khả năng tạo ngà sửa chữa của biodentine nghiên cứu in vivo

MỞ ĐẦU Lộ tủy xảy sâu răng, chấn thương thao tác điều trị bác sĩ Hậu gây đau nhiễm trùng dẫn đến phải điều trị nội nha nhổ Tuy nhiên, phục hồi điều trị nội nha nhiều thời gian chi phí cao Nội nha phương pháp điều trị có nhiều rủi ro, bao gồm tắc nghẽn ống tủy, gãy dụng cụ ống tủy, thủng (thủng sàn, thủng chân răng) số lượng đáng kể mô bị Hơn nữa, điều trị nội nha khơng cịn cảm giác với kích thích, sâu tiến triển mà bệnh nhân không nhận biết… Một phương pháp khác giúp bảo tồn sống thay cho nhổ điều trị nội nha trường hợp định che tủy trực tiếp Che tủy trực tiếp nhằm mục đích bảo tồn trì mơ tủy bị tổn thương khơng bị phá hủy hồn tồn sâu răng, chấn thương… Sự điều trị có ý nghĩa quan trọng tồn lâu dài Tuỳ thuộc vào khả phục hồi mô tủy mức độ nghiêm trọng chấn thương Tủy trải qua trình hình thành phản ứng tự vệ thành công tiến triển thành hoại tử tủy Tủy đáp ứng với tác nhân kích thích theo ba cách: canxi hóa đóng ống ngà, lắng đọng ngà gian ống hình thành ngà thứ ba Tất đáp ứng nhằm giảm tính thấm ngà răng, hạn chế tác nhân kích thích di chuyển qua ngà vào tủy Trong số đáp ứng này, hình thành ngà thứ ba bảo vệ quan trọng khơng làm giảm tính thấm ngà mà cịn tăng khoảng cách từ nguồn kích thích đến tủy Do đó, ngà thứ ba nhân tố bảo vệ tủy hiệu Tuy nhiên, điều khơng có nghĩa vận chuyển chất qua ngà loại bỏ hoàn toàn Hàng rào chức phụ thuộc vào chiều dày Tính thấm tăng theo cấp số nhân với giảm chiều dày ngà Vật liệu sử dụng để che tủy trường hợp đóng vai trị quan trọng hình thành cầu ngà sửa chữa Che tủy lần thực vào năm 1756 Philip Pfaff Đến năm 1920, calcium hydroxide sử dụng nhanh chóng xem tiêu chuẩn vàng vật liệu che tủy Tuy nhiên, cầu ngà sửa chữa tạo calcium hydroxide có nhiều khiếm khuyết dẫn đến thất bại điều trị Điều dẫn đến đời loạt vật liệu thay thế, bật số vật liệu calcium silicate Phản ứng đông cứng vật liệu calcium silicate tạo thành calcium silicate hydrate calcium hydroxide Từ phóng thích ion canxi Ion canxi tạo thành từ phản ứng đông cứng vật liệu kết hợp với ion phosphate có nước bọt dịch ngà hình thành tinh thể hydroxyapatite Tinh thể hydroxyapatite tăng cường khả trám bít kín xi măng Ion hydroxyl tạo mơi trường kiềm có khả kháng khuẩn Bên cạnh khả tiết ion canxi, vật liệu calcium silicate chứng minh có khả kích thích tăng tiết yếu tố tăng trưởng có vai trị quan trọng hình thành cầu ngà sửa chữa Trong số vật liệu calcium silicate, Mineral Trioxide Aggregate (MTA) chứng minh hiệu ứng dụng che tủy trực tiếp Đây loại vật liệu có hoạt tính sinh học cao khả tạo môi trường lý tưởng cho lành thương Kết che tủy trực tiếp cho thấy MTA kích thích hình thành cầu ngà sửa chữa nhanh hơn, dày đồng so với calcium hydroxide Tuy nhiên, thân MTA tồn số nhược điểm thời gian đơng cứng q lâu (165 phút), khó khăn sử dụng đặc tính học Biodentine™ đời năm 2010 khắc phục số nhược điểm MTA Biodentine™ có thành phần calcium silicate MTA Tuy nhiên, ưu điểm Biodentine™ so với MTA thời gian đông cứng nhanh hơn, tính chất học tốt sử dụng dễ dàng Biodentine™ chứng minh vật liệu tương hợp sinh học tốt tương tự MTA Tuy nhiên, nghiên cứu in vivo so sánh chất lượng cầu ngà hình thành hai vật liệu có kết chưa thống nhất, đặc biệt chiều dày cầu ngà sửa chữa Xuất phát từ vấn đề trên, tiến hành nghiên cứu đánh giá khả tương hợp sinh học vật liệu Biodentine™ mô tủy chuột qua đề tài: " Khả tạo ngà sửa chữa Biodentine: Nghiên cứu in vivo " - Mục tiêu tổng quát: So sánh đáp ứng tủy vật liệu Biodentine™ MTA che