có tới 972 triệu người bị bệnh cao huyết áp số ước tính vào khoảng 1,56 tỷ người vào năm 2025 Bệnh cao huyết áp thường diễn biến âm thầm gây biến chứng nguy hiểm đe dọa tính mạng người bệnh để lại gánh nặng tàn phế Cao huyết áp bệnh mà áp lực máu động mạch tăng cao mạn tính Theo nhịp đập, trái tim bơm máu theo động mạch nuôi thể Huyết áp máu lực mà máu đẩy tác động lên thành mạch Nếu áp lực cao trái tim phải hoạt động nhiều để bơm máu Điều gây ảnh hưởng đến quan đau tim, đột quỵ, suy tim, rối loạn nhịp tổn thương thận Theo Trung tâm thông tin sức khỏe viện tim, phổi máu Quốc gia, bệnh cao huyết áp gây bệnh đe dọa tính mạng vấn đề thận, đột quỵ, suy tim, mù mắt đau tim Nghiên cứu cho thấy stress oxy hóa nguyên nhân bệnh tăng huyết áp, số yếu tố nguy cho tỉ lệ tử vong bệnh tim mạch (Rodrigo, 2003) ROS có ảnh hưởng đến mạch máu tỉ lệ tăng huyết áp (Lassegue, 2004) ROS làm tăng huyết áp hình thành superoxide mạch máu cải thiện nhờ chất kháng oxy hóa ngoại sinh nghiên cứu mơ hình động vật (Chen, 2001) 2.4 TỔNG QUAN VỀ GAN VÀ BỆNH LÝ CỦA GAN DO STRESS OXY HÓA 2.4.1 Cấu trúc gan loại tế bào có gan Gan tạng lớn thể Tế bào gan có nhiều ty lạp thể hệ thống enzym hồn chỉnh Vì vậy, chúng có hoạt động chuyển hóa mạnh Về mặt tổ chức học, tế bào gan xếp thành tiểu thùy gan Tiểu thùy gan đơn vị cấu trúc đơn vị chức gan Mỗi tiểu thùy gan có cấu trúc hình đa giác, hình đa giác tĩnh mạch trung tâm tiểu thùy Các tế bào gan xếp thành bè gồm hàng liền tỏa phía ngoại vi hình nan hoa gọi bè Remak Giữa hàng tế bào gan bè Remak có đường ống nhỏ gọi ống mật vi ti Giữa bè có xoang mạch nhận máu từ động mạch gan tĩnh mạch cửa đổ tĩnh mạch trung tâm tiểu thùy Vách xoang mạch lót lớp tế bào nội mơ khơng liên tục, có nhiều lỗ thủng, xen vào lớp tế bào nội mô đại thực bào hình gọi tế bào Kupffer Hình 2.5 Cấu trúc gan Giữa tế bào gan lớp tế bào nội mô xoang mạch có khoảng gọi khoảng Disse, nơi xuất phát hệ bạch huyết gan qua tế bào gan trao đổi chất với xoang mạch Tổng diện tích tiếp xúc tế bào gan huyết tương xoang mạch lớn Ở góc tiểu thùy, nơi tiểu thùy tiếp xúc nhau, có khoảng cửa khoảng Kiernan gồm thành phần: môṭnhánh tĩnh mạch cửa, môṭ nhánh động mạch gan, sợi thần kinh, đường bạch huyết ống mật nhận mật từ ống mật vi ti bè Remak 2.4.2 Chức gan Gan có bốn chức là: Biến dưỡng, khử độc, tiết mật, dự trữ vitamin Gan phận lọc quan trọng thể Gan tiếp nhận máu từ hai nguồn khác nhau: 30% từ tim 70% từ tĩnh mạch cửa (Portal Vein) Máu từ tim với dưỡng khí nhiên liệu ni dưỡng tế bào gan Máu đến từ tĩnh mạch cửa máu đến từ quan bao tử, lách, tụy tạng, túi mật, ruột non, ruột già quan khác bụng Tiếp nhận chất dinh dưỡng hợp chất hữa khác hấp thụ từ hệ thống tiêu hóa nên thức ăn tất nhiên liệu phải qua gan trước để lọc biến chế thành vật liệu khác Nhiệm vụ chuyển hóa chất: gan có khả chuyển hóa thứ mà ăn vào, hít vào chất hấp thu qua da Gan biến đổi số chất thể tiết ví dụ nội tiết tố 2.4.3 Bệnh lý gan stress oxy hóa Phản ứng ROS RNS sản xuất trao đổi chất tế bào bình thường Tuy nhiên, bệnh gan, sư c̣ oxy hóa tăng lên gây tổn hại mô gan Khả ethanol làm tăng ROS RNS, peroxy lipid chứng minh ROS đóng vai trị quan trọng việc tăng fibrogenesis có nguồn gốc từ tiểu cầu Ung thư biểu mô tế bào gan (đặc biệt gan xơ gan) chế chung cho hepatocarcinogenesis viêm mãn tính liên quan đến stress oxy hóa Yếu tố nguy khác chế độ ăn, hút thuốc lá, nghiện rượu Chấn thương thiếu máu cục - tái tưới máu ảnh hưởng trực tiếp lên tế bào gan, đặc biệt trình cấy ghép phẫu thuật gan Thiếu máu cục kích hoạt tế bào Kupffer nguồn ROS thời gian tái tưới máu Nguyên nhân chết tế bào gan suy giảm glutathione mối liên hệ chất chuyển hóa phản ứng cộng hóa trị N -acetyl- p -benzoquinone imin với protein tế bào Do đó, việc tìm chất chống oxy hóa liệu pháp để phịng chống bệnh gan (Nguyễn Ngocc̣ Hồng, 2010) 2.4.3.1 Tổn thương gan thiếu máu cục Trong hệ thống miễn dịch, đại thực bào bạch cầu trung tính có chức tiêu hủy xâm lấn vi sinh vật, dọn dẹp tế bào chết mảnh vỡ tế bào Có nhiều bằng chứng cho rằng bạch cầu gây nên hoại tử gan loạt tiến trình gây bệnh Các bạch cầu thực chức chức nhờ hình thành ROS superoxyde, hydrogen peroxyde, acid hypocloric tiết protease (elastase cathepsin G) Sự hủy hoại tế bào gan thiếu máu cục gan ROS tạo với lượng lớn hệ thống xanthin oxydase (Goolab Trilok, 2012) Động vật có vú có hai dạng xanthin oxidoreductase xanthin dehydrogenase (XDH) xanthin oxidase (XO) Hai loaị enzyme chuyển hypoxanthin thành xanthin cuối thành acid uric Xanthin dehydrogenase chuyển hai điện tử từ hypo xanthin/xanthin đến NAD + thành NADH xanthin oxidase lấy điện tử oxy thành gốc tự tác dụng SOD tạo thành peroxide Xanthin dehydrogenase tế bào chất chuyển thành xanthin oxidase enzyme protease oxy hóa acid amin cystein Hệ thống xanthin oxidase có nhiều màng tế bào gan ruột phân tử ROS phát sinh nhiều suốt trình tổn thương gan Trong q trình thiếu máu cục hyoxanthin tích lũy gan thiếu ATP Bên cạnh đó, xathin dehydro genase bị chuyển thành xanthin oxidase enzyme protease hoạt hóa suốt giai đoạn giảm oxy máu Tế bào tích lũy hypoxathin tạo số lượng lớn điện tử cho xanthin oxidase để tạo thành superoxide có nhiều ROS tăng nhanh gây tổn thương gan nghiêm trọng (Nguyễn Hồng Ngọc, 2010) 2.4.3.2 Gốc tự bệnh gan nhiễm mỡ không rượu Sự oxy hóa acid béo tạo nhiều ROS gây bệnh gan nhiễm mỡ, làm thiếu hụt ATP NAD, hư hại DNA, phá vỡ cấu trúc ổn định protein, phá hủy cấu trúc màng qua đường peroxyde hóa lipid kích thích tế bào hệ miễn dịch tiết nhân tố tiền gây viêm cytokine Khi bị bệnh gan nhiễm mỡ không rượu, mức độ peroxyde hóa màng tế bào tăng dẫn đến tình trạng stress oxy hóa làm giảm q trình β-oxy hóa dẫn đến việc acid béo tích lũy cytosol, việc ATP bị thiếu hụt ảnh hướng đến q trình chuyển hóa ty thể dẫn đến hoạt động bất bình thường cuối gây chết tế bào