Ứng dụng kỹ thuật sắc ký điện di mao quản phân tích acesulfame k saccharin aspartame trong đồ uống

Luận văn thạc sỹ Chun ngành: Hóa Phân tích ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN  TRẦN PHÚC NGHĨA ỨNG DỤNG KỸ THUẬT SẮC KÝ ĐIỆN DI MAO QUẢN PHÂN TÍCH ACESULFAME-K, SACCHARIN, ASPARTAME TRONG ĐỒ UỐNG LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội - 2011 Trần Phúc Nghĩa Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sỹ Chuyên ngành: Hóa Phân tích ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN KHOA HOÁ HỌC  TRẦN PHÚC NGHĨA ỨNG DỤNG KỸ THUẬT SẮC KÝ ĐIỆN DI MAO QUẢN PHÂN TÍCH ACESULFAME-K, SACCHARIN, ASPARTAME TRONG ĐỒ UỐNG CHUN NGÀNH: HỐ PHÂN TÍCH MÃ SỐ: 60 44 29 Giáo viên hướng dẫn khoa học: TS LÊ THỊ HỒNG HẢO Hà Nội - 2011 Trần Phúc Nghĩa Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sỹ Chuyên ngành: Hóa Phân tích MỤC LỤC MỞ ĐẦU Chƣơng I: TỔNG QUAN 1.1.Giới thiệu đường hóa học 1.1.1 Định nghĩa 1.1.2 Phân loại 1.1.3 Tác hại đường hóa học 1.1.4 Tình hình sử dụng đường hóa học thực phẩm, đồ uống 1.2 Đại cương chất phân tích 1.2.1 Acesulfame-K 1.2.2 Aspartam 1.2.3 Saccharin 1.3 Tổng quan phương pháp phân tích Ac-k, Sac, As 1.3.1 Các phương pháp xu hướng nghiên cứu nước 1.3.2 Các phương pháp giới 1.3.2.1 Phương pháp quang phổ UV – VIS 1.3.2.2 Các phương pháp HPLC 10 1.3.2.3 Phương pháp điện di mao quản 12 Chƣơng 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1.Đối tượng, nội dung mục tiêu nghiên cứu 14 2.1.1 Đối tượng mục tiêu nghiên cứu 14 2.1.2 Nội dung nghiên cứu 14 2.2 Phương pháp nghiên cứu 15 2.2.1 Phương pháp sử lý mẫu 15 2.2.2 Phương pháp sắc ký điện di mao quản 15 2.2.2.1 Cơ sở lý thuyết điện di mao quản 15 2.2.2.2 Nguyên tắc hoạt động điện di mao quản 15 2.2.2.3 Đặc điểm điện di mao quản 16 2.2.2.4 Phân loại điện di mao quản 16 2.2.2.5 Mao quản (cột tách) phương pháp điện di mao quản 17 Trần Phúc Nghĩa Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sỹ Chuyên ngành: Hóa Phân tích 2.2.2.6 Dịng điện thẩm (Electroosmotic flow-EOF) 17 2.2.2.7 Các thông số phân tích CE 20 2.2.2.8 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình điện di 21 2.2.2.9 Các loại detector thông dụng phương pháp điện di mao quản 21 2.2.2.10 Điện di mao quản vùng (CZE) 22 2.3 Phương tiện nghiên cứu 22 2.3.1 Nguyên vật liệu 22 2.3.1.1 Chất chuẩn đối chiếu 22 2.3.1.2 Hóa chất dung mơi 23 2.3.1.3 Thiết bị dụng cụ 23 2.4 Chuẩn bị dung dịch hóa chất 24 2.4.1 Pha dung dịch chuẩn gốc 24 2.4.2 Pha dung dịch đệm 25 Chƣơng 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 3.1 Tối ưu hóa điều kiện xác định Ace-K, Sac, Asp kỹ thuật sắc ký điện di mao quản 27 3.1.1 Một số điều kiện cố định 27 3.1.2 Khảo sát điều kiện 27 3.1.2.1 Hệ đệm 28 3.1.2.2 Xác định điều kiện nhiệt độ 32 3.1.2.3 Xác định đặt vào hai đầu 33 3.1.2.4 Xác định bước sóng định lượng 34 3.1.2.5 Kết luận 36 3.2 Thẩm định phương pháp 36 3.2.1 Tính chọn lọc Error! Bookmark not defined 3.2.2 Các chất cản trở gây ảnh hưởng 38 3.2.2.1 Ảnh hưởng chất bảo quản 39 3.2.2.2 Ảnh hưởng loại đường 40 3.2.2.3 Ảnh hưởng phẩm màu 42 3.2.3 Khảo sát lập đường chuẩn 44 Trần Phúc Nghĩa Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sỹ Chuyên ngành: Hóa Phân tích 3.2.4 Giới hạn phát LOD 47 3.2.5.Giới hạn định lượng LOQ 49 3.2.6 Khoảng