tủy trực tiếp - Mục tiêu chuyên biệt: + So sánh chiều dày cầu ngà sửa chữa tạo vật liệu Biodentine™ MTA thời điểm tuần, tuần kỹ thuật mô học + So sánh chiều dày cầu ngà sửa chữa tạo vật liệu Biodentine™ thời điểm tuần tuần kỹ thuật mô học + So sánh chiều dày cầu ngà sửa chữa tạo vật liệu MTA thời điểm tuần tuần kỹ thuật mơ học + So sánh hình thái mật độ ống ngà cầu ngà sửa chữa tạo Biodentine™ ngà nguyên phát thời điểm tuần kính hiển vi điện tử quet CHƢƠNG 1: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 1.1 Đối tƣợng nghiên cứu 1.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu Mười chuột cống đực trưởng thành (chuột Wistar) tuần tuổi Cân nặng 100140 gam Chuột cung cấp khoa Thực Nghiệm, Viện Y Dược Học Dân Tộc Thành phố Hồ Chí Minh 1.1.2 Cỡ mẫu Mỗi chuột sử dụng cối lớn thứ hàm Số là: 20 1.2 Vật liệu nghiên cứu - Biodentine™ (Septodont, Saint­Maur­des­Fosses, Pháp) - Mineral Trioxide Aggregate (ProRootMTA®, Dentsply, Hoa kỳ) 1.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 1.3.1 Các bƣớc tiến hành 1.3.1.1 Các bƣớc tiến hành - Gây mê chuột - Tạo xoang + Xoang sửa soạn với mũi khoan Tungsten carbine ướt đường kính 0.6mm, sau thấm rửa nước nhanh tránh bị nhiệt phá hủy Thao tác thấm rửa cẩn thận, không thấm nhiều nước nguy chuột hít nước vào Đến lộ ánh hồng tủy, thấm rửa nước muối sinh lý lần nữa, lau khô côn giấy, sử dụng trâm Protaper F1 làm lộ tủy vị trí trung tâm xoang (ngay tủy lộ dừng lại, cố gắng đảm bảo điểm lộ tủy răng) Điểm lộ tủy thấm rửa nước muối sinh lý, cầm máu viên gịn vơ khuẩn đến q trình đơng cầm máu tự nhiên diễn + Trộn đặt vật liệu che tủy Răng cối thứ hàm bên phải đặt Biodentine™, cối thứ hàm bên trái đặt MTA + Răng trám sau xi măng glass ionomer tăng cường nhựa Chăm sóc chuột sau thủ thuật: - Thuốc giảm đau (paracetamol) pha vào nước uống ngày đầu - Thức ăn: cơm gạo lức, mầm lúa - Nuôi chuồng (tránh việc chuột bị đau sau thủ thuật cắn nhau) - Giết chuột vào hai thời điểm: tuần, tuần sau thủ thuật 1.3.2 Chuẩn bị mẫu đánh giá 1.3.2.1 Mẫu đánh giá kỹ thuật mô học - Cố định mẫu Xương hàm (bao gồm răng) bóc tách từ chuột cố định dung dịch formaline 10% (ngâm ngập dung dịch) sau lấy Chỉ chọn mẫu miếng trám nguyên vẹn - Khử khoáng - Đúc block parafine - Cắt rang: Mỗi lát cắt có độ dày µm máy HM 325 hãng Thermo Scientific Shandon - Nhuộm Hematoxylin Eosin 1.3.2.2 Mẫu đánh giá kính hiển vi điện tử quét (SEM) - Chuẩn bị mài mẫu + Xương hàm bao gồm sau cố định dung dịch formaline 10% đặt nhựa polyester suốt + Cắt khối nhựa gọn lại máy cắt tốc độ chậm IsoMet hãng Kích thước 1cm×1cm×1cm + Khi vào đến răng, sử dụng giấy nhám nước theo thứ tự 600, 800 để mài dần đến miếng trám (quan sát kính hiển vi nổi) Sau mài đánh bóng giấy nhám nước có độ mịn tăng dần: 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 5000 máy LaboPol-5 hãng - Làm mẫu - Đánh giá mẫu máy HITACHI S-4800 1.3.3 Đánh giá kết 1.3.3.1 Mẫu mô học Chiều dày cầu ngà đo theo nguyên tắc: - Mỗi mẫu đo tiêu bản: tiêu vị trí trung tâm tiêu hai bên cách vị trí trung tâm - Mỗi tiêu đo vị trí: Trung tâm cầu ngà vị trí hai bên thành xoang tiếp nối với cầu ngà - Tính trung bình chiều dày cầu ngà sửa chữa mẫu 1.3.3.2 Mẫu SEM - Mô tả hình dạng (ống ngà trịn hay ống ngà khơng trịn đều) cầu ngà sửa chữa - Mơ tả hướng ống ngà (sự song song hay không song song đường ống ngà) cầu ngà sửa chữa - Mơ tả hình dạng đường ống ngà ngà nguyên phát * Tóm tắt quy trình nghiên cứu Chuột Thực thủ thuật Nuôi chuột tuần tuần Xử lý mô học Xử lý mô học Đọc kết Xử lý thống kê tuần Xử