Viêm gan mỡ không rượu tình trạng viêm tích lũy mơ mỡ xơ gan, xảy người không uống rượu Bệnh thường gặp người bị đái tháo đường, béo phì kháng insulin Khi nghiên cứu 1266 bệnh nhân từ 2004 - 2008, nhận thấy có 31% bị bệnh đái tháo đường type (Neuschwander et al., 2010) Viêm gan mỡ không rượu mô tả lần đầu vào năm 1980 kể từ đó, nhiều nghiên cứu khác cho thấy hậu nghiêm trọng bệnh cá nhân xã hội 2.4.3.3 Gốc tư ̣do bệnh xơ hóa gan Các sản phẩm peroxid hóa lipid cầu nối tổn thương mơ gan chứng xơ hóa gan Do đó, stress oxy hóa nguyên nhân gây chứng xơ hóa gan Bệnh xơ gan xảy sau nhiều phục gan gan bị tổn thương Những tế bào gan HSC hoạt hóa gan bị tổn thương, làm hình thành sẹo khoảng Diss làm hư hại chức gan Xơ gan xác định q trình xơ hố lan toả hình thành khối tăng sinh (nodules) với cấu trúc bất thường Đây gọi kết cuối trình tăng sinh xơ xuất với tổn thương gan mãn tính Bệnh biết từ kỷ thứ trước công nguyên với mô tả Hypocrates, tới năm 1819 – thuật ngữ “cirrhosis” nhà lâm sàng tiếng người Pháp R Laennec đề xuất với gốc ý nghĩa tiếng Hy Lạp: gan màu vàng cam (Ngô Quý Châu et al., 2012) CHƯƠNG PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Vật liệu 3.1.1 Nguyên liệu Lá Trứng Cá (Muntingia calabura) thu thập từ môi trường sống tự nhiên Lá sấy khô ngày nhiệt độ phòng (27 ± ° C) chăm sóc đặc biệt tránh hình thành nấm mốc Lá sấy khơ khơng khí (500 g) nghiền thành bột thơ sau ngâm 10 L metanol [tỷ lệ 1:20 (w/v)] 72 Chất mặt lọc bằng lọc vải, bơng gịn cuối giấy lọc Whatman số Phần dư lại phải chịu trình chiết xuất hai lần Các chất gộp lại bay áp suất giảm 40 ° C để thu chiết xuất thô (% suất = 17,9%), giữ 4°C sử dụng 3.1.2 Đối tượng Chuột nhắt khỏe mạnh, bệnh, khối lượng 20-24 gram viện … cung cấp Chuột ăn uống đầy đủ bằng thức ăn viên ni phịng thí nghiệm Trung tâm Sâm Dược Liệu TPHCM nhiệt độ phòng chu kỳ sáng tối 12/12 3.1.3 Dụng cụ Chuồng nuôi chuột bao gồm thiết bị cho ăn uống, kéo cong, kéo lớn, kéo thẳng, kéo mũi nhọn, kẹp lớn, kẹp nhỏ, ống tiêm loại 80 ml, kim tiêm lớn làm tà đầu nhọn dùng uống, loại micropippet, đầu cone, bình chứa hóa chất dụng cụ cần thiết có liên quan khác 3.1.4 Thiết bị 3.1.5 Hóa chất Cồn tuyệt đối, nước cất, Dimethyl sulfoxide (DMSO), Hydrogen peroxide (H2O2) (Merck), Ethylendiamin Tetraacetic Acidum (EDTA) (Merck), Thiobarbituric Acid (TBA), Sodium benzoate, Methanol, DPPH (2,2-diphenyl1-picrylhydrazyl) hóa chất cần thiết khác 3.2 Phương pháp nghiên cứu Chuột có khối lượng 20–24 g chia thành nhóm, nhóm chuột Các thực nghiệm bố trí sau: Nhó m Tình trạng Liều lượng Hóa chất TN1 Nhóm bình thường 0,2ml Dầu olive + DMSO 1% TN2 Nhóm không điều trị 0,2ml Dung dịch CCl4 + Dầu olive 0,2ml Dung dịch CCl4 + Dầu olive Sau cho uống thêm Atiso + DMSO1% 0,2ml Dung dịch CCl4 + Dầu olive Sau cho uống thêm dịch chiết từ Trứng Cá +DMSO 1% TN3 TN4 Nhóm thuốc Atiso Nhóm thuốc dịch chiết từ Trứng Cá Mỗi nhóm chuột thực thí