Nghiên cứu hoạt tính sinh học định hướng phân lập hợp chất tinh khiết từ cây nhân trần tía và ứng dụng

ĐỒN THANH NIÊN CỘNG SẢN HỒ CHÍ MINH BAN CHẤP HÀNH TP HỒ CHÍ MINH CƠNG TRÌNH DỰ THI GIẢI THƯỞNG SINH VIÊN NGHIÊN CỨU KHOA HỌC EURÉKA LẦN THỨ XX NĂM 2018 TÊN CƠNG TRÌNH: NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH SINH HỌC ĐỊNH HƯỚNG PHÂN LẬP HỢP CHẤT TINH KHIẾT TỪ CÂY NHÂN TRẦN TÍA VÀ ỨNG DỤNG LĨNH VỰC NGHIÊN CỨU: Cơng nghệ Hóa - Dược CHUN NGÀNH: Dược liệu Mã số cơng trình: …………………………… i MỤC LỤC DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT .iv DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ, ĐỒ THỊ, SƠ ĐỒ, HÌNH ẢNH vii TÓM TẮT MỞ ĐẦU PHẦN 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan chi Adenosma 1.2 Tổng quan nhân trần tía (Adenosma bracteosum Bonati.) 1.2.1 Đặc điểm hình thái 1.2.2 Đặc điểm phân bố 1.2.3 Một số thành phần hóa học nghiên cứu 1.2.4 Hoạt tính sinh học 13 1.3 Định nghĩa gốc tự do, stress oxy hóa, chất chống oxy hóa bệnh tiểu đường 15 1.3.1 Khái niệm gốc tự stress oxy hóa 15 1.3.2 Tác hại stress oxy hóa 16 1.3.3 Chất chống oxy hóa 18 1.3.4 Bệnh tiểu đường 19 1.4 Hợp chất tự nhiên từ thực vật 19 1.4.1 Terpenoid 19 1.4.2 Steroid 22 1.4.3 Polyphenol 23 PHẦN 2: MỤC TIÊU - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 Mục tiêu đề tài 26 2.2 Ngun liệu, dung mơi, hố chất, trang thiết bị 26 2.2.1 Nguyên liệu 26 2.2.2 Dung mơi, hố chất 27 ii 2.2.3 Trang thiết bị 27 2.3 Phương pháp nghiên cứu 29 2.3.1 Xác định độ ẩm 30 2.3.2 Quá trình chiết thu nhận cao chiết 30 2.3.3 Phương pháp xác định hàm lượng cao thu 31 2.3.4 Phương pháp định tính thành phần hóa học từ cao cồn nước Nhân trần tía 31 2.3.5 Đánh giá hoạt tính kháng oxy hóa mơ hình DPPH 34 2.3.6 Đánh giá hoạt tính kháng oxy hóa mơ hình FRAP 35 2.3.7 Phương pháp ức chế enzym xanthin oxidase 36 2.3.8 Phương pháp đánh giá khả chống tăng đường huyết mơ hình in vivo chuột tăng đường huyết cấp tính 36 2.3.9 Đánh giá mơ hình in vivo chuột gây tiểu đường streptozocin 38 2.3.10 Phân lập xác định cấu trúc 41 2.3.11 Xác định độ tinh khiết sắc ký lớp mỏng 42 2.3.12 Phương pháp xử lý số liệu 43 PHẦN 3: KẾT QUẢ - THẢO LUẬN 44 3.1 Thử độ ẩm dược liệu 44 3.2 Khảo sát hàm lượng cao chiết 44 3.3 Định tính thành phần hóa học nhân trần tía 45 3.4 Kết khả kháng oxy hóa mơ hình DPPH 52 3.5 Kết khả kháng oxy hóa mơ hình FRAP 53 3.6 Khả ức chế enzyme xanthin oxidase 55 3.7 Ảnh hưởng dịch chiết nhân trần tía lên lượng đường máu 56 3.8 Kết đánh giá mơ hình in vivo chuột gây tiểu đường streptozocin 57 3.9 Phân lập xác định cấu trúc 58 3.9.1 Phân lập sắc ký cột 58 iii 3.9.2 Khảo sát cấu trúc độ tinh khiết chất phân lập 67 3.10 Đánh giá ảnh hưởng AB3 lên lượng đường máu 70 3.11 Bước đầu nghiên cứu qui trình sản xuất trà túi lọc từ Nhân Trần tía 71 3.11.1 Khảo sát chế độ sấy nguyên liệu 71 3.11.2 Tỷ lệ phối trộn với nguyên liệu phụ 73 3.11.3 Đề xuất quy trình sản xuất trà túi lọc 73 3.11.4 Khảo sát ảnh hưởng trà túi lọc lên lượng đường máu 76 PHẦN 4: KẾT LUẬN – ĐỀ NGHỊ 78 4.1 Kết luận 78 4.2 Kiến nghị 79 TÀI LIỆU THAM KHẢO 80 PHỤ LỤC 85 