lý SEM CHƢƠNG 2: KẾT QUẢ 2.1 Đánh giá mô học 2.1.1 Đáp ứng viêm tủy hình thành cầu ngà sửa chữa Quan sát mơ học cho thấy khơng cịn tượng viêm diện tủy tất mẫu thời điểm tuần tuần Đây điểm cho tiến triển thuận lợi trình lành thương (Hình 2.1) Tất mẫu diện vùng hoại tử nhỏ phía cầu ngà sửa chữa, nhân tố khởi xướng cho trình lành thương Vùng hoại tử quan sát thấy có khuynh hướng nhỏ lại theo thời gian, cho thấy trình lành thương tiến triển thuận lợi (Hình 2.2) Cầu ngà sửa chữa che phủ hồn tồn mơ tủy lộ liên tục với ngà nguyên phát kế cận tất che tủy trực tiếp vật liệu calcium silicate Cầu ngà liên tục số vùng có chơn vùi tế bào cầu ngà sửa chữa mẫu tuần Tuy nhiên, cầu ngà đồng mẫu tuần (Hình 2.2) Bên cầu ngà sửa chữa có tập trung tế bào Bên cầu ngà sửa chữa quan sát thấy hình ảnh ống ngà (Hình 2.1) Hình ảnh ống ngà quan sát miêu tả rõ mẫu SEM Biodentine™ MTA Hình 2.1 Đáp ứng viêm tủy Khơng cịn tượng viêm bên tủy răng, tế bào diện bên cầu ngà sửa chữa (HE × 400) A Biodentine ™ thời điểm tuần B MTA thời điểm tuần C Biodentine ™ thời điểm tuần D MTA thời điểm tuần CN: cầu ngà sửa chữa TR: tủy Biodentine™ MTA 18 CHƢƠNG 3: BÀN LUẬN 3.1 Đối tƣợng phƣơng pháp nghiên cứu 3.1.1 Chọn chuột đối tƣợng nghiên cứu Vật liệu nha khoa đặt vào gây kích thích mơ xung quanh làm thay đổi vật liệu mơ tiếp xúc Vì vậy, để có tính an tồn sử dụng lâm sàng, địi hỏi phải có đánh giá tính tương hợp sinh học vật liệu Ban đầu, thử nghiệm tính tương hợp sinh sinh học vật liệu tiến hành người Tuy nhiên, biện pháp gặp phải nhiều khó khăn dẫn đến đời biện pháp đánh giá khác thích hợp hơn, dùng ngày [37] Trình tự đánh giá tính tương hợp sinh học vật liệu nha khoa gồm: thử nghiệm cấp I hay thử nghiệm in vitro (đo mức độ gây lên độc tế bào hay phát triển tế bào, chuyển hóa hay chức tế bào, đột biến gen, sinh ung thư…) Thử nghiệm cấp II hay thử nghiệm in vivo động vật (thử nghiệm kích thích niêm mạc, tính mẫn cảm da, da, thử nghiệm cấy ghép…) Thử nghiệm ứng dụng (mơ phổng tình lâm sàng hay thử nghiệm tiền lâm sàng) thực động vật lớn chuột, thỏ, chó, khỉ… Thử nghiệm in vitro thử nghiệm in vivo động vật có nhược điểm mức độ phù hợp với việc ứng dụng lâm sàng nhiều nghi vấn [37] Thử nghiệm ứng dụng thực động vật đối tượng người Ưu điểm loại thử nghiệm tiến trình đánh giá tương hợp sinh học vật liệu nha khoa có phù hợp với tình sử dụng lâm sàng mặt: thời gian, vị trí, mơi trường kỹ thuật thực Tuy nhiên, thử nghiệm có nhược điểm chi phí tốn [37] 19 Trong thử nghiệm ứng dụng, đối tượng nghiên cứu người có ưu điểm bật gần giống với tình lâm sàng Tuy nhiên, vấn đề đạo đức ngăn cản mẫu nghiên cứu vậy, chi phí tốn thời gian nghiên cứu kéo dài Do đó, nghiên cứu thử nghiệm ứng dụng động vật ưu tiên lựa chọn đánh giá tính tương hợp sinh học vật liệu trước thử nghiệm người Trong y văn có nhiều nghiên cứu che tủy trực tiếp thực mô hình động vật khác như: chó [12], lợn [40] chuột [43] [22] Xem xét khía cạnh đạo đức, tốc độ đáp ứng, giá tiền, chuột có nhiều ưu mẫu nghiên cứu thử nghiệm ứng dụng Thêm vào đó, Biodentine™ vật liệu tương đối (ra đời năm 2010) Số lượng nghiên cứu động vật hạn chế, có nghiên cứu thực chuột [43] Hơn nữa, Việt Nam chưa có nghiên cứu thử nghiệm ứng dụng đánh giá tính tương hợp sinh học Biodentine™ Tuy nhiên, sử dụng chuột làm đối tượng nghiên cứu gặp nhiều khó khăn, đặc biệt kích thước nhỏ khó thao tác đòi hỏi tỉ mỉ trợ giúp kính hiển vi Các cửa có dạng điển hình cho động vật gặm nhấm (mọc vĩnh viễn suốt đời, lỗ chóp mở rộng) nên khơng thể so sánh với người Ngược lại, cối