Sử dụng phương pháp sắc ký lỏng khối phổ LC MS MS để phân tích các sản phẩm tạo thành của phản ứng giữa bis 1 naphthaldehyde và hợp chất chứa nguyên tử hidro linh động

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC LÊ THỊ THÙY DƯƠNG SỬ DỤNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ (LC- MS/MS) ĐỂ PHÂN TÍCH CÁC SẢN PHẨM TẠO THÀNH CỦA PHẢN ỨNG GIỮA DẪN XUẤT BIS (1-NAPHTHALDEHYDE) VÀ HỢP CHẤT CHỨA NGUYÊN TỬ HIDRO LINH ĐỘNG LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC HÀ NỘI, 2018 LỜI CẢM ƠN Nghiên cứu khoa học thực phịng thí nghiệm Hóa học Hữu – Khoa Hóa học – Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội Lời em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới Tiến Sĩ Đào Thị Nhung giáo viên hướng dẫn giao đề tài, tận tình hướng dẫn, truyền đạt nhiều kinh nghiệm quý báu, quan tâm tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành đề tài Em xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo trường Hóa trường Đại học Khoa học, Đại học Thái Ngun nói chung khoa Hóa phân tích nói riêng giảng dạy trang bị cho em kiến thức quý giá suốt trình học Em xin gửi lời cảm ơn đến bạn sinh viên phịng thí nghiệm Hóa hữu 2, trường Đại học Khoa học Tự nhiên giúp đỡ em trình thực nghiệm đề tài Cuối em xin chân thành cảm ơn Hội đồng khoa học giúp đỡ em bảo vệ thành công đề tài Hà Nội, ngày 20 tháng 05 năm 2018 Lê Thị Thùy Dương DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT HPLC: Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao SKPB: Sắc ký phân bố SKPT: Sắc ký pha thường SKPĐ: Sắc ký pha đảo ESI: Ion hóa dầu phun điện tử APCI: Ion hóa hóa học áp suất khí CTPT: Cơng thức phân tử DMF: Dimethylformamdie LC – MS/MS: Phương pháp sắc ký lỏng hai lần khối phổ USA: United States of America TLC: Sắc ký lớp mỏng (thin layer chromatography) DCM/EtOH: Dichloromethan/ethanol H/E: Hexane/ Ethylacetat NH4OAc: Ammoniumacetat ACN: Acetonitrile IR: Phổ hồng ngoại Phổ 1H-NMR: Phổ cộng hưởng từ hạt nhân pronton Phổ 13C-NMR: Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon NMR: Cộng hưởng từ hạt nhân DANH MỤC SƠ ĐỒ Sơ đồ 1.1 Sản phẩm định hướng tổng hợp phản ứng dẫn xuất Bis (1- Naphthaldehyde) hợp chất chứa nguyên tử Hidro linh động - 20 Sơ đồ 1.2 Sản phẩm trung gian phản ứng dẫn xuất Bis (1- Naphthaldehyde) hợp chất chứa nguyên tử Hidro linh động 21 Sơ đồ 3.1 Phản ứng tổng hợp dẫn xuất bis (1-naphthadehyde) 31 Sơ đồ 3.2 Phản ứng A3 với thioure 34 Sơ đồ 3.3 Phản ứng A3 N-methylthioure 35 Sơ đồ 3.4 Phản ứng A3 hợp chất keton - 36 Sơ đồ 3.5 Phản ứng A3 ethylacetoacetate 37 Sơ đồ 3.6 Phản ứng A3 methylethylketone 40 Sơ đồ 3.7 Phản ứng A3 dibenzylketone 45 Sơ đồ 3.8 Phản ứng A3 cyclohexanone 49 Sơ đồ 3.9 Phản ứng A3 acetylacetone 50 Sơ đồ 3.10 Phản ứng A3 malonamide 53 Sơ đồ 3.11 Phản ứng A3 Dimethythioure 55 Sơ đồ 3.12 Phản ứng A3 aminoguanidine hydrochloride - 56 Sơ đồ 3.13 Phản ứng A3 guanidine sulfate - 58 DANH MỤC HÌNH VẼ Hình 1.1 Hệ thống LC/MS 13 Hình 1.2 Cấu tạo đầu phun ESI 13 Hình 1.3 Chế độ ion hóa phun mù vào điện trường ESI - 14 Hình 1.4 Cấu tạo hệ thống LC-MS 15 Hình 1.5 Cấu tạo tứ cực - 16 Hình 1.6 Thiết bị khối phổ MS/MS - 17 Hình 2.1 Quy trình xử lý mẫu từ dung dịch phản ứng - 25 Hình 3.1 Phổ IR hợp chất A3 - 31 Hình 3.2 Phổ 1H-NMRcủa A3 - 32 Hình 3.3 Phổ giãn hợp chất A3 32 Hình 