iv 13 DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT C-NMR: C- Nuclear Magnetic Resonance 13 H-NMR: 1H-Nuclear Magnetic Resonance Ac: Acetone AG: Acid Gallic ALT: enzyme alanin aminotrasferase AQ: aqueous (nước) C, CH, CHCl3: chloroform CCl4: carbon tetrachloride db: gam dược liệu khô DMSO: Dimethyl sulfoxyde DPPH: 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl EA: Ethyl acetate EI: Electron Impact Mass Spectroscopy Et: ethanol (cồn) FRAP: Ferric ion Reducing Antioxydant Power H: Hexan HCTN: hợp chất tự nhiên IC50: half maximal inhibitory concentration Me, MeOH: Methanol MS: Mass spectroscopy NMR: Nuclear Magnetic Resonance (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân) RNS: Reactive Nitrogen Species ROS: Reactive Oxygen Species SKLM: Sắc ký lớp mỏng SRB: Sulforhodamine B TFC: Total Flavonoids Content (Hàm lượng flavonoid tổng số) v TPC: Total Polyphenols Content (Hàm lượng polyphenol tổng số) TPHH: thành phần hóa học TPTZ: 2,4,6-tripyridyl-s-triazin W: nước VS: vanillin sulfuric XO: Xathin oxidase vi DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Các thành phần hóa học có tinh dầu Adenosma bracteosum Bonati 11 Bảng 1.2 Các ROS RNS thể sinh học 16 Bảng 1.3 Các bệnh liên quan đến oxy hóa DNA 17 Bảng 1.4 Các bệnh liên quan đến oxy hóa protein 17 Bảng 1.5 Các bệnh liên quan đến oxy hóa lipid 18 Bảng 3.1 Độ ẩm dược liệu 44 Bảng 3.2 Khảo sát hàm lượng cao chiết theo dung môi 44 Bảng 3.3 Kết phân tích sơ thành phần hóa học 45 Bảng 3.4 Hình ảnh định tính thành phần hóa học 46 Bảng 3.5 Chỉ số đường huyết mãn tính 21 ngày 57 Bảng 3.6 Các hệ dung môi sử dụng cho sắc ký cột cao phân đoạn C 59 Bảng 3.7 Kết phân đoạn từ sắc ký cột cao phân đoạn C 62 Bảng 3.8 Kết sắc ký cột silica gel phân đoạn A3 64 Bảng 3.9 Kết sắc ký cột silica gel phân đoạn B4 66 Bảng 3.10 Kết đo đường huyết nhóm chuột uống AB3 so với nhóm chuột đối chứng 70 Bảng 3.11 Biến đổi màu, mùi, vị Nhân trần tía nhiệt độ khác 72 Bảng 3.12 Một số tiêu vi sinh trà túi lọc Nhân trần 76 Bảng 3.13 Kết lượng đường máu mơ hình chuột cấp tính sau thử sản phẩm 77 vii DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ, ĐỒ THỊ, SƠ ĐỒ, HÌNH ẢNH Sơ đồ 2.1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm 29 Sơ đồ 2.2 Sơ đồ bố trí thí nghiệm thử hoạt tính mẫu chuột tăng đường huyết cấp tính 36 Sơ đồ 2.3 Sơ đồ tạo mơ hình chuột mắc bệnh tiểu đường type 38 Sơ đồ 2.4 Sơ đồ bố trí thí nghiệm thử hoạt tính mẫu chuột tăng đường huyết mãn tính 39 Sơ đồ 3.1 Sơ đồ quy trình cơng nghệ sản xuất trà túi lọc 74 Hình 1.1 Cây Nhân trần tía (Adenosma bracteosum Bonati.) Hình 2.1 Chuột cho uống dung dịch glucose 2g.kg-1 thể trọng 37 Hình 2.2 Chuột tiêm STZ vào phúc mạc bụng 39 Hình 2.3 Chuột cho uống cao chiết 40 Hình 2.4 Bảng tra nồng độ đường huyết 41 Hình 3.1 Biểu đồ so sánh giá trị IC50 cao chiết thí nghiệm quét gốc tự DPPH 53 Hình 3.2 Biểu đồ kết tác dụng chống oxy hóa mẫu thử nồng độ mg/ml thí nghiệm FRAP 54 Hình 3.3 Biểu đồ kết hoạt tính ức chế enzyme xathin oxidase 55 Hình 3.4 Hiệu chống tăng đường huyết cao Et AQ 56 Hình 3.5 Biểu đồ so sánh số