VNU Journal of Science: Natural Sciences and Technology, Vol 35, No (2019) 29-36 Original Article All Trans Retinoic Acid Regulates Expression of Genes Invoved in Cell Senescence Pathway in Gastric Cancer Cell Line MKN45 Luu Thi Binh1, Le Thi Thanh Huong2, Nguyen Trung Thanh3, Nguyen Phu Hung2, Thai Nguyen University of Medicine and Pharmacy, Thai Nguyen University, Tan Thinh, Thai Nguyen, Vietnam Thai Nguyen University of Sciences, Thai Nguyen University, Tan Thinh, Thai Nguyen, Vietnam Faculty of Biology, VNU University of Science, 334 Nguyen Trai, Hanoi, Vietnam Received 22 May 2019 Revised 22 September 2019; Accepted 23 October 2019 Abstract: Cellular senescence is a state in wich cells can not longer divide The dysregulation of the cell senescence signaling pathway could lead to uncontrolled cell proliferation and formation of malignant cells Intervening in cell senessence signaling pathway to bring cancer cells back to cell senessence state is a potential way in cancertreatment Recent studies show that tumor cells can undergo celluar senessencestate by using special chemotherapy In this study, we indicatedthat All trans retinoic acid (ATRA) is able to influence the expression of genes involved in cell senessence signaling pathway in gastric cancer cells MKN45 ATRA down-regulatesthe expression of important genes controlling cell growth On the other hand, ATRA up-regulate the expression of GADD45A, P21 and P53 genes that play an important role in the signaling pathway of cells.This finding suggestes that ATRA could inhibite MKN45 cells through activating cell senescence signaling pathway Keywords: All trans retinoic acid, gastric cancer stem cell, cell senescence Corresponding author Email address: hungnguyenphu@tnus.edu.vn https://doi.org/10.25073/2588-1140/vnunst.4907 29 VNU Journal of Science: Natural Sciences and Technology, Vol 35, No (2019) 29-36 All trans retinoic acid điều hịa biểu gene đường tín hiệu lão hố tế bào dịng tế bào ung thư dày MKN45 Lưu Thị Bình1, Lê Thị Thanh Hương2, Nguyễn Trung Thành3, Nguyễn Phú Hùng2, Trường Đại học Y-Dược, Đại học Thái Nguyên, Tân Thịnh, Thái Nguyên, Việt Nam Trường Đại học Khoa học, Đại học Thái Nguyên, Tân Thịnh, Thái Nguyên, Việt Nam Khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQGHN, 334 Nguyễn Trãi, Hà Nội, Việt Nam Nhận ngày 22 tháng năm 2019 Chỉnh sửa ngày 22 tháng năm 2019; Chấp nhận đăng ngày 23 tháng 10 năm 2019 Tóm tắt: Lão hố tế bào trạng thái tế bào khơng cịn khả tiếp tục phân chia Sự rối loạn điều hịa đường tín hiệu lão hóa dẫn tới tế bào kiểm sốt phân chia hình thành lên tế bào ác tính Việc can thiệp vào đường tín hiệu nhằm đưa tế bào ung thư trở lại lão hóa hướng tiếp cận tiềm điều trị ung thư Các nghiên cứu gần rằng, tế bào khối u trải qua đường lão hố nhờ sử dụng hố chất thơng qua liệu pháp hoá trị Trong