chuột, bao gồm hình dáng tủy răng, xem cối thu nhỏ người với đặc điểm tương tự giải phẫu (hình dạng thân chân răng, tủy buồng, tủy chân lỗ chóp thu nhỏ) đặc điểm phát triển mô học, sinh học tương tự cối người [10] Vì cối lớn thứ nằm phía trước lớn cung hàm nên chọn gây lộ tủy 20 Răng cối lớn thứ [10] Hình 3.1 Giải phẫu hàm chuột 3.1.2 Vật liệu nghiên cứu 3.1.2.1 Nhóm chứng MTA gồm hạt ưa nước tốt, đơng cứng có diện môi trường ẩm Sản phẩm hỗn hợp xi măng Portland bismuth oxide Phần bột gồm dicalcium silicate, tricalcium silicate, tricalcium aluminate Bismuth oxide có vai trò chất cản quang Xi măng trộn với nước cất xảy phản ứng đông cứng MTA định lâm sàng vật liệu bít ống tủy, che tủy trực tiếp, sửa chữa lỗ thủng ( thủng sàn, thủng chân răng) kích thích đóng chóp có lỗ chóp mở rộng MTA dùng vật liệu che tủy trực tiếp giúp hình thành cầu ngà sửa chữa nhanh hơn, dày chất lượng so với calcium hydroxide [3] 21 Hiện MTA xem “ chuẩn vàng” cho ứng dụng che tủy trực tiếp Vì vậy, MTA chọn làm nhóm chứng nghiên cứu 3.1.2.2.Vật liệu nghiên cứu Biodentine™ (Septodont, Saint-Maur-Fosses Codex, Pháp) gồm phần bột phần lỏng Bột có thành phần tricalcium silicate, dicalcium silicate, calcium carbonate Trong zirconium oxide có vai trị chất cản quang Thành phần lỏng có chứa calcium cloride chất gia tốc hydrosoluble polymer tác nhân khử nước Zirconium oxide có ưu điểm so với bismuth oxide (chứa MTA) không ảnh hưởng đến khả hydrate hóa xi măng, cải thiện tính đồng hỗn hợp xi măng, tăng đặc tính học vật liệu chất tương hợp sinh học tốt [34] [6] Tác nhân khử nước hydrosoluble polymer giúp giảm độ nhớt xi măng giúp vật liệu sử dụng dễ dàng, ưu điểm Biodentine™ so với MTA Nước cần thiết cho phản ứng đông cứng vật liệu, đồng thời nhân tố ảnh hưởng đến tính chất học xi măng calcium silicate Nước dư thừa hệ thống tạo độ rỗng, làm giảm đáng kể tính chất học vật liệu Nhưng làm giảm hàm lượng nước giảm đồng vật liệu đông cứng Bổ sung tác nhân khử nước hydrosoluble polymer, giúp trì cân hàm lượng nước thấp, cải thiện thao tác sử dụng đồng vật liệu Calcium cloride giúp gia tăng tốc độ hydrate hóa xi măng dẫn đến hình thành nhiều tinh thể calcium silicate hydrate Thời gian đông cứng vật liệu nhanh vật liệu calcium silicate khác Đồng thời, hình thành nhiều calcium silicate hydrate giúp tăng cường độ bền nén giảm độ rỗng xi măng [24] Biodentine™ ban đầu định sử dụng vật liệu trám thay ngà Tuy nhiên sau ứng dụng lâm sàng vật liệu mở rộng che tủy trực tiếp, gián tiếp, sửa chữa lỗ thủng (thủng sàn, thủng chân) chưa đóng 22 chóp nhờ đặc tính sinh học bật : không gây độc tế bào, không gây đột biến [26], khả kháng khuẩn tốt [5],[15] Ngồi ra, độ rỗng thấp, độ hịa tan thấp [15] đặc tính quan trọng giúp vật liệu ổn định lâu dài, trì thành cơng trình điều trị So với vật liệu calcium silicate khác (điển hình MTA) Biodentine™ có đặc tính học trội hơn, thời gian đơng cứng nhanh hơn, dễ sử dụng [15] [28] Một vài nghiên cứu cho thấy Biodentine™ có tính tương hợp sinh học cao [15] [43] Mặc dù định vật liệu che tủy trực tiếp Tuy nhiên, đặc tính sinh học Biodentine™ cần nghiên cứu thêm Do đó, chúng tơi chọn Biodentine™ làm vật liệu nghiên cứu 3.1.2.3.Vật liệu trám sau Xi măng glass ionomer tăng cường nhựa có thành phần bột calcium fluoro-alumino-silicate glass Phần lỏng chứa polyacrylic acid HEMA/Bis GMA Xi măng glass ionomer tăng cường nhựa có tỷ lệ nhựa khoảng 6%, bước đầu đông cứng thông qua phản ứng trùng hợp nhựa nhờ tác nhân kích hoạt ánh sáng, đông cứng bổ sung thông qua phản ứng axit-bazơ Vật liệu đông cứng nhanh giúp bảo vệ MTA khỏi thâm nhập nước bọt vi khuẩn MTA chưa đông cứng Xi măng glass ionomer tăng cường nhựa ảnh hưởng đến q trình đơng cứng MTA mức ảnh hưởng giảm dần theo thời gian [13] Ngoài ra, vật liệu có chất nước, q trình đơng cứng bị ảnh hưởng diện lượng nhỏ nước [11] Chính glass ionomer tăng cường nhựa chọn làm vật liệu trám sau nghiên cứu Mặc dù có đặc tính học tốt chứng minh vật liệu tồn đến tháng phục hồi cối [28] [46] Tuy nhiên, để tạo tính đồng cho nghiên cứu, che tủy Biodentine™ trám sau glass ionomer tăng cường nhựa 23 Trong đó, dùng vật liệu trám sau composite đòi hỏi phải sửa soạn bề mặt mơ Q trình ảnh hưởng đến vật liệu che tủy axit xoi mòn phá hủy cấu trúc vật liệu ngăn chặn phản ứng đông cứng MTA [4] Ngồi ra, bề mặt mơ sau xoi mịn phải khơ hồn tồn nước ảnh hưởng đến trình trùng hợp vật liệu Vì vậy, composite khơng sử dụng trường hợp 3.2.Đánh giá mô học 3.2.1.Đáp ứng viêm tủy hình thành cầu ngà sửa chữa Nghiên cứu thực chuột gây lộ tủy biện pháp học Kết nghiên cứu sau tuần, tuần cho thấy che tủy trực tiếp Biodentine™ MTA khơng cịn tình trạng viêm, cầu ngà sửa chữa hình thành che phủ hồn tồn mơ tủy lộ tất mẫu Kết phù hợp với nghiên cứu trước thực chó, lợn, chuột người chứng tỏ khả tương hợp sinh học tốt vật liệu Biodentine™ Một số nghiên cứu trước cho thấy cầu ngà sửa chữa hình thành khơng che phủ hồn tồn mơ tủy lộ giải thích thực động vật lớn chuột (các động vật lớn nên trình phát triển sinh học diễn chậm hơn) Thêm vào đó, thời gian theo dõi nghiên cứu ngắn Chính vậy, cầu ngà sửa chữa khơng hình thành đầy đủ tất mẫu nghiên cứu Trong kết nghiên cứu chúng tôi, tất mẫu có diện lớp tủy bề mặt hoại tử kế cận cầu ngà sửa chữa có kích thước giảm dần theo thời gian Lớp hoại tử cho vật liệu phóng thích ion hydroxyl q trình đơng cứng tạo mơi trường kiềm (pH ≈12) Hiện tượng đồng thời nhân tố kích thích sửa chữa mơ Mặc dù tạo mơi trường kiềm cao, nhiên, điều kiện in vivo độ kiềm cao trung hịa dịch lỏng mô thể không gây ảnh hưởng đáng kể khả tồn tế bào Điều chứng minh nghiên cứu trước đây, mơ tủy có tượng viêm hoại tử sau 24 tuần tượng giảm dần đến tuần thứ hai lớp hoại tử bề mặt, bên tủy lành mạnh Khi mô tủy tiếp xúc trực tiếp với vật liệu, bề mặt mô tủy bị rối loạn Vùng bề mặt gọi vùng tắc nghẽn Vùng bao gồm mảnh vụn ngà, cục máu đông, phần vật liệu che tủy…Vùng tắc nghẽn môi trường kiềm vật liệu kết hợp với áp lực đặt vật liệu tác động lên mô tủy Sự liên kết tác động tiếp tục diễn ra, mô tủy với protein huyết tương đáp ứng lại với kích thích Kết hình thành vùng đông máu hoại tử Giữa mức sâu vùng đông máu hoại tử mô tủy sống bên có đường phân giới phát triển Trong vịng vài ngày, q trình sửa chữa thuận lợi, bên đường phân giới này, biệt hóa tế bào xảy hình thành mơ khống hóa Trong thời gian sâu hay chấn thương nhẹ, yếu tố tăng trưởng giải phóng q trình axit hịa tan ngà răng, dẫn đến kích thích hoạt động nguyên bào ngà tiết ngà phản ứng Sâu nghiêm trọng thường dẫn đến tổn thương nguyên bào ngà ngà tiếp tục bị hịa tan dẫn đến giải phóng nhiều yếu tố tăng trưởng để đáp ứng hình thành ngà sửa chữa Biodentine™ chứng minh có khả kích thích tế bào tủy tăng tiết yếu tố tăng trưởng Transforming growth factor–β1 (TGF-β1) [25] TGF-β1 yếu tố tăng trưởng thuộc họ protein liên quan đến cấu trúc, có liên hệ với biệt hóa ngun bào ngà tiết khn ngà Biodentine™ có khả kích thích tế bào tủy tăng tiết Dentine sialoprotein Osteopontin Dentine sialoprotein có nguồn gốc từ Dentin sialophosphoprotein Dentin sialophosphoprotein chất đánh