luận án tiến sĩ nghiên cứu quy trình sản xuất giống và nuôi thương phẩm giun nhiều tơ (perinereis nuntia var brevicirris (grube, 1857) làm thức ăn nuôi vỗ tôm bố mẹ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG NGUYỄN VĂN DŨNG NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT GIỐNG VÀ NUÔI THƯƠNG PHẨM GIUN NHIỀU TƠ Perinereis nuntia var brevicirris (Grube, 1857) LÀM THỨC ĂN NUÔI VỖ TÔM BỐ MẸ LUẬN ÁN TIẾN SĨ Khánh Hòa – 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG NGUYỄN VĂN DŨNG NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT GIỐNG VÀ NUÔI THƯƠNG PHẨM GIUN NHIỀU TƠ Perinereis nuntia var brevicirris (Grube, 1857) LÀM THỨC ĂN NUÔI VỖ TÔM BỐ MẸ Ngành đào tạo: Mã số: Nuôi trồng thủy sản LUẬN ÁN TIẾN SĨ NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS TRƯƠNG HÀ PHƯƠNG TS LỤC MINH DIỆP Phản biện 1: PGS TS Nguyễn Như Trí Phản biện 2: TS Nguyễn Văn Thành Khánh Hòa - 2021 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình “Nghiên cứu quy trình sản xuất giống nuôi thương phẩm giun nhiều tơ Perinereis nuntia var brevicirris (Grube, 1857) làm thức ăn nuôi vỗ tôm bố mẹ” kết nghiên cứu nghiêm túc suốt thời gian từ năm 2013 đến năm 2018 Các kết thu luận án phần thành nghiên cứu đề tài cấp sở “Nghiên cứu đặc điểm sinh học thử nghiệm sinh sản nhân tạo giun nhiều tơ Perinereis nuntia var brevicirris (Grube, 1857)” năm 2011, đề tài cấp Bộ “Nghiên cứu sản xuất giống nuôi thương phẩm giun nhiều tơ Perinereis nuntia var brevicirris (Grube, 1857) làm thức ăn nuôi vỗ tôm bố mẹ” từ năm 2012-2014 dự án sản xuất thử nghiệm cấp Bộ “Hồn thiện quy trình sản xuất giống ni thương phẩm giun nhiều tơ Perinereis nuntia var brevicirris (Grube, 1857) quy mơ hàng hóa làm thức ăn ni vỗ tôm bố mẹ” từ năm 2016-2018 làm chủ nhiệm Tôi xin cam đoan kết quả, số liệu luận án trung thực chưa cơng bố cơng trình Khánh Hòa, ngày 05 tháng 01 năm 2021 Tác giả luận án Nguyễn Văn Dũng iii LỜI CẢM ƠN Tôi xin trân trọng bày tỏ lòng biết ơn đến Ban Giám hiệu Trường Đại học Nha Trang, Ban lãnh đạo Viện Ni trồng Thủy sản, Phịng Đào tạo Sau Đại học trường Đại học Nha Trang tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến Ban lãnh đạo Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản III lãnh đạo Trung tâm Nghiên cứu Phát triển Nuôi biển Nha Trang tạo điều kiện thuận lợi mặt thời gian cho thực luận án Lời cảm ơn chân thành sâu sắc muốn gửi đến hai Thầy hướng dẫn: TS Trương Hà Phương TS Lục Minh Diệp, người định hướng nghiên cứu tận tình hướng dẫn tơi suốt thời gian thực luận án Xin cám ơn em sinh viên khóa 55NT 56NT nhiệt tình hỗ trợ tơi công tác nghiên cứu Cuối lời cám ơn đến người thân yêu gia đình động viên, giúp đỡ tinh thần vật chất suốt thời gian học tập, nghiên cứu hồn thành luận án Khánh Hịa, ngày 05 tháng 01 năm 2021 Tác giả luận án Nguyễn Văn Dũng iv MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN .iii LỜI CẢM ƠN iv MỤC LỤC v DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT vii DANH MỤC BẢNG viii DANH MỤC HÌNH x MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC SINH SẢN CỦA GIUN NHIỀU TƠ .4 1.1.1 Đặc điểm sinh học sinh sản giun nhiều tơ 1.2 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU NI GIUN NHIỀU TƠ .9 1.2.1 Nghiên cứu sinh sản ương nuôi giun nhiều tơ 1.3 NHU CẦU DINH DƯỠNG CỦA TÔM BIỂN 15 1.3.1 Nhu cầu protein lượng 15 1.3.2 Nhu cầu lipid axít béo thiết yếu (EFAs) 17 1.3.3 Các nhóm lipid khác 19 1.3.4 Thành phần sinh hóa buồng trứng 20 1.3.5 Nhu cầu vitamin 21 1.3.6 Nhu cầu chất khoáng 22 1.4 GIÁ TRỊ DINH DƯỠNG CỦA GIUN NHIỀU TƠ 22 1.4.1 Thành phần dinh dưỡng giun nhiều tơ 22 1.4.2 Thành phần axít amin giun nhiều tơ 22 1.4.3 Thành phần axít béo giun nhiều tơ 23 1.4.4 Thành phần khoáng vitamin giun nhiều tơ 25 1.4.5 Giá trị dinh dưỡng giun nhiều tơ nuôi trồng thủy sản .25 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 30 2.2 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 30 2.3 SƠ ĐỒ KHỐI NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 30 2.