Ứng dụng IGG trong nghiên cứu đặc tính lectin và phân loại tụ cầu khuẩn

TAP CHÍ KHOA H Ọ C ĐHQGHN, KHTN & CN T.xx, số 2PT-, 2004 Ú N G D Ụ N G IG G T R O N G N G H IÊ N c ứ u Đ Ặ C T ÍN H L E C T IN VÀ PH Â N L O Ạ I T Ụ C Ẩ U K H U Ẩ N B ùi Phương T huận K hoa S in h học, Trường Đại học Khoa học T ự nhiên, Đ HQ GHN Mở đầu Một n h ữ ng ứng dụng thực tế láp globulin m iễn dịch IgG để tách nghiên cứu đặc tín h hợp chất sinh học glycoprotein, đặc biệt lectin Nhờ vào k gây ngưng k ết k ết tủ a chọn lọc, lectin sử dụng nhiều nghiên cứu tế bào miễn dịch, để xác dịnh nhóm m áu [2,4,5] N hững k ết nghiên cứu trước cho thấy IgG có tương tác với lectin từ sam biên sô lectin thực vật Trong nghiên cứu này, xem xét ảnh hưởng IgG lên phản ứng gây ngưng kết tế bào vi khuẩn lectin, nhằm mở rộng khả năn g ứng dụng IgG lectin thực tế Chi tụ cầu kh u ẩn (Staphylococcus) bao gồm nhiều tác n h ân gây bệnh cho ngưòi động vật Thưòng chúng chia làm hai loại dựa k h ả năn g làm đông huyết tương (phán ứng coagulase): loại dương tính, chủ yếu Staph, aureus (tụ cầu vàng) gây bệnh nhiều nhất, cịn loại ám tính lồi tụ cầu trắn g (trong có Staph, negative coagulase (SNC) Staph epiderm idỉs) gây tác hại Tuy nhiên, cách phân chia khơng xác có gáy nhẩm lẫn Do vậy, việc tìm phương thức nhận biết nhanh, nhạy khác biệt hai lồi tụ cầu để phân loại chúng có ý nghĩa lớn thực tế N g u y ê n liệ u v p h n g p h p N guyên liêu: -Dịch chiết lectin thô chuẩn bị từ m ẫu thực v ật (hoa, quả, hạt) dung dịch đệm PBS [2] Staphylococcus nuôi cấy, xử lý, tạo huyền dịch điều chỉnh đến độ đục thích hợp ỏ bước sóng 540 nm máy đo quang phổ - Chê phẩm LgG huyết tương (tách từ m áu người bình thưịng T rung tâm huyết học truyền m áu T rung ương cung cấp) P hư ơng p h p n g h iên u ■ Xác định k h ả năn g gây ngưng kết t ế bào vi kh u ẩn lectin [1]: - Sử dụng kỹ th u ậ t ELISA [3] để nghiên cứu tương tác IgG với lectin vi khuẩn -Cácchủngvi khuẩn (doViệnVệsinhdịchtễTrungươngcungcấp) K ế t q u ả , t h ả o lu ậ n 1T ác d ụ n g củ a IgG lên p h ả n ứng g â y n gư ng k ế t t ế bào vi k h u ẩ n c ủ a lectin a- Hoạt tính gãy ngưng kết t ế bào vi khuẩn lectin Một sô lectin biểu khả năn g gây ngưng k ết không trê n t ế bào hồng cầu, mà trê n t ế bào vi k h u ẩn Đặc tính có ứng dụng rấ t qu an trọng nghiên cứu miễn dịch định loại vi sinh v ật [1,6] Chúng sử dụng vi k h u ẩn có ý nghía m ặt dịch tễ qu an tâm sáu chủng tụ cầu vàng Staph, aureus (S au) 4, 15, 16, 17, 25923 29213,; bốn chủng tụ cầu trắ n g SNC 20 19, Staph, epiderm is (s ep) 21, Staph, xylusus (S xy) để nghiên cứu tương tác lectin - vi k h u ẩ n (kết hàn g trê n bảng 1) tác dụng IgG lên tương tác (kết ngoặc đơn hàng bảng 1) 173 Bùi Phuơng Thuận 174 Các số liệu thu cho thấy có khác biệt m ẫu biếu hoạt tính lectin Các m ẫu từ đậu ván, đậu dải, đậu trạch lai, h t hoè, hoa kim cúc, củ lay ơn đểu tác dụng lẽn vi khuẩn (với số chủng bị ngưng k ết tơi đa 10%) có khả năn g gây ngưng kết hồng cầu m ạnh Ngược lại, m ẫu từ h t móng bị đỏ, h t gội tía củ m ã thầy (có hoạt tính gây ngưng k ết hồng cầu rấ t thấp) lại tác dụng lẽn h ầu h ết (từ 80- 100%) sô chủng tụ cầu thử nghiệm Một sô lectin có tác dụng liên k ết chọn lọc với tụ cầu vàng, điển hình )à lectin từ h ạt dậu ván (với chủng s au 17), h t đậu ngự (với mức độ ngưng k ế t khác b iệt rõ rệ t giảm dần chủng đầu: từ (3+) với s au đến (+) với s au 25923), h t n h ã n Ngược lại, số lectin khác l i gây ngưng k ết r ấ t đặc hiệu chủng tụ cầu tráng, ví d ụ nh lectin từ hoa, đặc biệt rõ chê phẩm lectin vô hoè với mức độ ngưng k ết giảm dần từ (4+) với s.ep 21 xuống (2+) với S N C 19 (+) với s.xy , hay nh lectin h t hoè có tác dụng phân loại đặc hiệu hẹp gây ngưng k ế t tối đa (4+) n h ấ t chủng s.x y Do vậy, có th ể sử dụng nhũng lectin dể phân biệt h lồi tụ cầu, th ậm chí chủng loài B ả n g Tác dụng IgG lên hoạt độ gây ngưng k ết t ế bào tụ cầu lectin Tu cầu vàng Tu cầu trắng Lectin (OD)90nmtrong s.au S.au15 s.au s.au 17 s.au s au SNC19 SNC 20 s.ep s.xy ELISAvới IgG) 16 29213 25923 21 + + + Hat dánh dành (0,039) (-) (-) (•) (*) (+) (-) (*) (-> (’) (+) Hat đâu vàn 2+ (0.044)