3.4 Phổ 13C-NMR A3 33 Hình 3.5 Phổ MS A3 33 Hình 3.6 Sắc ký đồ LC-MS dung dịch phản ứng A3 thioure. - 35 Hình 3.7 Sắc ký đồ LC-MS dung dịch phản ứng A3 N-methylthioure 36 Hình 3.8 Sắc ký đồ LC-MS dung dịch phản ứng A3 ethylacetoacetate (1) 38 Hình 3.9 Sắc ký đồ LC-MS dung dịch phản ứng A3 ethylacetoacetate (2) 38 Hình 3.10 Sắc ký đồ LC-MS dung dịch phản ứng A3 ethylacetoacetate (3) 39 Hình 3.11 Phổ IR sản phẩm (1-1) tách - 39 Hình 3.12 Phổ 1H-NMR sản phẩm (1-1) tách - 40 Hình 3.13 Phổ 13C-NMR sản phẩm (1-1) tách 41 Hình 3.14 Phổ MS sản phẩm (1-1) tách 41 Hình 3.15 Sắc ký đồ LC-MS dung dịch phản ứng A3 methylethylketone (1) - 43 Hình 3.16 Sắc ký đồ LC-MS dung dịch phản ứng A3 methylethylketone(2) - 43 Hình 3.17 Phổ 1H-NMR sản phẩm (2-1) tách - 44 Hình 3.18 Phổ 13C-NMR sản phẩm (2-1) tách 45 Hình 3.19 Sắc ký đồ LC-MS dung dịch phản ứng A3 dibenzylketone - 46 Hình 3.20 Phổ 1H-NMR sản phẩm (3-1) tách - 47 Hình 3.21 Phổ 13C-NMR sản phẩm (3-1) tách - 48 Hình 3.22 Phổ MS sản phẩm (3-1) tách - 48 Hình 3.23 Sắc ký đồ LC-MS dung dịch phản ứng A3 cyclohexanone - 50 Hình 3.24 Sắc ký đồ LC-MS dung dịch phản ứng A3 acetylacetone (1) - 51 Hình 3.25 Sắc ký đồ LC-MS dung dịch phản ứng A3 acetylacetone (2) - 52 Hình 3.26 Sắc ký đồ LC-MS dung dịch phản ứng A3 acetylacetone (3) - 52 Hình 3.27 Sắc ký đồ LC-MS dung dịch phản ứng A3 acetylacetone (4) - 53 Hình 3.28 Sắc ký đồ LC-MS dung dịch phản ứng A3 malonamide (1) 54 Hình 3.29 Sắc ký đồ LC-MS dung dịch phản ứng A3 malonamide (2) 55 Hình 3.30 Sắc ký đồ LC-MS dung dịch phản ứng A3 Dimethylure 56 Hình 3.31 Sắc ký đồ LC-MS dung dịch phản ứng A3 aminoguanidine hydrochloride 57 Hình 3.32 Sắc ký đồ LC-MS dung dịch phản ứng A3 guanidine sulfate 58 DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Một số phản ứng ngưng tụ đa tác nhân phương pháp tổng hợp kinh điển - 18 Bảng 2.1 Điều kiện phân tích thiết bị LTQ Orbitrap XL - 26 Bảng 3.1 Số khối m/z tìm thấy hợp chất dự đoán tạo thành phản ứng A3 ethylacetoacetate 37 Bảng 3.2 Số khối m/z tìm thấy hợp chất dự đoán tạo thành phản ứng A3 methylethylketone - 42 Bảng 3.3 Số khối m/z tìm thấy hợp chất dự đoán tạo thành phản ứng A3 đibenzylketone 44 Bảng 3.4 Số khối m/z tìm thấy hợp chất dự đoán tạo thành phản ứng A3 cyclohexanone - 49 Bảng 3.5 Số khối m/z tìm thấy hợp chất dự đoán tạo thành phản ứng A3 acetylacetone - 50 Bảng 3.6 Số khối m/z tìm thấy hợp chất dự đốn tạo thành phản ứng A3 malonamide - 54 Bảng 3.7 Số khối m/z tìm thấy hợp chất dự đoán tạo thành phản ứng A3 aminoguanidine hydrochloride - 57 MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT - DANH MỤC SƠ ĐỒ DANH MỤC HÌNH VẼ -5 DANH MỤC BẢNG -7 MỞ ĐẦU - 10 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN VỀ PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ - 11 1.1 SẮC KÝ LỎNG HAI LẦN KHỐI PHỔ (LC-MS/MS) - 11 1.1.1 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 11 1.1.2 Khối phổ (Mass Spectrometry) - 12 1.2 PHẢN ỨNG CỦA DẪN XUẤT BIS (1-NAPHTHADEHYDE) VÀ HỢP CHẤT CHỨA NGUYÊN TỬ HIDRO LINH DỘNG - 18 CHƯƠNG 2: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU - 22 2.1 THIẾT BỊ, DỤNG CỤ, HÓA CHẤT, CHẤT CHUẨN 22 2.1.1 Thiết bị 22 2.1.2 Dụng cụ - 22 2.1.3 Hóa chất - 22 2.2 MỤC TIÊU ĐỀ TÀI - 22 2.1.1 Mục tiêu chung 22 2.1.2 Mục tiêu cụ thể 23 2.3 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU - 23 2.3.1 Nội dung nghiên cứu 23 2.3.2 Đối tượng nghiên cứu - 23 2.3.3 Phương pháp nghiên cứu - 23 2.4 THỰC NGHIỆM - 24 2.4.1 Tổng hợp dẫn xuất bis(1-naphthaldehyde) (A3) - 24 2.4.2 Phản ứng bis(1-naphthaldehyde) hợp chất chứa nguyên tử Hidro linh động 24 2.4.3 Phân tích thiết bị LC-MS/MS - 24 2.4.3.1 Xử lý mẫu 25 2.4.3.2 Kết phân tích 26 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN - 31 3.1 TỔNG HỢP DẪN XUẤT BIS (1-NAPHTHADEHYDE) - 31 3.2 PHẢN ỨNG GIỮA BIS (1-NAPHTHADEHYDE) VÀ HỢP CHẤT CHỨA NGUYÊN TỬ HIDRO LINH ĐỘNG 34 3.2.1 Phản ứng với dẫn xuất thioure - 34 3.2.1.1 Phản ứng A3 thioure 34 3.2.1.2 Phản ứng A3 N-methylthioure 35 3.2.2 Phản ứng A3 hợp chất keton - 36 3.2.2.1 Phản ứng A3 ethylacetoacetate 37 3.2.2.2 Phản ứng A3 methylethylketone - 42 3.2.2.3 Phản ứng A3 dibenzylketone - 45 3.2.2.4 Phản ứng A3 cyclohexanone - 49 3.2.2.5 Phản ứng A3 acetylacetone - 50 3.2.2.6 Phản ứng A3 malonamide - 53 3.2.2.7 A3 Dimethyure - 55 3.2.3 Phản ứng A3 dẫn xuất guanidine 56 3.2.3.1 Phản ứng A3 aminoguanidine hydrochloride 56 3.2.3.2 Phản ứng A3 guanidine sulfate 58 Chương 4: KẾT LUẬN - 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO - 61 PHỤ LỤC -66 MỞ ĐẦU Phương pháp sắc ký lỏng khối phổ kỹ thuật sắc ký đại, có độ nhạy tính chọn lọc cao, sử dụng nhiều lĩnh vực nghiên cứu bao gồm định tính định lượng Thiết bị gồm hai phần ghép nối phần sắc ký (cho phép tách chất) phần khối phổ (phát chất) Bằng việc đo đạc tỉ lệ khối lượng điện tích ion (m/z), phương pháp khối phổ cho phép xác định hợp chất chưa biết cách dựa vào khối lượng phân tử hợp chất; xác định kết cấu chất đồng vị thành phần hợp chất; xác định cấu trúc hợp chất dựa thành phần phân mảnh… Các hợp chất crown ether bắt đầu nghiên cứu tổng hợp từ năm 1967 nhà hóa học Charles Pedersen Pedersen tổng hợp thành công crown ether chứng minh ứng dụng quan trọng hợp chất lĩnh vực khoa học kỹ thuật Kể từ đến nay, hóa học hợp chất crown ether tiếp tục phát triển, nhiều cấu trúc thiết lập với tiềm ứng dụng khác, đặc biệt hợp chất azacrown ether với thay nguyên tử O vòng crown nguyên tử Nitơ Phương pháp kinh điển để tổng hợp dẫn xuất azacrown ether sử dụng phản ứng ngưng tụ đa tác nhân hợp chất dialdehit xeton với hợp chất chứa hidro linh động dung mơi thích hợp có mặt muối amonium acetate Phương pháp có ưu điểm rút ngắn giai đoạn trung gian, tạo thành sản phẩm dị vòng cạnh định hướng, dễ dàng thay đổi tác nhân phản ứng nên tạo thư viện lớn hợp chất Tuy nhiên, trình phản ứng tạo thành nhiều sản phẩm phụ khác Để xác định sản phẩm tạo thành phản ứng ngưng tụ đa tác nhân, nghiên cứu này, chúng tơi tiến hành phân tích sản phẩm tạo thành phản ứng Bis (1- Naphthaldehyde) hợp chất chứa nguyên tử Hidro linh động phương pháp sắc ký lỏng khối phổ Dựa số khối m/z thu dựa vào thời gian lưu chất xác định số lượng sản phẩm tạo thành trình phản ứng, từ dự đốn chiều hướng ưu tiên phản ứng điều kiện thí nghiệm thay đổi điều kiện tiến hành để thu sản phẩm định hướng 10 Phụ lục 19: Hình 3.19 Sắc ký đồ LC-MS dung dịch phản ứng A3 dibenzylketone C:\Xcalibur\data\A3_DBK RT: 0.00 - 10.00 SM: 7B 100 1.79 1.77 50 2.73 1.95 2.49 NL: 2.51E7 2.77 T IC MS A3_DBK 2.79 3.07 3.11 3.61 3.78 1.71 0.09 0.57 Relative Abundance 5/12/2018 10:03:35 AM 1.27 4.22 1.62 100 4.67 5.03 5.34 5.72 6.65 