Xác định các Protein có tính kháng nguyên của Streptococcus suis serotype 2 bằng phương pháp Immunoproteomics

Xác định các Protein có tính kháng nguyên của Streptococcus suis serotype 2 bằng phương pháp Immunoproteomics Xác định các Protein có tính kháng nguyên của Streptococcus suis serotype 2 bằng phương pháp Immunoproteomics luận văn tốt nghiệp thạc sĩ

XÁC ĐỊNH CÁC PROTEIN CĨ TÍNH KHÁNG NGUN CỦA STREPTOCOCCUS SUIS SEROTYPE BẰNG PHƯƠNG PHÁP IMMUNOPROTEOMICS Tác giả: Nguyên Hồng Bách (Tiến sỹ, Giàng viên Bộ mơn Vi Sinh, Đại học YDược Huếj Giáo viên hướng dẫn: TS Lê Văn An (Giảng viên Bộ môn Vi Sinh, Đại học YDược Huế) GS Alberto A lberti (Đại học Sassarí, Cộng hồ Y) TĨM TẤT Mở đầu: Nhiễm trùng liên cầu lợn người bệnh nhiễm trùng cấp tính với biểu lâm sàng đa dạng bao gồm nhiễm trùng huyết, viêm màng não mủ, viêm nội tâm mạc, viêm khớp Hiện chưa có vaccine phịng bệnh hữu hiệu lợn cà người Nghiên cứu chúng tơi cung cấp liệu protein có tính khống nguyên xốc định phương pháp immunoproteomics Đối tuựng phương pháp: Protein hòa tan tống số củaSS2 phân giải bằngđiện di protein chiều gelacrylamide sàng lọc huyết bệnh nhân nhiễm bệnh western immunoblotting Các protein có tính kháng nguyên nhận biết kỹ thuật immunoblottịng 2-D acrylamide gel định danh kỹ thuật nanoLC-ESI-MS/MS Kết Định danh protein sắc ký/khối phổ: enoỉãse, 60kDA chaperonin, Chaperone protein DnaK and elongation factor Tu Tắt cà protein báo cảo có tính sinh miễn dịch với câc vật chủ khác câc nghiên cứu gần Từ khóa: Nhiễm trùng liên cầu lợn, SS2 SUMMARY IDENTIFICATION ANTIGENIC PROTEINS OF Streptococcus suis serotype BY IMMUNOPROTEOMICS APPROACH Auhtor: Nguyen Hoang Bach (Department o f Microbiology, Hue University o f Medicine and Pharmacy) Supervisor: Dr Le Van An (Department o f Microbiology, Hue University o f Medicine and Pharmacy) Prof Alberto Alberti (University o f Sassari, Italy) Introduction: Streptococcus suis infection in humans is an acute infectious disease with diverse clinical manifestations include septicemia, meningitis, endocarditis, arthritis There are no effective vaccines against SS2 for both swine and humans This study provides data on the antigenic proteins identified by immunoproteomics method Materials and methods: Total soluble protein extracts of SS2 were resolved on 1-D acrylamide gel Patient sera were tested by western blot Immunogenic protein were identified by immunoblotting techniques on 2-D acrylamide gels and identified by nanoLC-ESI-MS/MS Results: proteins have been identified by the data obtained from nanoLC-ESI-MS/MS: enolase, 60kDA chaperonins, Chaperone proteins and elongation factor Tu DnaK In recent studies, all o f proteinsare involved in binding antigens and presenting them to the immune system Keywords: Streptococcus suis infection, SS2 Đ Ặ Ĩ VẮN ĐỀ Nhiễm trùng liên cầu lợn người bệnh nhiễm trùng cấp tính với biểu lâm sàng đa dạng bao gịm nhiễm trùng huyết, viêm màng não mủ, viêm nội tâm mạc, viêm khớp Nhiễm liên cau lợn người phát vào năm 1960 số lượng bệnh nhân nhiễm ngày tăng Bằng kỹ thuật phân lập nuôi cấy thông thường, S.suis gây bệnh (chủ yếu serotype ) phân lập từ bệnh phẩm lâm sàng