Trong trường hợp của bệnh lupus, nồng độ của nhân tố bổ thể trong huyết thanh cho biết trạng thái hoạt động của bệnh.. Giảm nồng độ C3 cũng thấy ở bệnh viêm cầu thận cấp và bệnh tan má[r]
(1)QUY TRÌNH
ĐỊNH LƯỢNG C3c ( MÁU) I NGUYÊN LÝ
Các protein có dịch thể người tạo thành phức hợp miễn dịch phản ứng hóa miễn dịch với kháng thể đặc hiệu Những phức hợp phát tán chùm ánh sáng qua mẫu Cường độ ánh sáng phân tán tỷ lệ thuận với nồng độ protein có liên quan mẫu Đánh giá kết cách so sánh với mẫu chuẩn có nồng độ biết
Nồng độ C3 giảm thấy bệnh lupus ban đỏ hệ thống (SLE) giai đoạn hoạt động, bệnh huyết Trong trường hợp bệnh lupus, nồng độ nhân tố bổ thể huyết cho biết trạng thái hoạt động bệnh Giảm nồng độ C3 thấy bệnh viêm cầu thận cấp bệnh tan máu tự miễn Bổ thể C3 hoạt động protein giai đoạn cấp nồng độ tăng lên tình trạng viêm
II CHUẨN BỊ
1 Cán thực hiện: 01 Bác sỹ 01cán đại học 01 kỹ thuật viên chuyên ngành Hóa sinh
2 Phương tiện, hóa chất 2.1 Phương tiện
Máy phân tích: BN ProSpec- hãng Siemens Máy ly tâm
Tủ lạnh để bảo quản hóa chất, chất hiệu chuẩn, QC mẫu bệnh phẩm Pipep loại
Ống nghiệm, giá đựng ống nghiệm 2.2 Hóa chất
Thuốc thử N Antiserum to Human C3: sản xuất tạo miễn dịch thỏ nhân tố bổ thể C3c người Nồng độ kháng thể dạng hoạt động <6.4 g/L
Hóa chất bị tạo tủa bị đục mà khơng phải nhiễm khuẩn Trường hợp nên lọc với kích thước lỗ lọc 0.45 μm trước dùng
Hóa chất ổn định đến ngày ghi nắp hộp với điều kiện không mở nắp bảo quản nhiệt độ 2-8°C Độ ổn định sau mở, bảo quản 2-8°C lọ đóng kín tuần
2.3 Các dụng cụ tiêu hao khác Ống nghiệm;
(2)Bông, cồn sát trùng, bơm tiêm kim lây máu, dây ga rô
3 Người bệnh: Cần giải thích mục đích xét nghiệm để bệnh nhân người nhà bệnh hiểu, từ hợp tác q trình lấy máu
4 Phiếu xét nghiệm: có đầy đủ thông tin bệnh nhân bao gồm họ tên, tuổi, khoa phịng, chẩn đốn, tình trạng mẫu, tên BS định, ngày định, ngày lấy mẫu, loại thuốc sử dụng (nếu có)…
III CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH
1 Lấy bệnh phẩm xử lý mẫu bệnh phẩm
Thực mẫu máu: huyết thanh, huyết tương heparin EDTA
Mẫu huyết cần làm đơng hồn tồn sau li tâm khơng chứa hạt nhỏ dấu tích fibrin Mẫu mỡ máu bị đục sau rã đông cần làm ly tâm ( 10 phút 15,000 x g)
2 Tiến hành kỹ thuật 2.1 Chuẩn bị máy phân tích
Dựng đường chuẩn: dựa điểm với nồng độ khác nha Phân tích QC: level Khi QC đạt tiến hành phân tích mẫu 2.2 Phân tích mẫu
Mẫu máu sử dụng sớm tốt
Mẫu sau ly tâm chuyển vào khay đựng bệnh phẩm
Đánh số (hoặc ID bệnh nhân); chọn test vận hành theo protocol máy tự động phân tích
Mẫu tự động pha loãng 1:20 với N Diluent phải dùng vòng Nếu kết khoảng, xét nghiệm lặp lại với mẫu pha loãng cao thấp
IV NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ
Khoảng tham chiếu áp dụng cho mẫu huyết huyết tương từ đối tượng khỏe mạnh: C3/C3c: 0.9-1.8 g/L
Mẫu lấy thường có giá trị C3 thấp Khoảng tham chiếu C3 phụ thuộc vào thời gian điều kiện bảo quản
V NHỮNG SAI SĨT VÀ XỬ TRÍ
(3)+ Mẫu tán huyết, mỡ máu, mẫu bị đục sau rã đông
+ Thời gian lưu trữ mẫu: mức độ mảnh C3c thay đổi tùy thuộc vào thời gian mẫu lưu trữ Ở mẫu lấy, giá trị C3 thấp tới 30% so với mẫu lưu trữ
Xử trí:
+ Khi lấy máu tránh gây vỡ hồng cầu, mẫu bị vỡ hồng cầu nên loại, yêu cầu lấy mẫu máu khác để xét nghiệm
+ Mẫu bị đục sau rã đông cần làm ly tâm (10 phút 15,000 x g) Mẫu chứa mỡ máu bị đục mà không làm ly tâm cần loại bỏ