nghiên cứu rằng, All trans retinoic acid (ATRA) có khả tác động lên biểu gene liên quan tới lão hoá tế bào tế bào ung thư dày MKN45 Đáng ý, ATRA điều hoà giảm mạnh gene quan trọng kiểm soát tăng trưởng tế bào Mặt khác, ATRA điều hoà tăng biểu gene GADD45A, P21 P53 có vai trị quan trọng đường tín hiệu lão hố tế bào Kết ATRA ức chế tế bào ung thư dày thông qua việc hoạt hóa đường tín hiệu lão hóa tế bào Từ khóa: All trans retinoic acid, tế bào gốc ung thư dày, lão hoá tế bào chu kỳ nhân đơi DNA Bên cạnh đó, rối loạn chức ty thể, tổn thương DNA nhân tố ngoại sinh gây lão hóa tế bào [2] Đặc trưng lão hóa tế bào sinh trưởng ổn định kèm với thay đổi mặt kiểu tái cấu trúc sợi nhiễm sắc, tái thiết lập chương trình trao đổi chất, tăng cường tự thực bào [3] Ở khối u, lão hóa tế bào Mở đầu Sự lão hóa tế bào mô tả lần vào năm 1961 nuôi cấy nguyên bào sợi người Hayflick Moorhead (Hayflick and Moorhead, 1961) Theo đó, lão hóa tế bào định nghĩa trạng thái tế bào khơng cịn khả tiếp tục phân chia ngắn đoạn telomere đầu mút nhiễm sắc thể sau Tác giả liên hệ Địa email: hungnguyenphu@tnus.edu.vn https://doi.org/10.25073/2588-1140/vnunst.4907 30 L.T Binh et al / VNU Journal of Science: Natural Sciences and Technology, Vol 35, No (2019) 29-36 quan sát trạng thái tiền ác tính, nhiên tế bào ác tính lại khơng có tượng bị lão hóa, minh chứng mạnh mẽ cho thấy rối loạn lão hóa tế bào đóng vai trị quan trọng trình phát sinh khối u [4] ATRA dẫn xuất vitamin A thuộc họ retinoid, sử dụng loại thuốc chống ung thư liệu pháp hóa học ATRA ức chế phát triển khối u thông qua khả dừng chu kỳ tế bào, gây biệt hóa cảm ứng trình apoptosis tế bào khối u [5] Heo cộng rằng, ATRA cảm ứng trình chết theo chương trình (apoptosis) tế bào ung thư gan cách hoạt hóa biểu p14 đường tín hiệu p53 [6] Bên cạnh đó, việc can thiệp vào đường tín hiệu Rb để cải thiện hiệu xử lí tế bào ung thư phát triển liệu pháp hướng ý [7] Trong nghiên cứu trước, ATRA gây biệt hóa tế bào ung thư dày mơ hình ni cấy in vitro mơ hình chuột [8] Đồng thời chúng tơi xác định ATRA điều hịa biểu gene tham gia vào trình apoptosis theo hướng tăng cường biểu gene thúc đẩy apoptosis giảm biểu gene ức chế apoptosis [9] Tuy nhiên,hiện chưa có nghiên cứu đánh giá tác động ATRA lên đường tín hiệu phân tử lão hóa tế bào ung thư dày Chính vậy, nghiên cứu này, chúng tơi tiến hành phân tích ảnh hưởng ATRA lên biểu gene liên quan tới lão hoá tế bào, bao gồm gene kiểm sốt q trình phân bào, yếu tố phiên mã, cyclin số proto-oncogene dòng tế bào ung thư dày MKN45 31 Pháp Bordeaux Quy trình ni cấy tiến hành theo nghiên cứu trước [8] Ni cấy tế bào ung thư dày MKN45 với mật độ 2000 tế bào/giếng nuôi cấy diện tích 3,8 cm2 bề mặt khơng bám dính để hình thành nên tumorsphere (một khối tế bào ung thư hình cầu) mơi trường DMEMF12/Glutamax (từ Invitrogen) có bổ sung 