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 31 2.4.1 Nghiên cứu số đặc điểm sinh học sinh sản 31 2.4.2 Nghiên cứu nuôi giun bố mẹ 32 2.4.3 Nghiên cứu ương nuôi ấu trùng 33 v 2.4.4 Nghiên cứu nuôi thương phẩm 36 2.4.5 Đánh giá chất lượng giun nhiều tơ nuôi vỗ thành thục tôm bố mẹ 39 2.4.6 Phương pháp thu thập xử lý số liệu 40 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 44 3.1 Nghiên cứu số đặc điểm sinh học sinh sản 44 3.1.1 Mùa vụ sinh sản giun nhiều tơ 44 3.1.2 Kích thước thành thục sinh dục lần đầu 45 3.1.3 Phân biệt giới tính, tỷ lệ đực 46 3.1.4 Hệ số thành thục giun nhiều tơ 47 3.1.5 Sức sinh sản giun nhiều tơ 47 3.1.6 Các giai đoạn phát triển tuyến sinh dục 48 3.1.7 Thời gian phát triển phôi 51 3.1.8 Sự phát triển ấu trùng 52 3.2 Nghiên cứu nuôi giun bố mẹ 54 3.2.1 Ảnh hưởng thức ăn đến sinh sản giun bố mẹ 54 3.2.2 Ảnh hưởng mật độ nuôi đến sinh sản giun bố mẹ 58 3.2.3 Thực nghiệm nuôi giun bố mẹ cho sinh sản 62 3.3 Nghiên cứu ương nuôi ấu trùng 64 3.3.1 Ảnh hưởng thức ăn ương nuôi ấu trùng 64 3.3.2 Xác định mật độ ương nuôi 67 3.3.3 Xác định độ mặn ương nuôi 69 3.3.4 Thực nghiệm ương nuôi ấu trùng giun nhiều tơ đến cỡ giống cm 71 3.4 Nghiên cứu kỹ thuật nuôi thương phẩm 74 3.4.1 Xác định loại thức ăn, chế độ phần cho ăn 74 3.4.2 Xác định mật độ ni thích hợp 83 3.4.3 Thực nghiệm nuôi thương phẩm 85 3.5 Đánh giá chất lượng giun nhiều tơ nuôi vỗ thành thục tôm bố mẹ 87 3.5.1 Phân tích thành phần sinh hóa giun nhiều tơ từ nguồn tự nhiên nguồn nuôi thương phẩm 87 3.5.2 Đánh giá chất lượng giun nhiều tơ từ nguồn tự nhiên nguồn nuôi thương phẩm nuôi vỗ thành thục tôm bố mẹ 90 KẾT LUẬN 94 TÀI LIỆU THAM KHẢO 96 PHỤ LỤC vi C14:0 C16:0 C16:1n-7 C18:0 C18:1n-9 C19:0 C19:1 C20:2n-6 C20:4n-6 C22:4n-6 C22:6n-3 20:5n-3 FA HUFA MUFA n-3 n-6 PUFA SFA TAG vii DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Tỷ lệ thành thục sinh dục giun nhiều tơ (n=60) 44 Bảng 3.2 Tỷ lệ đực, giun nhiều tơ qua tháng thu mẫu (n=60) 46 Bảng 3.3 Hệ số thành thục giun nhiều tơ 47 Bảng 3.4 Sức sinh sản giun nhiều tơ (n=60) 47 Bảng 3.5 Thời gian phát triển phôi giun nhiều tơ 51 Bảng 3.6 Sinh trưởng khối lượng (g/con) giun nhiều tơ 54 Bảng 3.7 Sức sinh sản giun nhiều tơ nghiệm thức 57 Bảng 3.8 Chất lượng giun nhiều tơ bố mẹ sử dụng loại thức ăn khác 58 Bảng 3.9 Sinh trưởng khối lượng (g/con) giun nhiều tơ mật độ nuôi khác nhau58 Bảng 3.10 Tỷ lệ thành thục (%) giun nhiều tơ mật độ nuôi khác 60 Bảng 3.11 Sức sinh sản giun nhiều tơ mật độ nuôi khác 61 Bảng 3.12 Chất lượng giun nhiều tơ bố mẹ 62 Bảng 3.13 Kết nuôi vỗ giun nhiều tơ qua đợt 62 Bảng 3.14 Kết tuyển chọn giun nhiều tơ 63 Bảng 3.15 Chỉ tiêu sinh sản qua đợt 64 Bảng 3.16 Sinh trưởng chiều dài số đốt giun ương nuôi tỷ lệ thức ăn khác 64 Bảng 3.17 Sinh trưởng chiều dài ấu trùng giun nhiều tơ 65 Bảng 3.18 Sinh trưởng chiều dài số đốt giun ương nuôi mật độ khác 67 Bảng 3.19 Sinh trưởng chiều dài số đốt giun ương nuôi mật độ khác 68 Bảng 3.20 Sinh trưởng chiều dài giun ương nuôi mức độ mặn khác 70 Bảng 3.21 Diễn biến yếu tố môi trường qua đợt ương nuôi (*) 72 Bảng 3.22 Kết ương nuôi giun nhiều tơ qua đợt 73 Bảng 3.23 Sinh trưởng, hệ số tiêu tốn thức ăn tỷ lệ phân đàn giun nhiều tơ nuôi loại thức ăn khác 74 Bảng 3.24 Hàm lượng protein, chất béo, chất xơ độ ẩm giun nhiều tơ (%/100 g ướt) 77 Bảng 3.25 Thành phần axít béo giun nhiều tơ (mg/100 g ướt) 78 Bảng 3.26 Sinh trưởng giun nhiều tơ nuôi chế độ phần ăn khác 81 viii Bảng 3.27 Sinh trưởng tỷ lệ sống giun nhiều tơ nuôi mật độ khác .84 Bảng 3.28 Năng suất, hệ số tiêu tốn thức ăn tỷ lệ phân đàn giun nhiều tơ .84 Bảng 3.29 Các thông số môi trường đợt nuôi 85 Bảng 3.30 Kết nuôi thương phẩm giun nhiều tơ 86 Bảng 3.31 Hàm lượng protein, chất béo, chất xơ độ ẩm giun nhiều tơ (%/100 g ướt) (n = 3) 88 Bảng 3.32 Thành phần axít béo giun nhiều tơ (mg/100 g ướt) (n= 3) 88 Bảng 3.33 Chất lượng tôm mẹ chân trắng sử dụng giun tự nhiên nuôi thương phẩm làm thức ăn (TB ± SD; n=15) 91 Bảng 3.34 Chất lượng tôm chân trắng đực qua nghiệm thức sử dụng giun tự nhiên nuôi thương phẩm (TB ± SD; n=15) 92 ix Tiến hành Nung chén ban đầu 550 oC giờ; cân lại chén sau nung (M o); cân luongj mẫu khoảng 2-5 g vào chén (m) Đem thi than hóa nhiệt độ khoảng 300oC Nung lị 550oC đến mẫu có màu trắng xám có khối lượng khơng đổi (16h) Lấy chén chuyển vào bình hút ẩm để 30 phút tiến hành cân (M 2) Tiếp tục nung cân lại hai q trình cân khơng lẹch q 0,01 g Tính kết Hàm lượng tro tính theo cơng thức: Hàm lượng tro (%) = (M1-M2)*100/m Trong đó: M1: Khối lượng mẫu chén trước sấy (M1=M0+m) (g) M: Khối lượng mẫu chén sau sấy (g) M: Khối lượng mẫu cân (g) 6.