Phân lập các loài vi nấm ký sinh trên nấm linh chi và sử dụng chúng trong đối kháng bệnh hại cây trồng

Phân lập các loài vi nấm ký sinh trên nấm linh chi và sử dụng chúng trong đối kháng bệnh hại cây trồng Phân lập các loài vi nấm ký sinh trên nấm linh chi và sử dụng chúng trong đối kháng bệnh hại cây trồng Phân lập các loài vi nấm ký sinh trên nấm linh chi và sử dụng chúng trong đối kháng bệnh hại cây trồng Phân lập các loài vi nấm ký sinh trên nấm linh chi và sử dụng chúng trong đối kháng bệnh hại cây trồng Phân lập các loài vi nấm ký sinh trên nấm linh chi và sử dụng chúng trong đối kháng bệnh hại cây trồng Phân lập các loài vi nấm ký sinh trên nấm linh chi và sử dụng chúng trong đối kháng bệnh hại cây trồng

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ TRƯỜNG PHÂN LẬP CÁC LOÀI VI NẤM KÝ SINH TRÊN NẤM LINH CHI VÀ SỬ DỤNG CHÚNG TRONG ĐỐI KHÁNG BỆNH HẠI CÂY TRỒNG Mã số: 2013/07-CNSHTPMT Chủ nhiệm đề tài: TS NGUYỄN THỊ HAI Tp Hồ Chí Minh, Tháng Năm 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CƠNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ TRƯỜNG PHÂN LẬP CÁC LOÀI VI NẤM KÝ SINH TRÊN NẤM LINH CHI VÀ SỬ DỤNG CHÚNG TRONG ĐỐI KHÁNG BỆNH HẠI CÂY TRỒNG Mã số: 2013/07-CNSHTPMT Xác nhận Chủ tịch HĐ nghiệm thu Chủ nhiệm đề tài (ký, ghi rõ họ tên) NGUYỄN THỊ HAI Tp Hồ Chí Minh, Tháng Năm 2017 MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ Nấm Linh chi biết đến loài nấm có giá trị sử dụng cao để làm dược liệu sản xuất phổ biến nhiều nước giới Beta glucan chitine thành phần cấu tạo nên thành tế bào nấm Linh chi (Pai-Feng Kao cộng sự, 2012) Tuy nhiên, Kumar cộng (2011) cho biết, trình sinh trưởng, phát triển, nấm Linh chi bị kí sinh nhiều lồi nấm, có lồi nấm thuộc chi Trichoderma Tác giả đánh giá nhóm nấm có triển vọng quản lý bệnh hại trồng Enzyme nhân tố quan trọng giúp Trichoderma có khả công trực tiếp lên nấm Linh chi loài nấm khác.Trong số enzyme tiết từ nấm Trichoderma spp ký sinh nấm linh chi Endochitinase Glucanase 1,3beta-glucosidase đóng vai trị quan trọng hoạt động kí sinh nấm Trichoderma spp (Margolles Clark cộng sự, 1995) Hầu hết vách tế bào nấm bệnh có cấu chitin glucan (Agrios, 2005) Vì vậy, lồi nấm kí sinh nấm Linh chi có khả đối kháng với loài nấm bệnh khác Một số chủng Trichoderma ký sinh nấm linh chi sử dụng để phòng trừ nhiều loài nấm gây bệnh trồng (Stanley Freeman cộng sự, 2004) Cũng giới, nấm Linh chi trồng phổ biến nhiều tỉnh thành Việt Nam Theo Lê Duy Thắng (2001), nấm Linh chi bị số lồi nấm kí sinh gây hại Trong số có nấm Trichoderma lồi gây hại nghiêm trọng nhất, nhóm mốc cơng bịch có tơ ăn đầy, chí tai nấm Linh chi ức chế mạnh lên phát triển tơ nấm Nấm Trichoderma nghiên cứu sử dụng nhiều Việt Nam chủ yếu phân lập từ đất để phịng trừ nấm gây hại trồng có đất (Dương Minh cộng sự, 2005) Việc phân lập nấm Trichoderma từ nấm Linh chi lợi dụng chúng để phòng trừ bệnh hại trồng chưa quan tâm Bên cạnh đó, biện pháp quản lý nấm gây hại loài