1% ampinicllin/streptomycin, yếu tố tăng trưởng biểu mô EGF 20 ng/ml, yếu tố tăng trưởng thượng bì FGF 20 ng/ml, glucose 0,3%, insulin µg/ml 370C, 5% CO2 Sau ngày q trình ni cấy, loại bỏ ml môi trường nuôi cấy cũ, đồng thời bổ sung ml môi trường nuôi cấy Sau ngày nuôi cấy, tế bào xử lí với ATRA nồng độ µM (đây nồng độ ức chế tăng sinh tế bào lựa chọn từ sàng lọc dải nồng độ từ - 10 µM trước tiến hành nghiên cứu này) 48 Mẫu đối chứng xử lí DMSO nồng độ 0,01% thời gian tương ứng với mẫu xử lý với ATRA Thu nhận phân tách tumorsphere thành tế bào đơn enzyme trypsine nồng độ 0,05% trước tách chiết RNA tổng số (tất hoá chất cung cấp Sigma, Saint-Quentin Fallavier, France) 2.2 Tách chiết RNA tổng số tổng hợp cDNA RNA tổng số tách chiết phương pháp Trizol theo hướng dẫn nhà sản xuất (Invitrogen, Cergy-Pontoise, France) Nồng độ chất lượng RNA đánh giá máy đo quang phổ NanoDrop bước sóng hấp thụ 260 nm µg RNA sử dụng để thực phản ứng tạo cDNA Quantitect Reverse Transcriptase (RT) kit (cung cấp Qiagen, Hilden, Germany) theo hướng dẫn nhà sản xuất Đối tượng phương pháp nghiên cứu 2.3 Phân tích biểu gene Realtime PCR 2.1 Nuôi cấy tế bào 3D xử lý tế bào với ATRA Phân tích Real-time PCR sử dụng 20 ng cDNA cho phản ứng với tổng thể tích 20µl, chất phát huỳnh quang SYBR Green qPCR Invitrogen cung cấp mơ tả Dịng tế bào ung thư dày MKN45 cung cấp Phịng thí nghiệm Inserm U1053 Viện Sức khỏe Nghiên cứu Y học Quốc gia 32 L.T Binh et al / VNU Journal of Science: Natural Sciences and Technology, Vol 35, No (2019) 29-36 nghiên cứu trước [8] Danh sách gene nghiên cứu với mã số cặp mồi tương ứng cung cấp Qiagen trình bày bảng 1, HPRT1 gene tham chiếu (reference gene) Sự thay đổi mức độ biểu gene tính theo phương pháp Delta delta ct (ΔΔCt) [10] Kết trình bày dạng giá trị trung bình lần lặp lại thí nghiệm với độ lệch chuẩn SD, cỡ mẫu cho lần thí nghiệm n=3 Dữ liệu thống kê phân tích phần mềm SPSS16.0F, sử dụng kiểm định Mann-Whitney 2.4 Phân tích biểu P21 phương pháp miễn dịch huỳnh quang Phân tích biểu P21 phương pháp miễn dịch huỳnh quang tóm tắt theo bước sau: Các tumorsphere cố định parafomaldehyde sau rửa lần đệm PBS Tiếp theo nhuộm tiêu với kháng thể thứ kháng thể đơn dòng (IgG) thỏ kháng lại p21 người (Abcam cung cấp) tỷ lệ 1/100 30 phút nhiệt độ phòng, rửa tiêu PBS lần Tiếp theo, nhuộm với kháng thể gắn AlexaFluor®488 (Abcam cung cấp) kháng lại kháng thể thứ 15 phút 4°C Sau đó, tế bào rửa lần đệm PBS, nhuộm với Phalodin 647, tỷ lệ 1/1000 thời gian 30 phút Rửa tế bào lần PBS 1X, lần thứ đệm rửa PBS chứa dung dịch nhuộm nhân tế bào DAPI (Sigma cung cấp) Tế bào quan sát chụp ảnh hệ thống kính hiển vi huỳnh quang Nikon Eclipse Ti2 Kết thảo luận 3.1 ATRA điều hồ giảm phiên mã gene kiểm sốt phân chia tăng trưởng tế bào đường tín hiệu lão hóa Lão hóa tế bào q trình phức tạp, có tham gia nhiều gen khác có nhóm gen