tuyến tính 50 3.2.7 Đánh giá độ xác (độ đúng, độ chụm ) phương pháp 50 3.2.8 Độ lặp lại độ thu hồi phương pháp 52 3.3 Phân tích mẫu thực tế 54 3.4 Bàn luận qui trình rửa giải 61 KẾT LUẬN 63 KIẾN NGHỊ 64 TÀI LIỆU THAM KHẢO 65 PHỤ LỤC 69 Trần Phúc Nghĩa Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sỹ Chun ngành: Hóa Phân tích BẢNG NHỮNG KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN VĂN STT Ký hiệu Giải thích Ace-K Acesulfame Asp Aspartame Brill Brilliant CE Phương pháp điện di mao quản CIEFC Sắc ký điện di mao quản đẳng tốc độ Cyc Cyclamate CZE Điện di mao quản vùng EOF Dòng điện di thẩm thấu Fruc Fructose 10 GEL-CEC Sắc ký điện di mao quản gel (rây phân tử) 11 Glu Glucose 12 HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao 13 IC Sắc ký ion 14 LOD giới hạn phát 15 LOQ Giới hạn định lượng Điện di mao quản điện động học Mixen 16 MEKC 17 Qui Quilenol 18 RSD Độ lệch chuẩn 19 Sac Saccharin 20 Sacch Saccharose 21 Sun Sunset - Yellow 22 Tarta Tartarin 23 TNHH Trách nhiệm hữu hạn 24 UPLC Sắc ký lỏng siêu hiệu suất 25 UV-VIS Quang phổ hấp thụ phân tử Trần Phúc Nghĩa Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sỹ Chun ngành: Hóa Phân tích MỤC LỤC BẢNG Bảng 3.1 Kết phụ thuộc diện tích píc chất vào loại đệm 28 Bảng 3.2 Kết phụ thuộc diện tích píc chất vào giá trị pH 29 Bảng 3.3 Kết phụ thuộc thời gian lưu chất chuẩn 31 vào nồng độ đệm borat 31 Bảng 3.4 Kết thời gian lưu asp, sac, ace-k nhiệt độ khác 32 Bảng 3.5 Thời gian lưu asp, sac, ace-k thay đổi điện 34 Bảng 3.6 Diện tích píc asp, sac, ace-k bước sóng khác 35 Bảng 3.7 Kết thể tính chọn lọc phương pháp 38 Bảng 3.8 Ảnh hưởng chất bảo quản lên diện tích pic Ace-K, Sac, Asp 39 Bảng 3.9 Ảnh hưởng đường Glucose, Fructose, Cyclamate Saccharose 40 lên diện tích pic Ace-K, Sac, Asp 40 Bảng 3.10 Ảnh hưởng phẩm màu Tarta Brill, Sunset Qui 42 tới diện tích pic Asp, Sac, Ace-K 42 Bảng 3.11 Sự phụ thuộc diện tích píc vào nồng độ Asp, Ace-K, Sac 44 Bảng 3.12 Giá trị phương sai Ftính Asp, Sac, Ace-K 47 Bảng 3.13 Giới hạn phát (LOD) theo phương pháp lý thuyết tính theo 49 phương trình đường chuẩn 49 Bảng 3.14: Giới hạn định lượng (LOQ) phương pháp 49 Bảng 3.15 Khoảng tuyến tính Asp, Sac, Ace-K 50 Bảng 3.16 Sai số độ lặp lại phép đo nồng độ khác 51 Bảng 3.17 Diện tích píc As, Sac, Ac-k nồng độ khác 53 Bảng 3.18 Kết độ lặp lại độ thu hồi phương pháp 53 Bảng 3.19 Kết diện tích pic mẫu thêm chuẩn không thêm chuẩn 55 Bảng 3.19 Kết phân tích Asp, Sac, Ace mẫu 61 Trần Phúc Nghĩa Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sỹ Chuyên ngành: Hóa Phân tích MỤC LỤC HÌNH Trang Hình 2.1 Sơ đồ cấu tạo máy điện di muản 15 Hình 2.2 Mặt cắt ngang mao quản 17 Hình 2.3 Cấu trúc lớp điện kép thành mao quản 18 Hình 2.4 Dịng EOF lớp điện kép mao quản 18 Hình 2.5 Các kiểu dịng chảy pic sắc ký CE 19 Hình 2.6 Hệ thống phân tích CE: Máy điện di Agilent, máy tính, máy in 23 Hình 3.1: Phổ hấp thụ UV – VIS asp (a), sac (b), ace- k (c) môi 27 trường nước ( L= 65cm, i.d=50 μm, áp suất 50 mbar, I = 50 mA, E = 25 kV) 27 Hình 3.2 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc diện tích píc chất 28 vào loại đệm 28 Hình 3.3 Điện di đồ hỗn hợp chất chuẩn asp, sac, ace-k điều kiện 29 Đệm borat 20 mM pH 9,00 ( L=65 cm, I=50 mA, V=25kV, t =25oC, áp suất 50 mbar) 29 Hình 3.4 