nghiệm ngày Thí nghiệm thực đến tuần thứ 4, gan đem xử lý Nhóm chuột cịn lại tiếp tục thực thí nghiệm đến tuần thứ tuần, gan đem xử lý Cách xử lý mẫu tiến hành sau giải phẫu chuột sau: 100 mg gan chuột tách nghiền mịn với 200 μL dung dịch điệm phosphate lạnh nồng độ 100 mM, pH = 7,4 Sau li tâm 10 phút 10000 vòng/phút, phần dịch sử dụng cho việc khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa bảo vệ gan cao chiết methanol Cây Trứng Cá 3.2.1 Khảo sát khả kháng oxy hóa tổng số cao chiết methanol Cây Trứng Cá in vivo chuột (Total Antioxidant Status (TAS) assay) TAS xác định theo phương pháp Koracevic et al (2000) có hiệu chỉnh sau: 10 μL dịch gan sau đồng (liver homogenate) pha loãng với 490 μL dung dịch đệm sodium phosphate nồng độ 100 mM, pH = 7,4 cho vào hỗn hợp gồm 0.5 mL dung dịch sodium benzoate 10 mM với 0.2 mL Fe – EDTA (2 mL Fe-EDTA pha từ 2mM dung dịch EDTA với mM dung dịch Fe(NH4)2(SO4)2) Sau 0,2 mL H2O2 10 mM cho hỗn hợp phản ứng, lắc ủ 37 oC 60 phút Sau ủ, 0.5 mL acid acetic 20% 0,5 mL TBA (thiobarbituric acid) 0,8% NaOH thêm vào ống nghiệm Hỗn hợp phản ứng ủ 100 oC 30 phút để nguội nhiệt độ phòng Độ hấp thu quang phổ phản ứng đo bước sóng 532 nm Hàm lượng chất kháng oxy hóa gan tính tốn tương đương nồng độ mg/mL vitamin C 3.2.2 Khảo sát khả kháng oxy hóa bảo vệ gan cao chiết methanol Cây Trứng Cá gan chuột bằng phương pháp mô bệnh học CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Kết kháng oxy hóa cao chiết Methanol Trứng Cá gan chuột bị tổn thương bằng phương pháp Koracevic et al 4.1.1 Khả kháng oxy hóa in vivo bằng phương pháp TAS gan chuột bị tổn thương điều trị sau tuần Sau tuần gây bệnh điều trị, gan lấy mang xử lý thực phản ứng TAS Kết Hiệu kháng Hàm lượng chất Nhóm Tình trạng oxy hóa (%) kháng oxy hóa TN1 Nhóm bình thường TN2 Nhóm khơng điều trị TN3 Nhóm thuốc Atiso Nhóm thuốc dịch chiết từ TN4 Trứng Cá 4.2 Khảo sát khả bảo vệ gan cao chiết methanol trứng cá gan chuột bị tổn thương bằng phương pháp mô bệnh học Thí nghiệm thực nhằm khảo sát khả bảo vệ gan cao chiết methanol Cây Trứng Cá với chuột Gan chuột sau thời gian gây bệnh điều trị mang xử lý thực kính hiển vi Phương pháp xác định khả bảo vệ gan dựa khả hồi phục gan sau sử dụng dịch chiết từ Trứng Cá Các mẫu mô gan sau thực lưu lại làm tài liệu hồn thành đề tài 4.2.1 Khả kháng oxy hóa cao chiết methanol Trứng Cá gan chuột sau tuần bằng phương pháp quan sát mô gan CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Kiến nghị Khảo sát khả kháng oxy hóa cao methanol Cây Trứng Cá (Acanthus ilicifolius) in vivo gan chuột tổn thương gan sau tuần Thí nghiệm gây tổn thương điều trị cho chuột tuần đầu, sau tuần thí nghiệm tiếp tục điều trị không gây tổn thương Khảo sát khả kháng oxy hóa bảo vệ gan phận khác Trứng Cá Khảo sát thành phần hóa học khả kháng khuẩn cao chiết Trứng Cá Khảo sát khả kháng oxy hóa cao chiết Trứng Cá thận chuột TÀI LIỆU THAM KHẢO