7.04 7.32 7.80 8.23 8.52 9.24 9.61 NL: 4.41E5 1.89 2.09 2.27 0.53 0.90 0.98 50 100 1.84 2.67 3.11 3.96 4.36 4.62 5.11 5.44 6.73 7.16 7.43 8.15 8.78 9.09 9.81 NL: 4.00E7 2.74 1.90 2.54 3.04 3.10 3.59 T IC F: IT MS + c ESI Ful l ms [50.00-1000.00] MS A3_DBK 3.81 50 4.19 4.64 0.08 6.19 T IC F: IT MS - c ESI Ful l ms [50.00-2000.00] MS A3_DBK 0.54 0.97 1.31 5.04 5.31 5.72 6.04 6.66 6.99 7.73 8.24 8.49 9.27 9.56 0 Tim e (m in) A3_DBK #179 RT: 1.84 AV: NL: 1.53E7 F: ITMS + c ESI Full m s [50.00-1000.00] 606.39 100 90 Relative Abundance 80 70 60 50 40 30 20 488.36 10 385.41 397.25 380 400 419.46 420 437.25 440 449.42 468.39 460 507.48 517.52 480 500 520 m /z 537.40 551.34 563.45 540 560 589.47 580 604.48 600 629.41 620 649.62 640 665.62 660 84 Phụ lục 20: Hình 3.20 Phổ 1H-NMR sản phẩm (3-1) tách 85 Phụ lục 21: Hình 3.21 Phổ 13C-NMR sản phẩm (3-1) tách 86 C:\LTQ Orbitrap\ \a3_dbk_180126132354 it nh4oac Phụ lục 22: Hình 3.22 MS sản phẩm (3-1) tách 1/30/2018 1:53:16Phổ PM a3_dbk_180126132354 #503 RT: 6.14 AV: NL: 7.76E7 T: ITMS + c ESI Full m s [50.00-2000.00] 606.08 100 95 90 85 80 75 70 65 Relative Abundance 60 55 50 45 40 35 30 25 20 15 521.09 10 488.08 130.81 50 100 171.91 192.96 150 200 245.03 273.01 250 371.18 398.15 317.01 300 350 m /z 400 442.05 450 480.90 507.06 500 563.14 550 624.05 600 87 Phụ lục 23: Hình 3.23 Sắc ký đồ LC-MS dung dịch phản ứng A3 cyclohexanone C:\Xcalibur\data\A3_CYCLO_180412092715 4/12/2018 9:27:15 AM RT: 0.00 - 19.99 SM: 13B 100 2.51 2.14 50 Relative Abundance NL: 3.44E7 2.81 5.71 6.37 7.14 8.03 0.11 100 T IC MS A3_CYCLO_180412092 715 3.42 4.41 2.40 9.42 10.10 11.22 11.93 13.28 15.06 15.53 16.67 17.58 18.93 NL: 3.80E6 2.62 50 3.88 4.41 5.09 0.19 1.02 100 7.21 7.71 8.24 8.91 9.99 10.54 11.44 12.64 13.73 14.40 15.77 16.39 17.32 18.50 2.81 50 3.63 4.58 5.25 6.06 6.83 7.81 8.44 9.32 10.10 10.99 11.96 12.97 4.77 4.92 0.17 1.52 100 15.12 16.34 16.93 18.14 18.78 1.03 1.76 3.66 4.18 6.24 6.78 7.55 9.43 10.52 50 Relative Abundance 12 14 16.36 17.47 16 18.64 19.94 NL: 9.22E6 A3_CYCLO_180412092715 #422 RT: 2.52 AV: T: ITMS + c ESI Full ms [80.00-800.00] 414.26 341.37 352.32 385.37 396.26 418.31 449.38 467.30 489.33 516.23 526.30 548.48 570.38 587.39 NL: 1.39E7 A3_CYCLO_180412092715 #480 RT: 2.84 AV: T: ITMS + c ESI Full ms [80.00-800.00] 494.31 50 100 348.31 366.40 385.34 396.26 414.29 417.36 516.26 526.30 539.44 477.34 449.38 572.46 587.42 NL: 9.49E5 A3_CYCLO_180412092715 #856 RT: 4.98 AV: T: ITMS + c ESI Full ms [80.00-800.00] 476.34 494.35 50 556.36 341.21 340 362.61 360 386.27 396.21 380 400 414.30 420 445.07 440 512.34 526.37 467.60 460 m/z 480 Base Peak m/z= 553.50-554.50 MS A3_CYCLO_180412092 715 18 494.38 100 100 12.72 13.29 14.24 15.19 10 Time (min) NL: 1.47E7 Base Peak m/z= 493.50-494.50 MS A3_CYCLO_180412092 715 NL: 2.54E5 50 Base Peak m/z= 413.50-414.50 MS A3_CYCLO_180412092 715 500 520 590.39 546.38 540 571.40 560 580 88 Phụ lục 24: Hình 3.24 Sắc ký đồ LC-MS dung dịch phản ứng giữa dẫn xuất A3 acetylacetone (1) C:\Xcalibur\data\A3_ACETYLACETONE 4/18/2018 3:18:29 PM RT: 0.00 - 10.01 SM: 7B 1.79 1.83 50 3.60 3.88 2.53 2.98 TIC MS A3_ACETYLACETONE 4.08 4.53 5.05 5.95 6.19 6.80 6.84 7.55 7.90 8.35 1.62 0.34 0.63 Relative Abundance NL: 2.17E7 3.18 3.20 3.50 100 100 9.08 9.31 NL: 2.47E5 1.72 3.08 3.16 50 2.09 