Đề tài được thực hiện với mục tiêu: Nghiên cứu thành phần hóa học của Mán đ a theo định hướng tác dụng sinh học, thử tác dụng chống oxy hóa in vitro các chất phân lập được[r]
(1)TÁC DỤNG BẢO VỆ GAN VÀ THÀNH PHÀN HÓA HỌC CỦA PHẦN TRÊN MẶT ĐẮT CÂY MÁN ĐỈA ( A R C H I D E N D R O N C L Y P E A R I A )
ThS Nguyễn Khánh Thùy U n h í1}, Th.s Hồ Việt Đức{1>, PGS TS Nguyễn Thị Hoài(1), TS Đ ỗ Thị Thảo(2)
(1>: Khoa Dược, trường Đ ại học Y Dược Huế (2): Viện Công nghệ sinh học - Viện Hàn lâm khoa học cơng nghệ Việt Nam.
TĨM TĂT
Đặt van đề mục tiêu: Mán đ a đồng bào Pako, Vân Kiều Quảng Trị dùng chữa bệnh có liên quan đến tác dụng chống oxy hoá viêm gan, xơ gan Sàng lọc hoạt tính chống oxy hoả in vitro cho thấy Mán đ a có hoạt tính mạnh Đề tài thực với mục tiêu: Nghiên cứu thành phần hóa học Mán đ a theo định hướng tác dụng sinh học, thử tác dụng chống oxy hóa in vitro chất phân lập thử hoạt tính bào vệ gan in vivo cao chiết dược liệu.
Đối tượng nghiên cứu: phần mặt đất Mán đỉa thu hâi huyện Dakrong, tỉnh Quảng Trị.
, Phương pháp nghiên cứu: Chiết xuất phuvng pháp chiết lỏng - lỏng rắn ~ lỏng Phân lập chầỉ tinh khiết
bằng phương pháp sắc ký Xác định cấu trúc phương pháp phổ Thử tác dụng chống oxy hóa in vitro trên gan chuột phân lập Thử tắc dụng bảo vệ gan in vivo chuột gây viêm gan paracetamol.
Kết quả: Đã phân lập xác định cấu trúc hợp chất tính khiết là: Daucosterol (1), Methyl gallat (2), Quercetin 3-O-a-L-rhamnopyranosid (3), 7-0-galloyltrícetiflavan (4), i-octacosanol (5) acid docosenoic (6) Các hợp chất (2), (3), (4) có tác dụng chống oxy hóa in vitro với ED50 7,31 ụg/ml, 30,64 ụg/mí 1,02 ụg/ml Cao chiết ethyl acetat liều 500 1000 mg/kg/ngày thề rõ tác dụng bảo vệ gan liều 2000 mg/kg/ngày có tâc dụng bảo vệ gan tương đương với Silymann.
Kết luận: Đã phân lập 06 hợp chất: Daucosteroi (1), Methyl gallat (2), Quercetin 3-O-ơ-L- rhamnopyranosid (3), 7-0-galloyltricetifỉavan (4), 1-octacosanol (5) acid docosenoic (6) Trong hợp chắt (2), (3), (4) có tác dụng chống oxy hóa in vitro Cao chiết ethyl acetat dược liệu thể tác dụng bảo vệ gan in vivo.
Từ khóa: Mán đa
SUMMARY
LIVER-PROTECTING EFFECTS AND THE CHEMICAL CONSTITUENTS OF THE AERIAL PARTS OF ARCHIDENDRON CLYPEARIA
Nguyen Khanh Thuy Linh(1), Ho Viet Duc(1>, Nguyen Thi Hoafv, Do Thi Thao(2i Faculty o f Pharmacy, Hue college o f Medicine and Pharmacy
m: Institute o f Biotechnology, Academy o f Science and Technology o f Vietnam
Backgrounds: Archidendron clypearia has shown in vitro antioxidant activity in our previous screening test This paper aims to clarify the chemical composition and antioxidant activity ofArchidendron clypearia.
Puqjoses: To study the chemical composition oriented biological effects; Determination antioxidant activity of isolated compounds.