Đánh giá phương pháp Chọn mẫu tiến hành thí nghiệm riêng biệt theo quy trình nêu Kết hàm lượng tro trình bày Bảng sau: Khảo sát độ lặp lại của phép xác định tro Thí nghiệm Độ lệch chuẩn KTC (P=95%) Phụ lục 6.5: Định lượng axít béo phương pháp ester hóa phân tích sắc ký khí (GC) Các bước chuẩn bị 1.1 Dụng cụ thiết bị Tủ hút, thổi khí N2, máy gia nhiệt, máy vortex, máy li tâm, máy sắc ký (GC) Ống nghiệm có nắp 20 ml, ống thủy tinh có nắp vial 20 ml, pipette pasture, ống ly tâm có nắp 20 ml, bình định mức ml, ống xilanh 20 ml, giấy lọc GF/C 1.2 Hóa chất MeOH: Toluen (tỷ lệ 3:2); acetyl chloride: methanol (tỷ lệ 1:20); hexane; axít methyl heneicosanoic (Me C21:0), chất chuẩn nội nồng độ mg/ml; Na2SO4 khan 1.3 Chuẩn bị mẫu kiểm tra thiết bị Mẫu thử lấy từ dung dịch mẫu lipit chloroform, tách chiết từ phương pháp folch Mẫu phân tích cung cấp cho máy sắc ký GC, cần phải tách chiết axít béo với độ tinh kiết cao Kiểm tra thiết bị: Bình kí nitơ, điều chỉnh nhiệt độ máy gia nhiệt; khởi động máy sắc ký khí GC, kiểm tra bình N 2, bình O2, khí H2 Kiểm tra cột tương ứng loại mẫu tiêu cần phân tích Tiêm dung mơi hexane để rửa cột kiểm tra độ ởn định máy 2.Tiến hành thử nghiệm Tiến hành ester hóa Chuyển lượng dung dịch lipit khoảng mg vào ống ly tâm thể tích 20 ml có nắp chặt, chịu nhiệt tốt; làm khơ mẫu khí N 2; thêm ml chất xúc tác MeOH: toluene (tỷ lệ 3:2) ml acetyl chloride: methanol (tỷ lệ 1:20); đuổi khí oxi ống cho bay lên khí nitơ, đậy kín nắp đem vortex; đặt vào khuân máy gia nhiệt 100oC 2 Tách chiết axít béo Làm lạnh ống cho them 1,5 ml hexan ml nước cất; cho them 120 µl chất chuẩn nội Me C21:0; đuổi oxi khí nitơ đem vortex phút; ly tâm 1.500 rpm phút; dung pipette pasture hút lớp dịch lọc qua Na2SO4 khan, cho dịch mẫ chảy xuống bình định mức ml; lặp lại chiết rút cách cho thêm 1,5 ml hexan (lần 2) ml hexan (lần 3), li tâm lọc; định mức đến ml lắc trộn đều; dung pipette hút 500 µl cho vào ống vial thể tích ml làm khơ khí nitơ; sau cho thêm vào 300 µl n-Hexan, mẫu sẵn sàng để tiêm vào máy GC để phân tích Lưu giữ lạnh ống mẫu cịn lại tủ lạnh 3.Xác định hàm lượng axít béo máy sắc ký khí (GC) Cài đặt thông số Bộ phận bơm mẫu – Inlets: nhiệt độ Inlets: 250oC, áp suất 7,98 psi Cột – Colunms: Mã cột: Agilent 19091F-112, HP-FFAP Polyethylence Glycol TPA Nhiệt độ cột: cao 240oC Tổng thời gian chạy cột: 20 ml/min Tốc độ khí nitơ chạy cột: 1,5 ml/min, áp suất 7,98 psi Lò nâng nhiệt – Oven: cài đặt nhiệt độ ban đầu: 120 oC; nhiệt độ lò nâng nhiệt lên cao nhất: 230 oC Chương trình nhiệt độ: o C/ Bắt đầu Bước 12 10 0.5 4.0 10 0.0 Kết thúc Đầu dị tín hiệu – Detectors: Nhiệt độ: 250 oC Tốc độ dịng khí H2: 40 ml/min Tốc độ dịng khí O2: 400 ml/min Tốc độ dịng khí N2: 45 ml/min 3.2 Thực hành bơm mẫu máy GC Trước bơm mẫu vào máy để phân tích, cần phải dùng dung mơi để rửa cột, loại bỏ tạp chất bám dính thành cột kiểm tra độ ổn định khí lưu thơng máy Chương trình nhiệt độ để nâng nhiệt lị Oven sử dụng chương trình chạy mẫu Sau rửa cột, tiêm mẫu chuẩn để xác định peak chuẩn Dựa diện tích peak chuẩn nồng độ biết trước (0,005 g/ml) để xác định hàm lượng axít béo mẫu Tiêm mẫu Kiểm tra tất thông số Nếu bơm mẫu hệ thống tự động phải xếp vial chứa mẫu cho vị trí, cài đặt thơng số lượng mẫu bơm vào µl chuẩn bị sẵn sàng thao tác điều khiển máy bơm mẫu Sau nhấn nút Start để bắt đầu rửa kim bơm bơm mẫu, trước bơm mẫu phảo bơm dung môi hexan để rửa kim, khoảng 2-3 lần, sau bơm µl mẫu Xử lý kết nhận xét Nhận dạng peak axít béo có mẫu Tính kết nhận xét theo cơng thức: Trong đó: X: hàm lượng axít béo cần tìm (mg/g) Cx: Lượng axít béo mẫu (mg) F: hệ số pha lỗng Sx: diện tích peak axít béo cần xác định (Sx) = diện tích thể máy C21:0: lượng chuẩn nội (mg) = 0,6 mg (lấy 120 µl mg/ml) Sc: diện tích peak chuẩn nội = diện tích thể tín hiệu máy T: thành phần khơ mẫu, T = (100 – W)/100; W: độ ẩm mẫu (%) Lập bảng kết quả: STT Tên mẫu %SFA %USFA %PSFA %MSFA %FA %TFA Nhận xét Trong đó: SFA: axít béo no USFA: axít béo khơng no PSFA: đa axít béo MSFA: đơn axít béo FA: axít béo PHỤ LỤC 7: DỰ THẢO QUY TRÌNH SẢN XUẤT GIỐNG VÀ NUÔI THƯƠNG PHẨM GIUN NHIỀU TƠ Phụ lục 7.1: Dự thảo quy trình sản xuất giống giun nhiều tơ Perinereis nuntia var brevicirris (Grube, 1857) I Căn để xây dựng quy trình sản xuất giống giun nhiều tơ Quy trình sản xuất giống giun nhiều tơ xây dựng dựa kết nghiên cứu khoa học đề tài “Nghiên cứu quy trình sản xuất giống nuôi thương phẩm giun nhiều tơ (Perinereis nuntia var brevicirris (Grube, 1857) làm thức ăn nuôi vỗ tôm bố mẹ” II Độ tin cậy, đối tượng phạm vi áp dụng 2.1 Độ tin cậy quy trình Quy trình sản xuất giống giun nhiều tơ xây dựng dựa kết nghiên cứu khoa học thực tiễn sản xuất Chỉ tiêu kỹ thuật quy trình: Tỷ lệ nuôi vỗ thành thục > 30%; Tỷ lệ đẻ >90%; Tỷ lệ thụ tinh > 75%; Tỷ lệ nở > 70%; Tỷ lệ sống > 18% 2.2 Đối tượng áp dụng Quy trình áp dụng để sản xuất giống giun nhiều tơ Quy trình quy định trình tự bước thực hiện, nội dung yêu cầu kỹ thuật, phương pháp chăm sóc quản lý trình sản xuất giống 2.3 Phạm vi áp dụng Quy trình áp dụng cho tổ chức, cá nhân làm nghề nuôi trồng thủy sản địa phương ven biển đáp ứng đầy đủ điều kiện kỹ thuật đề quy trình III Điều kiện áp dụng 3.1 Nguồn nước Nguồn nước biển có độ mặn (27-32‰) ổn định, nhiệt độ 26-30 oC pH dao động 7,5-8,5 Xa nguồn nước thải từ khu cơng nghiệp khu dân cư Có nguồn nước ổn định 3.2 Điện giao thơng Chọn nơi có hệ thống giao thơng thuận lợi giúp việc vận chuyển lưu thông dễ dàng, nơi có nguồn điện lưới ổn định, đảm bảo an ninh tốt Là nơi nằm gần vùng sản xuất tôm cua giống IV Thiết kế xây dựng trại giống 4.1 Hệ thống lấy nước biển Tùy quy mơ trại sản xuất, địa hình điều kiện địa chất mà bơm nước trực tiếp từ biển bơm nước biển từ giếng bờ biển 4.2 Hệ thống phân phối nước Trại sản xuất giống giun cần xây dựng bể chứa nước độ cao để cung cấp nước cho tồn trại sản xuất Kích thước trung bình bể chứa 30-50 m gồm bể 4.3 Hệ thống bể chứa Gồm bể lắng chất bẩn, cát chất khác nước biển, bể lọc bể xử lý Dung tích hệ thống bể chứa tuỳ thuộc vào quy mô, nhu cầu sử dụng nước cho hoạt động sản xuất 4.4 Hệ thống bể nuôi Trong sản xuất giống giun nhiều tơ, hệ thống bể nuôi gồm bể nuôi vỗ giun bố mẹ, bể ương nuôi ấu trùng bể nuôi loại sinh vật phù du làm thức ăn cho ấu trùng giun Bể nuôi giun bố mẹ Bể có dạng hình chữ nhật hình vng, diện tích khoảng 5-20 m 2, độ sâu khoảng 0,5-0,8 m, ống cấp nước có đường kính 2,7-3,4 cm ống nước khoảng 4,9-9,0 cm Hệ thống sục khí lắp đặt cho bể để cung cấp oxy cho giun Bể ương nuôi ấu trùng - Bể ương nuôi ấu trùng giai đoạn trơi nổi: Bể có dạng hình trịn, hình chữ nhật hình vng Kích thước bể tùy thuộc vào quy mơ đầu tư, trình độ kỹ thuật quản lý kế hoạch sản xuất Bể ương nuôi giai đoạn ấu trùng trôi xây dựng nhà có mái che, kích thước bể thường từ 4-15 m3 chiều cao 1,2-1,5 m Hệ thống sục khí lắp đặt đến bể để đảm bảo cung cấp oxy cho bể - Bể ương nuôi ấu trùng giai đoạn xuống đáy: Bể có dạng hình trịn, hình chữ nhật hình vng Kích thước bể tùy thuộc vào quy mơ đầu tư, trình độ kỹ thuật quản lý kế hoạch sản xuất Bể ương nuôi giai đoạn xuống đáy xây dựng nhà có mái che, kích thước bể thường từ 5-20 m2, chiều cao 0,3-0,5 m Hệ thống sục khí lắp đặt đến bể để đảm bảo cung cấp oxy cho bể Bể nuôi sinh vật phù du Bể ni thực vật phù du ngồi trời có dạng hình trịn, vng chữ nhật, tuỳ theo qui mơ sản xuất mà dung tích bể thường dao động từ 1-10 m 3, độ sâu khoảng 1,0-1,5 m 4.5 Hệ thống nước Có thể dùng nước giếng khoan nước máy, trước sử dụng cần phải cấp vào bể chứa có sục khí 4.6 Hệ thống sục khí Phải đủ để cung cấp dưỡng khí cho hệ thông bể nuôi giun bố mẹ, ương nuôi ấu trùng nuôi sinh vật phù du Đảm bảo sục khí liên tục, áp lực khí khoảng 