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc diện tích píc 30 asp, sac, ace-k vào giá trị pH đệm borat 20 mM 30 Hình 3.5 Điện di đồ hỗn hợp chất chuẩn asp, sac, ace-k điều kiện (Đệm borat pH 9,5, L=65 cm, I= 50mA, V= 25kV, t=25oC áp suất 50 mbar) 30 Hình 3.6 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc thời gian lưu asp, sac, ace-k 31 vào nồng dộ đệm borat pH 9,5 31 Hình 3.7 Điện di đồ hỗn hợp chất điều kiện đệm borat 20 mM 31 ( pH 9,5 I=50 mA, V=25kV, L= 65 cm, t =25oC, áp suất 50 mbar) 31 Hình 3.8 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc thời gian lưu 32 asp, sac, ace-k vào nhiệt độ 32 Hình 3.9 Điện di đồ hỗn hợp asp, sac, ace-k nhiệt độ 25oC điều kiện 33 ( Đệm borat 20 mM, pH 95, I=50 mA, V=25kV, L= 65 cm, áp suất 50 mbar) 33 Hình 3.10 Đồ thị biểu diện phụ thuộc thời gian lưu 34 asp, sac, ace-k vào điện 34 Hình 3.11 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc diện tích píc 35 asp, sac, ace-k vào bước sóng 35 Trần Phúc Nghĩa Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sỹ Chuyên ngành: Hóa Phân tích Hình 3.12 Sắc đồ chất chuẩn hỗn hợp bước sóng 215,5 nm 35 (L=65 cm, V=25kV, I=50mA, đệm borat 20mM, pH=9,5, t = 20oC, áp suất 50 mbar) 35 Hình 3.13 Điện di đồ hỗn hợp chất điều kiện điện di lựa chọn 36 (L=65cm, I=50 mA, V=25 kV, áp suất 50 mbar, t =25oC, đệm borat 20 mM, pH= 9,5 ) 36 Hình 3.14 Điện di đồ thời gian lưu chuẩn đơn Aspartame (hình c), 37 Acesulfame-k (hình b), Saccharin( hình a) điều kiện (L=65cm, I=50 mA, V=25 kV, áp suất 50 mbar, t =25oC, đệm borat 20 mM, pH= 9,5 ) 37 Hình 3.15 Điện di đồ thêm yếu tố ảnh hưởng(axit benzoic 43,04 ppm, 43 axit sorbic 46,08 ppm, glucose 46,24 ppm, fructose 43,04 ppm, saccharose 41,80 ppm, cyclamate 50 ppm, sunset yellow 67,52 ppm , brilliant 18,6 ppm, quilenol 57,12 ppm , tartarin 48,64 ppm ) điều kiện (L=54cm, I=50 mA, V=25 kV, áp suất 50 mbar, 43 t =25oC, đệm borat 20 mM, pH= 9,5 ) 43 Hình 3.16 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc diện tích píc vào nồng độ Asp 45 đường chuẩn Aspartame 45 Hình 3.17 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc diện tích píc vào nồng độ Saccharin 45 đường chuẩn Saccharin 45 Hình 3.18 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc diện tích píc vào nồng độ Acesulfame-K 46 đường chuẩn Acesulfame-K 46 Hình 3.19 Đường chuẩn thêm chuẩn Aspartame (a), Saccharin (b), 56 Acesulfame-K (c) mẫu Samurai 56 Hình 3.20 Đường chuẩn thêm chuẩn Aspartame (a), Saccharin (b), 57 Acesulfame-K (c) mẫu Sprite 57 Hình 3.21 Đường chuẩn thêm chuẩn Aspartame (a), Saccharin (b), 58 Acesulfame-K (c) mẫu Lemon C2 58 Hình 3.22 Đường chuẩn thêm chuẩn Aspartame (a), Saccharin (b), 59 Acesulfame-K (c) mẫu Coca Cola 59 Hình 3.23 Đường chuẩn thêm chuẩn Aspartame (a), Saccharin (b), 60 Acesulfame-K (c) mẫu Trà xanh Oo 60 Trần Phúc Nghĩa Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sỹ Chun ngành: Hóa Phân tích MỞ ĐẦU Acesulfame-k, saccharin, aspartame chất tổng hợp thường sử dụng ngành sản xuất chế biến dược phẩm, mỹ phẩm, thực phẩm (đặc biệt loại đồ uống) Các chất gây ảnh hưởng tới sức khỏe người dùng mức độ khác tuỳ thuộc vào liều lượng đưa vào thể Vì vậy, vấn đề đặt không với quan quản lý chất lượng an toàn vệ sinh thực phẩm, mà với nhà sản xuất phải xây dựng phương pháp phát hiện, định lượng chất kể nhằm phục vụ cho công tác tra, kiểm định kiểm soát hàm lượng nằm tiêu chuẩn cho phép Hiện việc phân tích acesulfame-k, saccharin,và aspartame tiến hành chủ yếu dựa vào kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Ưu điểm HPLC độ xác độ lặp lại cao chi phí tốn độc hại sử dụng dung mơi hữu Thêm vào đó, chất khảo sát chất phân cực, nên việc phân tích HPLC thực tế gặp nhiều khó khăn Do đó, đề tài nghiên cứu chọn phương pháp điện di mao quản để xác định đồng thời hàm lượng aspartame, acesulfame-k, saccharin loại đồ uống Phương pháp có ưu điểm thiết bị tương đối đơn giản, chi phí thấp đặc biệt tích hợp với nhiều loại đetectơ khác đetectơ quang phổ hấp thụ phân tử (UV-Vis), huỳnh quang, khối phổ, điện hóa (đo dịng, đo đo độ dẫn), nên cho khả nhận dạng định lượng chất cách chọn lọc Nghiên cứu tiến hành nhằm thực mục tiêu: - Xây dựng, thẩm định phương pháp tách định lượng đồng thời acesulfame-k, saccharin, aspartame - số chất chất tổng hợp hay dùng đồ uống, nước giải khát - Ứng dụng phương pháp vừa xây dựng để phân tích chất khảo sát kể số sản phẩm lưu hành thị trường Trần Phúc Nghĩa Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sỹ Chun ngành: Hóa Phân tích 20 Da-jin Yang and Bo Chen (2009) “ Simultaneous Determination of Nonnutritive Sweeteners in Foods by HPLC/ESI-MS” , , Hunan Normal University, Changsha 410081, China, and National Institute for Nutrition and Food Safety, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing 100021, China J Agric Food Chem., 2009, 57 (8), pp 3022–3027 21 David J Ager, David P Pantaleone, Scott A Henderson, Alan R Katritzky, Indra Prakash, D Eric Walters, (1998), "Commercial, Synthetic Nonnutritive Sweeteners" Angewandte Chemie International Edition 37 (13-24): 1802–17 22 David N Heiger, (1992), “ High Performance Capillary Electrophoresis”, Hewlett Packard Company Pub 23 Health Canada: "Aspartame - Artificial Sweeteners" http://www.hc-sc.gc.ca/fnan/securit/addit/sweeten-edulcor/aspartame-eng.php 24 Ji C, Sun Y, Li X, Chu X, Chen Z (2009) “Simultaneous determination of artificial sweeteners in beverage by ultra performance liquid chromatography” Article in Chinese, Se Pu Jan; 27(1):111-3 25 Karstadt, Myra.L, "Testing Needed for Acesulfame Potassium, anArtificialSweetener" Food Anal Methods 5:105-109 26 Lin, Yu H Chou, Shin S.Sheu, Fuu Shyu, Yuan Authors, (2009), “Simultaneous Determination of Sweeteners and Preservatives in Preserved Fruits by Micellar Electrokinetic Capillary Chromatography”, Source: Journal of Chromatographic Science, Volume 38, Number 8, August 2000, pp 345-352(8) 27 L F Capitán-Vallveya, M C Valenciaa & E Arana Nicolás (2007) “Flowthrough spectrophotometric sensor for the determination of saccharin in lowcalorie products”, Available online: 20 Feb 2007, Pages 32-41 28 Miguel A Cantarelli, Roberto G Pellerano, Eduardo J Marchevsky, José M Camiña (2009) “Simultaneous determination of aspartame and acesulfame-K by molecular absorption spectrophotometry using multivariate calibration and validation by high performance liquid chromatography” Universidad Nacional de San Luis, Chacabuco y Pedernera, 5700 San Luis, Argentina, p 1664-1778 29 M.C Boyce, (1999) ”Simultaneous determination of antioxidants, preservatives and sweeteners