Materials: The whole aerial part o f A clypearia were collected in Dakrong, Quang Trí province, Vietnam. Methods: Extraction methods: soaking extraction, liquid-liquid extraction, solid-liquid extraction Isolated by column chromatography and thin-layer chromatography Determining structure by spectroscopic methods Determination antioxidant activity in in vitro test Determination liver-protecting effect in vivo test.
Results: compounds were isolated from Archidendron clypearia including Daucosterol, Methyl gallat, Quercetin 3-Ọ-a-L-rhamnopyranosid, 7-O-galloyltncetiflavan, 1- octacosanol and acid docosenoid In in vitro tests on isolated liver cells of rats, there are out o f substances which have shown antioxidant activity, in which the best one is 7-O-galloyltricetiflavan, followed by Methyl gallate and Quercetin 3-O-a-L-rhamnopyranosid with ED50 values o f 1.02, 7.31 and 30.64 fjg/m l respectively In in vivo test, ethyl acetate extracts shown a protective effect on liver at doses 500mg/kg/day.
Conclusion: compounds were isolated from Archidendron clypearia 7-O-galloyltricetiflavan, Methyl gallat and Quercetin 3-0~a-L-rhamnopyranosid have shown antioxidant effects In in vivo test, ethyl acetate extracts shown a protective effect on liver.
K eyw ords: Archidendron clypearia
(2)dụng bảo vệ gan thành phần hóa học phần mặt đất Mán đĩa Archidendron clypearía (Jack.) I Niels Mimosaceae” với ba mục tiêu chính:
- Nghiên cứu thành phần hóa học theo định hướng tác dụng sinh học
- Thu’ íác dụng chống oxy hóa in vitro chẳt phân lập
- Thử tác dụng bảo vệ gan in vivo cùa cao chiết dược liệu
ĐÓI TƯỢNG, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN u
1 Đối tượng nghiên cứu
Phần mặt đấí Mán đỉa thu hái tạí huyện Dakrong, tỉnh Quảng Trị Mâu dược liệu nghiên cứu TS Nguyễn Thế Cường - Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật - Viện Hàn iâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam xác định íên khoa học Archidendron
clypearía (Jack) I Niels, Mimosaceae.
2 Phương pháp nghiên cứu
2.1 X lý mẫu, ch iế t x u ấ t cao toàn phần cao
các phân đoạn.
Dược liệú phơi sấy khô, xay nhỏ thành bột mịn, sau chiết với methanol tuyệt đối pháp ngâm lạnh (48 giờ/lần X lần) Gộp dịch chiet methanol cắt íhu hồi hết dung mơi áp suất giảm cho đển cắn thu cao cắn toàn phần
Lấy cao cắn toàn phần phân tán vào nước chiểt xuất phân đoạn phương pháp chiết lỏng-lỏng với dung môi rt-hexan, chloroform, ethylacetat, butanol, thu dịch chiết phân đoạn phần nước lại
2.2 P hương pháp p h â n lập tế bào gan chuột. Chuột BALB/c khóẻ mạnh sử dụng đề tach tế bào gan Gây chết chuột ethanol 800, tách lấy gan Gan chuột sau khỉ tách rửa PBS có 10% kháng sinh PSF (Penicillin-Streptomicin- Fungizone) (Invitrogen) sau dùng panh, kéo, kim
đáng tin cậy với sai số p < 0,05 % tế bào gan
sống sót “
ỈOD(chấíthử)
OD(H?Q?)1 X 100
NH4CI để phá vỡ hồng cầu Sau li tâm cắn tế bào thu hoà lại vào mồi trường MEME có 10% FBS