dấu quan trọng biệt hóa nguyên bào ngà Protein diện nguyên bào ngà trưởng thành trước bắt đầu qúa trình khống hóa Dentine sialoprotein xác nhận khởi đầu trình hình thành ngà Trong Osteopontin protein diện nguyên bào ngà ngà 25 Sự hình thành cầu ngà sửa chữa nghiên cứu xem đáp ứng tích cực dấu hiệu lành thương tốt Các tế bào hình trụ, nhân phân cực diện bên cầu ngà sửa chữa Chúng quan sát tế bào qua tiêu mơ học nhuộm HE,vẫn cịn thiếu chứng miễn dich học… Tuy nhiên, kết hợp với kết công bố nhiều nghiên cứu trước đây, cho tế bào tế bào giống nguyên bào ngà Nguyên bào ngà tế bào biệt hóa sau cùng, chúng khơng thể tạo cách phân chia từ nguyên bào ngà lân cận Khi tủy lộ nguyên bào ngà nguyên phát chết, chúng thay tế bào giống nguyên bào ngà Các tế bào giống ngun bào ngà có khả tiết khn ngà, hình thành cầu ngà sửa chữa Đặc điểm đồng thời thấy nghiên cứu trước Khả hình thành cầu ngà sửa chữa tốt Biodentine™ phần vật liệu kích thích tăng sinh tế bào cao nhiều so với calcium hydroxide Mật độ tế bào tỉ lệ thuận với gia tăng chiều dày cầu ngà sửa chữa Kết che tủy đạt kết hợp yếu tố tác động bao gồm tình trạng ban đầu tủy, khơng cịn diện vi sinh vật, tính chất vật liệu, thực nghiêm ngặt bước kỹ thuật Nghiên cứu thực khỏe mạnh môi trường làm trước gây lộ tủy biện pháp học Trong tình lâm sàng, lộ tủy gây chấn thương sâu răng, mô tủy bị vi khuẩn xâm nhập, gây phản ứng viêm mạnh gây khó khăn cho việc hình thành cầu ngà sửa chữa trì tồn lâu dài cầu ngà Đây điều hạn chế nghiên cứu Do đó, cần thiết có nghiên cứu lâm sàng đánh giá đáp ứng tủy Biodentine™ trường hợp lộ tủy chấn thương sâu Tuy nhiên, thực mơi trường lành mạnh loại bỏ yếu tố gây nhiễu Đáp ứng tủy tác động vật liệu nghiên cứu Đồng thời, vi khuẩn xâm nhập vào tủy qua bờ xoang trám Trong nghiên cứu chúng tơi, phản ứng viêm khơng cịn quan sát thấy hai thời điểm tất 26 mẫu, chứng tỏ đặc tính khơng gây độc tế bào khả trám bít kín hợp với ion phosphate có nước bọt dịch ngà Những tinh thể hydroxyapatite diện bề mặt vật liệu tạo thành mối liên kết chắn vật liệu với ngà Độ kiềm cao Biodentine™ (pH≈12) gây hịa tan mơ hữu ống ngà Hơn nữa, cấu trúc vi thể kích thước nhỏ gel hình thành sau trộn Biodentine™ cho phép vật liệu lan tốt lên bề mặt ngà bị hịa tan Điều cho phép Biodentine™ bám dính tốt với ngà răng, tạo miếng trám bít kín ổn định, ngăn chặn vi khuẩn hiệu Thất bại điều trị che tủy trực tiếp mức độ hịa tan cao vật liệu Sự ổn định vật liệu calcium silicate q trình hydrate hóa diễn ra, calcium silicate hydrate (CSH) liên kết với tạo thành mạng lưới cấu trúc calcium hydroxide hình thành len vào khoảng trống cấu trúc CSH Nói cách khác, calcium hydroxide hạt nhân mạng cấu trúc CSH Mạng thiết lập vài phút sau trộn vật liệu tăng dần sức mạnh liên kết CSH trình ngậm nước tiếp diễn CSH hình thành nhiều Kết nghiên cứu cho thấy chiều dày cầu ngà sửa chữa tạo Biodentine™ MTA khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p>0.05) thời điểm so sánh (4 tuần tuần) Kết phù hợp với nghiên cứu tác giả Nowicka cộng Sự khác biệt so với kết nghiên cứu tác giả Andiara De Rossi cộng nghiên cứu tác giả Andiara De Rossi thực điều trị tủy buồng So với che tủy trực tiếp, điều trị tủy buồng khó thực nên nguy có khơng đồng thực đặt vật liệu cao Lý tưởng nhất, vật liệu che tủy nên đặt nhẹ nhàng lên bề mặt tủy lộ Nếu vật liệu vào sâu mô tủy gây phản ứng ức chế hình thành cầu ngà sửa chữa ức chế trình lành thương Trong nghiên cứu chúng tơi, q trình thủ thuật thực 27 bác sĩ có kinh nghiệm nghiên cứu chuột nên tạo đồng tạo xoang