trồng chủ yếu nhờ vào loại thuốc hóa học chưa có tác nhân sinh học tỏ có hiệu đối kháng với lồi nấm bệnh Vì vậy, việc phân lập lợi dụng chủng nấm kí sinh nấm Linh chi để quản lý số bệnh hại trồng mặt đất khả thi cần thiết Xuất phát từ lý trên, tiến hành đề tài “ Phân lập lồi vi nấm kí sinh nấm Linh chi sử dụng chúng phòng trừ sâu hại trồng” MỤC ĐÍCH NGHIÊN CỨU Phân lập vi nấm kí sinh gây bệnh nấm Linh chi sử dụng chủng có ích để đối kháng nấm gây bệnh trồng MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU − Phân lập nấm kí sinh gây bệnh nấm Linh chi − Xác định khả sinh enzyme ngoại bào (cellulase, chitinase) số chủng nấm có lợi kí sinh nấm linh chi − Xác định khả đối kháng số chủng nấm kí sinh gây bệnh có tiềm với nấm bệnh gây hại trồng điều kiện in vitro NHỮNG NGHIÊN CỨU TRONG VÀ NGỒI NƯỚC CĨ LIÊN QUAN TỚI ĐỀ TÀI 3.1 Giới thiệu nấm Linh chi 3.1.1 Phân loại Nấm Linh chi có khoa học Ganoderma lucidum, thường tìm thấy nước Á Đông Từ xưa đến nay, Trung Quốc, Nhật Bản số nước châu Á khác sử dụng nấm Linh chi loại thảo dược để giúp tăng cường sức khỏe kéo dài tuổi thọ người Đây loại nấm lớn, màu tối, vỏ ngồi nhẵn bóng nhìn giống khúc gỗ… Ở nơi nấm Linh chi gọi nhiều tên khác Reishi (Nhật Bản), Lingzhi (Trung Quốc), Yeongji (Hàn Quốc) LingChih (Đài Loan) Ngoài số tên gọi khác nấm vạn niên (Nhật bản) hay nấm trường sinh (Trung Quốc) Theo sách tiếng mô tả loại dược thảo Trung Quốc, “Shen Nong Ben Cao Jing” (25- 220 trước Công nguyên, thuộc triều đại Đông Hán) “Ben Cao Gang Mil” Li Shi Zhen (1590 trước Cơng ngun, thuộc triều đại nhà Minh), có chủng nấm biết đến thời điểm lúc Trong có 250 loại nấm Linh chi đề cập (Sissi Wachtel-Galor Iris F.F.Benzie, 2011) Nấm Linh chi xuất thân từ loài nấm gỗ mọc hoang thiên nhiên, có hàng trăm lồi khác họ nấm gỗ (Ganodermataceae) Trong đó, chi Ganoderma có đến 80 lồi có màu sắc khác thay đổi từ vàng, cam, đỏ tía đa dạng Vị trí phân loại nấm Linh chi sau: – Giới: Fungi – Ngành: Basidiomycota – Lớp: Agaricomycetes – Bộ: Polyporales – Họ : Ganodermataceae – Chi: Ganoderma – Lồi: Ganoderma lucidum 3.1.2 Hình thái thể nấm Linh chi Theo Nguyễn Lân Dũng (2001), nấm Linh chi loại nấm hóa mộc, cứng khơ tiếp xúc với nước trở nên mềm Quả thể nấm Linh chi gồm: Mũ nấm: mặt thường có lớp bóng màu nâu đỏ, mặt nấm có nhiều lổ nhỏ li ti, quan sinh bào tử cắt ngang có dạng tổ ong Ngồi thiên nhiên, nấm ln có dạng bất đối xứng, tức cuống nấm thường bên vị trí tay quạt Đối với nấm trồng, mũ nấm tròn gần đối xứng, cuống nấm trung tâm trồng theo đơn vị, khơng có chèn ép ảnh hưởng mơi trường bên ngồi Bào tử: hình thuẩn có gai lõm Một đầu trịn lớn, đầu nhỏ có lỗ, nơi bào tử nảy mầm cho khuẩn ty ăn luồn vào thân Bào tử nấm tương tự loại phấn hạt mầm, phát triển thành nấm hồn chỉnh, khác chỗ cấu tạo từ tế bào Đường kính bào tử nấm Linh chi từ – µm So sánh trọng lượng, bào tử nấm Linh chi có dược tính mạnh thể 75 lần, gồm dược chất thiên nhiên triterpenoids, polysaccharides (β - D - glucans), germannium hoạt chất khác Cuống nấm: cuống nấm đặc cứng, sậm màu, bám vào đài vật thân Chân nấm dài ngắn, phận giúp nấm lấy chất dinh dưỡng A B 10 Hình 3.2 Kết giải trình tự rDNA 28s tra cứu BLAST SEARCH chủng T2 Kết giải trình tự gen 28S rRNA tra cứu BLAST SEARCH xác định T1 thuộc loài Trichoderma virens; T2 thuộc loài Trichoderma harzianum với độ tương đồng 98% 99% Dựa nghiên cứu nấm đối kháng Trichoderma, tiến hành khảo sát khả sinh enzyme ngoại bào khả đối kháng với số nấm gây bệnh hại 32 trồng Trichoderma virens (T1) Trichoderma harzianum (T2) ba chủng nấm Trichoderma T3, T4 T5 Bên cạnh chủng nấm trên, nhóm đề tài cịn phân lập chủng nấm ký sinh bịch phôi với đặc điểm đại thể vi thể khác hẳn với chủng nấm kể Nhóm đề tài đặt tên chủng nấm A1 Đặc điểm hình thái chủng nấm A1  Đại thể: Sợi tơ nấm mảnh, lúc đầu màu trắng vàng nhạt nhanh chóng tạo bào tử chuyển sang màu đen Mặt trái tản nấm có màu vàng nhạt Tản nấm sau ngày ni cấy đạt 45 mm (hình 3.5) Mặt trước Mặt sau ngày sau cấy ngày sau cấy ngày sau cấy Hình 3.3 Hình thái đại thể chủng nấm A1 nuôi cấy môi trường PGA  Vi thể: Cuống sinh túi bào tử Bào tử đính hình cầu, khơng có vách ngăn, màu nâu nhạt 33 A B C Hình 3.4 Hình thái vi thể chủng nấm A1 quan sát kính hiển vi vật kính 40X: (A) Cuống sinh bào tử, (B) Túi bào tử, (C) Bào tử Dựa mô tả đặc điểm hình thái chủng nấm A1 cho thấy chủng nấm có đặc điểm đặc trưng chi Aspergillus Nguyễn Đức Lượng cộng (2006) mô tả Ngồi ra, sở mơ tả Eltem et al (2004) Hina Afzal et al (2013) chúng tơi tạm kết luận chủng nấm A1 lồi Aspergillus niger Kết giải trình tự gen 28S rRNA thực BLAST SEARCH từ Ngân hàng gen NCBI thực công ty Nam Khoa Biotek khẳng định chủng A1 thuộc loài Aspergillus niger Như vậy, tai nấm linh chi bịch phôi trồng nấm linh chi phân lập chủng nấm Trichoderma chủng nấm Aspergillus niger Các mẫu nấm tiến hành kiểm chứng tác nhân gây bệnh theo quy tắc Koch điều kiện in vitro Kết cho thấy chủng nấm T 1- T5 nấm ký sinh nấm linh chi chủng Aspergillus niger phát triển mạnh bịch phôi Trên sở này, chọn chủng nấm T1- T5 để tiếp tục nghiên cứu 34 Hình 3.5 Kết giải trình tự 28S rRNA tra cứu BLAST SEARCH chủng nấm A1 5.2 Khảo sát khả sinh trưởng chủng Trichoderma spp Bảng 3.2 Đường kính tản nấm Trichodema spp (cm) sau ngày ni cấy Các chủng Trichoderma T1 T2 T3 T4 T5 Đường kính tản nấm Trichodema spp (cm) sau ngày ni cấy 2NSC 4,40b ± 0,30 8,13a ± 0,06 7,87a ± 0,23 7,57a ± 0,40 8,07a ± 0,06 3NSC 8,07b ± 0,21 8,67a ± 0,15 8,20b ± 0,17 8,63a ± 0,06 8,30b ± 0,10 4NSC 9,00ns 9,00ns 9,00ns 9,00ns 9,00ns 35 Ghi chú: NSC: ngày sau cấy Số liệu tính giá trị trung bình lần lặp lại ± SD cột có chữ theo sau giống khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê với độ tin cậy 99% ns: không khác biệt thống kê α = 1% Sự tăng trưởng nấm tiêu quan trọng để lựa chọn chủng loài VSV ứng dụng tạo chế phẩm sinh học phòng trừ nấm bệnh trồng Kết bảng 3.1 cho thấy chủng Trichoderma kí hiệu