2.3 Phương pháp thử tác dụng chống oxy hóa in vitro [3], [4], [5], [6].
Tế bào gan từ gan chuột sau phân lập nuôi ổn định 1-2 ngay, sau đưa vào đĩa thí nghiệm 96 giếng với mật đọ X 104 tb/giếng để ni qua đểm íủ ẳm 5% C 2, 37°c Thêm chất nghiên cứu Cucurmin (đối chứng dương) nồng độ khác nhau,^ ù 2h Thêm 100 fiM H20 vào giếng để ỉác động 2h Để xác định số tế bào gan sống sót sau tác động H20 tác động bảo vệ cùa hoạt chất nghiên cửu, MTT nồng độ 1mg/ml (50 nl/giếng) đưa vào giếng ủ tiếp 4h 37°c Loại bị tồn dịch va đưa vào giếng 100 ^il/giếng DMSO 100% Đo mật độ quang học (giá trị OD - Optical Density) chất formazanI tạo thành máy Microplate Reader 492 nm Tấí thí nghiệm lặp lại lần để tránh sai sổ Các số liệu xử lí bắng phần mềm TabieCurve 2D phiên số EXEL để tính giá trị Standard Deviation Độ xác số liệu tỉnh R2 Nếu R2 0,95 kết ổược xem ìà
OD(Tế bào) - 0D(H20 2) Trong đó: OD(chất thử), 0D (H 20 2), OD(Te bào) giá trị mật độ quang học đo giếng có chất cần kiểm tra hoạt tính, aiếnơ đối chứng êm ('chỉ gây chếí tể bào H20 2) va giếng mà tế bào hồn tồn khỏe mạnh, khơng bị gây chết H20
2.4 Phương pháp thử tác dụng chống oxy hóa in vivo Ị7Ị.
Gây ton thương gan paracetamol (PAR) với liều 400 mg/kg, paracetamol pha với nồng độ 50 mg/ml 36 chuột BALB/c có khối lượng 26 g ± g chĩa iàm ỉô (6 con/lô): Lô 1: uống DMSO 10%: o’,2 mi/con/ngày (chuột khỏe mạnh bình thường), lơ 2: uống DMSO 10%: + Paracetamoỉ (bệnh lý), lô 3, 4, 5: uống cao chiết ethyl acetat liều 500 mg/kg/ngày, 1000 mg/kg/ngày, 2000 mg/kg/ngày, lô 6: uống Sịlymarin 50 mg/kg/ngày (chứng dương) Gây ổộc gan cách cho uổng paracetamol (chỉ cho lô 2, 3,4, 5) với liều paracetamol 400 mg/kg/1 lần
Chuột íô thử/ lô ổối chiếu uống cao chiết/ thuốc đối chứng liên tục ngày, ngày cho uống lần vào buổi sáng, trước gây độc gan paracetamol Ngày thứ chuột uong paraceíamoi 1lần liều 400 mg/kg sau uống mâu giờ, nhịn đói 14-16 ỉrước đó, Sau 48 uống paracetamol, láy máu định lượng aminotransferase (AST, ALT), cân khổi lượng gan, quan sát đại thể gan xác định hàm lượng MDA gan
❖ Định lượng aminotransferase (AST, ALT) trong, huyết chuột phương pháp so màu, thực írên máy định iượng sinh hố bán tự động AU680 cùa hãng Beckman Coulter
❖ Kiềm íra trực quan gan: Sau toàn íhí nghiệm sau lấy máu xét nghiệm, chuột mổ đề kiểm tra trực quan
❖ Xác định hàm lượng MDA gan ❖ Phương pháp xử lí số liệu
Các sổ liệu sử !í írên Excei, thuật toán ỉhống kê student t’test, F’test phương pháp phân tích phương sai nhân tố ngẫu nhiên (one way ANOVA) vả sử dụng hệ số LSD (ieast-significant difference) đế kiểm tra sai khác có ý nghĩa so với đối chứng âm,
sai khác khơng có ý nghĩa thống kê
2.5 Phương pháp thử độc tính cấp [2]
Theo phương pháp Litchfield-Wilcoxon, chuột nhắc trắng giống chia làm lơ, íơ Chuột nhịn ăn 12h, uống thuốc íhử (cao chiết ethyl acetat Mán đỉa) liều íăng dần Theo đõỉ liên íục 72 đầu đế xác ổịnh số chuột chết tình trạng chung chuột suối ngày lơ, tính giá trị LD50