tiến hành lảm xét nghiệm huyết íhanh học phương pháp reaí-time PCR Kháng nguyên vỏ liên cầu lợn có cấu trúc polysaccharide đặc hiệu, đóng vai trị quan trọng khả gây bệnh cùa vi khuẩn, người ta chia liên cầu lợn thành 35 íỵpe huyết khác dựa vào cấu trúc kháng ngun polysaccharides, íype 1/2 thường phân lập lợn bệnh có khả lây sang người [9], [10] Xác định tính protein có tính kháng ngun vi khuẩn gây bệnh cho người động vật có vai trị quan trọng sinh học y học, nhằm xác định tính chất độc iực gây bệnh chúng, quan trọng sư dụng protein vào làm vaccine, chế tạo sinh phẩm chần đoán huyểt học ELiSA, western blot, sắc ký miễn dịch Các nghiên cứu gần nước phát triển người ta sử dụng kỹ thuật immunoproteomics Phương pháp áp dụng nghiên cứu để tạo vaccine sinh phẩm chẩn đoán với vi khuẩn Mycoplasma mycoides, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus equi ssp Zooepidemicus, Bordetella bronchisepíicav Vibrio parahaemolyticus, Bruceiia meíitensis [4], [15], [16], [19], [21] [25] Nghiên cứu sử dụng kỹ thuật immunoproteomics đề phân tích xác định tính kháng nguyên protein sinh miễn dịch liên cầu !ợn type Kết nghiên cứu làm sở đế có thề đưa protein kháng ngun iàm mơ hình vaccine hay tạo sinh phẩm để chẩn đoán nhiễm trùng liên cầu type người vả động vật ĐÓI TƯỢNG VÀ PHƯỚNG PHÁP NGHIÊN c ứ u Đối tứợng nghiên cứu Chùng Vi khuan: chủng Streptococcus suis serotype phân lập từ dịch não tủy bệnh nhân viêm màng não mũ định danh bằngcảc phương pháp định danh vi sinh vật thường quy phương pháp real-time PCR, cung cấp khoa Vi sinh, Bệnh viện Trung ương Huế [20] Huyết thanh’ Huyết tách từ máu íồn phần bệnh nhân ổã có chẩn đoốn viêm màng não 500 liên cầu lợn sau 1-4 tuần từ bị bệnh Phương pháp nghiên cứu Tách protein hòa tan tổng số SS2 Sinh khối SS2 sau ngày nuôi cấy thang BHI (Brain-Heart Infusion broth) thu nhận ly tâm, dung địch tế bào vi khuẩn đồng xư lý nhiệt siêu âm để thu hoạch protein tồn phần hịa tan íế bàọ bi khuẩn Phân tách điện di chiều SDS-PAGE 5-15 ụg protein tổng số cho vào acrylamide gelvà trình điện di tiến hành hệ thống điện di đứng Gel nhuộm coomassie blue với kit SimpiyBlue™ SafeStain (Life Technologies, Hoa Kỳ) Hình ảnh gel đượcsố hóa hệ thống ImageScanner™ ill (GE, Hoa Kỳ) hay dùng thực Western blot Sàng iọc huyết tích hợp Western Biot Protein tồn phần chùng phân tách kỹ thuật SDS-PAGE lược 1mm chuyển lên màng nitrocellulose Để sàng lọc huyết bệnh nhân, loại huyết ủ với màng độ pha loãng từ 1:500-1:1500 PBS-T có 2% (w/v) sữa tách béo sàng lọc Mini-PROTEAN II Multiscreen Apparatus (Bio-RacCcẢ, Hoa Kỳ), màng với kháng the có gắn enzyme Goat Anti-Human !gG-HRP-conjugated (SouthernBiotech, Alabama, Hoa Kỳ) độ pha loang 1:50.000 PBS-T có 5% (w/v) sữa tách béo Màng làm màu chất huỳnh quang Luminata™ Forte Western HRP substrate (Merck Miilipore Corp., Darmsíadỉ, Đức) tín hiệu màng thu nhận hệ thống ChemỈDoc™ XRS+ Phân tách protein điện di hai chiều (2-D PAGE) 300 ụg protein hòa tan tổng số SS2 hịa tan đệm thủy hóa (6 M Urea; M Thiourea; 4% CHAPS; M DTT) bổ sung 1% SERVALYT™ Carrier Ampholytes pH 3-10 (SERVA Electrophoresis GmbH, Đức) Thủy hóa thụ đọng mẫu vào gel 11 cm pH 3-10 Non-linear SẺRVA IPG