3.40 3.58 0.53 0.78 1.21 100 3.17 3.23 1.82 50 0.60 2.57 2.95 4.10 4.40 5.08 5.75 6.17 6.23 8.08 8.78 9.06 9.43 NL: 3.56E7 3.57 3.75 TIC F: ITMS + c ESI Full m s [50.00-1000.00] MS A3_ACETYLACETONE 5.98 6.37 6.81 6.90 7.53 7.87 8.32 8.75 9.24 9.50 3.99 4.56 4.82 1.53 100 7.03 7.25 NL: 1.14E7 2.57 50 0.08 0.68 1.26 1.82 TIC F: ITMS - c ESI Full m s [50.00-2000.00] MS A3_ACETYLACETONE 3.51 4.01 4.54 4.88 5.35 5.98 6.27 6.81 7.04 7.61 7.85 8.38 8.75 9.08 9.50 Tim e (m in) Bas e Peak m /z= 495.50-496.50 F: ITMS + c ESI Full m s [50.00-1000.00] MS A3_ACETYLACETONE 10 A3_ACETYLACETONE #251 RT: 2.57 AV: NL: 1.06E7 F: ITMS + c ESI Full m s [50.00-1000.00] 496.28 100 90 Relative Abundance 80 70 60 50 40 30 20 10 85.10 100 144.98 197.16 237.21 283.29 200 300 371.31 412.26 400 454.25 518.26 500 606.34 649.62 600 701.44 733.51 700 797.59 800 875.31 903.82 900 957.51 1000 m /z 89 Phụ lục 25: Hình 3.25 Sắc ký đồ LC-MS dung dịch phản ứng giữa dẫn xuất A3 acetylacetone (2) C:\Xcalibur\data\A3_ACETYLACETONE 4/18/2018 3:18:29 PM RT: 0.00 - 10.01 100 3.17 50 3.21 3.47 3.65 NL: 4.76E7 3.85 TIC MS A3_ACETYLACETONE 4.23 5.07 5.94 6.77 7.55 7.73 7.87 8.57 9.05 9.28 NL: 2.74E5 1.68 1.79 100 3.02 3.34 3.44 1.95 2.92 50 Relative Abundance 1.70 1.68 0.54 2.53 0.09 0.71 100 3.17 2.53 1.70 50 0.54 3.21 3.47 3.65 2.89 3.21 2.08 2.43 50 0.17 0.73 50 1.59 1.70 1.82 0.97 1.57 0.33 0 5.26 6.13 6.44 7.23 7.64 8.15 8.72 TIC F: ITMS - c ESI Full m s [50.00-2000.00] MS A3_ACETYLACETONE 9.39 NL: 4.76E7 3.85 4.52 5.07 5.94 6.77 TIC F: ITMS + c ESI Full m s [50.00-1000.00] MS A3_ACETYLACETONE 7.55 7.73 7.87 8.57 9.05 9.28 1.57 100 100 3.88 4.67 1.25 NL: 4.47E5 Bas e Peak m /z= 478.50-479.50 F: ITMS + c ESI Full m s [50.00-1000.00] MS A3_ACETYLACETONE 3.35 3.47 3.65 3.81 4.07 4.58 5.21 6.16 6.77 7.22 7.91 8.22 8.95 9.28 NL: 3.61E4 2.26 3.17 3.01 3.33 2.91 3.63 4.23 5.07 5.49 5.94 Tim e (m in) 6.59 6.88 7.87 8.36 Bas e Peak m /z= 584.50-585.50 F: ITMS + c ESI Full m s [50.00-1000.00] MS A3_ACETYLACETONE 9.05 9.38 10 A3_ACETYLACETONE #261 RT: 2.67 AV: NL: 1.56E5 F: ITMS + c ESI Full m s [50.00-1000.00] 478.29 100 479.29 90 Relative Abundance 80 70 60 50 477.27 40 480.27 30 20 469.42 10 466.55 467.31 466 467 470.54 468.44 468 469 470 473.42 471.46 471 472 481.26 474.48 472.41 473 474 m /z 475 482.34 475.66 476 477 478 479 480 481 482 483 90 Phụ lục 26: Hình 3.26 Sắc ký đồ LC-MS dung dịch phản ứng giữa dẫn xuất A3 acetylacetone (3) C:\Xcalibur\data\A3_ACETYLACETONE 4/18/2018 3:18:29 PM RT: 0.00 - 10.01 100 50 1.68 0.54 NL: 4.76E7 3.85 TIC MS A3_ACETYLACETONE 4.23 5.94 5.07 6.77 7.55 7.73 7.87 8.57 9.05 9.28 NL: 2.74E5 1.68 1.79 100 1.95 2.92 50 Relative Abundance 3.21 3.47 3.65 3.17 2.53 1.70 0.09 0.71 3.02 1.25 100 3.21 3.47 3.65 3.17 2.53 1.70 50 0.54 3.34 3.44 3.35 2.89 3.21 2.08 2.43 50 0.17 0.73 50 5.26 6.13 6.44 7.23 1.20 7.64 8.72 8.15 TIC F: ITMS - c ESI Full m s [50.00-2000.00] MS A3_ACETYLACETONE 9.39 NL: 4.76E7 3.85 4.52 5.07 5.94 6.77 7.55 7.73 7.87 8.57 TIC F: ITMS + c ESI Full m s [50.00-1000.00] MS A3_ACETYLACETONE 9.05 9.28 NL: 4.47E5 Bas e Peak m /z= 478.50-479.50 F: ITMS + c ESI Full m s [50.00-1000.00] MS A3_ACETYLACETONE 3.47 3.65 3.81 1.59 1.80 0.21 4.67 1.57 100 100 3.88 4.07 4.58 5.21 6.16 6.77 7.22 7.91 8.22 8.95 9.28 NL: 8.99E4 1.84 1.59 2.00 2.16 