2.6 Phương pháp nghiên cứu hoả học.
Phân lập chất tinh khiết sắc ký cột silica gel pha thường (Silica gel 60 0,040-0,063mm (230-400 mesh ASTM), Merck); silica gel pha đảo YMC (30-50
(3)-pha đảo (TLC-Silicagel 60 F254 Merck) Phát vết chất đèn tử ngoại hai bước sóng 254 nm 366 nm đùng thuốc íhử dung dịch H2SO410% phun lên mỏng, sấy khô hơ nóng từ từ đến màu
Xác định cấu trúc hợp chất phân lập dựa phương pháp phổ bao gồm: phổ cộng hường íừ hạt nhân chiều (1IH-NMR, 13C-NMR, DEPT) va hai chiều (HMBC, HSQC) đo tren máy Bruker Avance AM500 FT-NMR, phổ khối lượng phun mù điện tử đo máy AGILENT 1100 LC-MSD Trap Viện Hoá học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việỉ Nam
KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
1 Tác dụng chống òxy hóa in v itro cao chiêt tồn phần cao phân đoạn
Cao chiet toàn phần methanol (M),'õ phân đoạn: n- hexan (H), chloroform (C), ethyl acetat (E), n-buỉanol (B) nước (W) Mán đỉa thử tác dụng chống oxy hóa in vitro kểt bang 1
Bang Giá trị ED50 cao chiết phân đoạn Mán đỉa
Nồng độ (pg/ml)
% íê bào sốnq sót
H c E B w Curcumi n N đô M 100 71,1 68,5 70,2 71,4
64,43 67,43 20 113,8 20 56,8
6
53,7 67,7 57,7 28,57 64,57 64,73
4 37,4 37,7 65,1 39,4 ?
10,14 47,71 0,8 27,3
0,8 17,4 27,1 53,1 15,1
1,43 12,57 0,16 -7,55
ED50 9,30 14,9 0,63 9,10 >50 (59,43)
4,43 ed5 2,18
cao chiết nước khơng the hoạt tính, cịn phân đoạn cịn lại có tác dụng mửc độ khác Trong đó, phân đoạn ethyl acetat thể hoạt tính mạnh với giá trị ED50 thấp thấp chất đối chửng dương Curcuniin
Điều có ý nghĩa trình nghiên cứu ỉhuốc từ dược liệu Vì biếỉ, khó khăn việc pháỉ ỉriển thuốc dân tộc cổ truyền lâu thường dùng dịch chiết tổng (dịch chiết toàn phần) mà khơng tìm ra, khơng chứng minh phân đoạn có tác dụng Cao chiết tồn phần với khối lượng lớn khó khăn đưa vào dạng bào chế phân liều đại Việc chứng minh thành phần, phân đoạn có tác^dụng định hướng cho nghiên cứu tiếp
dụng manh dịch chiết f?hân đoạn ethyl acet Kết nghiên cứu hóa học
5,0 kg dược liệu xay thành bột ngâm chiết meíhanol (10 lít X 3), dịch chiết sau khơ áp suấỉ thấp, thu cao cắn cắ n methanol phân bố vào nước chiết với n-hexan, chloroform, ethyl axetat, n-butanol cho phân đoạn chiết n-hexan (H), chloroform (C), ethyl axetat (E), n- butanol (B) dịch nước lại Dịch nước tách
phân đoạn cột Dianion HP-20 (W)
