NGUYỄN VIỆT CƯỜNG NGHIÊN cứu xây DỰNG vân TAY sắc ký lớp MỎNG của một số LOÀI THUỘC CHI dây THÌA CANH (gymnema r br) KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP dược sĩ hà nội – 2020

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN VIỆT CƯỜNG NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG VÂN TAY SẮC KÝ LỚP MỎNG CỦA MỘT SỐ LỒI THUỘC CHI DÂY THÌA CANH (Gymnema R.Br) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2020 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN VIỆT CƯỜNG Mã sinh viên: 1501069 NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG VÂN TAY SẮC KÝ LỚP MỎNG CỦA MỘT SỐ LỒI THUỘC CHI DÂY THÌA CANH (Gymnema R.Br) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: ThS Phạm Thị Linh Giang Nơi thực hiện: Bộ môn Thực vật Trường Đại học Dược Hà Nội HÀ NỘI – 2020 Lời cảm ơn Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới ThS Phạm Thị Linh Giang, người trực tiếp hướng dẫn, tận tình bảo tạo điều kiện tốt cho tơi suốt q trình thực hồn thành khóa luận Cơ vừa người thầy, vừa người chị trước động viên cho lời khuyên chân thành công tác nghiên cứu khoa học lẫn sống, giúp tơi hồn thành khóa luận tốt Bên cạnh đó, q trình thực khóa luận tơi cịn nhận giúp đỡ bảo nhiều thầy cô, anh chị em khác Tôi xin bày tỏ lời cảm ơn tới: PGS.TS Trần Văn Ơn, người thầy giúp đỡ tạo điều kiện để thu mẫu xã Yên Ninh, huyện Phú Lương, tỉnh Thái Nguyên cho lời khuyên quý báu nghiên cứu; thầy cô giảng viên Bộ mơn Thực vật: TS Hồng Quỳnh Hoa, TS Phạm Hà Thanh Tùng, ThS Nghiêm Đức Trọng, ThS Lê Thiên Kim chị kỹ thuật viên ln giúp đỡ, bảo nhiệt tình cho tơi q trình thực khóa luận Các em sinh viên nghiên cứu khoa học: Vương Thị Ngân Hà (A8K73), Nguyễn Thị Ngọc Ánh (A3K72), Đinh Thùy Dương (A1K72) bạn thực khóa luận tốt nghiệp Bộ môn Thực vật, người hỗ trợ nhiều thời gian nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn tới thầy cô bạn bè Trường Đại học Dược Hà Nội, người học hỏi suốt năm vừa qua Cuối cùng, tơi gửi lời tri ân đến gia đình tơi– nơi chỗ dựa nguồn động lực tơi khó khăn Hà Nội, ngày 22 tháng năm 2020 Nguyễn Việt Cường MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ .1 CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Chi Gymnema R Br 1.1.1 Vị trí phân loại thực vật chi Gymnema R.Br .2 1.1.2 Đặc điểm thực vật, phân bố loài chi giới 1.1.3 Tác dụng sinh học số loài thuộc thuộc chi Gymnema R.Br 1.2 Chi Gymnema R.Br Việt Nam 1.2.1 Loài Gymnema sylvestre (Retz) R Br Ex Schult 1.2.2 Loài Gymnema latifolium Wall Ex Wight .6 1.2.3 Loài Gymnema inodorum (Lour.) Decne .8 1.2.4 Loài Gymnema yunnanense Tsiang 1.3 Phương pháp sắc ký lớp mỏng hiệu cao .10 1.3.1 Sắc ký lớp mỏng 10 1.3.2 Sắc ký lớp mỏng hiệu cao 10 1.4 Vân tay sắc ký thực vật .11 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .14 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị 14 2.1.1 Mẫu nghiên cứu 14 2.1.2 Trang thiết bị nghiên cứu 15 2.2 Nội dung nghiên cứu 16 2.2.1 Khảo sát số thơng số quy