đặt vật liệu 3.2.2.Chiều dày cầu ngà sửa chữa gia tăng theo thời gian Kết thu cho thấy chiều dày cầu ngà sửa chữa tạo Biodentine™ MTA thời điểm tuần lớn chiều dày cầu ngà sửa chữa thời điểm tuần có ý nghĩa thống kê (p=0.034) Như trình bày, calcium hydroxide trước xem tiêu chuẩn vàng vật liệu che tủy trực tiếp Tuy nhiên, calcium hydroxide tạo cầu ngà có nhiều khiếm khuyết, mức độ hịa tan cao, bám dính với ngà răng, khơng có khả trám bít kín lâu dài chống lại vi kẽ Do đó, dẫn đến thất bại điều trị lâu dài Nếu vi khuẩn diện bên xoang trám gây hoại tử tủy, phá hủy cầu ngà sửa chữa Vật liệu che tủy bị hòa tan nhiều dẫn đến xuất khiếm khuyết Từ khiếm khuyết vi khuẩn xâm nhập gây thất bại trường hợp calcium hydroxide Vật liệu calcium silicate, trình bày, có khả tạo mối liên kết chặt chẽ với ngà răng, ngăn chặn hiệu xâm nhập vi khuẩn Trong nghiên cứu Fridland cộng cho thấy khả hòa tan thấp MTA thời gian 78 ngày Điều giải thích cho trì thành cơng lâu dài MTA sử dụng che tủy trực tiếp Nhiều giả thiết cho calcium hydroxide tạo từ MTA kéo dài ổn định qua thời gian Ion canxi phân ly từ calcium hydroxide đóng vai trị quan trọng q trình khống hóa Chúng kích thích tăng sinh tế bào tủy người kích thích biệt hóa tế bào thành nguyên bào ngà hình thành ngà rang Điều dẫn đến chiều dày cầu ngà sửa chữa gia tăng theo thời gian nghiên cứu Thêm vào đó, MTA chứng minh thử nghiệm ứng dụng khả trì thành cơng lâu dài 28 Trong nghiên cứu ngắn hạn, Biodentine™ có mức hịa tan khả trám bít kín tốt tương tự MTA Số lượng ion canxi tiết vật liệu Biodentine™ chí cịn vượt trội so với MTA Vì lý này, chúng tơi cho Biodentine™ có khả tiết ion canxi ổn định thời gian dài tương tự MTA nên cầu ngà sửa chữa thời điểm tuần dày so với thời điểm tuần 3.2.3.Đánh giá kính hiển vi điện tử quét (SEM) Các ống ngà thành phần ống ngà tạo nên ngà sống khả đáp ứng ngà với kích thích khác Do đó, ống ngà có vai trị quan trọng phân tích phản ứng ngà thủ thuật lâm sàng Tại vùng tủy lộ, mức độ chấn thương trình hình thành cầu ngà ảnh hưởng đến cấu trúc khuôn ngà tiết Khái niệm cầu ngà chưa thống diện khơng hoàn hảo nhiều cầu ngà [8] Những khiếm khuyết cầu ngà, liên quan đến nhiều cấu trúc rỗng cho phép vi sinh vật di chuyển qua ngà vào mơ tủy Bản chất mơ khống hóa tạo thành vật liệu calcium silicate công nhận cầu ngà sửa chữa nghiên cứu trước Tuy nhiên, nghiên cứu có đặc điểm chung tiến hành đánh giá cầu ngà sửa chữa tiêu mơ học khử khống Cho đến nay, giới chưa có nghiên cứu khảo sát hình thái cầu ngà sửa chữa chưa khử khoáng tạo vật liệu calcium silicate kính hiển vi điện tử quét (SEM) Trong điều kiện giới hạn nghiên cứu, chúng tơi khảo sát kính hiển vi điện tử quét (SEM) cầu ngà sửa chữa hình thành nhóm vật liệu Biodentine™ Kết đánh giá SEM cho thấy cầu ngà sửa chữa hình thành che phủ mô tủy lộ mẫu mô học nhuộm HE trình bày Cầu ngà sửa chữa quan sát SEM có mật độ ống ngà so với ngà nguyên phát Ống ngà 29 cầu ngà sửa chữa có hình dạng khơng đường khơng song song ngà nguyên phát Kết mẫu SEM khơng có liệu thống kê số lượng mẫu nhỏ Trong trình chuẩn bị mẫu tiến hành đánh giá gặp nghiều khó khăn Vì vậy, kết nghiên cứu ghi nhận nhóm Biodentine™ Do Biodentine™ MTA có thành phần calcium silicate Hai vật liệu có chế tác động nên chúng tơi giả thuyết hình thái cầu ngà sửa chữa tạo vật liệu MTA tương tự Biodentine™ Vi khuẩn độc tố vi khuẩn gây đáp ứng tủy chúng khuếch tán qua ngà vào tủy Do đó, tính thấm ngà nhân tố quan trọng đánh giá chất lượng cầu ngà sửa chữa Nó xem yếu tố định phản ứng tủy [44] Bên cạnh