0,2-0,3 kg/cm3 khối lượng khơng khí bể ni ln ổn định từ 4-5 l/m3/phút 4.7 Máy phát điện Cần phải có máy phát điện để đề phòng trường hợp điện lưới bị mất, mục đích để trì hoạt động trại sản xuất giống 4.8 Các trang thiết bị khác Ngoài hệ thống bể nêu trên, trại giống cần có dụng cụ khác máy đo độ mặn, nhiệt độ, pH số dụng cụ mau hỏng xô, chậu, loại vợt V Nội dung quy trình 5.1 Quản lý nước đầu vào Nguồn nước sử dụng sản xuất cần phải xử lý trước cung cấp cho hệ thống nuôi Nước biển bơm vào bể lắng, thông qua hệ thống lọc học nhằm loại bỏ chất bẩn lơ lửng đến bể chứa, nước từ bể chứa cung cấp xuống bể nuôi qua hệ thống xử lý tia cực tím để loại bỏ hồn tồn mầm bệnh 5.2 Kỹ thuật nuôi vỗ thành thục giun bố mẹ 5.2.1 Tạo đàn giun bố mẹ Việc phát triển đàn giun bố mẹ có chất lượng tốt quan trọng sản xuất giống nhằm tạo hệ giống có chất lượng tốc độ tăng trưởng nhanh Thông thường khoảng 1-2 tháng cho trại giống để có đủ đàn giun bố mẹ Giun tuyển chọn làm bố mẹ trưởng thành khỏe mạnh, không bị tổn thương khơng có mầm bệnh, giun thu ngồi tự nhiên ni thương phẩm, giun có trọng lượng trung bình ≥ g/con Giun bố mẹ thu ngồi tự nhiên sau tuyển chọn vận chuyển trại sản xuất giống phải dưỡng kiểm soát mầm bệnh trước đưa vào bể nuôi vỗ thành thục 52.2 Kỹ thuật quản lý chăm sóc giun bố mẹ Bể nuôi vỗ giun bố mẹ thường bể xi măng nhà có mái che, thống mát Cấp cát sỏi (kích cỡ 1-2 mm) vào bể độ dày 10-15 cm cho giun bố mẹ đào hang ẩn lấp Mật độ ni vỗ thành thục thích hợp 1.000-1.500 con/m2 Nguồn nước sử dụng cho bể nuôi giun bố mẹ phải sạch, độ mặn ổn định từ 2732‰, nhiệt độ khoảng 27-30oC, hàm lượng oxy hoà tan bể ln ln ≥ mg/l Dinh dưỡng có ảnh hưởng lớn đến phát triển tuyến sinh dục khả sinh sản giun bố mẹ Thức ăn cho giun bố mẹ phải cịn tươi, khơng cho giun ăn loại thức ăn không đạt chất lượng, cho giun ăn loại thức ăn cá trích, cá nục, cá ngân, mực (xay nhỏ) thức ăn công nghiệp Định kỳ 3-5 ngày bổ sung vitamin E (800mg/ kg thức ăn) chất khoáng, giúp giun khoẻ mạnh chống lại tác nhân gây bệnh từ bên Khẩu phần cho ăn hàng ngày khoảng từ 3-5% trọng lượng thân Cho ăn ngày lần vào buổi sáng (7-8h) buổi chiều (16-17h) Sau cho ăn tiến hành kiểm tra lượng thức ăn cịn thừa bể để đảm bảo cho mơi trường nuôi thường xuyên Định kỳ 15 ngày vệ sinh bể nuôi cách chà rửa thành bể vệ sinh mặt đáy bể, mục đích loại bỏ mầm bệnh từ bên Thường xuyên theo dõi tình trạng sức khoẻ giun để có biện pháp xử lý kịp thời có tình xảy Định kỳ kiểm tra phát triển tuyến sinh dục để có phương án sản xuất phù hợp 5.2.3 Kỹ thuật cho đẻ thu trứng giun Tiêu chuẩn chọn giun cho đẻ Giun khoẻ mạnh linh hoạt, có đầy đủ phần phụ, thân hình cân đối khơng bị thương tật hay đứt đoạn Đối với thể có màu xanh thẫm, chân bơi phát triển Đối với đực thể có màu trắng đục, chân bơi có màu đỏ tươi, mắt to sát lại gần Đây cá thể thành thục tốt tham gia sinh sản Kích thích cho giun đẻ Trong q trình ni, định kỳ kiểm tra mức độ thành thục giun để có kế hoạch cho đẻ Mức độ thành thục giun dựa vào màu sắc, hình dạng phát triển bên ngồi giai đoạn thành thục (màu xanh thẫm cá thể cái, trắng đục cá thể đực phát triển chân bơi phần đuôi) Sử dụng phương pháp gây sốc áp lực thủy tĩnh: Tháo cạn nước bể đẻ, phơi khô giun bố mẹ khoảng 3-5 phút, sau cấp nước vào từ từ thơng qua vịi phun phương pháp thụ tinh nhân tạo: Trong q trình thụ tinh nhân tạo chuẩn bị tinh dịch giun trước sau, cách tốt tiến hành vuốt trứng giun trước sau vuốt trực tiếp tinh dịch giun đực vào, dùng lông gà khuấy để trứng tinh trùng tiếp xúc nhằm tăng tỷ lệ thụ tinh Bên cạnh tiến hành theo cách vừa vuốt tinh dịch vừa vuốt trứng, phương pháp cần nhiều nhân cơng có trình độ kỹ thuật cao Sau trộn trứng với tinh dịch, thêm nước biển vô trùng vào để khoảng phút, sau rửa tinh dịch dư thừa, định lượng trứng thụ tinh sau chuyển trứng trực tiếp vào ương ấu trùng Trong q trình kích thích sinh sản không nên sử dụng nhiều đực nhằm hạn chế lượng tinh trùng dư thừa Tỷ lệ đực 1:3, để nhiều tinh trùng bể đẻ làm bẩn nước, ảnh hưởng đến trứng Hiện tượng đa tinh trùng trứng làm giảm tỷ lệ thụ tinh, gây ảnh