2.32 3.45 3.71 3.97 A3_ACETYLACETONE #177 RT: 1.82 AV: F: ITMS + c ESI Full m s [50.00-1000.00] 547.30 100 5.60 4.86 Tim e (m in) 6.14 6.77 7.24 Bas e Peak m /z= 579.50-580.50 F: ITMS + c ESI Full m s [50.00-1000.00] MS 8.57 8.95 9.50 9.98 A3_ACETYLACETONE 7.73 10 NL: 1.03E6 90 Relative Abundance 80 70 60 565.34 50 40 548.34 30 20 10 566.35 549.34 551.44 550 556.56 555 560 580.33 567.34 561.49 571.35 565 570 577.43 575 580 584.33 585.37 585 m /z 603.45 590.40 590 593.38 595 606.35 608.32 600.52 600 605 610 613.40 615 617.57 621.37 620 625.44 625 91 Phụ lục 27: Hình 3.27 Sắc ký đồ LC-MS dung dịch phản ứng giữa dẫn xuất A3 acetylacetone (4) C:\Xcalibur\data\A3_ACETYLACETONE 4/18/2018 3:18:29 PM RT: 0.00 - 10.01 100 50 0.54 1.70 1.68 NL: 4.76E7 3.85 TIC MS A3_ACETYLACETONE 4.23 5.07 5.94 6.77 7.55 7.73 7.87 8.57 9.05 9.28 NL: 2.74E5 1.68 1.79 100 1.95 2.92 50 Relative Abundance 3.21 3.47 3.65 3.17 2.53 0.09 0.71 3.02 3.34 3.44 100 3.21 3.47 3.65 3.17 2.53 1.70 50 0.54 2.89 3.21 2.08 2.43 50 0.17 0.73 0.33 7.23 7.64 9.39 4.52 5.07 5.94 6.77 7.55 7.73 7.87 8.57 9.05 9.28 4.07 4.58 5.21 6.16 6.77 7.22 7.91 8.95 9.28 8.22 2.83 TIC F: ITMS - c ESI Full m s [50.00-2000.00] MS A3_ACETYLACETONE TIC F: ITMS + c ESI Full m s [50.00-1000.00] MS A3_ACETYLACETONE NL: 4.47E5 Bas e Peak m /z= 478.50-479.50 F: ITMS + c ESI Full m s [50.00-1000.00] MS A3_ACETYLACETONE NL: 1.30E5 2.61 1.30 1.57 8.72 8.15 3.35 3.47 3.65 3.81 2.55 2.00 6.13 6.44 NL: 4.76E7 3.85 1.59 1.68 50 5.26 1.57 100 100 3.88 4.67 1.25 3.01 3.47 4.40 4.82 5.56 5.92 Tim e (m in) 6.77 7.38 7.71 8.08 Bas e Peak m /z= 518.50-519.50 F: ITMS + c ESI Full m s [50.00-1000.00] MS 9.46 9.91 A3_ACETYLACETONE 8.69 10 A3_ACETYLACETONE #195 RT: 2.00 AV: NL: 3.73E5 F: ITMS + c ESI Full m s [50.00-1000.00] 520.31 100 496.29 90 Relative Abundance 80 70 60 518.30 50 521.30 498.33 40 30 499.30 536.25 20 10 534.28 517.58 515.26 500.26 485.33 503.32 489.38 491.32 493.36 507.35 522.30 537.27 524.32 511.34 485 490 495 500 505 510 m /z 515 520 525 533.63 527.23 530 539.37 535 540 92 Phụ lục 28: Hình 3.28 Sắc ký đồ LC-MS dung dịch phản ứng dẫn xuất A3 malonamide (1) A3_NH2COCH2CONH2_180418091905 4/18/2018 9:19:05 AM RT: 0.00 - 10.00 50 0.23 0.62 1.14 2.75 2.91 2.25 1.65 1.61 100 TIC MS A3_NH2COCH2CONH2 _180418091905 2.39 1.73 1.69 Relative Abundance NL: 8.93E7 2.43 2.61 2.63 100 3.35 3.51 3.92 4.67 5.05 5.27 5.74 6.07 6.68 6.99 7.69 8.23 8.64 9.34 9.54 NL: 1.28E6 1.72 1.66 2.40 2.48 2.86 3.18 3.50 50 0.18 0.40 0.71 1.45 100 1.69 50 4.23 4.43 5.34 5.65 5.79 6.55 7.08 7.37 8.09 8.58 8.97 9.47 NL: 8.93E7 2.43 2.61 2.67 2.39 1.73 2.25 TIC F: ITMS + c ESI Full m s [50.00-1000.00] MS A3_NH2COCH2CONH2 _180418091905 2.83 1.65 0.23 0.62 TIC F: ITMS - c ESI Full m s [50.00-2000.00] MS A3_NH2COCH2CONH2 _180418091905 1.78 3.35 1.34 3.39 3.73 4.67 5.05 5.27 5.74 6.07 6.68 6.99 7.69 8.23 8.64 9.34 9.54 0 A3_NH2COCH2CONH2_180418091905 #183 RT: 1.87 F: ITMS + c ESI Full m s [50.00-1000.00] 498.28 100 Tim e (m in) 10 AV: NL: 1.45E7 90 Relative Abundance 80 70 60 50 40 30 20 10 520.25 438.29 440 455.28 460 481.27 480 517.54 500 520 536.32 540 551.39 568.29 560 595.55 580 605.52 600 639.50 620 649.51 640 683.43 660 680 693.55 700 712.32 720 737.56 740 m /z 93 Phụ lục 29: Hình 3.29 Sắc ký đồ LC-MS dung dịch phản ứng dẫn