Balan T, Mohd Sani MH, Suppaiah V, Mohtarrudin N, Suhaili Z, Ahmad Z, Zakaria ZA 2014.Antiulcer activity of Muntingia calabura leaves involves the modulation of endogenous nitric oxide and nonprotein sulfhydryl compounds Pharm Biol 52:410–418 Kim HJ, Bruckner JV, Dallas CE, Gallo JM 1990a Effect of dosing vehicles on the pharmacokinetics of orally administered carbon tetrachloride in rats Toxicol Appl Pharmacol 102:50–60 Kamisan FH, Yahya F, Mamat SS, Kamarolzaman MFF, Suhaili Z, Mohtarrudin N, Teh LK, Salleh MZ, Hussain MK, Zakaria ZA 2014 Effect of methanol extract of Dicranopteris linearis against carbon tetrachloride-induced acute liver injury in rats BMC Complement Alternat Med 14:123–132 Mahmood D, Mamat SS, Kamisan FH, Yahya F, Kamarolzaman MFF, Nasir N, Suhaili Z, Mohtarrudin N, Zakaria ZA 2014b Amelioration of paracetamolinduced hepatotoxicity in rat by the administration of methanol extract of Muntingia calabura L leaves Biomed Res Int 2014:695678 Mahmood ND, Nasir NLM, Rofiee MS, Tohid SFM, Ching SM, Teh LK, Salleh MZ, Zakaria ZA 2014 Muntingia calabura L.: a review on its traditional uses, chemical properties and pharmacological observations Pharm Biol 52:1598– 1623 Nguyễn Ngọc Hồng, 2010 Nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng chống oxy hóa số thuốc hướng tác dụng gan Luận án tiến sĩ, Đại học Quốc gia thành phố Hồ Chí Minh Ohata Y, Ohashi K, Matsura T, Tokunaga K, Kitagawa A, Yamada K 2008 Octacosanol attenuates disrupted hepatic reactive oxygen species metabolism associated with acute liver injury progression in rats intoxicated with carbon tetrachloride J Clin Biochem Nutr 42:118–125 10 11 12 Favier A (2003) Le stress oxydant: Intéréte conceptuel et expérimental dans la compréhension des mécanismes des maladies et potentiel thérapeutique Laboratoire Lésions des acides nucléiques, Centre d’Étude Nucléaire de Grenoble, rue des Martyrs, 38054 Grenoble L’actualit chimique, 108-115 Huang D., Ou B., Hampsch-Woodill M., Flanagan J A and Deemer E K., 2002 Development and validation of oxygen radical aborbance capacity assay for lipophilic antioxydants using randomLy methylated β-cyclodextrin as the solubility enhancer Journal of agricultural and food chemistry, 50, p 1815 – 1821 Nguyễn Ngọc Hồng, 2010 Nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng chống oxy hóa số thuốc hƣớng tác dụng gan Luận án tiến sĩ, Đại học Quốc gia thành phố Hồ Chí Minh Nguyễn Ngọc Hồng, Huỳnh Ngọc Thụy, 2012 Tác dụng bảo vệ gan cao chiết ethyl acetate từ nghể lông dày (Polygonum tomentosum Willd.) râu mèo (Orthosiphon aristatus (Blume) Miq.) mô hình gan chuột bị gây độc mã tính bằng carbon tetrachloride Tạp chí sinh học, 2012, 34 (3SE): 313-318 Nguyễn Thị Yến Chi, 2013 Đặc điểm hình thái giải phẫu khảo sát khả kháng oxy hóa Ơ Rơ (Acathus ilicifolius L.) Luận văn thạc sĩ, Đại học Cần Thơ

Định dạng
Số trang	23
Dung lượng	266,45 KB