BlueStrips (Serva Electrophoresis GmbH, CA, Hoa Kỳ) Protein tập trung theo chiều đẵng điện hệ thống Ettan iPGphor (GE Heathcare, Hoa Kỳ) đến đạt 38,000 Vh.Các protein phân tách chiều thứ hai điện di chiều SDS-PAGE Mãu chạy gel đồng thời, gel nhuộm thuốc nhuộm SimpiyBlue™ SafeStain (Life Technologies, Grand Island, NY, Hoa Kỳ) Thanh gel lại dùng để phân tích western blot theo mơ tả với thay đổi để phù hợp với gel điện di chiều Định danh protein sắc ký lỏng kết nối khối phổ (nanoLC-ESI-MS/MS) Xác định protein kháng nguyên gel điện di chiều cách chồng lấp hình ảnh íín hiệu írong gel phân tích western blot lên hinh ảnh gel từ điện dỉ chiều Các proíeinđược đánh dấu cắỉ khỏi gel Sau thành phần loại màu thuốc nhuộm tiến hành cắt protein thành chuỗi poíypeptide enzyme trypsin Quá trinh thực khối phổ liên tiếp tiến hành hệ thống khối phổ XCT Ultra 6340 bắt ion íheo mơ tả Bossa cs (2014) Dữ liệu khối phổ đưực phân tích mềm Proíeome Discoverer (version 1.4; Thermo Scientific, Bremen, Germany) sử dụng server nội Mascot (version 2.3; Matrix Science) để định danh protein, dựa theo điều kiện: sở liệu UniProtKB/Swiss-Prot (phiên 05-2015), enzyme: trypsin, taxonomy: Streptococcus KẾT QUẢ VÀ BAN LUẬN SDS-PAGE, western ỉm m unoblotting lựa chọn huyết bệnh nhân Theo hình 1, lượng lớn băng protein hoà ỉan tổng số SS2 sau phân tách có khối iượng ỉập trung chủ yếu khoảng 10-100 kDa số lượng vị trí băng protein chủng SS2 tương đồng , 301 KD 2SO - Hỉnh 1: Phổ điện di SDS-PAGE chùng SS2 (iD 262, 286,301) MW: Precision Plus Protein™ All Blue Pre­ stained Protein Standards; Đường 1,3,5: Ịjg protein hoà tan tổng sổ Đường 2,4,6:15 pg protein hoà tan tổng số Nhằm xác định huyết bệnh nhân có lượnp kháng thể cao với protein tồn phần hồ tan, mơi chùng SS2 sang lọc kỹ thuật Western biot với huyết từ cácbệnh nhân nhiễm liên cầu lợn Huyết lấy thời điểm khác (từ 1-4 tuần từ khí bị bệnh) íừ bệnh nhân viêm màng não SS2 bệnh nhân nhiễm N meningitidis, H influenza !àm huyết đối chứng âm Kết sàng lọc huyếỉ western blot hình , đừờng so 10 11 (huỵết đối chứng âm) khơng có tín hiệu nào.Hai huyết íhanh với ID 286, tuần; !D 301, tuần có nhiều băng tín hiệu so với huyết khác.Các huyết trộn lại đùng kháng thể đặc hiệu phân tích western biot diện di chiều 2-D PAGE * / t * 19 íl Hỉnh 2: Hình ảnh western bloỉcùa protein hồ tan tổng số SS2 với 11 huyết bệnh nhân viêm màng não Đường số 1-9: HTbệnh nhân nhiễm SS2 lấy sau 1-3 ỉuần; 10: HT bệnh nhân nhiễm N meningitidis sau tuần; 11: HT bệnh nhân nhiễm H influenza sau tuần 501 Điện di chiều, western immunoblotting protein phân tích sắc ký/khồi phổ cho thấy sắc ký/khốỉ phổ protein định danh lần lượí là: elongation Protein ìồn phần hòa tan chủng SS2 262, factor Tu, enolase, 60 kDa chaperonin, chaperone 286 301 trộn lại phân tách điện di protein DnaK chiều 2-D PAGE gel đồng thời Hình ảnh Các thông sổ trọng lượng phân tử (MW), điểm điện di chiều cho tháy phổ điện di protein phân định danh (identification score), sổ peptide trùng khớp í í _ ì : _ j _ I _ Á _ i i _ £ _ J tách theo điểm đẵng điện (pl) chiếu ổlện di thử nằm khoảng pH 4-7 (hình 3A) gel thứ hai, kết phân tích western blot với kháng thể điểm định