permitted as additives in foods by mixed micellar electrokinetic chromatography”, J Chromatogr, A, 847(1-2),369-375 Trần Phúc Nghĩa Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sỹ Chuyên ngành: Hóa Phân tích 30 Newton, David E, (2007), “Food Chemistry (New Chemistry)” New York: Facts on File pp 69 31 Natalia E Llamas & María S Di Nezio & Miriam E Palomeque & Beatriz S Fernández Band, (2008), “Direct Determination of Saccharin and Acesulfame-K in Sweeteners and Fruit Juices Powders”, Food Anal Methods 1:43–48 32 Rainer Schuster, Angelika Gratzfeld-Hüsgen “CZE analysis of artificial sweeteners and preservatives in drinks”, Agilent Technologies.Waldbronn, Germany 33 Rowe, Raymond C (2009) "Aspartame", Handbook of Pharmaceutical Excipients pp 11–12 ISBN 1582120587 34 Orawan Kritsunankul , Jaroon Jakmunee, (2009), “Flow injection on-line dialysis coupled to high performance liquid chromatography for the determination of some organic acids in wine”, Talanta, vol.79, no 35 W.G.Kuhr, (1990), “ Capillary Electrophoresis”, Anal Chem, 64,398R-40R Trần Phúc Nghĩa Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sỹ Chun ngành: Hóa Phân tích PHỤ LỤC Khảo sát loại đệm (1a) (1b) DAD1 E, Sig=215,5 Ref=off (MIXDUONG HH\STD000091.D) DAD1 E, Sig=215,5 Ref=off (MIXDUONG HH\STD000080.D) 8.391 70 Norm 6.850 Norm 120 60 100 50 pH=6 pH=9 80 40 7.460 60 20 40 4.571 3.830 9.380 30 20 10 0 (1c) (1d) DAD1 E, Sig=215,5 Ref=off (MIXDUONG HH\STD000090.D) 4.374 Norm 15 12.5 10 pH=7.5 7.5 2.5 -2.5 (1e) Điện di đồ hỗn hợp (asp, sac, ace-k) 40 ppm hệ đệm khác điều kiện ( L=65 cm, I=50mA, V=25 kV, áp suất 50 mbar, t=25oC), cụ thể: - Đệm photphat 20 mM, pH 3,0 (1a 1b) pH 7,5 (1e) - Đệm acetat 20 mM, pH 6,0 (1c) - Đệm borat 20 mM, pH 9,0 (1d) Trần Phúc Nghĩa Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sỹ Chuyên ngành: Hóa Phân tích Khảo sát pH đệm DAD1 E, Sig=215,5 Ref=off (MIXDUONG HH\STD000080.D) 6.850 Norm 120 100 pH=9 80 7.460 60 4.571 40 20 (2a) (2b) DAD1 E, Sig=215,5 Ref=off (MIXDUONG HH\STD000082.D) 6.860 Norm 100 80 pH=9.5 7.527 60 40 4.536 20 (2c) (2d) Điện di đồ hỗn hợp (asp, sac, ace-k) 40 ppm điện di với đệm borat 20 mM điểm pH khác ( pH 8,5 –2a, pH 9,0 – 2b, pH 9,5 – 2c, pH 10,0– 2d) điều kiện( L=65 cm, I=50mA, V=25 kV, áp suất 50 mbar, t=25oC), Trần Phúc Nghĩa Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sỹ Chun ngành: Hóa Phân tích 3.Khảo sát nồng độ đệm DAD1 E, Sig=215,5 Ref=off (MIXDUONG HH\MIX40000094.D) DAD1 E, Sig=215,5 Ref=off (MIXDUONG HH\MIX40000096.D) 120 6.812 Norm 6.496 Norm 120 100 100 Borate 15mMpH=9.5 Borate 20mMpH=9.5 80 60 7.013 60 40 7.413 80 20 4.589 4.471 40 20 0 (3a) (3b) DAD1 E, Sig=215,5 Ref=off (MIXDUONG HH\MIX40000097.D) 7.412 Norm 100 80 Borate 25mMpH=9.5 8.171 60 4.777 40 20 (3c) (3d) Điện di đồ hỗn hợp (asp, sac, ace-k) 40 ppm điện di với đệm borat pH 9,5 nồng độ ( 15 mM – 3a, 20 mM –3b, 25 mM – 3c, 30 mM – 3d) điều kiện (L=65cm)( L=65 cm, I=50 mA, V=25 kV, áp suất 50 mbar, t=25oC), Trần Phúc Nghĩa Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sỹ Chun ngành: Hóa Phân tích Khảo sát nhiệt độ (4a) (4b) Điện di đồ hỗn hợp (asp, sac, ace-k) 40 ppm nhiệt độ ( t = 30oC –4a, t = 20oC –4b) điều kiện ( L=65 cm, I=50mA, V=25 kV, đệm borat 20 mM, pH 9,5 áp suất 50 mbar, t=25oC) Khảo