Phân đoạn ethyl actetat'(E) tách cột silica gel, rửa giải n-hexan/aceton 100 - 40/1-20/1-10/1-5/1 -1/1 -0/100 methanol 100% thu 8 phân đoạn (E1-8) Phân đoạn E4 tách cột silica gei pha thường, rửa giải hỗn hợp chlorofom/aceton 10/1, thu phân đoạn (E4A- E) Phân đoạn E4B tiến hành sắc ký với cộí silica gel pha đảo, rửa giải hệ dung mổi aceton/nước 3/2 íhu phân đoạn (E4B1-4) Phân đoạn E4B3 tiếp tục tiến hành sắc ký cột pha thường với hệ dung mơi chloroform/ethyl acetaư methanol 15/1/0,1 íhu đưực phân đoạn (E4B3A-E) E4B3D phân lập bang sac ký cột siìicagei pha đảo với hệ methanol/nước 3/1 thu phẩn đoạn (E4B3D1-3) E4B3D2 tinh chế qua cột Sephadex, rửa giải methanol 100% ỉhu Chat số (ACE9) 25mg E4D tách cộỉ Sephađex, rửa giàí meỉhanol 100%, thu phan đoạn (E4D1-4) E4D2 tiếp tục íỉnh chế qua sắc ký cộỉ silicagel pha đảo với hệ methanol/nước 8/1 thu phân đoạn (E4D2A-D) E4D2B tiến hành sắc ký lớp mỏng điều chế với hệ chloroform/methanol/acid formic íhu chất sồ (ACE7) 12mg
Phân đoạn E6 tách cột silĩcagel pha thường, rửa giải hệ chioroform/aceton 1/1 thu phân đoạn (E6A-E) Tinh chế phân đoạn E6B cộỉ silica gel pha đảo, r!>a giải methanol/nước 2/1, thu phân đoạn (E6B1-5) Phân đoạn E6B2 tách cột Sephàdex, rửa giải methanol 80%, thu phân đoạn (E6B2A-D) E6B2A tiến hành sắc ký pha thường, rửa giải hệ dung môi chioroform/methanol/acid formic 6/1/0,1, thu đựợc phân đoạn E6B2A1-3 E6B2A3 tinh chế sắc ký pha đảo với hệ meíhanol/nước/acid formic 1/1/0,05 thu chất số (AEC4) 105mg E6B2C tách sắc ký pha thừờng, rưa giải hệ chioroform/methanol 3/2 thu phân đoạn (E6B2C1-3) E6B2C2 xuất tinh thể trắng cô đặc; tiến hành lọc, rửa ỉinh thể thu chất số (ẦÓE8) 86mg
Phân đoạn E3 tiến hanh sắc ký cột pha thường với hệ dung môi chloroform : methanol ( : ) íhu phân đoạn E3A-E Phân đoạn E3D tiếp tục qua cột Sephadex, rửa giải methanol : nước ( : ) thu ỔIPỢC phân đoan E3D1-4 Phân đoạn E3D2 qua cột sắc kỷ pha đảo với hệ dung môi aceion : nước : acid
giải băng methanol thu đươc phân đọạn E3D2A1-3 Phân đoạn E3D2A2 tinh chế sắc ký cộí pha thường với hệ dung môi chloroform : meỉhanoi : nước ( : : 0,1) thu chất số (ACC1) 92mg Phân đoạn E3Đ2D tinh chế sắc ký cột Sephadex rửa giải methanol thu chất số 6 (ACC3) 88mg
(4)Hình Cấu trúc chất phân lập từ Mán đỉa
3 Tác dụng chống oxy hóa chất phân lập
Tỷ lê (%) tê bào sốnq sỏt Nồng độ
(MQ/ml) ACC1 ACC3 ACE4 ACE7 ACE8 ACE9 Nồng độ (ug/mí)Cucurmín 160 24,38 1,94 63,25 65,90 66,95 27,92 80 67,42
32 19,26 5,30 50,53 62,19 66,25 6,01 16 59,11 6,4 14,84 13,07 24,73 46,11 55,30 3,00 3,2 41,73 1,28 8,83 9,72 8,13 38,34 51,41 -7,42 0,64 16,89 ED50 (ụg/ml) >160 > 160 30,64 7,31 1,02 >160 6,31 tác dụng mạnh nhẳt với ED50 íà 1,02 ụg/ml, mạnh gểp Ỉần so với Curcumin Kế tiếp ACE7 với ED5Q 7,31 ụg/ml (gần tương đương so với Curcumin) ACE4 30,64 Ịjg/ml ACC1, ACC3 ACE9 tác dụng chống oxy hóa
bệnh suy giồm hệ thần kinh tăng tốc độ trinh lão hỏa thể người 4 Tác dụng bào vệ gan in vivo cao chiết dược liệu.