đường huyết cao Et cao AQ với thuốc 57 Hình 3.6 Phân đoạn C soi UV 254nm sau nhúng TTVS màu 59 Hình 3.7 Mẫu nạp vào chạy sắc ký cột 61 Hình 3.8 Phân đoạn A3 soi UV 265nm sau nhúng TTVS màu 63 viii Hình 3.9 Phân đoạn A3 nạp vào cột 64 Hình 3.10 Phân đoạn B4 soi UV 254nm sau nhúng TTVS màu 65 Hình 3.11 Sắc ký cột phân đoạn B4 66 Hình 3.12 Phân đoạn E1 E2 sau nhúng TTVS màu 67 Hình 3.13 AB3 kết tinh hình kim, màu vàng 68 Hình 3.14 AB3 UV 254nm sau nhúng TTVS màu 68 Hình 3.15 Phổ EI-MS AB3 69 Hình 3.16 Cấu trúc hợp chất AB3 70 Hình 3.17 Dịch trích ly ngun liệu nhiệt độ khác 72 TÓM TẮT Cây nhân trần tía Adenosma bracteosum Bonati dùng y học cổ truyền để trị bệnh gan mật có nghiên cứu hoạt tính sinh học khác Mục đích nghiên cứu đánh giá hoạt tính chống oxy hóa in vitro, in vivo chống tăng đường huyết nhân trần tía từ phân lập hợp chất tinh khiết đề xuất hướng ứng dụng từ loài Các cao chiết chloroform, ethanol nước đánh giá mơ hình chống oxy hóa FRAP (ferric reducing/antioxidant power), quét gốc tự DPPH (1,1diphenyl-2-picryl-hydrazyl) ức chế enzyme xanthin oxidase Kết phân tích cho thấy cao chiết cồn nước có hoạt tính chống oxy hóa mạnh Các liều thử khác cao chiết cồn nước chuột bị tăng đường huyết đường uống cho kết liều dùng thấp cao cồn (40 mg/kg) cao nước (50 mg/kg) tương đương với nhóm đối chứng dùng thuốc glibenclamide Trên mơ hình in vivo chuột bị gây đái tháo đường streptozocin (mơ hình thử 21 ngày) cho thấy cao cồn có khả đưa lượng đường máu tương đương với nhóm chứng thuốc hoạt tính đặc biệt Nhân trần tía mà chưa có tài liệu cơng bố trước Từ cao cồn, tiến hành kỹ thuật sắc ký qua nhiều cột sắc ký phân lập hợp chất tinh khiết (được đặt tên AB3) Khảo sát số tính chất chất phân lập cảm quan (hình dạng, màu sắc, ) qua sắc ký phổ đồ xác định cấu trúc AB3 5,7-Dihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-4-oxo-4H-chromen-8-yl hexopyranoside Đây hợp chất tự nhiên có Nhân trần tía chưa có cơng bố khoa học cơng bố trước Đánh giá ảnh hưởng AB3 lên lượng đường máu tốt Điều cho thấy hợp chất tiềm hỗ trợ điều trị bệnh đường huyết Bước đầu xây dựng quy trình sản xuất trà túi lọc Nhân trần tía chưa có thị trường đánh giá ảnh hưởng sản phẩm lên lượng đường máu mô hình in vivo cho kết khả quan Những kết thu nghiên cứu chứng minh nhân trần tía nguồn chất chống oxy hóa tự nhiên, ngăn ngừa gút, bảo vệ gan chống tăng đường huyết nên hỗ trợ điều trị bệnh tiểu đường 77 uống dịch trà nhân trần liều tương ứng 40 50 mg/kg dịch chiết từ sản phẩm trà thảo mộc đường với 2g glucose/kg Sau tiến hành đo đường huyết, thu kết bảng 3.13 Bảng 3.13 Kết lượng đường máu mơ hình chuột cấp tính sau thử sản phẩm Nhóm thí nghiệm Nhóm Nồng độ Đường huyết (mmol/l) Nhóm trắng - 5,65 ± 0,13b Nhóm chứng đường 2 g/kg 11,50 ± 0,70a Nhóm chứng thuốc 10 mg/kg 6,02 ± 0,05b 40 mg/kg 6,34 ± 0,09b 50 mg/kg 6,34 ± 0,15b Nhóm thử trà túi lọc Nhân trần Từ bảng 3.13 nhận thấy nhóm thử dịch trà sản phẩm cho kết tương đương Qua xử lý số liệu, nhóm thử có mối tương quan với nhóm chứng trắng nhóm thuốc Điều chứng tỏ sản phẩm trà túi lọc Nhân trần tía có khả hỗ trợ điều trị bệnh tiểu đường Tóm lại, đề tài nghiên cứu có ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn cao kết nghiên cứu đề tài mở hướng nghiên cứu ứng dụng điều trị bệnh đái tháo đường, ung thư nói riêng việc phòng ngừa nhiều loại bệnh tật nói chung Kết nghiên cứu đề tài cho thấy với liều uống cao chiết 50 mg/kg thể trọng giúp làm ổn định đường huyết mô hình thử nghiệm Qua mở hướng sử dụng Nhân trần tía loại thực phẩm chức dùng việc hỗ trợ điều trị bệnh lý đường huyết, góp phần tăng thêm giá trị sử dụng loại này, nâng cao giá trị dược liệu 78 PHẦN 4: KẾT LUẬN – ĐỀ NGHỊ 4.1 Kết luận Sau thời gian thực đề tài, với điều kiện phịng thí nghiệm Viện hóa học, phòng Hợp chất thiên nhiên Đề tài thực số công việc sau:  Về hàm lượng, thành phần hóa học: Hàm lượng cao thu sử dụng dung môi nước, dung môi cồn dung môi chloroform để chiết 15,52%, 8,88% 5,14% Kết phân tích sơ thành phần hóa học thực vật cho thấy Nhân trần tía có nhiều nhóm hợp chất tự nhiên terpenoid, steroid, flavonoid, saponin, tanin tinh dầu  Về khả kháng oxy hóa: Nghiên cứu hoạt tính chống oxy hóa in vitro theo phương pháp: mơ hình loại gốc tự DPPH, mơ hình FRAP ức chế enzyme xathin oxidase; thu kết quả: - Ở tất mẫu khảo sát có khả loại gốc tự DPPH, cao chiết cồn (6,61 ± 0,17) µg/ml có giá trị IC50 tốt cao nước (10,12 ± 0,13) µg/ml - Tất mẫu khảo sát thể khả oxy hóa mơ hình FRAP, cao chiết cồn cho kết có hoạt tính chống oxi hóa tình với hoạt tính chống oxy hóa 2,79 lần so với acid ascorbic tinh khiết nồng độ mẫu ban đầu mg/ml - Ở tất mẫu khảo sát thể hoạt tính ức chế enzyme XO nồng độ thử nghiệm 100μg/ml, cao cồn đạt kết cao 11,68 lần khả ức chế XO allopurinol  Về khả chống tăng đường huyết mơ hình cấp tính mơ hình gây đái tháo đường gây strepzotocin Kết nghiên cứu cho thấy Nhân trần tía có khả giúp làm ổn định lượng đường máu Hiệu giảm nồng độ đường máu nhóm động vật dùng dịch chiết cồn dịch chiết nước liều 40 mg/kg cao Et liều 50 mg/kg cao AQ tương đương với nhóm dùng thuốc trị bệnh tiểu đường glibenclamide (10 mg/kg 79 thể trọng) Nghiên cứu sở cho việc ứng dụng sản xuất thuốc có tác dụng ngăn ngừa bệnh đái tháo đường  Phân lập hợp chất tinh khiết AB3 từ phân đoạn cao cồn qua kỹ thuật sắc ký Dựa vào sắc ký phổ khối phổ cộng hưởng từ hạt nhân xác định cấu trúc AB3 5,7-Dihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-4-oxo-4H-chromen-8-yl hexopyranoside chưa có cơng bố khoa học hợp chất tự nhiên có Nhân trần tía Khảo sát ảnh hưởng AB3 lên lượng đường máu tốt  Về ứng dụng: đề xuất quy trình sản xuất trà túi lọc chưa có thị trường đánh giá hoạt tính dịch chiết trà mơ hình động vật tăng đường huyết cấp tính tốt 4.2 Kiến nghị Do điều kiện thực nghiệm thời gian thực đề tài có hạn, đề tài nghiên cứu phần nhỏ thành phần hố học cao cồn Nhân trần tía Để tiếp tục, đề tài nên tập trung vào nội dung sau:  Xử lý tiếp phân đoạn lại dịch chiết cồn để tách chất phân cực  Tiếp tục triển khai sắc ký cột cổ điển để thu hợp chất phân cực đặc biệt flavonoid  Tiếp tục thử nghiệm khảo sát thêm hoạt tính sinh học chất AB3  Tạo sản phẩm ứng dụng khác từ nhân trần