hưởng phát triển trứng tăng tỷ lệ dị hình ấu trùng Sau tồn cái, đực kết thúc phóng trứng tinh trùng đực chết, vớt bỏ hết bố mẹ Các thao tác theo dõi đếm có đực tham gia sinh sản quan trọng việc tính tốn cho đợt sinh sản kế tiếp, xác định thời gian phóng trứng để ước tính thời gian trứng nở Trong trường hợp giun bố mẹ không sinh sản, không nên tiếp tục dùng phương pháp kích thích khác Chuyển giun bố mẹ trở lại bể nuôi vỗ thành thục để tiếp tục nuôi vỗ Kỹ thuật thu trứng giun Trứng sau đẻ vớt vợt lưới mềm, mịn, có kích thước mắt lưới 6080µm, thu trực tiếp trứng bể đẻ Thao tác trình thu trứng phải nhanh cẩn thận tránh làm trứng bị tổn thương dẫn đển ảnh hưởng đến tỷ lệ nở chất lượng ấu trùng sau Trứng sau thu xong phải tiến hành lọc trứng để loại bỏ chất bẩn bám vào trứng sau tiến hành định lượng trứng trước chuyển vào ương nuôi ấu trùng Trứng trước đưa vào thả nuôi cần cân yếu tố môi trường (nhiệt độ, nồng độ muối ) bể đẻ bể ương ni trùng Nếu mơi trường chênh lệch khơng lớn thả trực tiếp trứng vào bể ương nuôi Nên xử lý trứng trước thả vào bể ương nuôi để ngăn ngừa mầm bệnh Cách xử lý tắm trứng nước có chứa formalin nồng độ 20 – 50 ppm thời gian 30 giây tắm Iodphor nồng độ 0,1 ppm phút (lưu ý cách tính tốn - pha nồng độ hóa chất xử lý) Trong trình xử lý, cần thay đổi toàn nước đựng trứng từ bể đẻ, thao tác phải thực nhanh gọn, nhẹ nhàng, hạn chế tối đa việc đưa trứng khỏi môi trường nước 5.3 Kỹ thuật chăm sóc quản lý ấu trùng giun 5.3.1 Mật độ nuôi ấu trùng Mật độ ương ni ấu trùng tính cho tồn 100% dung tích bể ni Mật độ ấu trùng thưa dư thừa thức ăn, mật độ nuôi dày thỉ khó chăm sóc, chất lượng giun giống Ương nuôi ấu trùng giai đoạn trôi với mật độ từ 125 ấu trùng/lít Ương ni ấu trùng giai đoạn xuống đáy với mật độ 35.000 ấu trùng/m2 5.3.2 Quản lý môi trường bể ương Giun nhiều tơ lồi nhạy cảm với mơi trường ni, việc giữ cho mơi trường bể ương ổn định nhằm giảm stress cho giun, stress kéo dài tăng hội mầm bệnh xuất Các yếu tố môi trường phải theo dõi hàng ngày để kịp thời xử lý có dấu hiệu bất thường xảy 5.3.3 Chế độ thay nước Thay nước cần thiết nhằm ổn định chất lượng nước nuôi cho ấu trùng, hạn chế mầm bệnh Giai đoạn ấu trùng trôi không thay nước Giai đoạn ấu trùng xuống đáy (Bắt đầu từ ngày thứ 15 sau ương nuôi), nước thay từ 15-50% lượng nước bể, từ ngày 20 thu hoạch, tần số thay nước tuỳ thuộc vào tình trạng sức khoẻ giun môi trương bể ương Ở giai đoạn này, ương ni ấu trùng phương pháp nước chảy vào với lưu tốc dòng chảy lít/phút 5.3.4 Quản lý màu nước bể ương nuôi Giai đoạn ấu trùng trôi nổi, tảo đơn bào Nanochloropsis oculata + tảo Chaetoceros calcitrans với tỷ lệ 60:40% cấp vào bể nuôi ấu trùng từ ngày thứ nhằm mục đích ổn định mơi trường ni làm thức ăn cho ấu trùng giun Nếu bể ương có biến động lớn mật độ tảo ảnh hưởng đến chất lượng nước bể ương Vì vậy, cần phải quản lý mật độ tảo thơng qua màu nước bể ấu trùng, trì mật độ thích hợp khoảng 106 tb/ml, ổn định bể ương Giai đoạn ấu trùng xuống đáy, sử dụng thức ăn kết hợp thức ăn tổng hợp bột cá với tỷ lệ 70:30% thức ăn tổng hợp với liều lượng 0,5-1,0 g/triệu ấu trùng/lần, hàng ngày cho ấu trùng ăn lần Kiểm tra thức ăn bể ương trước sau cho ăn 5.3.5 Biện pháp phòng trị bệnh Chủ yếu phòng bệnh, dựa nguyên tắc phòng bệnh tổng hợp vệ sinh dụng cụ trại sản xuất, tuyển chọn bố mẹ chất lượng tốt bệnh, hạn chế mầm bệnh từ nguồn thức ăn sống Định kỳ bổ sung vitamin nguyên tố vi lượng, giúp giun tăng cường sức đề kháng, chống lại tác nhân gây bệnh 5.4 Kỹ thuật quản lý thức ăn cho ấu trùng 5.4.1 Thức ăn tươi sống Ấu trùng giun nhiều tơ bắt đầu ăn sau nở khoảng 40-50 giờ, cần thiết phải đưa thức ăn vào bể sớm thời gian giun bắt đầu ăn thức ăn Thức ăn ấu trùng giun nở tảo đơn bào Nannochoropsis oculata + tảo Chaetoceros calcitrans với tỷ lệ 60:40%, mật độ cho ăn 10 tb/ml Thời gian cho ấu trùng giun ăn tảo kéo dài đến ngày thứ 15 sau nở, kiểm tra mật độ tảo bể trước sau thời gian cho ăn để điều chỉnh mật độ tảo bể 5.4.2 Thức ăn tổng hợp Thức ăn tổng hợp bột cá sử dụng cho ấu trùng giun giai đoạn xuống đáy thường dùng thức ăn