sát điện (5a) Trần Phúc Nghĩa (5b) Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sỹ Chuyên ngành: Hóa Phân tích (5c) Điện di đồ hỗn hợp (asp, sac, ace-k) 40 ppm điện ( V =20 kV – 5a, V = 25 kV –5b, V = 30 kV) điều kiện ( L=65 cm, I=50mA, V=25 kV, đệm borat 20 mM, pH 9,5 áp suất 50 mbar, t=25oC), Khảo sát bƣớc sóng định lƣợng chất (6a) (6b) (6c) Trần Phúc Nghĩa Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sỹ Chuyên ngành: Hóa Phân tích Điện di đồ hỗn hợp (asp, sac, ace-k) 40 ppm bước sóng khác ( λ = 195,5 nm – 6a; λ = 210,5 nm –6b; λ = 230,5 nm –6c) điều kiện (L = 65 cm, I = 50mA, V = 25 kV, đệm borat 20 mM, pH 9,5 áp suất 50 mbar,t = 25oC) 7.Khảo sát chất gây ảnh hƣởng Ảnh hưởng chất bảo quản lên thời gian Ace-K, Sac, Asp CAx.Ben tAsp Sai tSac Sai tAce-K Sai (ppm) (phút) số(%) (phút) số(%) (phút) số(%) 2,926 10,76 2,905 -0,7 4,318 -0,8 4,685 -1,2 21,52 2,906 -0,8 4,146 -4,7 4,705 -0,8 43,04 2,915 -3,8 4,137 -4,9 4,754 0,2 CAx.Sor tSac Sai tSac Sai tAce-K Sai (ppm) (phút) số(%) (phút) số(%) (phút) số(%) 2,926 11,52 2,902 -0,8 4,315 -0,9 4,701 -0.9 23,04 2,887 -1,3 4,298 -1,2 4,697 -1,0 46,08 2,849 -2,6 4,257 -2,2 4,686 -1,2 Trần Phúc Nghĩa 4,352 4,743 4,352 4,743 Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sỹ Chun ngành: Hóa Phân tích Ảnh hưởng đường Glucose, Fructose, Cyclamate Saccharose lên thời gian lưu Ace-K, Sac, Asp CGlu tAsp Sai tSac Sai tAce-K Sai (ppm) (phút) số(%) (phút) số(%) (phút) số(%) 2.926 23,12 2,894 -1,1 4,3 -1.20 4,687 -1,1 46,24 2,910 -0,6 4,332 -0.50 4,785 0,9 138,7 2,966 1,4 4,453 2.31 4,822 2,9 CFruc tAsp Sai tSac Sai tAce-K Sai (ppm) (phút) số(%) (phút) số(%) (phút) số(%) 2,926 21,52 2,884 -1,4 4,365 0,29 4,778 0,7 43,04 2,921 -0,2 4,398 1,06 4,802 1,2 129,12 2,915 -0,4 4,366 0,32 4,955 4,5 CCyc tAsp Sai tSac Sai tAce-K Sai (ppm) (phút) số(%) (phút) số(%) (phút) số(%) 2,926 20,00 2,924 0,1 4,423 1,62 4,803 1,21 50,00 2,935 0,3 4,455 2,30 4,859 2,40 100,00 2,956 1,0 4,501 3,42 4,988 5,12 CSacch tAsp Sai tSac Sai tAce-K Sai (ppm) (phút) số(%) (phút) số(%) (phút) số(%) 2,926 20,90 3,021 3,2 4,406 1,2 4,738 0,1 41,80 3,053 4,3 4,413 1,4 4,756 0,3 125,40 3,132 7,0 4,568 5,0 4,792 1,0 Trần Phúc Nghĩa 4,352 4,743 4,352 4,743 4,352 4,743 4,352 4,743 Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sỹ Chun ngành: Hóa Phân tích Ảnh hưởng chất phẩm màu Tartara, Brilliant, Sunset Qui tới thời gian lưu Ace, Sac, Ace-K CTarta tAsp Sai tSac Sai tAce-K Sai (ppm) (phút) số(%) (phút) số(%) (phút) số(%) 2,926 12,16 2,895 -1,0 4,342 -0,2 4,748 0,1 24,32 2,912 -0,5 4,306 -1,0 4,795 1,1 48,64 2,885 -1,4 4,298 -1,2 4,821 -1,6 CBrill tAsp Sai tSac Sai tAce-K Sai (ppm) (phút) số(%) (phút) số(%) (phút) số(%) 2,926 9,28 2,932 0,2 4,361 0,2 4,749 0,1 18,56 2,937 0,4 4,377 0,6 4,757 0,3 111,40 2,940 0,5 4,435 1,9 4,823 1,7 CSun tAsp Sai tSac Sai tAce-K Sai (ppm) (phút) số(%) (phút) số(%) (phút) số(%) 2,926 16,88 2,989 1,0 4,409 1,3 4,802 1,2 33,76 3,076 5,1 4,458 2,4 4,865 2,6 67,52 3,198 9,3 4,635 6,5 4,934 4,1 CQui tAsp Sai tSac Sai tAce-K Sai (ppm) (phút) số(%) (phút) số(%) (phút) số(%) 2,926 14,28 2,995 2,3 4,389 0,9 4,756 0,3 28,56 3,123 6,7 4,441 2,0 4,822 1,7 57,12 3,189 8,9 4,535 4,2 4,881 2,9 Trần Phúc Nghĩa 4,352 4,743 4,352 4,743 4,352 4,743 4,352 4,743 Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sỹ Chun ngành: Hóa Phân tích DAD1 B, Sig=215,5 Ref=off (MIXDUONG HH\STD000156.D) DAD1 B, Sig=215,5 Ref=off (MIXDUONG HH\STD000157.D) 30 35 30 Sac 25 Are 4.153 a Are : 57.94.319 a: 87 61 31 05 mAU 4.319 Are a: 0.1 925 mAU Sac Ben 25 20 4.147 A rea : 29 50 62 Ben Asp Asp 10 Ace-K 2.908 A rea : 9.0 768 15 A2.906 rea :8 49 29 10 A4.705 rea :2 9.1 75 20 A4.707 rea : 28 63 03 15 Ace-K 0 -5 -5 (7a) (7b) DAD1 B, Sig=215,5 Ref=off (MIXDUONG HH\STD000160.D) DAD1 B, Sig=215,5 Ref=off (MIXDUONG HH\STD000158.D) 4.286 Are a: 61.9 139 mAU 35 4.316 Are a: 61.7 908 mAU 35 30 30 Sac 25 Asor 15 10 10 Ace-K A2.903 rea : 9.2 48 44 Asp Ace-K Asp A2.888 rea : 8.2 80 48 15 A3.761 rea : 32 69 73 20 A4.700 rea : 31 77 89 20 Sac A4.116 rea : 30 25 41 A3.786 rea : 32 78 64 Ben A4.669 rea : 30 12 Asor 25 0 -5 (7c) (7d) DAD1 B, Sig=215,5 Ref=off (MIXDUONG HH\STD000163.D) DAD1 B, Sig=215,5 Ref=off (MIXDUONG HH\STD000162.D) 30 Sac 4.306 Are a: 59.7 072 mAU Are 4.283 a: 61.5 16 mAU Sac 30 25 25 20 Ace-K Asp 10 A2.896 rea : 8.4 28 63 Tatarin A5.231 rea : 26 95 65 A5.235 rea : 36 22 87 Tatarin A5.894 rea : 35 17 06 A2.884 rea : 9.1 33 56 Ace-k 15 Qui Asp 10 A4.695 rea : 30 40 66 20 A4.667 rea : 30 54 84 15 0 -5 (7e) Trần Phúc Nghĩa min (7f) Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sỹ Chuyên ngành: Hóa Phân tích DAD1 B, Sig=215,5 Ref=off (MIXDUONG HH\STD000168.D) DAD1 B, Sig=215,5 Ref=off (MIXDUONG HH\STD000164.D) 30 4.392 mAU 4.333 Are a: 59.1 757 mAU 30 Sac 25 20 20 Qui Sac Asp Asp 10 Tata 2.939 A2.911 rea : 027 10 15 Ace-K 5.376 15 Ace-K 4.795 A4.724 rea : 30 03 96 6.206 25 Cyc 3.470 0 (7g) min (7h) DAD1 B, Sig=215,5 Ref=off (MIXDUONG HH\STD000167.D) DAD1 B, Sig=215,5 Ref=off (MIXDUONG HH\STD000168.D) 30 3.874 A rea : 11 8.8 Are72 4.231 a: 18.6 15 mAU 4.392 Are a: 1.9 834 mAU 60 Ben Qui A6.209 rea : 16 0.9 76 20 Asor 40 Ace-K Sac 4.795 A rea : 30 64 39 15 30 Qui Asp 2.939 A rea : 725 09 10 Sun Tata 4.900 A rea : 333 05 Cyc 3.466 A rea : 400 23 9.570 A rea : 20 37 56 3.473 A rea : 369 35 2.017 20 Brill 5.385 A rea : 60 57 91 A2.940 rea : 573 Cyc 4.783 A rea : 30 09 54 Tata 10 5.551 A rea : 14 7.8 72 Ace Asp 6.181 A rea : 13 7.5 89 25 50 4.388 A rea : 62 16 16 Sac (7i) (7k) Điện di đồ hỗn hợp chất chuẩn thêm chất gây ảnh hưởng điều kiện điện di ( L = 56 cm, I = 50mA, V = 25 kV, đệm borat 20 mM, pH 9,5 áp suất 50 mbar, t = 25oC) - Hình (7a), hình (7b): Sắc đồ hỗn mix chuẩn thêm axit Benzoic nồng độ 10,76 ppm 21,52ppm - Hình (7c): Sắc đồ hỗn mix chuẩn thêm axit Sorbic nồng độ 11,52 ppm - Hình (7d): Sắc đồ hỗn mix chuẩn thêm axit Benzoic 10,76 ppm axit Sorbic 11,52 ppm - Hình (7e): Sắc đồ hỗn mix chuẩn thêm Tarta 12,16 ppm, Quil 14,28 ppm, Sun 16,88 ppm, Brill 12,16 ppm Trần Phúc Nghĩa Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sỹ Chun ngành: Hóa Phân tích - Hình (7f): Sắc đồ hỗn mix chuẩn thêm Tarta 12,60 ppm nồng độ - Hình (7g): Sắc đồ hỗn mix chuẩn thêm Glu 23,12 ppm, Fruc 21,52 ppm, Cyc 20 ppm, Sacch 20,9 ppm - Hình (7h): Sắc đồ hỗn mix chuẩn thêm Glu 46,24 ppm, Fruc 43,04 ppm, Cyc 50 ppm, Sacch 41,08 ppm, Tarta 12,16 ppm, Quil 28,56 ppm, Sun 33,66 ppm, Brill 24,32 ppm - Hình (7i): Sắc đồ hỗn mix chuẩn thêm Glu 46,24 ppm, Fruc 43,04 ppm, Cyc 50 ppm, Sacch 41,08 ppm, Tarta 12,16 ppm, Quil 28,56 