Nghiên cứu phương pháp phân tích nhanh malachite green

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA - PHẠM KIM PHỤNG NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH NHANH MALACHITE GREEN Chuyên ngành: Khoa học công nghệ thực phẩm Mã số ngành: 2.11.00 LUẬN VĂN THẠC SĨ TP HỒ CHÍ MINH, tháng 01 năm 2007 CÔNG TRÌNH ĐƯC HOÀN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HỒ CHÍ MINH *************************** Cán hướng dẫn khoa học: TS TRẦN BÍCH LAM Cán chấm nhận xét 1: GS TS NGUYỄN THỊ KÊ Cán chấm nhận xét 2: TS PHẠM THỊ HUỲNH MAI Luận văn thạc só bảo vệ tại: HỘI ĐỒNG CHẤM BẢO VỆ LUẬN VĂN THẠC SĨ TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA, ngày 27 tháng 01 năm 2007 TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA PHÒNG ĐÀO TẠO SĐH CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM ĐỘC LẬP – TỰ DO – HẠNH PHÚC Tp HCM, ngày 15 tháng 01 năm 2007 NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: PHẠM KIM PHỤNG Phái: Nữ Ngày, tháng, năm sinh: 30 / 09 / 1979 .Nơi sinh: TP.HCM Chuyên ngành: Khoa học Công nghệ thực phẩm MSHV: 01104293 I- TÊN ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH NHANH MALACHITE GREEN II- NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: - Tổng quan MG trạng dư lượng MG ngành thủy sản Việt Nam - Tìm hiểu lý thuyết kỹ thuật phân tích cực phổ - Khảo sát tính phân tích MG thiết bị ANALYZER SQF-505 - Tối ưu hóa điều kiện phân tích – Xây dựng phương pháp - Áp dụng phân tích mẫu nước hồ ni mẫu cá III- NGÀY GIAO NHIỆM VỤ : ngày 06 tháng 02 năm 2006 IV- NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: ngày 15 tháng 01 năm 2007 V- CÁN BỘ HƯỚNG DẪN : TS TRẦN BÍCH LAM CÁN BỘ HƯỚNG DẪN (Học hàm, học vị, họ tên chữ ký) CN BỘ MÔN QL CHUYÊN NGÀNH TS Trần Bích Lam Nội dung đề cương luận văn thạc sĩ Hội đồng chuyên ngành thơng qua TRƯỞNG PHỊNG ĐT – SĐH Ngày tháng năm 2007 TRƯỞNG KHOA QL NGÀNH LỜI CẢM ƠN Trước hết, xin chân thành cảm ơn thầy, cô môn Công nghệ thực phẩm hết lòng giảng dạy cho suốt thời gian vừa qua Đặc biệt cho phép bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến cô Trần Bích Lam tận tình hướng đẫn giúp đỡ hoàn thành luận văn theo cách tốt Tôi xin gửi lời cảm ơn đến: - TS Nguyễn Trọng Giao – chuyên viên khoa học cấp cao – Trung tâm Nhiệt Đới Việt - Nga, chi nhánh phía Nam - Thượng tá, ThS Ngô Chỉnh Quân – trưởng phòng phân tích môi trường Trung tâm Nhiệt Đới Việt - Nga, chi nhánh phía Nam - TS Cù Thành Sơn, KS Ngô Hữu Thắng anh chị làm việc phòng phân tích môi trường - Trung tâm Nhiệt Đới Việt - Nga, chi nhánh phía Nam - Các cô anh chị làm việc khoa xét nghiệm trung tâm – Viện Vệ Sinh Y Tế Công Cộng - KS Bùi Văn Thìn anh chị làm việc Phòng sinh hóa, Phân Viện Công Nghệ Sau Thu Hoạch Đã giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho thời gian thực luận văn Sau cùng, xin gửi lời chúc sức khỏe đến tất thầy cô anh chị Đại học Bách Khoa, tháng 01/2007 Phạm Kim Phụng ABSTRACT Malachite green (MG) belongs to group of triphenyl methane dyes that exhibits anti-microbial and anti-parasitic properties MG acts as a respiratory poison and damages the cells ability to produce energy to drive vital metabolic processes It is commonly used in the aquaculture industry to treat Saprolegnia (fungus) either when present on the fish or as a prophylactic treatment to protect fish eggs from infection When it breaks down, it forms a derivative called leucomalachite green (LMG) that is believed to persist in the muscle tissue of the fish Both MG and LMG have carcinogenic properties In this work, ANALYZER SQF-505 with Square Wave Polarography technique, made in Vietnam, was using to study the method for the quantitative determination of malachite green LMG was quantitatively oxidized to the chromic MG by reaction with lead (IV) oxide (PbO2) at pH 4.5 The application was simple In cat fish: MG and LMG residues were extracted from cat fish tissue with ammonium acetate buffer then were cleaned-up by solid phase extraction with RP-18e Extracts were analyzed for MG by ANALYZER SQF-505 with 43,101 ppb limit of detection In aquaculture: infected fish farm’s water was filtered preliminarily, then MG and LMG were detected directly by ANALYZER SQF-505 at the method