T1, T2, T3, T4 T5 phát triển nhanh môi trường PDA Sau ngày nuôi cấy, tản nấm phát triển đầy đĩa với đường kính (cm) Đặc biệt 3NSC, tốc độ tăng tưởng Trichoderma T4 T2 cao T1 T3 T2 T4 T5 Hình 3.6 Hình thái đại thể chủng nấm Trichoderma spp sau ngày nuôi cấy môi trường PDA 5.3 Khảo sát khả sinh enzyme chitinase chủng nấm Trichoderma Đường kinh vòng phân giải (cm) 36 Chủng Hình 3.7 Biểu đồ thể đường kính vịng phân giải chitin chủng Trichoderma (cm) Như ta biết, thành tế bào nấm bệnh có cấu tạo từ chitin glucan Vì để công tiêu diệt nấm bệnh, nấm đối kháng phải có khả sinh enzyme chitinase Đây tiêu quan trọng để tuyển chọn tác nhân phòng trừ nấm bệnh trồng Kết quan sát vòng phân giải chitin chủng Trichoderma T1, T2, T3 T4 T5 trình bày hình 3.8 cho thấy tất chủng Trichoderma khảo sát có khả sinh enzyme chitinase Trong đó, mạnh chủng T2, chủng T4 Đường kính vịng phân giải tương ứng 3,73 cm 2,37 cm; theo Trần Thị Thuần (1996) chủng có hoạt tính enzyme chitinase mạnh mạnh 37 T1 T2 T3 T4 T5 Hình 3.8 Đường kính vịng phân giải chitin năm chủng Trichoderma 5.4 Khảo sát khả sinh enzyme cellulase chủng nấm T1-T5 Kết quan sát đường kính vịng phân giải cellulase nấm Trichoderma hình 3.9 cho thấy, tất chủng Trichoderma khảo sát có khả tổng hợp enzyme cellulase phân giải cellulose Nhưng nhìn chung khả sinh enzyme cellulase chủng Trichoderma khảo sát yếu, đường kính vịng phân giải từ 0,27 đến 1,13 cm 38 T2 T1 T3 T4 T5 Hình 3.9 Đường kính vịng phân giải cellulase năm chủng Trichoderma 39 5.5 Khảo sát hoạt độ enzyme chitinase chủng nấm Trichoderma Hình 3.10 Biểu đồ thể hoạt độ enzyme chitinase chủng Trichoderma T1, T2, T3, T4, T5 Kết xác định hàm lượng enzyme chitinase hình 3.11 cho thấy hoạt độ enzyme chitinase chủng Trichoderma nghiên cứu có xu hướng cao chủng Trichoderma spp Tơ Duy Khương (2007), với hoạt tính enzyme chitinase thu 2,3 U/ml Trong hoạt độ enzyme chitinase chủng Trichoderma T2 mạnh nhất, chủng Trichoderma T4 yếu chủng Trichoderma T1 T3 Kết phù hợp với kết định tính enzyme chitinase hình 3.9 Tiêu chí cuối quan trọng để lựa chọn chủng phòng trừ nấm gây bệnh hại trồng khả đói kháng với loại nấm gây bệnh thực vật Kết trình bày sau: 5.6 Khảo sát khả đối kháng chủng nấm bệnh gây hại trồng điều kiện in vitro 5.6.1 Khả đối kháng với nấm Rhizoctonia solani Khả đối kháng tiêu định yếu tố quan trọng thể hiệu ức chế VSV phịng trừ bệnh hại trồng Như trình bày trên, nấm Rhizoctonia solani nấm ký sinh gây hại nhiều loại trồng Kết khảo sát điều kiện phịng thí nghiệm cho thấy, chủng nấm Trichoderma phân lập có khả ức chế cao nấm Rhizoctonia solani, tỷ lệ ức chế biến động từ 86 – 100% sau ngày nuôi cấy Ở thời điểm này, chủng T2 T4 mọc phủ lên nấm Rhizoctonia solani phân huỷ sợi nấm Rhizoctonia solani Các chủng T1,T3 T5 đến ngày thứ mọc phủ hết đĩa, lấn sang phần nấm bệnh Rhizoctonia solani Như vậy, chủng phân lập có khả đối kháng cao với nấm Rhizoctonia solani Kết tương tự với nhiều nghiên cứu giới Nhiều