trình phân tích vân tay sắc ký mẫu nghiên cứu .16 2.2.2 Xây dựng vân tay hóa học số lồi thuộc chi Gymnema R.Br 16 2.2.3 Xây dựng phân loại dựa thành phần hoá học (sắc ký đồ) mẫu nghiên cứu .16 2.2.4 Ứng dụng phân tích sắc ký đồ số mẫu Dây thìa canh thu thị trường 17 2.3 Phương pháp nghiên cứu 17 2.3.1 Chuẩn bị mẫu phân tích 17 2.3.2 Lựa chọn điều kiện triển khai sắc ký 19 2.3.3 Tiến hành phân tích vân tay sắc ký dịch chiết số loài chi Gymnema R.Br theo quy trình đề xuất 20 2.4 Phương pháp xử lý kết 20 CHƯƠNG KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM 22 3.1 Kết khảo sát số thông số quy trình phân tích vân tay sắc ký mẫu nghiên cứu 22 3.1.1 Với dịch chiết toàn phần .22 3.1.2 Với dịch chiết sau thủy phân 22 3.2 Kết xây dựng vân tay hóa học số loài thuộc chi Gymnema R.Br 23 3.2.1 Với dịch chiết toàn phần .23 3.2.2 Với dịch chiết sau thủy phân 27 3.3 Kết xây dựng phân loại dựa kết sắc ký lớp mỏng mẫu Gymnema nghiên cứu 31 3.4 Kết phân tích sắc ký đồ số mẫu Dây thìa canh thu thị trường 34 CHƯƠNG BÀN LUẬN 37 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 40 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT H2SO4 Acid sulfuric HCl Acid hydroclorid HPTLC High performance thin-layer chromatography – Sắc ký lớp mỏng hiệu cao ITS Internal Transcribed Spacer KOH Kali hydoxid MeOH Methanol G inodorum Gymnema inodorum (Lour.) Decne G latifolium Gymnema latifolium Wall ex Wight G reticulatum Gymnema reticulatum (Moon) Alst G sylvestre Gymnema sylvestre (Retz) R Br Ex Schult G yunnanense Gymnema yunnanense Tsiang GYM Chất chuẩn gymnemagenin Rf Ratio frequency - Hệ số di chuyển SKĐ Sắc ký đồ STT Số thứ tự TLC Thin-layer chromatography – Sắc ký lớp mỏng TT Thuốc thử UPGMA Unweighted Pair-Group Method with Arithmetical Averages VIS Visible – Ánh sáng thường UV Ultra violet – Ánh sáng tử ngoại UV 366-TT VIS-TT Quan sát ánh sáng tử ngoại 366nm sau phun thuốc thử Quan sát ánh sáng trắng sau phun thuốc thử DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Một số tác dụng sinh học cơng bố lồi thuộc chi Gymnema R.Br Bảng 1.2 Khóa phân loại lồi chi Gymnema Việt Nam [2] Bảng 1.3 Tổng hợp khác biệt cấu trúc khung chất loài chi Gymnema R.Br 13 Bảng 2.1 Danh mục ký hiệu mẫu nghiên cứu (i ii)…………………….14 Bảng 3.1 Sự xuất vết sắc ký đồ dịch chiết toàn phần mẫu nghiên cứu nhóm quan sát mỏng sau phun thuốc thử……………………………… 26 Bảng 3.2 Tổng hợp Rf màu sắc vết sắc ký đồ dịch chiết sau thủy phân mẫu thuộc loài G sylvestre quan sát VIS-TT UV 366-TT 28 Bảng 3.3 Tổng hợp Rf màu sắc vết sắc ký đồ dịch chiết sau thủy phân mẫu thuộc loài G latifolium quan sát VIS-TT UV 366-TT .29 Bảng 3.4 Tổng hợp Rf màu sắc vết sắc ký đồ dịch chiết sau thủy phân mẫu thuộc loài G yunnanense G inodorum quan sát VIS-TT UV 366-TT 31 Bảng 3.5 Bảng hệ số tương đồng cặp đôi mẫu nghiên cứu, sử dụng số Nei&Li 33 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Khung cấu trúc phần aglycon acid gymnemic phân lập từ Gymnema sylvestre (Retz) R Br Ex Schult [52] .5 Hình 1.2 Khung cấu trúc phần aglycon acid dạng C-4 gem-dimethylat olean phân lập từ Gymnema sylvestre (Retz) R Br Ex Schult nguồn gốc Việt Nam [37] Hình 1.3 Khung cấu trúc phần aglycon 3β-hydroxy oleaan triterpenoid phân lập từ Gymnema latifolium Wall Ex Wight [38] Hình 1.4 Khung cấu trúc số chất phân lập từ loài Gymnema inodorum (Lour.) Decne [44] .8 Hình 1.5 Khung cấu trúc chung aglycon C21 phân lập từ Gymnema yunnanense Tsiang [28], [62] Hình 2.1 Quy trình chiết - thủy phân mẫu nghiên cứu………………………….…18 Hình 3.1 Sắc ký đồ khai triển dịch chiết toàn phần mẫu Gymnema nhóm 1……………………………………………………………………………… 24 Hình 3.2 Kết chồng phổ sắc ký dịch chiết toàn phần VIS-TT mẫu thuộc nhóm 25 Hình 3.3 Sắc ký đồ dịch chiết sau thủy phân mẫu Gymnema nhóm 30 Hình 3.4 Cây phân loại dựa phân tích UPGMA hệ số tương đồng sắc ký đồ mẫu .33 Hình 3.5 Kết chồng phổ sắc ký đồ mẫu GX2, GX3 sắc ký đồ GS1 34 Hình 3.6 Kết chồng phổ sắc ký đồ mẫu GX4 sắc ký đồ GI 35 Hình 3.7 Kết chồng phổ sắc ký đồ mẫu GX1 sắc ký đồ GS1, GL1 36 ĐẶT VẤN ĐỀ Trong y học cổ truyền Ấn Độ Ayurveda, Dây thìa canh (Gymnema sylvestre (Retz) R Br Ex Schult) sử dụng từ 2000 năm để điều trị đái tháo đường [56], [61] Dựa kinh nghiệm này, hàng loạt nghiên cứu tiến hành để chứng minh chế tác dụng hạ đường huyết xác định acid gymnemic nhóm hoạt chất liên quan đến tác dụng [49], [53] Dựa nguyên lý lồi bậc taxon thực vật thường có thành phần hóa học tương tự có xu hướng có tác dụng sinh học giống [3], số nghiên cứu giới chứng minh tác dụng hạ đường huyết tương tự loài chi như: Gymnema montanum Hook.f., Gymnema inodorum (Lour.) Decne, Gymnema yunnanense Tsiang,…[18], [40], [46], [47], [58] Tại Việt Nam, nghiên cứu tác dụng hạ đường huyết thực chủ yếu loài Gymnema sylvestre (Retz) R Br Ex Schult Gymnema latifolium Wall Ex Wight [12], [16] Bên cạnh số sản phẩm thực phẩm chức Diabetna (Nam Dược), DK-betics (DK-Pharma),…cịn nhiều trà thảo dược – dược liệu khơ dây thìa canh bán rộng rãi số sản phẩm có tên gọi “Dây thìa canh” sử dụng khơng thuộc hai lồi nghiên cứu Vì vậy, việc nghiên cứu đa dạng vân tay sắc ký TLC số loài thuộc chi Dây thìa canh giúp bước đầu phân biệt nhanh hóa học, làm sở cho việc kiểm nghiệm sử dụng loài chi Gymnema R.Br.; đề tài “Nghiên cứu xây dựng vân tay sắc ký lớp mỏng số lồi thuộc chi dây thìa canh - Gymnema R.Br” thực với mục tiêu sau: - Xây dựng dấu vân tay sắc ký số loài thuộc chi Gymnema R.Br phương pháp sắc ký lớp mỏng hiệu cao từ xây dựng phân loại dựa thành phần hóa học (sắc ký đồ) mẫu nghiên cứu - Ứng dụng kết nghiên cứu phân tích sắc ký đồ số mẫu Dây thìa canh thu thị trường CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Chi Gymnema R Br 1.1.1 Vị trí phân loại thực vật chi Gymnema R.Br Theo hệ thống phân loại Armen Takhtajan “Flowering Plants” (2009), chi Gymnema R.Br xếp theo thứ tự phân loại sau: Ngành: Ngọc lan (Magnoliophyta) Lớp: Ngọc lan (Magnoliopsida) Phân lớp: Hoa môi (Lamiidae) Bộ: Long đởm (Gentianales) Họ: Trúc đào (Apocynaceae) Phân họ: Thiên lý (Asclepiadoideae) Chi: Gymnema R.Br [20] 1.1.2 Đặc điểm thực vật, phân bố loài chi giới Các loài thuộc chi Gymnema R.Br leo, khơng có rễ phụ thân Lá mọc đối, khơng nạc Cụm hoa xim, dạng tán chùm Hoa nhỏ Thùy đài nhỏ, hình trứng, đầu tù, gốc đài có tuyến, khơng có tuyến Tràng hình bánh xe, thùy tràng không gập nụ, tiền khai vặn phải Tràng phụ đơn, vảy tràng phụ dính tràng, thường có hàng lơng xếp dọc theo tràng Chỉ nhị dính nhau, bao phấn ơ, có phần phụ đỉnh, hạt phấn dính thành khối phấn có sáp bao bên ngồi vách khối phấn, khối phấn khơng có mỏm đỉnh, quan truyền phấn có gót đính chi, khối phấn hướng lên, có khối phấn phấn Đầu nhụy phình lên hình trứng, đỉnh bầu khơng thót lại thành dạng vịi nhụy Cột nhị - nhụy hình ống nhọn đầu [21], [23] Phân bố chi Gymnema R.Br rộng, vùng Tây châu Phi đến Australia, châu Á [7] Trong thực vật chí Trung Quốc, Tsiang cộng mơ tả xây dựng khóa phân loại chi Gymnema R.Br [21] Năm 2011, Jingyun Fang cộng cơng bố đồ phân bố lồi Gymnema R.Br Trung Quốc [29] Các tài liệu thực vật, Thái Lan ghi nhận có lồi, Ấn Độ có lồi, Indonesia lồi Lào [27], Đài Loan có lồi [32] Theo dự án “The plant list” thực Royal Botanic Gardens, Kew Missouri Botanical Garden khởi động từ năm 2010 xác định 120 loài thuộc chi Gymnema R.Br thu thập từ sở liệu khác giới có 52 tên khoa học chấp nhận (43,3%), 50 tên xác định tên đồng nghĩa (41,67 %), 18 tên 12 13 14 Track 11 Peak 10 11 12 13 14 15 16 Track 12 Peak 10 11 12 13 14 15 Track 13 Peak 10 0.6412 0.775 0.8426 2617.52 812.1113 814.4814 0.7118 0.8118 0.8868 6410 1501.148 2830.853 0.7735 0.8382 0.9691 789.3701 720.5557 141.4814 Height : start 982.4824 188.5566 1814.297 1824.482 1746.926 1735.148 2476.333 2978.594 1822.26 1972.815 4167.371 2276.074 1945.742 1925.741 1755.667 2091.853 Rf : max 0.0029 0.0412 0.0941 0.1176 0.1529 0.2294 0.2706 0.3029 0.4029 0.4735 0.4971 0.5632 0.6412 0.7088 0.8265 0.8897 Height : max 1202.186 5394.26 2274.779 1932.852 2260.26 3262.557 3397.777 4720.741 2364.223 4713.223 4358.037 4925.186 2852.075 4088.926 2808.853 3066.704 Rf : end 0.0132 0.0735 0.1029 0.125 0.1941 0.2515 0.2809 0.3382 0.4279 0.4853 0.5191 0.6088 0.6691 0.7632 0.8515 0.9691 Height : end 185.0742 1862.519 1817.037 1714.334 1583.26 2525.593 3068.444 1832.112 1878.963 4148.927 2200.814 1953.89 1979.297 1804.815 2095.778 764.3711 Height : start 1195.778 360.8525 4622.407 2016.741 1786.518 2557.297 3296.334 1716.111 2088.223 4888.26 2139.407 1768.556 1179.482 1524.111 1021.111 Rf : max 0.0044 0.0294 0.0397 0.0926 0.2324 0.2735 0.3088 0.4044 0.4779 0.5 0.5676 0.7088 0.8015 0.8294 0.8912 Height : max 1491.853 4723.741 5453.556 3604.63 4067.63 3889.334 5610.963 2346.074 4888.26 6402.408 4026.333 3973 1313.63 2215.963 1247.481 Rf : end 0.0162 0.0324 0.0706 0.1103 0.2529 0.2838 0.3632 0.4353 0.4779 0.5294 0.6118 0.7662 0.8015 0.8588 0.9338 Height : end 5.852539 4622.407 2063.778 2078.222 2557.297 3383.186 1771.778 2088.223 4888.26 2139.407 