detection limit of 10,254 ppb MUÏC LUÏC DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT LỜI NÓI ĐẦU CHƯƠNG I: TỔNG QUAN I.1 Malachite green .1 I.1.1 Tính chất vật lý malachite green I.1.2 Các dạng tồn taïi I.1.2.1 Daïng carbinol malachite green .2 I.1.2.2 Daïng leuco malachite green I.1.3 Tính chất hóa học cuûa malachite green .1 I.1.4 Tính chất sinh học I.1.4.1 Khả kháng nấm ký sinh trùng I.1.4.2 Sự hấp thu chuyển hóa MG thể I.1.5 Độc tính malachite green hàm lượng cho phép I.1.6 Tình hình sử dụng Malachite green ngành nuôi trồng chế biến thủy hải sản .7 I.1.7 Biện pháp kiểm soát dư lượng malachite green ngành thủy sản Việt Nam .8 I.2 Các phương pháp phân tích malachite green .9 I.2.1 Phương pháp ELISA .9 I.2.1.1 Nguyên tắc chung I.2.1.2 Ứng dụng phân tích Malachite green: .10 I.2.1.3 Ưu nhược điểm phương pháp 10 I.2.2 Phân tích định lượng HPLC – UV/Vis 11 I.2.2.1 Nguyên tắc chung .11 I.2.2.2 Ứng dụng phân tích Malachite green .11 I.2.2.3 Ưu nhược điểm phương pháp 11 I.2.3 Phân tích định lượng LC – MS/MS 12 I.2.3.1 Nguyên tắc chung .12 I.2.3.2 Ứng dụng phân tích Malachite green .12 I.2.3.3 Ưu nhược điểm phương pháp 13 I.3 Cơ sở lý thuyết phương pháp cực phổ 14 I.3.1 Phương pháp cực phổ cổ điển hạn chế .14 I.3.1.1 Nguyên tắc 14 I.3.1.2 Các phản ứng cản trở điện cực 16 I.3.1.3 Hạn chế phương pháp cực phổ cổ điển 16 I.3.2 Phương pháp cực phổ xung vi phân - Differential Pulse Polarography (DDP) 17 I.3.2.1 Nguyên tắc 17 I.3.2.2 Öu nhược điểm .19 I.3.3 Phương pháp cực phổ sóng vuông – Square wave polarography .19 I.3.3.1 Các loại phổ sóng vuông – Ưu nhược điểm loại 20 I.3.4 Phương pháp cực phổ sóng vuông quét nhanh - Volt-Ampe hòa tan 24 I.3.5 Ứng dụng kỹ thuật cực phổ phân tích vết 25 I.3.5.1 Các hợp chất vô 25 I.3.5.2 Các hợp chất hữu 25 I.3.5.3 Trong phaân tích Malachite green 26 I.3.5.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến phương pháp 26 CHƯƠNG II: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 II.1 II.1.1 II.1.2 II.1.3 II.1.4 Nguyên vật lieäu 28 Dụng cụ thiết bị sử dụng nghiên cứu .28 Hóa chất sử dụng 28 Mẫu vật 29 Nơi tiến hành nghiên cứu 29 II.2 Phương pháp nghiên cứu theo kỹ thuật cực phổ 30 II.2.1 Sơ đồ nghiên cứu 30 II.2.2 Tiến hành thực nghieäm 31 II.2.2.1.Khảo sát lựa chọn dung dịch neàn 31 II.2.2.2.Khảo sát yếu tố vận hành máy phân tích điện hóa SQF – 505 chế độ SQW_F đến khả phát MG 33 II.2.2.3.Xây dựng đường chuẩn MG 36 II.2.2.4.Khảo sát ảnh hưởng ion khác 37 II.2.2.5.Khảo sát quy trình oxi hóa LMG thành MG .37 II.2.2.6.Xác định MG mẫu nước 38 II.2.2.7.Xaùc định MG mẫu rắn sản phẩm thủy sản 40 II.2.2.8.Xử lý đánh giá kết 44 CHƯƠNG III: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUAÄN 47 III.1 Khảo sát qui trình xác định MG kỹ thuật sóng vuông quét nhanh kỹ thuật stripping nhanh cực giọt động .47 III.1.1 Khảo sát ảnh hưởng dung dịch .47 III.1.1.1 Ảnh hưởng chất 47 III.1.1.2 Ảnh hưởng nồng độ amoni acetate .48 III.1.1.3 Ảnh hưởng từ pH dung dịch amoni acetate .50 III.1.2 Khảo sát chế độ chạy máy chế độ sóng vuông quét nhanh cực treo phát triển (SQW_F) .52 III.1.2.1 Khảo sát bắt đầu kết thúc .52 III.1.2.2 Khảo sát thông số chạy máy 53 III.1.3 Khaûo sát chế độ chạy máy chế độ kỹ thuật stripping nhanh (PSA_F): .57 III.1.3.1 Khảo sát bắt đầu kết thúc: 57 III.1.3.2 Khảo sát thông số chạy máy 58 III.1.4 So sánh độ nhạy kỹ thuật sóng vuông quét nhanh kỹ thuật stripping nhanh phân tích MG .63 III.2 Xây dựng đường chuẩn xác định MG 64 III.2.1 Xây dựng đường chuẩn xác địng MG kỹ thuật sóng vuông quét nhanh cực treo phát triển 64 III.2.2 Xây dựng đường chuẩn xác địng MG kỹ thuật stripping nhanh: 65 III.3 III.3.1 III.3.2 III.3.3 III.3.4 III.3.5 III.3.6 Khảo sát ảnh hưởng số chất trình phân tích loại mẫu 66 Ảnh hưởng ion Fe3+ .66 Ảnh hưởng ion Cu2+ 67 Ảnh hưởng ion K+ 68 Ảnh hưởng ion Mn2+ 69 AÛnh hưởng ion Ca2+: .70 Ảnh hưởng ion Mg2+: 70 III.4 Khảo sát phản ứng oxi hoá LMG thành MG chì (IV) oxit 71 III.4.1 Khảo sát pH môi trường phản ứng 72 III.4.2 Hiệu suất phản ứng chuyển hoá 73 III.5 III.5.1 III.5.2 III.5.3 Phân tích MG môi trường nước máy ANALYZER SQF-505 74 Xác định MG mẫu kiểm soát .74 So sánh với phương pháp phân tích sắc ký lỏng 75 Xác định MG mẫu thật 76 III.6 III.6.1 III.6.2 III.6.3 Phân tích