danh từ 463-758.4 protein khớp hỗn hợp cùa huyết ỈD 286,4 tuần; ỈD 301, với protein Streptococcus suis chùng 98HAH33 tuần (hình 3B) Theo hỉnh 3B cho thầy có protein protein định danh lè 60 kDa chaperonin cóphức hợp kháng ngun-kháng thể íừ bệnh nhân Streptococcus anginosus có thơng số pl, nhiễm SS2 Các proteĩncó trọng lượng tính theo lượng phân tử (WM) tương đương với s suis 60 thực nghiệm 36, 46,48, 52 67 kDa Năm kĐa chaperonin pH =3 pH KDa o o iiiiiliiS lllil Hình Phổ điện di chiều protein toàn phần s suis (130 mm IPG strip, pH 3-10) kết phân tích western immunoblotting A Gel nhuộm coomassie blue tương tích khối phơ Chuẩn trọng lữợngphân tử bên ỉrái tính kiỉodaỊton B Gel thực song song sử dụng để phân tích western blot (nồng độ pha lỗng huyết 1:1,500) Các cấu từ đánh dấu định danh nanoLC-ESI-MS/MS Peptide đơn Số peptide 18 18 22 607 64,8 4,75 Q8KJ20 16 24 502 58,17 30,74 13 Số amino acid # Prot, Chaperone protein ĐnaK OS=Streptococcus suis (strain 98HAH33) GN=dnaK PÈ=3 sv=1 - [DNAK_STRS2] 60 kDa chaperonin OS=Streptococcus anginosus GN=groL PE=3 s v =1 - [CH60_STRAP] Độ bao phủ 596,39 28,34 20 Điểm định đan A4VZB5 Trọng ỉượng [kĐa] Chúng ước tính khối lượng phân tử điểm đẵng điện pl dựa theo hình ảnh gel điện chiều so sánh với kết phân tích từ liẹu khối phổ Có số khác biẹt aiá trị thực nghiệm va iý thuvết khảo sát khối lượng phân tử protein Trong đó, giá trị pỉ không khác biệt nhiều, khoảng pH 4-5 Điếu khác biệt q trình sau phân giai hậu dịch mã cat vùng alkaline trinh phosphorin hóa gốc amino acid [ 12 ] Định danh protein Từ liệu phân tích khổi phổ chúng tơi xác định protein kháng nguyên nhận biết huyết bệnh nhân bị nhiễm trùng S.suis, gồm enoiase, 60kDA chaperonin, Chaperone protein DnaK and elongation factor Tu (Bảng 1) Tất cá protein nghiên cứu gần xác định có tính sinh miễn dịch động vật nghiên cứu [6], [8], [27] Bảng k ế t định danh thành phần protein cùa s suis serotype nhận diện huyết bệnh nhân nhiễm bệnh tự nhiên sô Mã số Mơ tả TT TI ơì ■£L 540 56,9 4,73 A4W2T1 Enoiase OS=Streptococcus suis (strain 98HAH33) GN=eno PE=3 s v =1 - [ENO_STRS2] 526,26 26,90 14 11 11 16 A4VZZ3 Elongation factor Tu OS=Streptococcus suis (strain 98HAH33) GN=tuf PE=3 sv=2 - [EFTU_STRS2] 463,06 38,94 15 14 14 22 398 44,0 4,98 A4W2T1 Enoiase OS=Streptococcus suis (strain 98HAH33) GN=eno PE=3 sv=1 - [ENO_STRS2] 16 2 Enoiase enzyme chịu trách nhiệm cho trinh tách nước 2-phosphoglycerate (2-PGE) đe chuyển thành phosphoenoipyruvate (PEP) Gần đay, enoláse thừa nhận la protein ỉiên kết với plasminogen (piasminogen-binding protein) kháng nguyên ,bậì liên quan đến độc lực rhột số loài vi khuẩn giống Streptococcus.Enolase nằrntrên bề mặt ỉế bào góp phấn vào bám dính niêm mạc vi khuẩn gây bệnh hỗ trợ xâm nhập vào tế bào vật chủ [6], [7], [13], (22] Dinis vàcs (2009) phát triển vaccine an tồn hiệu qua nhằm phịng bệnh sâu gây Streptococcus sobrinus chuột cách dùng enolase tái tổ hợp Trong nghiên cứu chúng tôi, protein số trùng khớp vơi enolaseS suis serotype Enolase SS2 nhận biết bằnghuyết bệnh nhân mắc bệnh sau 1-3 tuần phân tích western immunoblotting 1-D 2-D gel Feng cs.(2009), Lu cs.