4.1 Hiệủ quà bào v ệ gan
Sau ngày thí nghiệm chuột íất lô láy máu đề kiểm tra hàm lượng AST, ALT írong huyết Kết nghiên cứu hiệu bảo vệ gan cao chiết ethyl acetat trinh bày bảng
Lô Thuôc liều lượng AST (Ul/L) ALT (Ul/L) % giảm AST % giảm ALT DMSO 10% 60,50 ±9,19 35,50 ± 6,36 -
-2 DMSO 10% + PRA400 mg/kg
92,67 ± 9,45 p<0,05 so với(1)
141,00 ±29,50 p<0,05 so với (1)
0
3 Cao ethyi acetat 500 mg/Rg/ngày + PRA 400
mg/kq
94,50 ± 16,77 p>0,05 so với (2) p>0,05 so với (5)
96,25 ±16,29 p<0,05 so với (2) p<0,05 so vởi (6)
-1,98 31,73
4 Cao eíhyl acetat 1000 mg/kg/ngày + PRA 400
mg/kg
93,00 ±12,63 p>0,05 so với (2) p>0,05 so với (5)
91,00 ±9,90 p<0,05 so với (2) p<0,05 so với (6)
-0,36 35,46
5 Cao ethyl acetat 2000 mg/kg/ngày + PRA 400
mg/kg
95,50 ±23,23 p>0,05 so với (2) p>0,05 so với (5)
71,50 ±11,92 p<0,05 so với (2) p>0,05 so với (6)
-3,06 49,50
6 Silymarin 50 mg/kg+PRA 400 mg/kg
88,50 ±2,13 p<0,05 so với (1) p>0,05 so với (2)
67,00 ± 8,38 p<0,05 so vớỉ(1) p<0,05 so với (2)
4,50 52,48
(5)-BảngI cho thấy chuột uống cao chiết ethyl acetat Siiymarin (lô 3, 4, 5, 6) có số ALT thấp so với đối chứng (lơ 2) có sai khác, đo số AST cao khong có sư sai khác so vơi đối chứng
Khỉ gan bị viêm hay bị íổn thương, men gan “rị ri” vào đòng máu làm số men tăng lên Paracetamol lam ton thương gan chuộí nên nồng độ ALT AST tăng lên có ý nghĩa thống kê so với mau chứng trắng (lô chuôỉ khôna sử duna Daracetam oiV K ấ t n u n n h iê n n V n rhn t hấ\t n À n n rtA A I T * a / l i i m -3-1 7-50/7 L4-, c k « « «
chiết ethyl acetat Mán đỉa liều 500 mg/kg/ngày Và khỉ sử dụng cao chiết liều 2000 mg/kg/ngay thi nồng đọ ALT giảm đến 49,50% so với lô chứng Điều chứng tỏ cao chiết ethyl acetat có tác dụng bảo vệ gan % giảm ALT cho chuột uống cao ethyl acetaí Man đỉa iĩều 2000 mg/kg/ngày gần tương đương với Silymarin điều có nghĩa khả bảo vệ gan Mán đìa dùng liều 2000 mg/kg/ngày gần tương đương với Silymarin thí nghiệm
4.2 Khối lượng gan trực quan tổn thương gan
D Ẳ r ì n Á h D A jnrt •x «A4 At n Ắ n (A IL*Í
Lơ Thuốc lieu lượng Khôi lượng gan
(g/1 Og thể) p Quan sát hinh thái trực quan gan DMSO 10% 0,381 ±0,009 Gan bình ỉhường, bê mật gan đồng
nhất khơnq có tổn thươnq DM SO 10% +PRA
400mg/kg 0,504 ± 0,088 p<0,05 so với (1) Gan to vá cỏ 1/6 bê mặt gan bị tôn thươnq qan rấỉ rõ rêĩ E-BM87 500 mg/kg/ngày
+ PRA 400mq/kq'" 0,394 ± 0,057 p>0,05 so với (2) p>0,05 so với (6) có gan to, bè mặt khơng có tốn thươnq E-BM87 1000
mg/kg/ngày + PRA 400mq/kq
0,390 ±0,022 p<0,05 so với (2)
p>0,05 so với (6) Gan bình thường, bề mặt khơng có tốn thương
5 E-BM87 2000 mg/kg/ngày + PRA
400mg/kg
0,401 ±0,058 p>Õ,05 so với (2)
p<0,05sovới(6) Gan bình thường, bê mặt khơng có tốn thương
6 Silymarin
50 mg/kg+PRA 400mq/kq 0,370 ±0,016 p<0,05 so với (2) p>0,05 so với (1) Gan bình thường, bề mặỉ khơng có tốn thươnq