ấu trùng tôm Cho ấu trùng giun ăn thức ăn tổng hợp bột cá với liều lượng 0,5-1,0 g/1 triệu ấu trùng giun, hàng ngày cho ăn lần Trước cho ấu trùng ăn, phải kiểm tra lượng thức ăn bể ương dư hay không để điều chỉnh cho lần ăn sau Thời gian cho ấu trùng ăn thức ăn tổng hợp bột cá kéo dài đến thu hoạch 5.5 Thu hoạch vận chuyển giun giống Sau 50-60 ngày ương nuôi, kích thước giun giống đạt 2-3 cm tiến hành thu hoạch Nếu q trình ương ni có sử dụng thuốc kháng sinh hố chất, phải lấy mẫu kiểm tra dư lượng kháng sinh hoá chất cấm sử dụng, đạt yêu cầu tiến hành thu hoạch Dụng cụ thu hoạch vận chuyển giun giống phải khơng có mầm bệnh, tránh tình trạng giun giống bị nhiễm bệnh Sau thu hoạch giun giống chuyển vào túi có chứa nước biển, bơm oxy đóng gói lại Tuỳ theo kích cỡ giun giống, quãng đường vận chuyển mà định mật độ giun vận chuyển Có thể vận chuyển giun loại phương tiện khác tuỳ theo thời gian quãng đường vận chuyển Tốt vận chuyển giun giống điều kiện nhiệt độ vận chuyển từ 20-25oC Phụ lục 7.2: Dự thảo quy trình nuôi thuong phẩm giun nhiều tơ Perinereis nuntia var brevicirris (Grube, 1857) I Căn để xây dựng quy trình ni thương phẩm giun nhiều tơ Quy trình sản xuất giống giun nhiều tơ xây dựng dựa kết nghiên cứu khoa học đề tài “Nghiên cứu quy trình sản xuất giống ni thương phẩm giun nhiều tơ (Perinereis nuntia var brevicirris (Grube, 1857) làm thức ăn nuôi vỗ tôm bố mẹ” II Độ tin cậy, đối tượng phạm vi áp dụng 2.1 Độ tin cậy quy trình Quy trình ni thương phẩm giun nhiều tơ xây dựng dựa kết nghiên cứu khoa học thực tiễn sản xuất Chỉ tiêu kỹ thuật quy trình: Tỷ lệ sống trung bình > 70%; suất đạt ≥ 1,8 kg/m2 2.2 Đối tượng áp dụng Quy trình áp dụng để ni thương phẩm giun nhiều tơ Quy trình quy định trình tự bước thực hiện, nội dung yêu cầu kỹ thuật, phương pháp chăm sóc quản lý q trình ni thương phẩm giun nhiều tơ giun nhiều tơ loài (Perinereis nuntia var brevicirris Grube, 1857) 2.3 Phạm vi áp dụng Quy trình áp dụng cho tổ chức, cá nhân làm nghề nuôi trồng thủy sản địa phương ven biển đáp ứng đầy đủ điều kiện kỹ thuật đề quy trình III Điều kiện áp dụng 3.1 Nguồn nước Nguồn nước cung cấp cho hệ thống nuôi thương phẩm giun nhiều tơ phải đầy đủ có chất lượng tốt bao gồm tất yếu tố thuỷ lý, thuỷ hoá như: độ mặn 25 o 33%o, nhiệt độ dao động từ 25-32 C; pH dao động từ 7,5-8,5; NH 3-N < 0,3 mg/L, H2S < 0,01 mg/L Xa nguồn nước thải nước thải công nghiệp, nông nghiệp sinh hoạt 3.2 Điện giao thông Thuận lợi giao thông, điện lưới, xa khu dân cư, thuận tiện cho việc mở rộng quy mô sản xuất, đồng thời nơi có nguồn nhân lực dồi gần vùng sản xuất tôm, cua giống IV Thiết kế xây dựng hệ thống nuôi giun 4.1 Hệ thống lấy nước biển Tuỳ quy mô trại nuôi thương phẩm, địa hình điều kiện địa chất mà bơm nước trực tiếp từ biển bơm nước biển từ giếng bờ biển 4.2 Hệ thống phân phối nước Trang trại nuôi thương phẩm giun cần xây dựng bể chứa nước để cung cấp nước cho tồn trại ni Kích thước trung bình bể chứa 50-100 m gồm 02 bể 4.3 Hệ thống bể chứa xử lý Gồm bể lắng chất bẩn, cát chất khác nước biển, bể lọc bể xử lý Dung tích hệ thống bể chứa tuỳ thuộc vào quy mô nhu cầu sử dụng nước cho hoạt động sản xuất 4.4 Bể nuôi thương phẩm Bể ni giun nhiều tơ thường có dạng hình chữ nhật hình vng với kích cỡ từ 15 m2 đến 50 m2 để dễ chăm sóc, quản lý thu hoạch, độ sâu bể thường dao động từ 0,2 – 0,4 m Mỗi bể phải có ống cấp thoát nước riêng để thuận tiện cho việc thay đổi nước Đáy bể phẳng dốc phía cống nước 4.5 Hệ thống nước Có thể dùng nước giếng khoan nước máy, trước sử dụng cần phải cấp vào bể chứa có sục khí 4.6 Máy phát điện Cần phải có máy phát điện để đề phòng trường hợp điện lưới bị mất, mục đích để trì hoạt động trại nuôi thương phẩm 4.7 Các trang thiết bị khác Ngồi hệ thống bể nêu trên, trang trại ni thương phẩm cần có dụng cụ khác máy đo độ mặn, nhiệt độ, pH số dụng cụ mau hỏng xô, chậu, loại vợt V Nội dung quy trình 5.1 Chuẩn bị hệ thống nuôi 5.1.1 Chuẩn bị bể nuôi Bể nuôi thương phẩm rửa xà phòng, ngâm chlorine khoảng 24 với nồng độ 30ppm, sau rửa lại nước trước đưa giá thể (nến đáy) vào bể Nước biển