(2012)đã xác định gene mã hóa protein enolase SS2 xây dựng hệ thổng biểu protein enolase để sản xuất protein tái tổ hợp Nghiên cứu cho thấy enolase SS2 có tính sinh mỉễn dịch mạnh có vai trị xâm nhiễm vàò tế bào thể vật chủ [8], [18], 60kDA chaperonin (còn biết ià Cpn60, HSP60 hay GroEL) có hầu hết serotype s suis thường đứợc tiét môi trường nuôi cấy [ j 60kĐA chaperonin thuộc nhóm stress protein hay proteins chịu nhiệt (hsps) Dữ liệu khối phổ cho thấy protein số írùng khớp với 60 KDa chaperonin SS2 Trong năm gần đây, hsps xem kháng nguyên mạnh liên quan đến khả sống sóí vi khuẩn thể vật chủ, hay chế gây bệnh vi khuẩn Cainelli Gebara cs (2007) nghiên cửu thành phần hsps hòa tan Bordetella pertussis bổ sung thành phần hsps kháng nguyên với bệnh ho gà hỗn hợp vaccine bạch hầu-ho gà-uốn ván (DPT) Vaccine tạo hàm lượng kháng thể cao, giúp 78% chuột thí nghiệm phìong nhiễm trùng gây nhiễm trùng thực nghiệm với B pertussis sổng [2] Chaperone protein DnaK thành viên họ protein chịu nhiệt (hsps) Nó ià kháng nguyên phổ biến vi khuẩn gây bệnh Protein đứợc bảo tồn mặt di truyền.đóríg vai trò quan trọng gấp cuộn cùa cấu trúc protein, tương tác proteinprotein chế xuyên màng protein [14], [24], [26] Chúng xác định protein số Eà chaperone protein DnaK SS2 Nghiên cứu gần 78,69 5,98 435 47,1 4,77 435 47,1 4,77 Chen cs (2011) báo cáo DnaK liên quan đến bám dínhcủá SS2 lên tế bào HEp-2 [3], [31] Takaya cs (2004) nhận thấy chể hoạt động DnaK/DnaJ chaperone la giúp cho Salmonella enterica serovar Typhimurium xâm nhiễm vào tế bào biểu mơ sống sót chế miễn dịch cùa đại thực bào [23], DnaK ứng viên tốt để tạo vaccine phòng SS2, dựa írên kết nghiên cứu ỜS pneumoniae [11], Mycobacterium tuberculosis [17], s suis [30] Các yếu tố kéo dài (EF) đóng vai trị quan trọng viẹc tổng hợp protein ribosome Elongation factor-Tu (EF-Tu) gián tiếp tham gia vào viẹcđưa aminoacyl ỈRNA vào vị trí trống ribosome trình dịch mã Thành phần protein số phù hợp với SS2 EF-Tu EF-Tu, xác định protein có tính sinh miễn dịch Bacillus cereus [5] and SS2 [28], [29] KẾT LUẬN Nghiên cứu cung cấp liệu protein cố tính kháng nguyên SS2,-được nhận biết huyết bệnh nhân nhiễm liên cầu lợn tự nhiên kỹ thuật western immunobiotting Các protein phân tách kỹ thuật điện di protein chiều định danh kỹ thuật sắc ký khối phổ (nanoLC-ESI-MS/MS) Các protein đếu xác nhận có tính sinh miễn dịch íhể vật chủ khác Một số protein enolase, chaperone protein DnaK, 60kDA chaperonin phát triển thành vaccine tái íổ hợp mơ hình giúp chống lại xâm nhiễm gây bệnh s suis mọt số vi khuẩn khác TÀI LIỆU THAM KHẢO Benkirane R., Gottschalk M G.Dubreuiỉ J D (1997), identification of a Streptococcus suis 60-kDa heatshock protein using western blotting FEMS Microbiol Lett, 153(2), 379-385 Cainelii Gebara V c., Risoleo L., Lopes A p et al (2007), Adjuvant and immunogenic activities of the 73kDa N-terminal alpha-domain of BrkA autotransporter and Cpn60/60kDa chaperonin of Bordetella pertussis Vaccine, 25(4), 621-629 doi: 10.1016/j.vaccine.2006.08.033 Chen B., Zhang A., Xuz et (2011), Large-scale identification of bacteria-host crosstalk by affinity chromatography: capturing the interactions of Streptococcus suis proteins with host