tác giả giới thử nghiệm khuyến cáo sử dụng nấm Trichoderma để trừ bệnh nấm Rhizoctonia 40 solani gây Zayame et al (2014) cho biết, chủng nấm Trichoderma ức chế 50- 100% phát triển nấm Rhizoctonia solani Các tác giả cho Trichoderma spp tác nhân có triển vọng để phòng trừ nấm Rhizoctonia solani (Abbas et al, 2017; Anees et al, 2011; Ali HH, Taha KK , 2016) Bảng 3.3 Tỷ lệ ức chế chủng nấm Trichoderma nấm Rhizoctonia solani Tỉ lệ (%) ức chế nấm bệnh Nghiệm thức 3NSC 5NSC 7NSC T1 25,38b 65,82b 86,12b T2 48,21a 80,56a 100a T3 23,08b 76,08ab 96,15a T4 41,26a 87,43a 100a T5 30,77b 79,23ab 87,1b 5.6.2 Khả đối kháng với nấm Fusarium solani Tương tự thử nghiệm với nấm Rhizoctonia solani Các chủng nấm phân lập đối kháng mạnh nấm Fusarium Đến ngày sau cấy, tất chủng nấm Trichoderma mọc lấn sang phần nấm Fusarium làm rụi tơ nấm Fusarium Như vậy, chủng nấm tác nhân tiềm để sử dụng trừ nấm Fusarium solani Thử nghiệm điều kiện nhà lưới, Federico et al (2005) cho biết, nấm Trichoderma harzianum có khả khống chế nấm Fusarium tác giả khuyến cáo sử dụng nấm Trichoderma harzianum xử lý hạt giống để trừ bệnh nấm Fusarium solani gây Đánh giá mức độ đối kháng chủng nấm Trichoderma nấm Fusarium gây bệnh trồng, Sundaramoorthy and Balabaskar (2013) cho biết, nấm Trichoderma ức chế đến 53% đường kính nấm bệnh Như vậy, so với kết tác giả, chủng nấm Trichoderma thí nghiệm có xu hướng đối kháng cao 41 Bảng 3.4 Tỷ lệ (%) ức chế chủng Trichoderma spp nấm Fusarium Chủng nấm Tỉ lệ đối kháng (%) sau ngày theo dõi Trichoderma T1 T2 T3 T4 T5 3NSC 5NSC 7NSC 19,53b ± 4,21 71,23ab ± 2,79 94,12 ± 4, 17 29,42a ± 2,11 88,12a ± 2,63 100ns 22,50a ± 2,23 73,21ab ± 2,82 92,87 ± 6,21 29,18a ± 0,17 87,22a ± 4,32 100ns 17,65a ± 2,12 75,31ab ± 1,20 100 5.6.3 Khảo sát khả đối kháng chủng nấm Trichoderma với chủng nấm bệnh Colletotrichum acutatum điều kiện invitro Bảng 3.5 Tỉ lệ đối kháng (%) chủng Trichoderma spp với Colletotrichum acutatum gây bệnh thán thư ớt Chủng nấm Trichoderma T1 T2 T3 T4 T5 Tỉ lệ đối kháng (%) sau ngày theo dõi 3NSC 13,67b ± 5,18 23,84a ± 0,85 25,69a ± 1,35 25,59a ± 5,02 25,64a ± 3,62 5NSC 59,99b ± 2,79 60,59b ± 2,63 64,10ab ± 6,80 67,61ab ± 6,03 70,58a ± 1,20 7NSC 100ns 100ns 95,24ns ± 4,12 97,55ns ± 4,25 100ns Ghi chú: NSC: ngày sau cấy Số liệu tính giá trị trung bình lần lặp lại ± SD cột có chữ theo sau giống khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê với độ tin cậy 99% ns: không khác biệt thống kê α = 1% Tỷ lệ đối kháng chủng Trichoderma khảo sát trình bày bảng 3.4 cho thấy chủng Trichoderma T1, T2, T3, T4 T5 có khả ức chế nấm Colletotrichum acutatum điều kiện invitro Sau ngày nuôi cấy chủng nấm Trichoderma có khả ức chế 100% nấm Colletotrichum acutatum gây bệnh thán thư ớt Trong đó, khả sinh enzyme chitinase chủng Trichoderma T1 T3 yếu so với chủng khác nhiên thể phần trăm đối kháng tương tự chủng Trichoderma T2, T4 T3 Vì ngồi khả sinh enzyme đối kháng nấm bệnh phụ thuộc vào khả tiết kháng