làm kẹo, siro… nghiên cứu thêm để sản xuất thuốc 80 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu nước [1] Bộ Y Tế (2002) Dược điển Việt Nam III, Hà Nội [2] Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Thu, Nguyễn Tập, Trần Toàn (2004) Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Tập II, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật [3] Đỗ Tất Lợi (2004) Những Cây Thuốc Và Vị Thuốc Việt Nam Nhà xuất Y học, Hà Nội, 625-629 [4] Dương Hồng Nhung (2015) Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học lồi Bồ bồ Adenosma indiana (Lour.) Merr phân bố địa bàn huyện Đại Từ - tỉnh Thái Nguyên Luận văn Thạc sĩ, Trường Đại học Sư Phạm Thái Nguyên [5] Dương Thị Mộng Ngọc, Nguyễn Thị Thu Hương, Nguyễn Thị Thanh Tâm, Trần Công Luận (2006) Tác dụng bảo vệ gan cao phối hợp từ Đinh lăng Nhân trần Tây Ninh, Nghiên cứu phát triển dược liệu đông dược Việt Nam, Viện Dược liệu [6] Thị Ngọc Hà, Vũ Thị Thư (2009) Stress oxy hóa chất chống oxy hóa tự nhiên, Tạp chí Khoa học Phát triển, Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội, 7(5), 667-677 [7] Lê Hồng Khải (2016) Khảo sát hoạt tính sinh học nhân trần tía Adenosma bracteosum Bonati hướng ứng dụng thực tiễn Luận văn tốt nghiệp Kỹ sư Đại học, Trường đại học Cơng Nghệ thành phố Hồ Chí Minh [8] Lê Tùng Châu, E Hethelyi, S Holly, Phạm Duy Hồng (1986), “Thành phần tinh dầu Nhân trần Tây Ninh” Tạp chí dược học, 5, tr 18, 19, 32 [9] Nguyễn Diệu Liên Hoa, Phạm Đình Hùng (2015) Hóa học hợp chất tự nhiên, Nhà xuất Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh [10] Nguyễn Đức Hạnh, Nguyễn Minh Đức, Nguyễn Minh Cang (2008) Nghiên cứu hợp chất polyphenol từ Nhân trần tía (Adenosma bracteosum Bonati -Scrophulariaceae), Tạp chí Dược liệu, 13(1), 5-12 81 [11] Hoàng Tuấn (2000) Nghiên cứu hoạt tính chống oxy hố Nhân trần Adenosma caeruleum số dược liệu khác, Luận văn tốt nghiệp Dược sỹ Đại học, Trường Đại học Dược Hà Nội [12] Nguyễn Kim Phi Phụng (2007) Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, Nhà xuất Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh [13] Nguyễn Minh Đức, Nguyễn Hà Thanh Trúc, Võ Duy Huân (1999), “Nghiên cứu cấu trúc hóa học hợp chất có tác dụng sinh học từ Nhân trần tía”, Hội nghị khoa học công nghệ Dược trước thềm kỷ 21, Khoa Dược, tr 23 [14] Phạm Hoàng Hộ (1999) Cây cỏ Việt Nam, Tập Nhà xuất Trẻ, Tp.HCM, 902904 [15] Trần Hùng (2004) Phương pháp nghiên cứu dược liệu Đại học Y Dược TP.HCM [16] Vũ Mạnh Hùng, Bùi Thị Bích Vân (2008) Tác dụng bảo vệ protecliv thực nghiệm, Tạp chí Dược liệu, 13(1), 40-44 Tài liệu nước [17] Abreu, M B., Malafronte, N., Van Kiem, P., Braca, A (2009) A new iridoid from Adenosma caeruleum R Br Fitoterapia, 80(6), 358-360 [18] Adam, G., Porzel, A., Sung, T V., Schmidt, J (1992) A monoterpenoid peroxyde from Adenosma caeruleum Phytochemistry, 31(8), 2885-2887 [19] Adibhatla, R.M., Hatcher, J.F (2010) Lipid oxidation and peroxidation in CNS health and disease: From molecular mechanisms to therapeutic opportunities, Antioxidants Redox Signaling, 12(1), 125 – 169 [20] Awad, A B., Fink