chiều dày, mật độ ống ngà đóng vai trị quan trọng ảnh hưởng đến tính thấm ngà rang Cầu ngà sửa chữa hình thành Biodentine™ có số lượng ống ngà nhiều so với ngà nguyên phát kế cận Điều giúp đặc tính “hàng rào che chở” cầu sửa chữa phát huy tác dụng thuận lợi bảo vệ sống tủy răng, hạn chế lưu thơng tác nhân kích thích qua ngà vào tủy Khi quan sát SEM, ống ngà cầu ngà sửa chữa chạy theo hướng khác nhau, không song song ống ngà ngà nguyên phát Đường kính ống ngà khơng đồng ngà nguyên phát Điều ngà sửa chữa, trình bày, lắng đọng vài vùng cụ thể để đáp ứng với chấn thương Tốc độ lắng đọng phụ thuộc vào mức độ chấn thương Chấn thương nặng tốc độ lắng đọng ngà nhanh Trong nghiên cứu chúng tôi, gây lộ tủy, địi hỏi lắng đọng nhanh chóng để hình thành rào cản che chở mơ tủy lộ Do lắng đọng nhanh chóng này, tế bào thường bị mắc kẹt khuôn ngà thành lập dẫn đến ống ngà bị lệch, xếp không theo quy luật 3.3.Ý nghĩa đề tài 30 Vật liệu nha khoa mơ thể có tác động qua lại với Vì lý này, tính tương hợp sinh học loại vật liệu phải đánh giá trước sử dụng lâm sàng Thử nghiệm ứng dụng biện pháp đánh giá tương hợp sinh học vật liệu gần tình lâm sàng so với thử nghiệm khác Trong suốt vịng đời răng, tủy sống góp phần vào việc sản xuất ngà thứ phát đáp ứng kích thích, trì tồn lâu dài Do đó, thành cơng che tủy phụ thuộc vào bảo tồn tủy sống hình thành cầu ngà Nghiên cứu cho thấy Biodentine™ có khả hình thành cầu ngà sửa chữa che phủ mô tủy lộ tương tự MTA Chiều dày cầu ngà sửa chữa tiếp tục tăng lên theo thời gian giúp gia tăng khoảng cách tủy tác nhân kích thích Cầu ngà sửa chữa có mật độ ống ngà so với ngà nguyên phát giúp giảm tính thấm, giảm xâm nhập độc tố qua ngà vào tủy Do đó, cầu ngà sửa chữa bảo vệ mơ tủy hiệu quả, trì thành cơng cho q trình điều trị Như kết nghiên cứu cung cấp chứng khoa học chứng tỏ tính hiệu Biodentine™ sử dụng che tủy trực tiếp 31 KẾT LUẬN Kết nghiên cứu đánh giá cầu ngà sửa chữa thời điểm tuần tuần mẫu nghiên cứu khử khoáng (nhuộm HE) tuần mẫu khơng khử khống (quan sát SEM) đưa số kết luận sau: - Sau tuần tuần, nhóm vật liệu Biodentine™ MTA có hình thành cầu ngà sữa chữa liên tục với ngà nguyên phát Cầu ngà ngà che phủ hồn tồn bảo vệ mơ tủy lành mạnh bên - Chiều dày cầu ngà sửa chữa tạo Biodentine™ tương tự MTA thời điểm tuần tuần quan sát mô học - Chiều dày cầu ngà sửa chữa tạo Biodentine™ thời điểm tuần lớn thời điểm tuần quan sát mô học - Chiều dày cầu ngà sửa chữa tạo MTA thời điểm tuần lớn thời điểm tuần quan sát mô học - Cầu ngà sửa chữa tạo vật liệu Biodentine™ quan sát kính hiển vi điện tử qt (SEM) có mật độ ống ngà so với ngà ngun phát (khơng có số liệu thống kê số lượng mẫu ít) Ống ngà có hình dạng khơng đường khơng song song ngà nguyên phát Từ kết nghiên cứu thu được, chúng tơi kết luận Biodentine™ vật liệu che tủy trực tiếp hiệu tương tự MTA Cầu ngà sửa chữa tạo Biodentine™ có cấu trúc thuận lợi cho việc bảo vệ mô tủy lộ bên ... từ vấn đề trên, tiến hành nghiên cứu đánh giá khả tương hợp sinh học vật liệu Biodentine? ?? mô tủy chuột qua đề tài: " Khả tạo ngà sửa chữa Biodentine: Nghiên cứu in vivo " - Mục tiêu tổng quát:... Chiều dày cầu ngà sửa chữa tạo Biodentine? ?? MTA thời điểm tuần 13 2.1.2.2 Chiều dày cầu ngà sửa chữa gia tăng theo thời gian - Nhóm Biodentine? ?? Chiều dày cầu ngà sửa chữa tạo Biodentine? ?? thời điểm... cầu ngà sửa chữa 2.1.2.1 Chiều dày cầu ngà sửa chữa hình thành tƣơng tự hai nhóm Biodentine? ?? MTA - Chiều dày cầu ngà sửa chữa thời điểm tuần: Chiều dày cầu ngà sửa chữa thời điểm tuần tạo Biodentine? ??