xuất A3 malonamide (2) A3_NH2COCH2CONH2_180418091905 4/18/2018 9:19:05 AM RT: 0.00 - 10.00 100 1.73 2.39 50 0.62 Relative Abundance 100 2.43 2.61 2.83 1.34 NL: 8.93E7 T IC F: IT MS + c ESI Full ms [50.00-1000.00] MS A3_NH2COCH2CONH2_180418091905 3.35 3.51 4.67 5.05 5.62 5.89 6.40 6.99 50 0.25 0.62 100 NL: 3.06E7 2.05 2.43 2.43 2.39 1.51 50 0.48 100 3.35 3.67 4.34 4.67 5.05 5.62 5.89 6.40 6.99 9.54 Base Peak m/z= 428.50-429.50 F: IT MS + c ESI Full ms [50.00-1000.00] MS 4.34 4.67 5.05 5.62 5.89 6.40 6.99 9.23 9.54 A3_NH2COCH2CONH2_180418091905 7.69 7.96 8.64 2.87 0.15 0.62 100 3.07 2.21 1.34 2.25 50 0.62 0 1.32 1.89 4.34 4.67 5.05 5.62 5.89 6.40 6.99 7.69 8.06 8.64 9.23 9.60 2.31 2.43 2.67 3.73 4.34 4.67 4.95 5.40 5.97 6.40 6.99 Time (min) 7.98 8.33 9.23 9.58 NL: 3.68E7 Base Peak m/z= 397.50-398.50 F: IT MS + c ESI Full ms [50.00-1000.00] MS A3_NH2COCH2CONH2_180418091905 NL: 1.15E7 Base Peak m/z= 512.50-513.50 F: IT MS + c ESI Full ms [50.00-1000.00] MS A3_NH2COCH2CONH2_180418091905 10 NL: 3.06E7 A3_NH2COCH2CONH2_180418091905# 169 RT : 1.73 AV: F: IT MS + c ESI Full ms [50.00-1000.00] 498.28 100 50 Relative Abundance 7.69 7.96 8.64 Base Peak m/z= 497.50-498.50 F: IT MS + c ESI Full ms [50.00-1000.00] MS A3_NH2COCH2CONH2_180418091905 NL: 4.94E7 2.71 2.91 2.61 2.67 1.34 1.75 50 100 7.69 8.23 8.64 9.23 9.54 1.69 1.73 1.85 1.65 413.28 85.12 171.17 242.17 327.25 481.26 429.29 520.27 568.31 639.49 693.59 737.65 781.66 900.80 NL: 4.94E7 A3_NH2COCH2CONH2_180418091905# 239 RT : 2.43 AV: F: IT MS + c ESI Full ms [50.00-1000.00] 50 145.12 196.09 240.13 100 326.97 411.25 451.24 513.27 754.36 613.42 663.36 815.30 893.40 NL: 3.58E7 398.27 A3_NH2COCH2CONH2_180418091905# 259 RT : 2.63 AV: F: IT MS + c ESI Full ms [50.00-1000.00] 50 157.03 196.08 242.23 291.40 100 384.25 429.23 513.27 513.30 613.41 693.31 754.32 835.43 893.46 NL: 1.15E7 A3_NH2COCH2CONH2_180418091905# 221 RT : 2.25 AV: F: IT MS + c ESI Full ms [50.00-1000.00] 498.28 50 145.07 196.09 242.24 100 200 310.14 300 398.28 429.30 400 535.29 593.27 500 m/z 600 722.31 754.38 700 837.44 893.44 800 900 94 Phụ lục 30: Hình 3.30 Sắc ký đồ LC-MS dung dịch phản ứng A3 Dimethythioure A3_DIMETHYLURE_180424133226 4/24/2018 1:32:26 PM RT: 0.00 - 10.01 1.97 2.01 1.91 100 3.05 50 3.17 1.87 0.19 0.66 Relative Abundance NL: 6.43E7 3.63 3.99 1.46 100 2.00 2.36 2.61 2.75 0.30 TIC MS A3_DIMETHYLURE_180424133226 2.47 0.87 1.30 4.52 4.82 1.97 2.01 1.91 7.17 7.37 7.86 8.56 8.79 9.73 3.58 4.02 4.69 5.50 5.77 6.55 6.99 7.97 7.26 8.88 8.92 9.68 1.46 1.77 3.63 TIC F: ITMS + c ESI Full m s [50.00-1000.00] MS A3_DIMETHYLURE_180424133226 3.99 4.52 4.82 5.52 6.56 6.88 7.17 7.37 7.86 8.56 8.79 9.73 NL: 8.34E4 1.83 1.91 1.77 50 0.43 0.49 2.15 1.68 TIC F: ITMS - c ESI Full m s [50.00-2000.00] MS A3_DIMETHYLURE_180424133226 NL: 6.43E7 50 0.19 0.66 6.88 2.47 3.05 3.17 100 6.56 NL: 6.94E5 3.33 50 100 5.52 2.25 3.31 4.03 4.19 5.07 5.64 7.15 7.37 6.25 6.88 7.54 8.05 8.56 8.68 9.71 Bas e Peak m /z= 483.50-484.50 F: ITMS + c ESI Full m s [50.00-1000.00] MS A3_DIMETHYLURE_180424133226 0 A3_DIMETHYLURE_180424133226 #177 F: ITMS + c ESI Full m s [50.00-1000.00] RT: 1.81 AV: Tim e (m in) 10 NL: 3.99E5 437.22 100 428.26 90 80 Relative Abundance 235.18 70 398.24 60 50 40 30 171.07 190.79 10 442.22 219.29 167.04 494.34 414.28 199.14 