MG sản phẩm thủy sản máy ANALYZER SQF-505 .78 Xây dựng đường chuẩn xác định MG mẫu cá .78 Hiệu suất trình ly trích 80 Phân tích mẫu thật so sánh với phương pháp phân tích HPLC: 82 CHƯƠNG IV: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 85 IV.1 IV.1.1 IV.1.2 IV.1.3 IV.1.4 Kết luận .85 Điều kiện vận hành máy .85 Áp dụng xác định MG mẫu nước hồ 85 Xác định MG mẫu cá 86 Kết kuận 88 IV.2 Kiến nghị .88 PHỤ LỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO LÝ LỊCH TRÍCH NGANG DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng III-1 Phổ sóng vuông MG dung dịch khảo sát 47 Bảng III-2 Phổ sóng vuông MG dd CH3COONH4 với nồng độ khác 48 Bảng III-3 Phổ sóng vuông MG dd CH3COONH4 với pH khác nhau.50 Bảng III-4 Phổ sóng vuông MG dd CH3COONH4 với chiều quét khác 52 Bảng III-5 Sự phụ thuộc cường độ dòng vào Vpulse,Vstep Tdrop = 5000ms 53 Bảng III-6 Sự phụ thuộc cường độ dòng vào Vpulse,Vstep Tdrop =4000ms 53 Bảng III-7 Sự phụ thuộc cường độ dòng vào Vpulse,Vstep Tdrop =3000ms 53 Bảng III-8 Phổ sóng vuông MG dd CH3COONH4 với chế độ quét khác 57 Bảng III-9 Sự phụ thuộc cường độ dòng vào Ve Te Tdrop= 5000m s 59 Bảng III-10 Sự phụ thuộc cường độ dòng vào Ve Te Tdrop= 4000m s 59 Bảng III-11 Sự phụ thuộc cường độ dòng vào Ve Te Tdrop= 3000ms .59 Bảng III-12 Phổ sóng vuông MG với chế độ SQW_F PSA_F 63 Bảng III-13 Phổ sóng vuông MG dd CH3COONH4, chế độ SQW_F, với nồng độ MG khác 64 Bảng III-14 Phổ sóng vuông MG dd CH3COONH4, chế độ PSA_F, với nồng độ MG khác 65 Bảng III-15 Phổ sóng vuông MG có mặt ion Fe3+ 66 Bảng III-16 Phổ sóng vuông MG có mặt ion Cu2+ .67 Bảng III-17 Phổ sóng vuông MG có mặt ion K+ 68 Bảng III-18 Phổ sóng vuông MG có mặt ion Mn2+ 69 Bảng III-19 Phổ sóng vuông MG có mặt ion Ca2+ .70 Bảng III-20 Phổ sóng vuông MG có mặt ion Mg2+ 71 Bảng III-21 Phổ sóng vuông MG dd CH3COONH4 72 Bảng III-22 Sóng phổ MG thu sau trình Oxi hóa 73 Bảng III-23 Sóng phổ MG mẫu MG kiểm soát .74 Bảng III-24 Sóng phổ MG mẫu nước nuôi tôm nồng độ, lần 76 Bảng III-25 Sóng phổ MG mẫu nước nuôi tôm nồng độ, lần 77 Bảng III-26 Phổ sóng vuông MG mẫu cá với nồng độ khác 79 Bảng III-27 Sóng phổ MG sau trình xử lý mẫu 80 Bảng III-28 Kết phân tích MG mẫu cá phương pháp cực phổ phương pháp LC-MS/MS .82 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình I-1 Cấu trúc phân tử malachite green .1 Hình I-2 Cấu trúc phân tử Carbinol Hình I-3 Cấu trúc phân tử leuco malachite green .2 Hình I-4 Đồ thị biểu diễn nồng độ cation MG cân pH khác theo thời gian Hình I-5 Đồ thị biểu diễn nồng độ cân MG+/MG-OH nước theo thời gian Hình I-6 Chu trình biến đổi quang hóa MG Hình I-7 Sơ đồ nguyên tắc hoạt động thiết bị phân tích LC-MS/MS .12 Hình I-8 Mối quan hệ dòng điện hiệu điện đặt lên điện cực làm việc 14 Hình I-9 Đường chuẩn số điều kiện chạy máy .15 Hình I-10 Dạng điện áp phân cực phương pháp DPP 17 Hình I-11 Dòng đáp ứng cho phản ứng thuận nghịch theo tín hiệu kích thích cực phổ sóng vuông .20 Hình I-12 Nguyên lý đo dòng cực phổ sóng vuông cực giọt thủy ngân tónh 22 Hình I-13 Nguyên lý đo dòng kỹ thuật sóng vuông quét nhanh cực treo phát triển 23 Hình I-14 Phản ứng điện hóa MG điện cực 26 Hình III-1 Sóng phổ MG khác .47 Hình III-2 Sóng phổ MG CH3COONH4 nồng độ khác 48 Hình III-3 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc cường độ dòng vào nồng độ 49 Hình III-4 Sóng phổ MG CH3COONH4 0,05M pH khác 50 Hình III-5 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc cường độ dòng vào pH 51 Hình III-6 Sóng phổ MG chế độ quét khác 52 Hình III-7 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc cường độ dòng I vào Vpulse Vstep Tdrop = 5000ms 54 Hình III-8 Đồ thị biểu diễn phu ï thuộc cường độ dòng I vaøo Vpulse & Vstep Tdrop = 4000ms 54 Hình III-9 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc cường độ dòng I vào Vpulse & Vstep Tdrop = 3000ms 54 Hình III-10 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc cường độ dòng I vào Vstep & Tdrop Vpulse = 40mV .55 Hình III-11 Sóng phổ MG theo Vpulse chế độ Vstep = 4, Tdrop= 5000ms 56 Hình III-12 Sóng phổ MG theo Vstep chế độ Vpulse =40, Tdrop=5000ms .56 Hình III-13 Sóng phổ MG theo Tdrop chế độ Vpulse = 40, Vstep= .57 Hình III-14 Sóng phổ MG với khoảng chiều quét khác 58 Phuï luïc Phuï luïc 8: Kết phân