sinh, yếu tố học tốc độ tăng trưởng nấm Trichoderma 42 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 6.1 Kết luận Đã phân lập chủng nấm Trichdoderma spp ký sinh nấm linh chi Trong có lồi Trichoderma virens Trichoderma harzianum Đề tài phân lập loài nấm Aspergillus niger ký sinh bịch phôi Cả chủng Trichoderma spp sinh trưởng mạnh, có khả sinh enzyme cellulase chitinase Khả sinh enzyme chitinase chủng cao khả sinh enzyme cellulase Trong điều kiện phịng thí nghiệm, chủng nấm có tỷ lệ ức chế cao phát triển nấm Rhizoctonia solami, Fusarium solani Collectotrichum aculatum 6.2 Kiến nghị Tiếp tục định danh lồi cịn lại khảo sát khả đối kháng nấm chủng Trichoderma nhiều chủng nấm bệnh khác: Pythium, Phytophthora, Sclerotium… Khảo sát khả đối kháng chủng Trichoderma với loài nấm bệnh hại trồng điều kiện in vivo TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT [1] Bùi Xuân Đồng (1982) Nhóm nấm Hyphomycetes Việt Nam, tập 1, NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội [2] Bùi Xuân Đồng, 1982 Vi nấm, NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội [3] Nguyễn Thái Minh Hiếu, 2014 Phân lập loài vi nấm ký sinh nấm Linh chi đánh giá khả đối kháng nấm bệnh gây hại trồng lồi có triển vọng, Đồ án tốt nghiệp chun ngành Công nghệ sinh học, Trường Đại học Công Nghệ Tp Hồ Chí Minh [4] Lê Thị Huệ, 2010 Khảo sát khả sinh tổng hợp enzyme chitinase số chủng nấm sợi thuộc giống Aspergillus, Trichoderma ứng dụng, Luận văn thạc sĩ sinh học, trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh 43 [5] Lê Thị Kim Huyên, 2013 Khảo sát đa dạng di truyền chủng nấm nấm Colletotrichum sp gây bệnh thán thư hại ớt phân bố vùng đồng song Cửu Long, Khóa luận tốt nghiệp chun ngành Cơng nghệ sinh học, Trường Đại học Cần Thơ [6] Tô Duy Khương, 2004 Khảo sát sinh tổng hợp chitinase Trichoderma khả đối kháng với số nấm gây bệnh thực vật, Luận văn thạc sĩ sinh học, trường Đại học Khoa học tự nhiên Thành phố Hồ Chí Minh [7] Nguyễn Đức Lượng, Phan Thị Huyền Nguyễn Ánh Tuyết, 2003 Thí nghiệm cơng nghệ sinh học tập 2, NXB Đại học Quốc gia Tp.HCM [8] Vũ Triệu Mân, 2007 Giáo trình Bệnh chuyên khoa, Chuyên ngành Bảo vệ thực vật, Trường Đại học Nông Nghiệp I, Hà Nội [9] Huỳnh Nhi, 2015 Nghiên cứu phòng trừ bệnh thán thư hại ớt chủng nấm Trichoderma spp phân lập từ nấm linh chi Đồ án tốt nghiệp chuyên ngành Công nghệ sinh học, Trường Đại học Cơng Nghệ Tp Hồ Chí Minh [10] Phạm Đình Quân, 2009 Nghiên cứu bệnh thán thư (Colletotrichum spp.) hại ớt Hải dương vụ Đông Xuân năm 2008 – 2009 biện pháp phòng trừ, Luận văn thạc sĩ nông nghiệp, Đại học Nông Nghiệp Hà Nội [11] Quy chuẩn kỹ thuật Quốc gia khảo nghiệm đồng ruộng hiệu lực phòng trừ bệnh thán thư (Colletotrichum spp.) hại ớt thuốc trừ bệnh (2014), Bộ Nông nghiệp & PTNT ban hành Thông tư số 16/TTBNNPTNT [12] Trần Thị Thanh Thuần, 2009 Nghiên cứu xử lý vỏ cà phê Trichoderma viride Aspergillus niger để sản xuất phân bón hữu bán tổng hợp, Khóa luận tốt