20 240.27 260.16 283.17 304.21 327.24 387.26 359.26 371.36 484.26 517.36 479.38 546.29 561.51 150 200 250 300 350 m /z 400 450 500 550 95 Phụ lục 31: Hình 3.31 Sắc ký đồ LC-MS dung dịch phản ứng A3 dẫn xuất aminoguanidine hydrochloride C:\Xcalibur\data\A3_AMINOGUANIDINE RT: 0.00 - 9.99 0.04 100 0.36 5/14/2018 1:37:54 PM NL: 3.91E7 0.87 1.75 1.85 1.93 50 100 1.24 1.70 0.07 1.76 Relative Abundance 0.04 0.36 5.64 6.01 6.28 6.44 7.33 7.66 8.57 9.46 9.94 NL: 9.73E5 1.80 2.08 2.42 3.32 3.44 3.62 50 100 TIC MS A3_AMINOGUANIDINE 2.46 3.04 3.39 3.61 4.43 4.78 4.52 4.85 6.14 5.55 6.51 7.36 7.52 8.79 8.87 9.20 TIC F: ITMS - c ESI Full m s [50.00-2000.00] MS 9.41 A3_AMINOGUANIDINE NL: 3.91E7 0.87 0.97 1.85 1.93 2.46 3.04 3.39 3.61 4.43 4.78 50 5.64 6.01 6.28 6.44 7.33 7.66 TIC F: ITMS + c ESI Full m s [50.00-1000.00] MS 9.46 9.94 A3_AMINOGUANIDINE 8.57 NL: 3.01E6 Bas e Peak m /z= 526.50-527.50 F: ITMS + c ESI Full m s [50.00-1000.00] MS A3_AMINOGUANIDINE 1.77 1.85 100 50 0.14 2.05 0.99 100 2.28 3.00 3.25 4.43 5.21 5.79 6.01 6.28 6.55 7.14 7.66 8.01 8.99 9.26 NL: 1.65E6 1.83 1.93 50 0.04 2.05 0.67 0.97 0 2.24 3.04 3.25 4.00 4.43 A3_AMINOGUANIDINE #185 RT: 1.85 AV: F: ITMS + c ESI Full m s [50.00-1000.00] 264.31 100 4.84 5.23 Tim e (m in) 6.01 6.28 6.53 6.96 7.66 8.01 8.57 9.26 9.48 Bas e Peak m /z= 470.50-471.50 F: ITMS + c ESI Full m s [50.00-1000.00] MS A3_AMINOGUANIDINE NL: 3.27E6 90 Relative Abundance 80 70 527.30 60 50 471.23 429.23 40 398.20 30 20 411.22 443.19 583.19 299.22 10 255.94 270.03 317.18 250 300 345.18 371.18 350 468.32 384.32 400 450 485.28 502.31 500 549.33 550 565.29 610.32 632.95 600 m /z 96 Phụ lục 32: Hình 3.32 Sắc ký đồ LC-MS dung dịch phản ứng A3 guanidine sulfate A3_GUANIDINE 180515155335 5/16/2018 9:18:56 AM RT: 0.00 - 4.67 NL: 2.76E6 0.78 100 Bas e Peak m /z= 454.50455.50 MS A3_GUANIDIN E 18051515 5335 90 80 0.79 Relative Abundance 70 2.32 2.78 2.72 2.97 3.53 3.15 3.32 3.49 60 2.52 2.08 3.67 50 4.02 3.85 40 0.81 0.84 30 1.68 0.92 4.18 4.51 4.20 2.07 1.92 1.82 1.67 1.06 20 1.41 1.19 10 4.29 0.0 0.5 1.0 1.5 A3_GUANIDINE 180515155335 #209 RT: 0.81 T: ITMS + c ESI Full m s [150.00-2000.00] 2.0 2.5 Tim e (m in) 3.0 3.5 4.0 4.5 AV: NL: 1.12E7 429.77 100 90 Relative Abundance 80 399.40 70 60 50 412.43 40 30 430.82 20 416.20 397.20 437.75 10 373.13 377.55 370 380 388.09 390 401.67 400 428.07 410 420 455.37 457.53 439.86 430 440 m /z 450 460 474.33 472.66 475.66 470 480 487.98 490 497.51 503.58 500 511.63 510 97 PHỤ LỤC MỘT SỐ HÌNH ẢNH THIẾT BỊ LTQ ORBITRAP XL Bộ cô đuổi nitơ Lọc mẫu qua màng 0,25um Hình ảnh đun hồi lưu bình phản ứng A3 Hình ảnh chạy cột methylethylketon bếp cách thủy sau 1h phản ứng 98 ... 9.99 10 .54 11 .44 12 .64 13 .73 14 .40 15 .77 16 .39 17 .32 18 .50 2. 81 50 3.63 4.58 5.25 6.06 6.83 7. 81 8.44 9.32 10 .10 10 .99 11 .96 12 .97 4.77 4.92 0 .17 1. 52 10 0 15 .12 16 .34 16 .93 18 .14 18 .78 1. 03 1. 76... QUAN VỀ PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ 1. 1 SẮC KÝ LỎNG HAI LẦN KHỐI PHỔ (LC- MS/ MS) 1. 1 .1 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao - HPLC (High Performance Liquid... - 10 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN VỀ PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ - 11 1. 1 SẮC KÝ LỎNG HAI LẦN KHỐI PHỔ (LC- MS/ MS) - 11 1. 1 .1 Phương pháp