liên quan tới dừng chu kì phân chia, làm ngừng gia tăng số lượng tế bào Để đánh giá ảnh hưởng ATRA lên chu kì tế bào, nghiên cứu này, 18 gene khác liên quan đến kiểm sốt chu kì tế bào phân tích Kết hình cho thấy, việc sử dụng ATRA làm giảm biểu gene kiểm soát tăng trưởng tế bào bao gồm gene thuộc họ cyclin (CCND1, CCNE1), CDKs (CDK2, CDK4, CDK6), protein kinase kiểm sốt vị trí chuyển pha chu kì tế bào (CHEK1, CHEK2) yếu tố phiên mã (E2F1, E2F3, ETS1, ETS2, RB1, RBL2, MDM2) Trong đó, gene mã hóa cho cyclin điều hòa giảm mức độ phiên mã từ đến lần so với mẫu đối chứng Tương tự vậy, mức độ biểu gene mã hóa cho protein điểm kiểm sốt chu kì tế bào gồm CHEK1 CHEK2 giảm từ 2,5 đến lần so với mẫu đối chứng (Hình 1) Các nghiên cứu trước rằng, ức chế biểu cyclin D1 thuốc kháng ung thư làm tăng tự thực bào tế bào biểu mô tuyến vú người thúc đẩy trạng thái lão hố tế bào [11] Bên cạnh đó, điều hịa giảm biểu kinase phụ thuộc cyclin điển CDK2, CDK4 CDK6 dẫn tới ức chế q trình phosphorin hóa RB RB khơng phosphorin hóa tương tác chặt chẽ với yếu tố phiên mã E2F dẫn tới ức chế trình phiên mã gene cần thiết cho tế bào bước vào pha S, kết thúc đẩy trình lão hóa tế bào [12, 13].Tuy nhiên, kết hình cho thấy ATRA không làm thay đổi đáng kể mức độ biểu gene TWIST, BMI1, MDM2, p19, CDK4 ATM TWIST biết đến protein tham gia trực tiếp vào biểu BMI1 q trình chuyển dịch biểu mơ – trung mơ (EMT), chế di ung thư đồng thời liên kết TWIST BMI1 liên quan đến đặc tính gốc tế bào ung thư [14] TWIST BMI1 biết đến hai yếu tố điều hòa âm p19 hay Cdkn2a [15, 16] L.T Binh et al / VNU Journal of Science: Natural Sciences and Technology, Vol 35, No (2019) 29-36 33 Bảng Mã số cặp mồi sử dụng cho Realtime - PCR (Qiagen) Tên gene ATM BMI1 CCND1 CCNE1 CDK2 CDK4 CDK6 HPRT1 Mã số cặp mồi PPH00325C PPH57778A PPH00128F PPH00131A PPH00117F PPH00118F PPH00119C PPH01018C Tên gene CHEK1 CHEK2 E2F1 E2F3 ETS1 ETS2 GADD45A Mã số cặp mồi PPH00940C PPH00921B PPH00136G PPH00917F PPH01781C PPH00091C PPH00148B Tên gene MDM2 p19 P21 P53 RB RBL2 TWIST Mã số cặp mồi PPH00193E PPH00210C PPH00211E PPH00213F PPH00228F PPH00364C PPH02132A Mức độ biểu gen (mRNA) 1.6 1.4 * 1.2 * * * * * * * * * 0.8 ATRA 0.6 Control 0.4 0.2 RB CC N D CC NE CD K2 CH EK CH EK CD K6 E2 F1 E2 F3 ET S2 ET S1 RB L2 TW IS T BM I M DM p1 CD K4 AT M 3.2 ATRA làm tăng cường phiên mã gene chủ chốt P53, P21 GADD45A đường tín hiệu lão hóa tế bào Trong nghiên cứu này, ATRA ảnh hưởng lên biểu gene P53, P21 GADD45A (Hình 2) Kết hình cho thấy, P53 biểu tăng 1,5 lần mức độ biểu P21 GADD45A tăng mạnh khoảng 2,5 lần so sánh với mẫu đối chứng Quá trình lão hóa tế bào xảy khơng ngắn dần đoạn telomere sau chu kì tái DNA mà gây bất thường biểu oncogene P53 tham gia vào nhiều trình khác tế bào bao gồm kiểm sốt chu kì tế bào, sửa chữa DNA, khiến tế bào trải qua apoptosis đồng thời gây nên lão