Lô Thuốc lièuĩươnq MDA (mM/ml) MDA tăng so với lô (lần) p
DMSO 10% 3,578
2 DMSO 10% +PRA 400 mq/kq 9,824 2,75 p<0,05 so với (1)
3 Cao eỉhyl acetat 500 mg/kg/ngày + PRA 400
rng/kg 7,968 2,23
p>0,05so với (2) p>0,05so với (6)
4 Cao ethyl acetat 1000 mg/kg/ngày + PRA
400mq/kq 6,721 1,88 p>0,05so với (2) p>0,05 so với (6) Cao ethyl acetat 2000 mg/kg/ngày + PRA
400mq/kq 5,528 1,55 p<0,05 so với (2) p>0,05so với (6) Silymarỉn
50 mg/kq + PRA 400 mq/kq 5,205 1,45 p<0,05 so với (2) p>0,05sovới(1ì
MDA (malonyl dialdehyd) sản phẩm cuối q trình peroxy hóa íipid màng tế bào, thường chọn số để đánh giá mức độ tổn thương te bào stress oxy hóa Khi cho chuột uống cao ethyl acetat liều 500 mg/kg/ngày 1000 mg/kg/ngày, hàm lượng MDA gan cải thiện so với lơ chứng khơng có hoạt chất bảo vệ, số liệu choI thấy sai khác khơng có ý nghĩa thống ke Tuy nhiên, dùng cao ethyl acetat Mán đỉa liều 2000 mg/kg/ngày, MDA írong gan giảm đáng kể so với lô chứng, hiệu gần tương đương Silymarin sai khác có ý nghĩa thống kê
Những kếí đạt chứng khoa học góp phần giải ìhích kinh nghiệm sử dụng dược liệu Man đỉa cõa đồng bào dân tộc Pako, Vân Kiều
trong chữa bệnh Nó mờ triển vọng thuốc
nàỵ cần nghiên cứu sâu đầy đủ ve thành
phan hóa học, tác dụng sinh học để có sở định hướng cho việc sử dụng phát triển thời gian tới
57 Độc tính cấp cùa cao chiết ethyl acetat Mán đỉa
LD50 xác định ià 9500 mg/kgP có nghĩa ià liều gây chết 50% chuột thí nghiệm 9500mg/kgP tương đương với 190g dược iiệu/kg chuột, cao gẩp khoảng 132 lan so với liều dùng theo kinh nghiệm người dân địa phươna Mặc dù cao hyl acetat Mán đỉa có độc tính cấp độc tính xuất
ồ liều cao, gấp 380 lần liều thường dùng theo kinh
(6)trị thấp nhiều so với liều độc nên dược liệu xem an tồn nghiên cứu tiểp íheo triển vọng phát triền thành thuốc
KẾT LUẠN
Cao chiết phân đoạn cửa Mán đỉa
(Archidendron clypearía, họ Mimosaceae)
nohiên cứu tài'- riụng r.hống nỵv hrtg ị n ụ ị t m Kốt nnả
cao chiết phân đoạn ethyi acetat thể hoạt tính mạnh với giá trị ED50 0,63 Mg/ml Từ phân đoạn ethyl aceíat đa chiết xuat phân lập, xác định cấu trúc ổược hợp chất tinh khiết bao gồm Daucosterol, Methyl galiate, Quercetin-3-O-a-rhamnopyranosid, 7- O-Gailoytricetiflavan, 1-octacosanol acid docosenoic Methyl galỉate, Quercetin-3-O-a- rhamnopyranosid, 7-0-Galloricetiflavan có íác dụng chống oxy hóa thử nghiệm in vitro, 7-0- Galloytricetiflavan thể tác dụng mạnh với ED50- 1,02 pg/ml Cao chiết eíhyl aceíat liều 500 1000 mg/kg/ngày íhề rõ tác dụng bảo vệ gan íiều 2000 mg/kg/ngày có tác dụng bảo vệ gan tương đương với Silymarin
TAI LIỆU THAM KHẢO
1 Nguỳễn Thị Hoài (2012-2013), Nghiên cứu cấc
cây thuốc đồng bào Pako Vân Kiều Miền Trung theo hướng tác dụng chống oxy hóa, diệt tế bào ung
thư, Đề tài cấp Bộ GD&ĐT.