cells J Proteome Res, 10(11), 5163-5174 doi: 10.1021/pr200758q Corona L., Cillara G.Tola s (2013), Proteomic approach for identification of immunogenic proteins of 503 Mycoplasma mycoides subsp capri Veterinary Microbiology, 167(3-4), 434-439 doi: http://dx.doi.Org/10.1016/j.vetmic.2013.08.024 Delvecchio V G., Connolly J p., Alefantis T G et (2006), Proteomic profiling and identification of immunodominant spore antigens of Bacillus anthracis, Bacillus cereus, and Bacillus thuringiensis Appi Environ Microbiol, 72(9), 6355-6363 doi: 10.1128/aem.00455-06 Dinis M„ Tavares D., Veiga-Maiìa I et al (2009), Oral therapeutic vaccination with Streptococcus sobrinus recombinant enolase confers protection against dental caries in rats J Infect Dis, 199(1), 116-123 doi: 10.1086/594372 Esgieas M., Li Y-, Hancock M A et af (2008), isolation and characterization of alpha-enoỉase, a novel fibronectin-binding protein from Streptococcus suis Microbiology, 154(Pt 9), 2668-2679 doi: 10.1099/mic.0.2008/017145-0 Feng Y., Pan X., Sun w et al (2009), Streptococcus suis enoiase functions as a protective antigen displayed on the bacterial cell surface J Infect Dis, 200(10), 1583-1592 Gottschalk M., Segura M.Xu J (2007), Streptococcus suis infections in humans: the Chinese experience and the situation in North America Anim Health Res Rev, 8(1), 29-45 10 Haleis A., A!fa M., Gottschalk M et al (2009), Meningitis caused by Streptococcus suis serotype 14, North America Emerg Infect Dis, 15(2), 350-352 11 Hamel J., Martin D.Brodeur B B (1997), Heat shock response of Streptococcus pneumoniae: identification of immunoreactive stress proteins Microb Pathog, 23(1), 11-21 doi: 10.1006/mpat.1996.0124 12 Jing H B., Yuan J., Wang J et (2008), Proteome analysis of Streptococcus suis serotype Proteomics, 8(2), 333-349 dot: 10.1002/pmic.200600930 13 Kolberg J., Aase A., Bergmarm s et al (2006), Streptococcus pneumoniae enolase is important for piasminogen binding despite low abundance of enolase protein on the bacterial ceil surface Microbiology, 152(Pt 5), 1307-1317 dot: 10.1099/mic.0.28747-0 14 Krska J., Elthon T.Bium p (1993), Monoclonal antibody recognition and function of a DnaK (HSP70) epitope found in gram-negative bacteria J Bacteriol, 175(20), 6433-6440; 15 Li c., YeZ., Wen L et al (2014), Identification of a novel vaccine candidate by immunogenic screening of Vibrio parahaemolyticus outer membrane proteins Vaccine, 32(46), 6115-6121 doi: http://dx.doi.Org/10.1016/j.vaccine.2014.08.077 16 Liu Y., Qin F.-y., Bao G.-l et al (2014), Immunoproteomic Analysis of Bordetella bronchiseptica Outer Membrane Proteins and Identification of New Immunogenic Proteins Journal of integrative Agriculture, 13(9), 2010-2018 doi: http://dx.doi.org/10.1016/S20953119(13)60618-8 17 Lowrie D B., Silva c L , Colston M J et (1997), Protection against tuberculosis by a plasmid DNA vaccine Vaccine, 15(8), 834-838 18 Lu Q., Lu H., Qi J et (2012), An octamer of enoiase from Streptococcus suis Protein & Ceil, 3(10), 769-780 doi: 10.1007/S13238-012-2040-7 19 Mao Y.t Fan H.-j., Zhou Y.