ppm, Sun 33,66 ppm, Brill 72,96 ppm - Hình (k): Sắc đồ hỗn mix chuẩn thêm Glu 46,24 ppm, Fruc 43,04 ppm, Cyc 50 ppm, Sacch 41,08 ppm, Tarta 12,16 ppm, Quil 28,56 ppm, Sun 33,66 ppm, Brill 24,32 ppm với axit Ben 43,04 ppm, axit Sor 46,08 ppm Phân tích mẫu thực tế điều kiện điện di ( L= 56 cm, I=50mA, V=25 kV, đệm borat 20 mM, pH 9,5 áp suất 50 mbar, t = 25oC, thời gian tiêm mẫu 5s) DAD1 B, Sig=215,5 Ref=off (MIXDUONG HH\STD000144.D) DAD1 B, Sig=215,5 Ref=off (MIXDUONG HH\STD000140.D) mAU mAU 100 80 70 Sac 80 4.403 A rea : 81 93 17 60 50 60 40 4.758 A rea : 55 83 31 40 30 Asp 20 (8a) Ace-K 2.814 A rea : 16 81 35 2.812 A rea : 761 54 4.328 A rea : 81 4.698 A rea344 : 10 54 97 20 10 (8b) Điện di đồ mẫu Samurai (8a) mẫu Sammurai thêm tiêu chuẩn(8b) ( Aspartame 21,6 ppm, Sac 21,52 ppm, Acesulfame-K 24,24 ppm) Trần Phúc Nghĩa Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sỹ Chun ngành: Hóa Phân tích DAD1 B, Sig=215,5 Ref=off (MIXDUONG HH\STD000152.D) DAD1 B, Sig=215,5 Ref=off (MIXDUONG HH\STD000153.D) mAU 40 5.050 Are a: 21.5 45 mAU 60 35 Sac 50 5.565 A rea : 83 82 21 30 40 25 20 30 Ace-K 15 20 Asp 3.326 A rea : 33 31 46 4.975 A rea : 5.2 925 Sac 10 5.611 A rea : 6.4 105 3.262 A rea : 10 84 35 Asp Ace-K 5.455 10 (8c) (8d) Hình 3.16 Điện di đồ mẫu Sprite (8c) mẫu Sprite thêm tiêu chuẩn(8d) ( Aspartame 43,02 ppm, Sac 43,04 ppm, Acesulfame-K 48,48 ppm) 40 60 30 40 20 Ace Asp 10 3.081 A rea : 14 77 64 20 Sac 4.954 A rea : 49 96 17 80 4.223 A rea : 7.9 163 mAU 50 4.542 Are a: 0.0 133 DAD1 B, Sig=215,5 Ref=off (MIXDUONG HH\STD000147.D) DAD1 B, Sig=215,5 Ref=off (MIXDUONG HH\STD000142.D) mAU 0 (8e) (8f) Điện di đồ mẫu Lemon C2 (8e) mẫu Lemon C2 thêm tiêu chuẩn (8f) ( Aspartame 21,6 ppm, Sac 21,52 ppm, Acesulfame-K 24,24 ppm) Trần Phúc Nghĩa Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sỹ Chuyên ngành: Hóa Phân tích DAD1 B, Sig=215,5 Ref=off (MIXDUONG HH\STD000148.D) DAD1 B, Sig=215,5 Ref=off (MIXDUONG HH\STD000143.D) 4.566 Are a: 7.5 035 mAU mAU 50 17.5 15 40 4.980 A rea : 50 87 22 12.5 30 10 7.5 20 3.043 A rea : 11 41 38 3.006 A rea : 5.1 078 10 2.5 0 (8g) (8h) Hình 3.18 Điện di đồ mẫu Coca Cola (8g) mẫu Coca Cola thêm tiêu chuẩn(8h) ( Aspartame 21,6 ppm, Sac 21,52 ppm, Acesulfame-K 24,24 ppm) DAD1 B, Sig=215,5 Ref=off (MIXDUONG HH\STD000149.D) DAD1 B, Sig=215,5 Ref=off (MIXDUONG HH\STD000145.D) 4.589 Are a: 7.4 212 mAU mAU 60 50 40 5.005 A rea : 46 49 40 30 30 20 20 10 3.080 A rea : 636 81 10 0 (8i) min (8k) Hình 3.19 Điện di đồ mẫu Trà xanh Oo (8i) mẫu Trà xanh Oo thêm tiêu chuẩn (8k)( Aspartame 21,6 ppm, Sac 21,52 ppm, Acesulfame-K 24,24 ppm) Trần Phúc Nghĩa Trường ĐHKH Tự nhiên ... Hóa Phân tích ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN KHOA HOÁ HỌC  TRẦN PHÚC NGHĨA ỨNG DỤNG K? ?? THUẬT SẮC K? ? ĐIỆN DI MAO QUẢN PHÂN TÍCH ACESULFAME- K, SACCHARIN, ASPARTAME TRONG. .. Phân tích BẢNG NHỮNG K? ? HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN VĂN STT K? ? hiệu Giải thích Ace -K Acesulfame Asp Aspartame Brill Brilliant CE Phương pháp điện di mao quản CIEFC Sắc k? ? điện di mao quản. .. Cyclamate CZE Điện di mao quản vùng EOF Dòng điện di thẩm thấu Fruc Fructose 10 GEL-CEC Sắc k? ? điện di mao quản gel (rây phân tử) 11 Glu Glucose 12 HPLC Sắc k? ? lỏng hiệu cao 13 IC Sắc k? ? ion 14 LOD