lọc xử lý tia cực tím trước cấp vào bể nuôi thương phẩm cho giun ăn 5.1.2 Chuẩn bị đáy Cát sử dụng làm đáy cát hạt lớn (kích thước – mm/hạt), rửa nước ngọt, phơi nắng - ngày trước đưa vào bể nuôi Độ cao đáy 10-20 cm tùy theo mật độ thả nuôi 5.2 Chọn giống nuôi thả giống 5.2.1 Chuẩn bị giun giống Giun nhiều tơ giống loài ăn tạp yêu cầu quan trọng giống phải có kích cỡ đồng nhằm hạn chế tối đa hao hụt cạnh tranh thức ăn, không bị thương tật, khơng nhiễm bệnh có màu sắc tự nhiên Giun giống khoẻ mạnh thường bò nhanh nhẹn có phản xạ tốt có tác động từ bên ngồi 5.2.2 Thả giống Giun giống có kích thước từ 2,5 – 3,0 cm tiến hành thả vào bể nuôi thương phẩm với mật độ 3.000 con/m2 Nên thả giống vào lúc sáng sớm chiều mát Trước thả giống cần kiểm tra nhiệt độ bể nuôi thương phẩm, tránh gây sốc giun nhiệt độ môi trường thay đổi 5.3 Thức ăn cách cho ăn 5.3.1 Thức ăn Thức ăn sử dụng nuôi thương phẩm giun nhiều tơ cá tạp (cá nục, cá ngân, cá mực…) kết hợp với thức ăn tổng hợp (thức ăn loại viên nhỏ tôm cá) sử dụng hoàn toàn thức ăn tổng hợp 5.3.2 Cách cho ăn Cá tạp tươi, xay nhỏ cho vừa kích cỡ miệng giun, tuần giun cho ăn lần ngày vào buổi sáng (6 giờ), buổi trưa (12 giờ) buổi chiều (17 giờ) với tỷ lệ 10 - 15% trọng lượng giun Trong tuần cho giun ăn lần ngày vớp tỷ lệ - 10% trọng lượng giun Từ tháng thứ thu hoạch cho ăn lần ngày vào buổi sáng buổi trưa buổi chiều với tỷ lệ 2-3% sau giảm dần xuống - 2% trọng lượng giun đến thu hoạch Giun có tập tính hang, chúng chui khỏi hang bắt mồi, cho ăn phải rải thức ăn khắp bề mặt đáy bể Tuy nhiên, điều chỉnh lượng thức ăn hàng ngày tùy theo tình trạng sức khỏe giun 5.4 Các biện pháp chăm sóc quản lý Việc thay nước bể nuôi giun không theo định kỳ định mà vào màu sắc lớp đáy tình trạng sức khoẻ giun để thay nước vệ sinh đáy Hàng ngày kiểm tra lớp đáy bể ni để có biện pháp xử lý kịp thời có cố xảy Định kỳ 15 ngày xác định tốc độ tăng trưởng giun, theo dõi diễn biến mơi trường, tình trạng bắt mồi tình trạng hoạt động giun để tính tốn điều chỉnh lượng thức ăn cho thích hợp Phịng trị bệnh: Phịng bệnh chính, sử dụng nước thuốc tím tắm cho giun trước thả vào bể nuôi Tăng cường hệ miễn dịch cho giun nuôi cách định kỳ bổ sung vitamin khoáng chất vào thức ăn trước cho ăn Vệ sinh quanh khu vực nuôi, trường hợp phát thấy giun chết bể phải vớt ra, kiểm tra nguyên nhân giun chết để kịp thời chữa trị Thời gian nuôi tùy theo nhu cầu thị trường, thông thường khoảng 3-4 tháng giun đạt kích cỡ khoảng từ 0,5-1,2 g/con Giun ni thương phẩm cịn phụ thuộc vào mùa vụ sản xuất giống tơm cua, mà điều chỉnh thời gian ni cho phù hợp với nhu cầu ngồi thị thường 5.5 Thu hoạch vận chuyển 5.5.1 Thu hoạch Sau khoảng thời gian từ 3-4 tháng nuôi, giun đạt kích cỡ khoảng từ 0,5-1,2 g/con, tiến hành thu hoạch Tùy theo nhu cầu mà thu tồn phần Dụng cụ thu hoạch vận chuyển phải tránh lây nhiễm vi sinh vật vào sản phẩm sau thu hoạch Giun sau thu hoạch phải bảo quản sống đông lạnh vận chuyển tới nơi tiêu thụ 5.5.2 Vận chuyển Phương pháp vận chuyển hở để giúp giun đảm bảo khơng bị thiếu oxy q trình vận chuyển Việc vận chuyển với cát ẩm không cần nước không cần sục khí tốt so với vận chuyển nước có sục khí, điều tránh trường hợp khí làm giun khơng hơ hấp Mật độ vận chuyển kg giun nhiều tơ/2 kg cát ẩm Ở phương pháp vận chuyển có nước sục khí trường hợp có cá thể cắn làm giun chết dịch giải phóng làm bẩn nước nhanh dẫn đến tượng giun chết hàng loạt ... VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG NGUYỄN VĂN DŨNG NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT GIỐNG VÀ NUÔI THƯƠNG PHẨM GIUN NHIỀU TƠ Perinereis nuntia var brevicirris (Grube, 1857) LÀM THỨC ĂN NUÔI VỖ TÔM... TƯỢNG NGHIÊN CỨU Giun nhiều tơ Perinereis nuntia var brevicirris (Grube, 1857) 2.3 SƠ ĐỒ KHỐI NỘI DUNG NGHIÊN CỨU Nghiên cứu quy trình sản xuất giống nuôi thương phẩm giun nhiều tơ (Perinereis nuntia. .. 1857) làm thức ăn nuôi vỗ tôm bố mẹ? ?? từ năm 2012-2014 dự án sản xuất thử nghiệm cấp Bộ “Hồn thiện quy trình sản xuất giống ni thương phẩm giun nhiều tơ Perinereis nuntia var brevicirris (Grube, 1857)