tích MG dung dịch CH3COONH4 nồng độ khác Dung dịch CH3COONH4 1M CH3COONH4 0,5M CH3COONH4 0,2M CH3COONH4 0,1M CH3COONH4 0,05M CH3COONH4 0,01M I (nA) Laàn Laàn 681,6 678,6 767,8 769,2 988,9 987,6 1258 1254 1352 1347 442,1 441,4 Laàn 677,4 770,2 989,9 1259 1352 432,2 RSD (%) 0,32 0,16 0,12 0,21 0,21 1,26 TB 679,2 769,1 988,8 1257 1351 438,6 E1/2 (mV) -1166 -1178 -1202 -1220 -1232 -1286 Phuï lục 9: Kết phân tích MG dung dịch CH3COONH4 pH khác Lần Lần Laàn TB RSD (%) CH3COONH4 0,05M; pH=4,0 - - - - - - CH3COONH4 0,05M; pH=4,5 - - - - - - CH3COONH4 0,05M; pH=5,2 - - - - - - CH3COONH4 0,05M; pH=6,0 1047 1018 1017 1027 1,66 -1220 CH3COONH4 0,05M; pH=6,9 1167 1166 1155 1163 0,57 -1228 CH3COONH4 0,05M; pH=7,4 1011 1013 994,1 1006 1,03 -1220 CH3COONH4 0,05M; pH=8,0 951,3 952,5 951,4 951,7 0,07 -1216 CH3COONH4 0,05M; pH=8,5 859,8 859,8 859,3 859,3 0,03 -1216 CH3COONH4 0,05M; pH=9,0 767,5 765,4 768,1 767 0,18 -1216 CH3COONH4 0,05M; pH=9,5 729,8 727,4 725,4 726,7 0,30 -1220 I (nA) Dung dịch E1/2 (mV) Phụ lục 10: Kết phân tích MG phụ thuộc vào Vpulse, Vstep Tdrop = 5000ms Vpulse, mV Vstep = 2mV 10 20 30 40 Laàn - I (nA) Laàn Laàn - TB - RSD (%) - E1/2 (mV) Trang 100 Phuï luïc Vpulse, mV Vstep = 4mV 10 20 30 40 Vpulse, mV Vstep = 6mV 10 20 30 40 Vpulse, mV Vstep = 8mV 10 20 30 40 Vpulse, mV Vstep = 10mV 10 20 30 40 Laàn 71,86 279,6 1000 1174 I (nA) Laàn Laàn 72,46 69,87 280,5 281,3 998 1010 1164 1160 Laàn 65,83 235,8 808,3 945,3 I (nA) Laàn Laàn 65,28 66,07 233,7 227,9 793,5 803,3 941,5 944,4 Laàn 64,52 213,9 682,3 779,5 I (nA) Laàn Laàn 63,92 64,22 213,2 210,6 687,3 683,7 755,5 777,8 Laàn 54,74 181,1 548,3 643,6 I (nA) Laàn Laàn 54,52 55,42 182,7 179,1 560 541,9 649,2 648,9 TB 71,39 280,5 1003 1166 RSD (%) 1,90 0,30 0,64 0,62 E1/2 (mV) -1240 -1232 -1232 -1228 TB 65,73 232,5 801,7 943,7 RSD (%) 0,62 1,76 0,94 0,21 E1/2 (mV) -1240 -1234 -1240 -1234 TB 64,22 212,6 684,4 770,9 RSD (%) 0,47 0,82 0,38 1,74 E1/2 (mV) -1244 -1236 -1244 -1236 TB 54,89 180,9 550,1 647,2 RSD (%) 0,85 1,00 1,67 0,49 E1/2 (mV) -1236 -1236 -1236 -1236 Phụ lục 11: Kết phân tích MG phụ thuộc vào Vpulse, Vstep Tdrop = 4000ms Vpulse, mV Vstep = 2mV 10 20 30 40 Laàn - I (nA) Laàn Laàn - TB - RSD (%) - E1/2 (mV) - Trang 101 Phuï luïc Vpulse, mV Vstep = 4mV 10 20 30 40 Vpulse, mV Vstep = 6mV 10 20 30 40 Vpulse, mV Vstep = 8mV 10 20 30 40 Vpulse, mV Vstep = 10mV 10 20 30 40 Laàn 69,22 314,3 836 1094 I (nA) Laàn Laàn 69,12 69,25 312,7 315,8 837,6 840,3 1091 1095 Laàn 68,14 280,1 625,1 907,1 I (nA) Laàn Laàn 67,58 67,69 281,8 278,2 628,1 628,5 911,6 903,8 Laàn 78,4 266,3 546,6 792,5 I (nA) Laàn Laàn 78,46 78,05 267,5 262,6 547,4 546,8 796,9 786,4 Laàn 74,45 241,5 460 680,5 I (nA) Laàn Laàn 74,91 73,33 242,8 242,2 464 463,5 676 674,8 TB 69,2 314,3 838 1093 RSD (%) 0,10 0,49 0,26 0,19 E1/2 (mV) -1240 -1236 -1232 -1232 TB 67,73 280 627,2 907,5 RSD (%) 0,44 0,64 0,30 0,43 E1/2 (mV) -1246 -1240 -1234 -1234 TB 78,3 265,5 546,9 792 RSD (%) 0,28 0,96 0,08 0,67 E1/2 (mV) -1244 -1244 -1236 -1236 TB 74,23 242,1 462,5 677,1 RSD (%) 1,09 0,27 0,47 0,44 E1/2 (mV) -1246 -1246 -1236 -1236 Phụ lục 12: Kết phân tích MG phụ thuộc vào Vpulse, Vstep Tdrop = 3000ms Vpulse, mV Vstep = 2mV 10 20 30 40 Laàn - I (nA) Laàn Laàn - TB - RSD (%) - E1/2 (mV) - Trang 102 Phuï luïc Vpulse, mV Vstep = 4mV 10 20 30 40 Vpulse, mV Vstep = 6mV 10 20 30 40 Vpulse, mV Vstep = 8mV 10 20 30 40 Vpulse, mV Vstep = 10mV 10 20 30 40 Laàn 60,98 271 717,2 838,5 I (nA) Laàn Laàn 59,33 59,15 272,7 268,8 720,7 710,8 854,5 850,8 Laàn 61,19 244,4 551,5 681,0 I (nA) Laàn Laàn 61,09 61,7 237,2 234,1 548,2 541,3 683,4 679,4 Laàn 68,3 224,5 455,1 600,6 I (nA) Laàn Laàn 68,3 67,66 223,5 224,4 454,5 449,9 605,7 603,2 Laàn 65,66 216,3 399,8 507,6 I (nA) Laàn Laàn 64,45 64,94 212,5 212,7 387,9 382,3 511,7 503,4 TB 59,79 270,8 716,2 848 RSD (%) 1,69 0,72 0,70 0,99 E1/2 (mV) -1236 -1236 -1232 -1232 TB 61,28 238,6 547 681,3 RSD (%) 0,53 2,22 0,95 0,30 E1/2 (mV) -1240 -1240 -1234 -1234 TB 68,09 224,1 453,2 603,2 RSD (%) 0,54 0,25 0,63 0,42 E1/2 (mV) -1244 -1244 -1236 -1244 TB 65,02 213,9 390,0 507,6 RSD (%) 0,94 1,00 2,29 0,82 E1/2 (mV) -1246 -1246 -1236 -1246 Phuï luïc 13: Kết phân tích MG phụ thuộc vào Ve, Te Tdrop = 5000ms Telectrolize= 3s Velectrolize, mV -2000 -1500 -1000 -500 200 Laàn 818,3 1048 667,0 782,3 1428 I (nA) Laàn Laàn 816,2 813,6 1048 1048 674,1 671,9 767,7 762,5 1573 1157 TB 816,1 1048 671,0 770,8 1386 RSD (%) 0,29 0,00 0,54 1,33 15,23 E1/2 (mV) -1228 -1220 -1228 -1236 -1232 Trang 103 Phuï luïc Telectrolize= 4s Velectrolize, mV -2000 -1500 -1000 -500 200 Telectrolize= 5s Velectrolize, mV -2000 -1500 -1000 -500 200 Telectrolize= 6s Velectrolize, mV -2000 -1500 -1000 -500 200 Laàn 854,2 1214 836,1 881,7 1327 I (nA) Laàn Laàn 851,2 856,7 1207 1201 835,3 826,5 861,7 859,8 1127 1223 Laàn 880,8 1365 975,6 956,5 1559 I (nA) Laàn Laàn 877,9 879,9 1352 1357 979,7 979,2 952,8 950,9 1281 1233 Laàn 924,3 1480 1085 1103 1535 I (nA) Laàn Laàn 922,6 922,1 1478 1480 1068 1072 1103 1066 1698 1281 TB 852,9 1207 832,6 867,7 1159 RSD (%) 0,32 0,54 0,64 1,40 8,16 E1/2 (mV) -1224 -1216 -1228 -1236 -1232 TB 879,5 1358 978,1 953,4 1265 RSD (%) 0,17 0,48 0,23 0,30 12,96 E1/2 (mV) -1224 -1216 -1228 -1236 -1232 TB 923,0 1480 1075 1090 1597 RSD (%) 0,12 0,08 0,83 1,96 13,97 E1/2 (mV) -1224 -1216 -1228 -1232 -1232 Phụ lục 14: Kết phân tích MG phụ thuộc vaøo Ve, Te Tdrop = 4000ms Telectrolize= 3s Velectrolize, mV -2000 -1500 -1000 -500 200 Laàn 553,4 796,8 748,5 707,1 931,6 I (nA) Laàn Laàn 551,4 552,4 800,6 790,7 749,6 744 708,3 704,5 1098 932,2 TB 552,4 799,0 747,4 708,8 987,2 RSD (%) 0,18 0,63 0,40 0,27 9,71 E1/2 (mV) -1236 -1236 -1232 -1236 -1236 Trang 104 Phuï luïc Telectrolize= 4s Velectrolize, mV -2000 -1500 -1000 -500 200 Telectrolize= 5s Velectrolize, mV -2000 -1500 -1000 -500 200 Telectrolize= 6s Velectrolize, mV -2000 -1500 -1000 -500 200 Laàn 609,5 928,1 891,8 772,9 1254 I (nA) Laàn Laàn 617,2 609,0 914,8 915,2 876,0 876,0 771,8 776,3 1110 1202 Laàn 678,0 1046 987,4 839,4 1266 I (nA) Laàn Laàn 685,3 665,4 1035 1037 975,2 988,8 834,7 838,3 1179 1026 Laàn 711,1 1165 1089 889,6 970,2 I (nA) Laàn Laàn 699,9 704,6 1153 1147 1090 1079 890,4 890,1 1096 1243 TB 611,9 919,4 881,3 773,7 1164 RSD (%) 0,75 0,82 1,04 0,30 6,13 E1/2 (mV) -1232 -1236 -1228 -1236 -1236 TB 676,3 1039 983,8 837,5 1182 RSD (%) 1,49 0,56 0,76 0,29 10,50 E1/2 (mV) -1232 -1236 -1228 -1236 -1236 TB 705,2 1155 1086 889,1 1103 RSD (%) 0,80 0,79 0,56 0,05 12,38 E1/2 (mV) -1232 -1236 -1224 -1236 -1236 Phụ lục 15: Kết phân tích MG phụ thuộc vào Ve, Te Tdrop = 3000ms Telectrolize= 3s Velectrolize, mV -2000 -1500 -1000 -500 200 Laàn 522,6 729,3 95,69 578,6 834,5 I (nA) Laàn Laàn 508,8 515,7 688,4 675,8 96,69 98,54 554,0 551,7 713,7 762,0 TB 515,7 697,8 96,98 561,5 770,1 RSD (%) 1,34 4,01 1,49 2,66 7,90 E1/2 (mV) -1228 -1224 -1244 -1232 -1232 Trang 105 Phuï luïc Telectrolize= 4s Velectrolize, mV -2000 -1500 -1000 -500 200 Telectrolize= 5s Velectrolize, mV -2000 -1500 -1000 -500 200 Telectrolize= 6s Velectrolize, mV -2000 -1500 -1000 -500 200 Laàn 570,3 788,2 80,33 599,4 1227 I (nA) Laàn Laàn 570,6 571,2 774,5 791,0 80,12 80,08 586,2 596,9 1084 834,5 Laàn 606,6 902,7 75,61 635,4 935,8 I (nA) Laàn Laàn 594,4 607,9 900,9 895,5 73,90 75,47 634,2 637,7 855,6 770,1 Laàn 611,2 979,7 661,2 933,8 I (nA) Laàn Laàn 609,8 605,9 973,8 984,5 659,7 664,3 769,2 666,9 TB 570,7 784,6 80,18 594,1 1046 RSD (%) 0,08 1,13 0,17 1,18 18,95 E1/2 (mV) -1228 -1224 -1244 -1232 -1228 TB 603,0 899,7 74,39 635,7 853,8 RSD (%) 1,24 0,42 1,27 0,28 9,70 E1/2 (mV) -1228 -1220 -1244 -1232 -1232 TB 609,0 979,3 661,7 790,0 RSD (%) 0,45 0,55 0,35 17,05 E1/2 (mV) -1224 -1220 -1232 -1236 Phụ lục 16: Kết phân tích MG tạo thành phụ thuộc vào pH môi trường oxi hóa LMG pH 3,1 4,0 4,4 5,0 6,9 Laàn 2 2 Laàn 193,7 208,9 302,3 280,4 360,4 376,6 139,7 135,0 70,39 84,66 I (nA) Laàn Laàn 194,6 197,5 211,8 210,0 301,1 297,9 272,2 276,6 358,8 357,4 374,6 381,3 143,0 145,9 132,0 136,6 71,0 70,26 84,87 83,6 TB 195,2 210,2 300,4 276,4 358,9 377,5 142,8 134,5 70,55 84,38 RSD (%) 1,02 0,70 0,76 1,48 0,42 0,91 2,17 1,74 0,56 0,81 E1/2 (mV) -1232 -1236 -1220 -1232 -1228 -1228 -1236 -1236 -1244 -1232 Cx (ppb) 668 692 824 788 911 939 592 579 484 503 CTB (ppb) 680 ± 51,6 806 ± 57,2 925 ±44,5 585,5± 20,7 493,5±30,2 Trang 106 Phuï luïc Phuï luïc 17: Kết phân tích MG mẫu MG kiểm soát Becher Lần 239,0 221,4 232,9 I (nA) Laàn Laàn 242,0 241,9 222,1 219,3 231,4 227,6 TB 241,0 220,9 230,6 RSD (%) 0,71 0,66 1,18 E1/2 (mV) -1232 -1232 -1228 Cx (ppb) 736 706 720 H (%) 92% 88,3% 90% Phụ lục 18: Kết phân tích MG mẫu MG kiểm soát I (nA) Cđo CTT RSD TB E1/2 CTổng (%) (mV) (ppb) (ppb) 302,4 304,8 1,10 -1212 834 34 40 334,4 334,0 334,8 0,68 -1220 877 77 80 407,2 407,6 407,8 0,19 -1228 988 188 200 Nồng độ Lần Lần Laàn ppm 308,6 303,3 ppm 335,9 ppm 408,7 Trang 107 Tài liệu tham khảo TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt [1] Cù Thành Long, Cơ sở phương pháp thống kê thực nghiệm hóa học, ĐHQG Tp Hồ Chí Minh, 2005 [2] Gia Khiêm, Tắm cá Malachite Green: Đe dọa vận hội mới, Báo Lao Động, Số 114, 25/04/2005 [3] Lê Xuân Mai, Nguyễn Bạch Tuyết, Giáo trình phân tích định lượng, ĐHQG Tp Hồ Chí Minh, 2000 [4] Nguyễn Kim Phi Phụng, Khối phổ- Lý thuyết, tập, giải, ĐHQG Tp Hồ Chí Minh, 2004 [5] Nguyễn Thị Thu Vân, Phân tích định lượng, ĐHQG Tp.Hồ Chí Minh, 2004 [6] Nguyễn Thị Tố Nga, Cơ sở lý thuyết ứng dụng trình chiết, ĐHQG Tp Hồ Chí Minh, 2001 [7] Th.S Phan Tiến Ngọc, Xuất thủy sản Việt Nam –Thực trạng thách thức, Viện Kinh Tế Tp.HCM Tài liệu tiếng Anh [8] Aldert A Bergwerff , Peter Scherpenisse (2003), Determination of residues of malachite green in aquatic animals, Journal of Chromatography B, 788, 351359 [9] Aldert A Bergwerff, Peter Scherpenisse (2004), Persistence of residues of malachite green in juvenile eels (Anguilla anguilla), Aquaculture 233, 55–63 [10] Allen John L., Jeffery R Meinertz (1994), Determination of malachite green residues in the eggs, fry and adult muscle tissue of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss), Journal of AOAC International, 77, 553–557 [11] Allen John L., Jeffery R Meinertz, Malachite Green Analysis in Water, U.S Fish and Wildlife Service National Fisheries Research Center [12] Allen John L., Jeffery R Meinertz (1991), Post-column reaction for simultaneous analysis of chromatic and leuco forms of malachite green and crystal violet by high-performance liquid chromatography with photometric detection, Journal of Chromatography, 536, 217-222 Trang 108 Tài liệu tham khảo [13] Annalaura Stammati et al., Effects of malachite green (MG) and its major metabolite, leucomalachite green (LMG), in two human cell lines, Toxicology in Vitro 19, 853–858 [14] Alderman D J et al (1985), Malachite green: a review, Journal of Fish Diseases , 8, 289-298 [15] Bauer K et al (1988), Uptake and excretion of malachite green by rainbow trout, Arch Lebensmittelhyg, 39, 85-108 [16] Bhasikuttan A C, (1995), Oxidation of crystal violet and malachite green in aqueous solutions a kinetic spectrophotometric study, Journal of Photochemistry and Photobiology A: Chemistry 90, 177 -182 [17] Bills T.D et al (1977), Malachite green: Its toxicity to aquatic organisms, persistence and removal with activated carbon, Invest Fish Control 75, 1-6 [18] Doerge, D R., Churchwell et al.(1998), Analysis of malachite green and metabolites in fish using liquid chromatography atmospheric pressure chemical ionization mass spectrometry, Rapid Communications in Mass Spectrometry, 12, 1625–1634 [19] Douglas A Skoog, James J.Leary (1992), Principles of Instrumental Analysis, Saunders College Publishing [20] Elizabeth W Baumann, Colorimetric determination of low pH with malachite green, Talanta, Vol 42, No 3, 457 – 462, 1995 [21] Gerundo N., Alderman D.J., Clifton-Hadley, (1991), Pathological effects of repeated doses of malachite green: A preliminary study, Journal of Fish Diseases 14, 521-532 [22] Grizzle J.M (1977), Hematological changes in fingerling channel catfish exposed to malachite green, Prog Fish Cult 39, 90-93 [23] Hajee C A J et al (1995), Simultaneous determination of malachite green and its metabolite leucomalachite green in eel plasma using post-column oxidation, Journal of Chromatography B, 669, 219–227 [24] Hoffman G.L & Meyer F.P (1974), Parasites of Freshwater Fishes, TFH Publications, Neptune, New Jersey [25] Jeremy A Bartlett (1999), Spectroscopic and photochemical properties of Trang 109 Tài liệu tham khaûo Malachite Green noncovalently bound to bovine serum albumin, Dyes and Pigments 43, 219 – 226 [26] Jón Ólafsson (1986), The semi – automated determination pf Manganese in sea water with Leuco - Malachite Green, The science