hoá tế bào theo hai cách [17] Mức độ biểu gen (mRNA) Hình ATRA điều hoà biểu gene kiểm soát tăng trưởng tế bào so sánh với mẫu đối chứng (control), n = 3, *p < 0,05 * * ATRA * Control P21 P53 GADD45A Hình ATRA điều hồ tăng biểu gen cảm ứng lão hoà tế bào so với mẫu đối chứng (control), n = 3, *p < 0,05 P21 yếu tố phiên mã điều hoà trực tiếp P53 biểu mạnh P53 dẫn tới điều hồ tăng biểu P21 q trình đáp ứng với stress từ môi 34 L.T Binh et al / VNU Journal of Science: Natural Sciences and Technology, Vol 35, No (2019) 29-36 trường [18] P21 chất ức chế trình tái DNA ức chế protein cycline phụ thuộc kinase(CDK) từ khiến tế bào vào trạng thái dừng chu kì tế bào [19] Đáng ý, nhiều dòng tế bào ung thư, biểu tăng cường P21 thúc đẩy tế bào vào trạng thái nghỉ vĩnh viễn với đặc điểm tế bào trải qua q trình lão hố [20] GADD45 protein giữ vai trò đặc biệt quan trọng việc dừng sinh trưởng tế bào đưa tế bào vào trạng thái lão hố, điều có ý nghĩa quan trọng việc ngăn ngừa sinh sôi tế bào chứa sai hỏng mặt di truyền Jackson cộng rằng, P53 gắn kết vào vùng promoter gene GADD45 tế bào xử lý thuốc điều trị ung thư tế bào lão hoá Đồng thời, nhóm nghiên cứu chứng minh tế bào lão hóa, liên kết P53 vào promoter gene đích tăng cường có P21 GADD45 tăng cường biểu [21] 3.3 ATRA cảm ứng biểu tăng protein P21 Hình Ảnh hưởng ATRA lên biểu protein P21: Phalodin phát F-actin màu đỏ; DAPI nhuộm nhân tế bào màu lam; Kháng thể kháng P21 màu lục; thang tỷ lệ (Scale bar) 20μm Các phân tích Realtime PCR trình bày ra, ATRA điều hoà tăng phiên mã P21 lên 2,5 lần so với đối chứng Để khẳng định ATRA làm tăng cường biểu P21 mức độ protein, phương pháp nhuộm miễn dịch huỳnh quang với kháng thể đơn dòng kháng P21 thực Kết hình P21 biểu mạnh nhân tế bào MKN45 xử lý với ATRA so với tế bào đối chứng Kết lần khẳng định ATRA điều hòa tăng biểu gene P21, gene chủ chốt liên quan đến lão hóa tế bào Đáng ý, nghiên cứu trước Park cộng tiến hành nghiên cứu ảnh hưởng ATRA lên dòng tế bào gan HepG2, Huh7 dòng tế bào ung thư ruột kết HCT116 điều kiện nuôi cấy 2D rằng, ATRA cảm ứng lão hoá tế bào gan HepG2 thơng qua điều hồ tăng biểu gene P16, P21 P27 Tuy nhiên, dịng tế bào Huh7 HTCT16 khơng bị cảm ứng lão hố ATRA khơng có điều hồ biểu tăng nhóm gene này, qua vai trị đặc biệt quan trọng gene P21, P27 P16 lão hoá tế bào [22] Trong nghiên cứu này, lần chúng tơi ATRA điều hồ tăng hoạt động gene chủ chốt đường tín hiệu lão hố dịng tế bào ung thư dày MKN45 Kết luận Trong nghiên cứu này, ATRA hoạt chất tiềm L.T Binh et al / VNU Journal of Science: Natural Sciences and Technology, Vol 35, No (2019) 29-36 việc can thiệp vào biểu gene liên quan đến lão hóa tế bào bao gồm tăng cường biểu gene cảm ứng lão hóa tế bào ức chế biểu gene kiểm sốt lão hóa tế bào Đặc biệt, ATRA tăng cường biểu P21, protein điều hoà P53 giữ vai trò đặc biệt quan trọng