nghiệp chun ngành Cơng nghệ sinh học, Trường Đại học Bách Khoa Tp Hồ Chí Minh Trần Thị Thuần, 1996 Kết nghiên cứu bước đầu nấm đối kháng [13] Trichoderma, Tuyển tập cơng trình nghiên cứu bảo vệ thực vật 1990 – 1995, Nxb Hà Nội Nguyễn Cảnh Trí, 2010 Khảo sát đặc điểm sinh học số chủng nấm [14] sợi thuộc hai chi Trichoderma Fusarium từ rừng ngập mặn Cần Giờ - Tp Hồ 44 Chí Minh, Luận văn thạc sĩ sinh học, trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh [15] Trần Đức Vinh, 2010 Xác định số điều kiện nuôi cấy tối ưu nấm Trichoderma harzianum để thu nhận enzyme chitinase, Khóa luận tốt nghiệp chuyên ngành Công nghệ sinh học, Trường Đại học Công nghệ Tp Hồ Chí Minh TÀI LIỆU NƯỚC NGỒI [16] Agrios G.N, 2005 Plant pathology, 5th edition, Elsevier Academic Press: San Diego, California [17] Don ctv, 2007 Trichoderma hamatum: Its hyphal interactions with Rhizoctonia solani and Pythium spp., Microb Ecol 7, pp 28 –29 Francesco Vinale, 2008 Trichoderma–plant–pathogen interactions,Soil [18] Biology & Biochemistry: p 1-10 [19] Gary E Harman, C P Kubicek, 2005 Trichoderma And Gliocladium: Enzymes, Biological Control and commercial applications, Volume 2, This edition published in the Taylor & Francis e-Library [20] Gary J Samuels, 2004 Trichoderma aguide to identification and biology, United States Department of Agriculture Research Service Systematic Botany and Mycology Laboratory 304, B-011A Beltsville, MD 20705-2350, USA Jean Michel Mérillon and Kishan Gopal Ramawat, 2012 Plant Defence: [21] Biological Control Dordrecht New York, Springer [22] Kamala T and S Indira, 2011 Evaluation of indigenous Trichoderma isolates from Manipur as biocontrol agent against Pythium aphanidermatum on common beans Biotech, 1(4): p 217-225 [23] Susanne Zeilinger and Markus Omann, 2007 Trichoderma Biocontrol: Signal [24] Sutton B.C, 1980 The Coelomycetes (Fungi imperfect with picnidia acervuli and stomata), Common wealth my cological institute, Kew, UK Transduction Pathways Involved in Host Sensing and Mycoparasitism, [25] Gene Regul Syst Bio 2007; 1: 227–234 [26] Vinit Kumar Mishra, 2010 In vitro antagonism of Trichjoderma species against Pythium aphanidermatum Phytology, 9: p 28-35 45 Xia Guoquing, Jin Chunsheng, Zhou Ju, 2001 A novel chitinase having a unique mode of actionfrom Aspergillus fumigatus YJ-407, Eur.J.Biochem 268, pp 4079-4085 46 ... CỨU Phân lập vi nấm kí sinh gây bệnh nấm Linh chi sử dụng chủng có ích để đối kháng nấm gây bệnh trồng MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU − Phân lập nấm kí sinh gây bệnh nấm Linh chi − Xác định khả sinh enzyme... số bệnh hại trồng mặt đất khả thi cần thiết Xuất phát từ lý trên, tiến hành đề tài “ Phân lập loài vi nấm kí sinh nấm Linh chi sử dụng chúng phòng trừ sâu hại trồng? ?? MỤC ĐÍCH NGHIÊN CỨU Phân lập. .. DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ TRƯỜNG PHÂN LẬP CÁC LOÀI VI NẤM KÝ SINH TRÊN NẤM LINH CHI VÀ SỬ DỤNG CHÚNG TRONG ĐỐI