-h et (2011), immunoproteomic Assay of Antigenic Surface Proteins in Streptococcus equi ssp zooepidetnicus Agricultural Sciences in China, 10(7), 1096-1105 doi: http://dx.doi.Org/10.1016/S1671-2927(11)60099:0 20 Nguyen B H., Phan D H., Nguyen H X et (2015), Molecular diagnostics and ITS-based phylogenic analysis of Streptococcus suis serotype in central Vietnam J Infect Dev ctries, 9(6), 624-630 doi: 10.3855/jidc.7027 21 Olaya-Abril A., Prados-Rosales R., McConnell M J et al (2014), Characterization of protective extracellular membrane-derived vesicles produced by Streptococcus pneumoniae Journal of Proteomics, 106, 46-60 doi: http://dx.doi.org/10.1016/jjprot.2014.04.023 22 Pancholi V (2001), Multifunctional aipha-enolase: its roie in diseases Ceil Mol Life Sci, 58(7), 902-920 23 Takaya A., Tomoyasu T., Matsui H et al (2004), The DnaK/DnaJ chaperone machinery of Salmonella enterica serovar Typhimurium is essential for invasion of epithelial cells and survival within macrophages, leading to systemic infection Infect immun, 72(3), 1364-1373 24 Vanghele M G E (2010), The roie of bacterial molecular chaperones in pathogen survival within the host Rom.J.Biochem., 47(1), 15 25 Yang Y., Wang L., Yin J et al (2011), immunoproteomic analysis of Brucelia meiitensis and identification of a new immunogenic candidate protein for the development of bruceilosis subunit vaccine Molecular Immunology, 49(1-2), 175-184 doi: http://dx.doi.Org/10.1016/j.molimm.2011.08.009 26 Young D., Roman E., Moreno c et (1993), Molecular Chaperones and the immune Response [and Discussion] Philosophical Transactions: Biological Sciences, 339(1289), 363-368 doi: 10.2307/55833 27 Zhang A., Chen B., Mu X et al (2009), identification and characterization of a novel protective antigen, Enoiase of Streptococcus suis serotype Vaccine, 27(9), 1348-1353 doi: 10.1016/j.vaccine,2008.12.047 28 Zhang A., Xie C-, Chen H et al (2008), Identification of immunogenic cell wall-associated proteins of Streptococcus suis serotype Proteomics, 8(17), 3506-3515 doi: 10.1002/pmic.200800007 29 Zhang W.Lu c p (2007), immunoproteomic assay of membrane-associated proteins of Streptococcus suis iype China vaccine strain HA9801 Zoonoses Public Health, 54(6-7), 253-259 doi: 10.1111/J.18632378.2007.01056.x 30 Zhang W.Lu c p (2007), Immunoproteomics of extracellular proteins of Chinese virulent strains of Streptococcus suis type Proteomics, 7(24), 4468-4476 doi: 10.1002/pmic.200700294 31 Zhang X., Jiang X., Yang L et al (2015), DnaJ of Streptococcus suis Type Contributes to Cell Adhesion and Thermotolerance J Microbiol Biotechnol, 25(6), 771781 504 ... 1-D 2- D gel Feng cs. (20 09), Lu cs. (20 12) đã xác định gene mã hóa protein enolase SS2 xây dựng hệ thổng biểu protein enolase để sản xuất protein tái tổ hợp Nghiên cứu cho thấy enolase SS2 có tính. .. quan trọng gấp cuộn cùa cấu trúc protein, tương tác proteinprotein chế xuyên màng protein [14], [24 ], [26 ] Chúng xác định protein số Eà chaperone protein DnaK SS2 Nghiên cứu gần 78,69 5,98 435... với SS2 EF-Tu EF-Tu, xác định protein có tính sinh miễn dịch Bacillus cereus [5] and SS2 [28 ], [29 ] KẾT LUẬN Nghiên cứu cung cấp liệu protein cố tính kháng nguyên SS2,-được nhận biết huyết bệnh