trình lão hóa tế bào điều kiện ni cấy 3D Nghiên cứu rằng, ATRA áp chế phát triển tế bào ung thư dày MKN45 thơng qua điều hồ biểu gene tham gia vào đường tín hiệu lão hóa tế bào Lời cảm ơn Nghiên cứu tài trợ kinh phí Đề tài cấp Bộ mã số B2017-TNA-48 Tài liệu tham khảo [1] L Hayflick, P.S Moorhead, The serial cultivation of human diploid cell strains, Exp Cell Res 25 (1961) 585-621 https://doi.org/10.1016/0014-4827 (61)90192-6 [2] V Dupé, N.B.Ghyselinck, V Thomazy, L Nagy, P.J Davies, P Chambon and M Mark, Essential roles of retinoic acid signaling in interdigital apoptosis and control of BMP-7 expression in mouse autopods, Development Biology 208 (1999) 30-34 https://doi.org/10.1006/dbio.1998 9176 [3] López-Otín Carlos, et al, The hallmarks of aging, Cell 153 (2013) 1194-1217 https://doi.org/ 10.1016/j.cell.2013.05.039 [4] Kuilman Thomas, et al, The essence of senescence, Genes & development 24 (2010) 2463-2479 https://doi.org/10.1101/gad.1971610 [5] Collado Manuel and Manuel Serrano, Senescence in tumours: vidence from mice and humans, Nature Reviews Cancer 10 (2010) 51-57 https:// doi.org/10.1038/nrc2772 [6] Hofmann, L Sandra, Retinoids:"differentiation" agents for cancer treatment and prevention, Am J Med Sci 304 (1992) 202-213 https://doi.org/10 1097/00000441-199209000-00010 [7] Heo Shin-Hee, Juri Kwak and Kyung Lib Jang, All-trans retinoic acid induces p53-depenent 35 apoptosis in human hepatocytes by activating p14 expression via promoter hypomethylation, Cancer letters 362 (2015) 139-148 https://doi.org/10 1016/j.canlet.2015.03.036 [8] P.H Nguyen, J Giraud, C Staedel, L Chambonnier, P Dubus, E Chevret, H Bœuf, X Gauthereau X, Rousseau B, Fevre M, Soubeyran I, Belleannée, S Evrard, D Collet, F Mégraud, C Varon, Knudsen, S Erik, All-trans retinoic acid targets gastric cancer stem cells and inhibits patient-derived gastric carcinoma tumor growth, Oncogene 35 (2016) 5619-5628 https://doi.org 10.1038/onc.2016 87 [9] SherrCharles, Frank McCormick, The RB and p53 pathways in cancer, Cancer cell 2(2002) 103-112 https://doi.org/10.1016/S1535-6108(02)00102-2 [10] Ngo Thu Ha, Luu Thi Binh, Le Thi Thanh Huong, Mai Van Linh, Nguyen Đac Trung, Nguyen Phu Hung, All-trans Retinoic Acid Effect on the Apoptosis Gene Expression of Gastric Cancer Cell (in Vietnamese), Journal of Sciences 33 (2017) 138-143 https://doi.org/10.25073/2588-1140/vnunst 4540 [11] K.J Livak, T.D Schmittgen, Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method, Method 25 (2001) 402-408 https://doi.org/10 1006/meth.2001.1262 [12] E.Nelson Brown., Rinath Jeselsohn., Teeru Bihani., Miaofen G Hu., Parthena Foltopoulou.,Charlotte Kuperwasser and Philip W Hinds, Cyclin D1 activity regulates autophagy and senescence in the mammary epithelium,Cancer Res 72 (2012) 64776489 https://doi.org/10.1158/0008-5472.CAN11-4139 [13] M Trimarchi Jeffrey, Jacqueline A Lees, Sibling rivalry in the E2F family, Nat Rev Mol Cell Biol (2002) 11-12 https://doi.org/10.1038/ nrm714 [14] Stevaux Olivier, Nicholas J Dyson, A revised picture of the E2F transcriptional network and RB function, Current opinion in cell biology 14 (2002) 684-691 https://doi.org/10.1016/S09550674(02)00388-5 [15] Wu Kou-Juey, Muh-Hwa Yang, Epithelialmesenchymal transition and cancer stemness: the Twist1-Bmi1connection, Bioscience reports 31 (2011) 449-455 https://doi.org/10.1042/BSR20 100114 [16] J.J.L Jacobs, K Kieboom, S Marino, R.A DePinho, M van Lohuizen, The oncogene and Polycomb-group gene bmi-1 regulates cell 36 L.T Binh et al / VNU Journal of Science: Natural Sciences and Technology, Vol 35, No (2019) 29-36 proliferation and senescence through the ink4a locus, Nature 397(1999) 164-168 https://doi.org/ 10.1038/16476 [17] R Maestro, A.P Dei Tos, Y Hamamori, S Krasnokutsky, V Sartorelli, L Kedes, D.H Beach,G.J Hannon,Twist is a potential oncogene that inhibits apoptosis, Genes Dev 13 (1999) 2207-2217 https://doi.org/10.1101/gad.13.17.2207 [18] Qian Yingjuan, Xinbin Chen, Senescence regulation by the p53 protein family,Methods Mol Biol 965 (2013) 37-61 https://doi.org/10.1007/ 978-1-62703-239-1_3 [19] A Karimian, Y Ahmadi, B Yousefi, Multiple functions of p21 in cell cycle, apoptosis and transcriptional regulation after DNA damage, DNA Repair (Amst) 42 (2016) 63-71 https://doi org/10.1016/j.dnarep.2016.04.008 [20] Y Xiong,G.J Hannon, H Zhang, D Casso, R Kobayashi, D Beach,P21 is a universal inhibitor of cyclin kinases, Nature 366 (1993) 701-704 https://doi.org/10.1038/366701a0 [21] L Fang, M Igarashi, J Leung, M.M Sugrue, S.W Lee, S.A Aaronson, p21Waf1/Cip1/Sdi1 induces permanent growth arrest with markers of replicative senescence in human tumor cells lacking functional p53, Oncogene 18 (1999) 27892797 https://doi.org/10.1038/sj.onc.1202615 [22] G Jackson James, M OliviaPereira-Smith, p53 is preferentially recruited to the promoters of growth arrest genes p21 and GADD45 during replicative senescence of normal human fibroblasts,Cancer Research 66 (2006) 8356-8360 https://doi.org/10 1158/0008-5472.can-06-1752 ... Linh, Nguyen Đac Trung, Nguyen Phu Hung, All- trans Retinoic Acid Effect on the Apoptosis Gene Expression of Gastric Cancer Cell (in Vietnamese), Journal of Sciences 33 (2017) 138-143 https://doi.org/10.25073/2588-1140/vnunst... [7] Heo Shin-Hee, Juri Kwak and Kyung Lib Jang, All- trans retinoic acid induces p53-depenent 35 apoptosis in human hepatocytes by activating p14 expression via promoter hypomethylation, Cancer letters... D Collet, F Mégraud, C Varon, Knudsen, S Erik, All- trans retinoic acid targets gastric cancer stem cells and inhibits patient-derived gastric carcinoma tumor growth, Oncogene 35 (2016) 5619-5628