C S (2000) Phytosterols as anticancer dietary components: evidence and mechanism of action, The Journal of nutrition,130(9), 2127-2130 [21] Benzie, I F., & Strain, J J (1996) The ferric reducing ability of plasma (FRAP) as a measure of “antioxidant power”: the FRAP assay Analytical biochemistry, 239(1), 7076 [22] Can Baser, K H (2008) Biological and pharmacological activities of carvacrol and carvacrol bearing essential oils Current pharmaceutical , 14(29), 3106-3119 82 [23] Cooke, M.S., Evans, M.D., Dizdaroglu, M., Lunec, J (2003) Oxidative DNA damage: mechanisms, mutation, and disease, The FASEB Journal, 17, 1195 – 1214 [24] De Stefani E, Boffetta P, Ronco AL, Brennan P, Deneo-Pellegrini H, Carzoglio JC et al (2000) Plant sterols and risk of stomach cancer: A case-control study in Uruguay Nutr Cancer 37, 140–144 [25] Denisov, E.T., Afanas’ev, I.B (2005) Oxidation and Antioxidants in Organic Chemistry and Biology, Taylor Francis Group, United State of America [26] Dix, T.A., Hess, K.M., Medina, M.A., Sullivan, R.W., Tilly, S.L., Webb, T.L (1996) Mechanism of site-selective DNA nicking by the hydrodioxyl (perhydroxyl) radical, Biochemistry, 35, 4578 – 4583 [27]., T., Kuete, V (2010) Cameroonian medicinal plants pharmacology and derived natural products Frontiers in pharmacology, 1, 123 [28] Fulda, S (2009) Betulinic acid: a natural product with anticancer activity Molecular nutrition food research, 53(1), 140-146 [29] Gonzalez-Burgos, E., Gomez-Serranillos, M P (2012) Terpenoid compounds in nature: A review of their potential antioxidant activity Current medicinal chemistry, 19(31), 5319-5341 [30] Hostettmann K (1991) Methods in plant biochemistry assay for bioactivity, Academic Press Harcourd Brace Jovanovic Pud.6: tr.142-147 [31] Jovanovic S V and Simic M G (2000) Antioxidants in nutrition, Annals of the New York Academy of Sciences, 899, 326-334 [32] Mendilaharsu M, Stefani ED, Deneo-Pellegrini H, Carzoglio J, Ronco A (1998) Phytosterols and risk of lung cancer: A case-control study in Uruguay Lung Cancer 21, 37–45 [33] Nyunai, N., Njikam, N., Addennebi, E.H., Mbaford, J.T., and Lamnaouer, D (2004) Hypoglycaemic and antihyperglycaemic activity of Ageratum conyzoides L in rats African Journal of Traditional Complementary and Alternative Medicines, (6) 123-130 83 [34] Oadir MI, Malik SA (2008) Plasma lipid profile in gynecologic cancers Eur J Gynaecol Oncol 29, 158–161 [35] Omotayo O Erejuwa (2012) Oxidative Stress in Diabetes Mellitus: Is There a Role for Anti-hyperglycemic Drugs and/or Antioxidants? Oxidative Stress and Diseases, InTech publisher [36] Pham-Huy, L A., He, H., Pham-Huy, C (2008) Free radicals, antioxidants in disease and health Int J Biomed Sci, 4(2), 89-96 [37] Puri, D (2014) Textbook of medical biochemistry Elsevier Health Sciences [38] Rahman, M., Hasan, N., Das, A K., Hossain, T., Jahan, R., Khatun, A.Rahmatullah, M (2011) Effect Of Delonix Regia Leaf Extract On Glucose Tolerance In Glucoseinduced Hyperglycemic Mice African Journal of Traditional, Complementary and Alternative Medicines, 