of the Total Environment, 49, 101 – 113 [27] I Safarik, M Safarikova, (2002), Detection of low concentrations of malachite green and crystal violet in water, Water Research 36, 196 – 200 [28] J.J Sulivan et al (1990), Determination of Total Sulfite in Shrimp, Potatoes, Dried Pineapple and White Vine by Flow Injection Analysis: Collaborative Study, Off Anal Chem, 73, (1) 35-42 [29] John A Dean (1995), Analaytical Chemistry Handbook, University of Tennessee, Knoxville [30] Kamila Mitrowska, Andrzej Posyniak, Jan Zmudzki (2005), Determination of malachite green and leucomalachite green in carp muscle by liquid chromatography with visible and fluorescence detection, Journal of Chromatography A, 1089, 187-192 [31] Kim-Chung Lee, Jian-Lin Wu, Zongwei Cai (2006), Determination of malachite green and leucomalachite green in edible goldfish muscle by liquid chromatography–ion trap mass spectrometry, Journal of Chromatography B, [32] K Halme, E Lindfors, (2004), Determination of malachite green residues in rainbow trout muscle with liquid chromatography and liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry, Food Additives and Contaminants, Vol 21, No 7, 641–648 [33] Lanzing W.J.R (1965), Observations on malachite green in relation to its application to fish diseases, Hydrobiologia 25, 426-441 [34] Larry G Rushing, Harold C Thompson Jr (1997), Simultaneous determination of malachite green, gentian violet and their leuco metabolites in catfish or trout tissue by highperformance liquid chromatography with visible detection, Journal of Chromatography B, 688, 325-330 [35] Law, F.C.P (1994), Total residue depletion and metabolic profile of selected drugs in trout U.S Food and Drug Administration Contract No 223-907016 Simon Fraser University, Burnaby, BC, Canada Trang 110 Tài liệu tham khảo [36] Luis Valle et al (2005), Determination of the sum of malachite green and leucomalachite green in salmon muscle by liquid chromatography–atmospheric pressure chemical ionisation-mass spectrometry, Journal of Chromatography A, 1067, 101–105 [37] Marek K Kalinowski et al (1980), Kinetics of the reaction of malachite green and crystal violet with formally aprotic solvents, Analyticc Chimica Acta, 117, 353-357 [38] Meyer F.P., Jorgenson T.A (1983), Teratological and other effects of malachite green on development of rainbow trout and rabbits, Trans Am Fish Soc, 112, 818-824 [39] Parissa Farnia et al (2004), Application of Oxidation – Reduction assay for monitoring treatment of patients with Pulmonary Tuberculosis, Journal of Clinical Microbiology, 42, 3324 – 3325 [40] Plakas S M et al (1996), Uptake, tissue distribution and metabolism of malachite green in the channel catfish (Ictalurus punctatus), Canadian Journal of Fisheries and Aquatic Sciences, 53, 1427–1433 [41] Peter Scherpenisse, Aldert A Bergwerff (2005), Determination of residues of malachite green in finfish by liquid chromatography tandem mass spectrometry, Analytica Chimica Acta 529, 173–177 [42] R S Clifton-Hadley, D J Alderman (1987), The effects of malachite green upon proliferative kidney disease, Journal of Fish Diseases, 10, 101-107 [43] Roberta A Mittelstaedt et al (2004), Genotoxicity of malachite green and leucomalachite green in female Big Blue B6C3F1 mice, Mutation Research 561, p 127–138 [44] Roybal J E et al (1995), Determination of malachite green and its metabolite, leucomalachite green, in catfish (Ictalurus punctatus) tissue by liquid chromatography with visible detection, Journal of AOAC International 78, 435457 [45] Sandra J Culp et al (2004), NTP Technical Report on the Toxicity Studies of Malachite Green Chloride and Leucomalachite Green, NIH Publication No 04-4416 [46] Sandra J Culp, F A Beland (1996), Malachite green: a toxicological Trang 111 Tài liệu tham khaûo review, Journal of the American College of Toxicology, 15, 219-238 [47] Sandra J Culp et al.