2 Viện đừợc iiệu (2006), Phương phấp nghiên cứu
tâc dụng dược lý thuốc từ thảo dược, NXB Khoa
học va kỹ thuật, ír 171 -183, tr 279-292
3 Burdon R H, (1993,), Carcinogenesis and Free
Radicals, In Free Radicals: from basis science to
medicine, molecular and cs!! biology updates, Basel,
pp.187-193
4 Collins A R (2005), “Assays for oxidatives stress an antioxidant status: application research into the biological effectiveness of polyphenol”, Am J Clin
Nutr, 81, pp.261-267 _
5 Gupta R Sbarma M., Lakshmy R., Prabhaharan D., Reddy K s (2009), Improved method of total antioxidant assay”, Indian J Biochem Biophys., 46, pp.126-129
6 Haimin c., Xiaojun Y., Peng Z-, Jing L (2006), "Antioxidant activity and hepatoprotective potential of agaro-oiigosaccharides invitro and invivo", Nutrition
Journal, 5(31).
7 Zacurazi Facurazi s., Hairuszah I., Nanthini u (2008), "Moringa oleifera Lam prevents acetaminophen induced liver through restoration of glutathione level”, Food Chem Toxicol, 46(8), pp.2611-2615
NGHIÊN c ứ u LÊN MEN LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS ĐẺ SẢN XUÁT MAGNESI LACTAT
Ths Nguyễn Minh Ngọc (Trường Cao đẳng Dược Hải Dương) Ts Nguyễn Thị Hường (Trường Cao đẳng Dược Hải Dương) Ts Đàm Thanh Xuân (Trường Đại học Dược Hà Nội)
ĐẶT VẮN ĐỀ
Magnesi nguyên tố đa lượng vai trò thiết yếu thể, thiếu Magnesi dẫn đến thay đổi sinh hóa triệu chứng nghiêm trọng, liên quan đến bệnh bệnh tim mạch, loãng xương bệnh hen suyễn Các dạng Magnesi vồ có sinh khả dụng thấp đạng muối Magnesi hữu có Magnesi íactai Magnesi íactat cịn sư dụng làm nguyên liệu sản xuất Caici lacỉat, axit lactic, nhựa sinh học polylactic Sản xuất Magnesi lactat cách lền men vi khuẩn lactic íừ nguồn nguyên liệu hỵdratcarbon bổ sung M gC03vào môi trường nuôi cay íà hướng nghiên cứu quan tâm [1J Nghiên cứu tiến hành nhắm mục đích lựa chọnpH thích hợp phương thức bổ sung M gC03 trình niioi cấy vi khuân Lactobacillus
acidophillus đề điều chế Magnesi lactat, đồng thời
kiểm tra tiêu chuẩn, định tínhT định iuợng sản phẩm Magnesì lactat tạo thành
ĐĨI TƯỢNG, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN u
1 Đối tứợng nghiên cứu
Chùng Lactobacillus acidophillus ATCC 4356 Mơi trường MRS có bổ sung sữa bột, MgC03, Magnesi lactat nguyên liệu số hóa chat đạt tiêu chùẳn phân tích
Thiềt bị đo phổ hồng ngoại, phổ cộng hường từ hạt nhân1H-NMR Bruker AV500 (Phịng NMR Viện Hóa
học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam), máy đo phổ khối lượng (MS) LCMS - 2010EV (Shimadzu) phịng Thí nghiệm Hố vậí liệu - Khoa Hố học - Trường ĐHKHTN - ĐHQGHN ‘
2 Phương pháp nuôi cấy vi sinh vậ t thu Magnesi lactat
Nuôi cấy Lactobacillus acidophillusở 37°c kiện vi hiếu khí 100ml mơi trường MRS có bồ sung sữa bộí[6], MgC03 Sau 96h, đun cách thủy dịch lên men írong 20 phút Ly tâm 4.000 vịng/phút vịng 15 phút, lọc nóng, ỉhu dịch Cơ cách íhủy cịn 30% thể tích Để kết tỉnh lạnh - 10°c, 12h tủ iạnh Thu tinh thể, rửa lần nước cất đe lạnh Dịch rửa cô tiếp đến cịn 30% thể tích, để kết tinh lạnh qua đêm c sấy tinh thể thu nhiệt độ 40°c 24h thu sản phẩm thô Hàm lượng Magnesi lactat sản phẩm thơ (q) xác định theophương pháp complexon [2].TÍnh hiệii suất tạo sản phẩm Magnesi lactat theo cơng íhức:
m q.n00-h).i80.lQ 0% (a-b).238,45
Trong đó: H: hiệu suất (%),