8(1) [39] Safe, S.H., L Prather, P., K Brents, L., Chadalapaka, G., Jutooru, I (2012) Unifying mechanisms of action of the anticancer activities of triterpenoids and synthetic analogs Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry (Formerly Current Medicinal Chemistry-AntiCancer Agents), 12(10), 1211-1220 [40] Shacter, E (2000) Quantification and significance of protein oxidation in biological samples, Drug Metabolism Reviews, 32(34), 307 – 326 [41] Singh N and Rajini P S (2004) Free radical scavenging activity of an aqueous extract of potato peel Food chemistry, 85, 611-616 [42] Trombetta, D., Castelli, F., Sarpietro, M G., Venuti, V., Cristani, M., Daniele, C., Bisignano, G (2005) Mechanisms of antibacterial action of three monoterpenoids Antimicrobial agents and chemotherapy, 49(6), 2474-2478 [43] Tsankova, E T., Kuleva, L V., Thanh, L T (1994) Composition of the Essential Oil of Adenosma bracteosum Bonati Journal of Essential Oil Research, 6(3), 305-306 [44] Umamaheswari M., AsokKumar K., Somasundaram A., Sivashanmugam T (2007) Xanthine oxidase inhibitory activity of some Indian medical plants”, Journal of Ethnopharmacology, 109(3): 547-551 84 [45] Von Gadow A., Joubert E and Hansmann C F., (1997) Comparison of antioxidant activity of aspalanthin with that of orther plant phenols of Rooibos tea (Aspalathus linearis), α-tocopherol, BHT, and BHA, Journal of Agricultural and Food Chemistry 45 632-638 [46] Wallace, K B (Ed.) (1997) Free radical toxicology CRC Press [47] Woyengo, T A., Ramprasath, V R., Jones, P J H (2009) Anticancer effects of phytosterols, European Journal of Clinical Nutrition, 63(7), 813-820 [48] Yadav RN, Agrawala M (2011) Phytochemical analysis of some medicinal plants, J Physiol; 3(12):10–14 [49] Yen G C and Duh P D (1994) Scavenging effect of methanolic extracts of peanut hulls on free radical and active oxygen species, Agricultural and Food Chemistry 42 (3) 629-632 [50] Yoshida, Y., Niki, E (2003) Antioxidant effects of phytosterol and its components Journal of nutritional science and vitaminology, 49(4), 277-280 [51] http://www.chemspider.com/Chemical-Structure.4830171.html?rid=52a31ea8-10214149-b239-8158dee56b0c 85 PHỤ LỤC Phụ lục A – Phổ MS AB3 86 Phụ lục B – Phổ 1H-NMR chất AB3 87 Phụ lục C - Phổ 13C-NMR chất AB3 88 Phụ lục D – Phổ HSQC AB3 89 Phụ lục E – Phổ HMBC AB3 90 Phụ lục F – Sự tương quan nhóm thử AB3 nhóm chứng trắng 91 Phụ lục G - Sự tương quan nhóm thử AB3 nhóm chứng dương ... trần tía  Khảo sát số hoạt tính sinh học Nhân trần tía  Chiết xuất phân lập hợp chất hoá học từ tủa cao cồn Nhân trần tía  Khảo sát hoạt tính sinh học hợp chất tinh khiết từ tủa cao cồn Nhân trần. .. tác dụng dược lý, chưa có nhiều nghiên cứu thành phần hố học Do đề tài ? ?Nghiên cứu hoạt tính sinh học định hướng phân lập hợp chất tinh khiết từ Nhân trần tía (Adenosma bracteosum Bonati.) ứng dụng? ??... thể: - Phân tích sơ thành phần hoá học từ tủa dịch chiết cồn Nhân trần tía - Khảo sát số hoạt tính sinh học Nhân trần tía - Chiết xuất phân lập hợp chất hố học từ tủa cao cồn Nhân trần tía - Khảo