(2006), Carcinogenicity of malachite green chloride and leucomalachite green in B6C3F1 mice and F344 rats, Food and Chemical Toxicology 44, 1204–1212 [48] Sandra J Culp et al (2002), Mutagenicity and carcinogenicity in relation to DNA adduct formation in rats fed leucomalachite green, Mutation Research 506– 507, 55–63 [49] Sandra J Culp et al (1999), Toxicity and metabolism of malachite green and leucomalachite green during short-term feeding to Fischer 344 rats and B6C3F1 mice, Chemico-Biological Interactions 122, 153–170 [50] Shivaji Srivastava, Ranjana Sinha (2004), Toxicological effects of malachite green, Aquatic Toxicology, 66, 319-329 [51] Shivaji Srivastava, Ranjana Sinha (1995), Acute toxicity of malachite green and its effects on certain blood parameters of a catfish – Heteropneustes fossilis, Aquatic Toxicology, 31, 241 – 247 [52] Sherri B Turnipseed, Joseù E Roybal et al.(1995), Particle beam liquid chromatography-mass spectrometry of triphenylmethane dyes: application to confirmation of malachite green in incurred catfish tissue, Journal of Chromatography B, 670, p 55-62 [53] Swarbrick A., Murby E J., (1997), Post-column electrochemical oxidation of leuco malachite green for the analysis of rainbow trout flesh using HPLC with absorbance detection, Journal of Liquid Chromatography and Related Technologies, 20, 2269–2280 [54] Tarbin J A et al.(1998), Screening and confirmation of triphenylmethane dyes and their leuco metabolites in trout muscle using HPLC-VIS and ESP-LCMS, Analyst, 123, 2567–2571 [55] The Merck Index (1996), 12, 972 Merck and Company, Inc., Whitehouse Station, NJ [56] T Meinelt, M Pietrock, A Wienke vaø F Volker (2003), Humic substances and the water calcium content change the toxicity of malachite green, J Appl Ichthyol 19, 380–382 Trang 112 Taøi liệu tham khảo [57] Turnipseed S B et al (1995), Gas chromatographic/mass spectrometric confirmation of leucomalachite green in catfish (Ictalurus punctatus) tissue, Journal of AOAC International, 78, 971–977 [58] Wendy C Andersen et al., Determination of Malachite Green and Leucomalachite Green in Salmon with In-Situ Oxidation and Liquid Chromatography with Visible Detection, FDA/ORA/DFS Laboratory Information Bulletin, No 4334 [59] Wendy C Andersen et al., Quantitative and Confirmatory Analyses of Malachite Green and Leucomalachite Green Residues in Fish and Shrimp, FDA/ORA/DFS Laboratory Information Bulletin, No 4363 [60] Werth G., Boiteux A (1968), The biological activity of malachite green Part VI: The detoxification of Malachite Green in the organism by formation of leucomalachite green, Arzneimittelforschung 18, 39-42 [61] Wright L.D (1976), Effect of malachite green and formaline on the survival of large mouth bass eggs and fry, Prog Fish Cult, 38 (3), 155–157 Weblinks [62] http://metrohm.com/ [63] http://en.wikipedia.org/wiki/Malachite_green [64] http://khoahoc.net/ [65] http://bogiaoducvadautu.com/ [66] http://www.leederconsulting.com/food_seafood_malachite_green.html [67] http://www.biooscientific.com/product.php?name=Malachite+Green&detail =Malachite_Green&nid=_type10&cid=_product1111 Trang 113 LÝ LỊCH TRÍCH NGANG Họ tên: PHẠM KIM PHỤNG Phái: Nữ Ngày, tháng, năm sinh: 30 / 09 / 1979 Nơi sinh: TP Hồ Chí Minh Địa liên lạc: 18/10 Đường Nhiêu Tứ, Phường 07, Quận Phú Nhuận TP Hồ Chí Minh, Việt Nam Điện thoại: 08-5107781 Di động: 0903 04 22 74 QUÁ TRÌNH ĐÀO TẠO: - Năm 2002, tốt nghiệp Khoa Công Nghệ Hóa học & Thực phẩm, trường Đại Học Bách Khoa, TP Hồ Chí Minh - Năm 2003: tham dự khoá đào tạo Kỹ thuật kiểm tra an toàn thực phẩm Công nghệ chế biến thịt Viện Nghiên Cứu Thịt Bắc Kinh, Trung Quốc - Năm 2004 – 2007: tham dự lớp cao học K15, ngành Khoa học công nghệ thực phẩm, Trường Đại Học Bách Khoa, TP Hồ Chí Minh QUÁ TRÌNH CÔNG TÁC: - Từ 2002 – 2004: giáo viên khoa Công nghệ chế biến thực phẩm, trường Cao Đẳng Công Nghiệp Thực Phẩm, TP Hồ Chí Minh - Từ 2004 – đến nay: nhân viên tư vấn kỹ thuật, Văn Phòng Đại Diện MERCK – Việt Nam ... ? ?Nghiên cứu phương pháp phân tích nhanh malachite green? ?? Mục tiêu đề tài: • Góp phần cung cấp công cụ kiểm tra quản lý vệ sinh an toàn thực phẩm • Đưa phương pháp phát nhanh có mặt malachite green. .. .8 I.2 Các phương pháp phân tích malachite green .9 I.2.1 Phương pháp ELISA .9 I.2.1.1 Nguyên tắc chung I.2.1.2 Ứng dụng phân tích Malachite green: .10... nhiều phương pháp triệt tiêu dòng tụ điện: phương pháp chọn thời gian ghi, phương pháp cực phổ dòng xoay chiều, phương pháp cực phổ sóng vuông, phương pháp cực phổ xung, … I.3.2 Phương pháp cực