1800.37 1169.927 1313.63 951.8887 336.1855 Height : start 1560 562.2227 1058.557 494.5566 1118.186 1052.852 893.5546 1442.63 1898.074 909.2598 Rf : max 0.0015 0.0368 0.0529 0.0912 0.1118 0.1426 0.2382 0.2824 0.3088 0.4059 Height : max 1565.777 3534.185 1194.408 1817.297 1478.408 1413.223 2729.963 1929.668 3882.334 2709.074 Rf : end 0.0147 0.05 0.0735 0.1029 0.1279 0.175 0.2574 0.2824 0.3353 0.4412 Height : end 562.2227 1058.557 494.5566 1118.186 1006.297 954.7051 1446.297 1929.668 1172.187 1389.593 294000.7 49634.09 112211.9 24.79266 4.185573 9.462671 Area Area [%] 6337.261 109489.4 37453.56 23857.23 83809.89 97623.78 58218.28 127755 72005.04 123929.8 77562.39 194980.2 91957.93 154066.6 129263.3 143312.1 0.413761 7.14859 2.445353 1.557645 5.47197 6.373883 3.801087 8.341161 4.701228 8.091407 5.064069 12.73031 6.003958 10.05905 8.439636 9.356888 Area Area [%] 10491.16 28429.63 88837.08 68190.93 120971.9 71270.46 178527.6 90990.5 95031.95 160939.5 163329.1 137338.9 24922.15 63380.74 42378.06 0.779994 2.113681 6.604841 5.069846 8.993996 5.298802 13.27314 6.764943 7.065416 11.9655 12.14316 10.21084 1.852907 4.712219 3.150716 Area Area [%] 12528.63 49104.77 14485.6 25352.96 20627.95 35582.46 90809.6 26331.6 96327.23 91512.11 1.028178 4.029843 1.188779 2.080622 1.692858 2.920118 7.452401 2.160935 7.905212 7.510053 GS3 Rf : start 0.0191 0.075 0.1059 0.1279 0.1971 0.2529 0.2824 0.3779 0.4309 0.4868 0.5235 0.6118 0.6721 0.7676 0.8544 GS4 Rf : start 0.0191 0.0324 0.0735 0.1956 0.2529 0.2853 0.3691 0.4353 0.4779 0.5294 0.6721 0.7706 0.8059 0.8618 GS5 Rf : start 0.0147 0.05 0.0735 0.1029 0.1309 0.1809 0.2603 0.2838 0.3603 11 12 13 14 15 16 17 0.4471 0.4985 0.5324 0.6206 0.6765 0.7706 0.8603 1379.26 4121.778 1629.112 1611.593 1891.037 1785.593 1309.89 0.4794 0.5059 0.5647 0.6441 0.7118 0.8324 0.8882 5289.815 4343.482 3492.927 2404.853 3903.037 2323.927 2553.778 0.4956 0.5294 0.6191 0.6735 0.7691 0.8574 0.9574 4184.89 1552.261 1605.334 1885.778 1792.557 1307.26 50.77832 119271 66930.36 149249.4 70124.09 154856.1 114183.8 81250.4 9.788124 5.492722 12.24833 5.754819 12.70846 9.37063 6.667913 PHỤ LỤC HÌNH ẢNH VÀ SỐ LIỆU SẮC KÝ ĐỒ NGHIÊN CỨU PHÂN TÍCH MỘT SỐ MẪU DÂY THÌA CANH TRÊN THỊ TRƯỜNG Hình PL5.1 Sắc ký đồ dịch chiết tồn phần mẫu Dây thìa canh thị trường khai triển mỏng với mẫu Dây thìa canh nhóm a) Quan sát VIS-TT; b) Quan sát UV 366-TT; c) Quan sát UV 366 Hình PL5.2 Sắc ký đồ dịch chiết sau thủy phân mẫu Dây thìa canh thị trường khai triển mỏng với mẫu Dây thìa canh nhóm a) Quan sát ánh sáng trắng; b) Quan sát UV 366nm Bảng PL5.1 Số liệu sắc ký đồ dịch chiết tồn phần mẫu Dây thìa canh thị trường Track 13 Peak 10 11 12 13 14 15 Track 14 Peak 10 11 12 13 14 15 Track 15 Peak 10 GX1 Rf : start 0.0128 0.0966 0.1293 0.1534 0.1903 0.2827 0.3224 0.3594 0.473 0.517 0.5668 0.6392 0.7287 0.7841 0.8267 Height : start 16.9502 1019.876 821.8496 1485.75 390.4102 814.3398 209.6113 141.5781 507.1768 369.6299 186.6377 1260.532 2622.759 Rf : max 0.0384 0.1222 0.1378 0.1761 0.2301 0.3068 0.3381 0.392 0.4886 0.5398 0.6023 0.6605 0.767 0.8224 0.8949 Height : max 2331.052 1106.805 1242.493 2187.608 3993.743 1289.928 1083.561 4015.715 602.4277 924.7666 2130.366 585.0752 1401.642 2540.204 5043.99 Rf : end 0.0625 0.1264 0.1506 0.1875 0.2699 0.3196 0.3537 0.4233 0.5043 0.5639 0.6321 0.6818 0.7798 0.8224 0.9687 Height : end 33.58105 1062.115 942.7539 1568.988 288.4053 409.9277 829.043 329.6797 310.9102 516.0283 419.5908 181.1885 1298.31 2540.204 267.1816 Height : start 70.1543 32.36523 177.124 88.33301 81.05957 245.0889 591.2402 232.1738 95.98975 289.4395 517.769 1318.646 2700.825 3212.338 Rf : max 0.0284 0.054 0.0795 0.1207 0.2273 0.3068 0.3437 0.3935 0.4886 0.5412 0.6676 0.7656 0.8239 0.8523 0.8977 Height : max 2417.911 212.3252 207.1787 1553.994 4651.333 319.3936 630.9976 2452.631 550.1128 843.0493 518.1958 1334.979 2690.522 3312.885 4219.398 Rf : end 0.0469 0.0625 0.0838 0.1548 0.2798 0.3139 0.3494 0.4304 0.5028 0.5682 0.6889 0.777 0.8239 0.8679 0.9673 Height : end 70.1543 34.12988 112.0791 156.5313 230.1504 612.604 287.9028 202.627 409.5933 286.8008 1260.858 2690.522 3210.551 301.8184 Height : start 50.85742 87.33301 55.3169 327.1787 481.7236 242.3418 691.4521 566.4473 453.0547 Rf : max 0.0327 0.125 0.2301 0.304 0.3437 0.3864 0.4915 0.5384 0.6562 0.7628 Height : max 3760.271 1577.667 4425.333 601.9146 698.0996 1596.607 750.5488 1422.374 848.9337 1596.536 Rf : end 0.0668 0.1605 0.277 0.3168 0.3537 0.4205 0.5114 0.5994 0.7031 0.7912 Height : end 83.51172 107.2139 45.33301 266.2007 532.3955 275.48 601.1411 623.811 461.7583 1504.429 Area Area [%] 37301.34 14926.52 16981.72 38119.71 145119.3 19505.73 19515.16 89248.83 9811.239 20446.53 53002.5 12650.6 31471.89 51206.59 325883.5 4.21393 1.686248 1.918424 4.306381 16.39412 2.203562 2.204627 10.08243 1.108375 2.309843 5.987689 1.429138 3.555378 5.784806 36.81504 Area Area [%] 30607.51 1638.897 1417.951 46205.58 169445.5 3904.683 10178.44 83349.43 9264.012 20328.31 17871.22 29063.45 61809.52 89068.3 178312.9 4.067629 0.217804 0.188441 6.140556 22.5187 0.518918 1.352678 11.07684 1.231154 2.70156 2.375021 3.862428 8.214265 11.83686 23.69715 Area Area [%] 68914.74 40119.85 146903.3 7989.853 12570.32 44624.34 21636.67 62803.33 42155.2 62516.81 8.745853 5.091542 18.64326 1.013979 1.595278 5.6632 2.745873 7.970264 5.349845 7.933903 GX2 Rf : start 0.0099 0.0469 0.0668 0.0866 0.1733 0.2912 0.3196 0.3523 0.4673 0.5156 0.6293 0.7386 0.7812 0.8267 0.8722 GX3 Rf : start 0.0099 0.0881 0.179 0.2855 0.3224 0.3551 0.4574 0.517 0.608 0.7131 11 12 Track 16 Peak 10 11 12 13 14 15 16 17 0.7983 0.8651 1812.07 2925.821 0.8523 0.8949 3095.869 3912.376 0.8608 0.9503 2935.837 783.5029 Height : start 0 505.2627 1398.445 85.30762 40.28906 96.66699 1113.667 869.9995 207.1553 714.377 1830.024 1378.876 612.457 498.6157 1707.453 4285.31 Rf : max 0.0256 0.0597 0.0824 0.1222 0.1534 0.2131 0.2955 0.3267 0.3807 0.5014 0.5611 0.598 0.6378 0.6932 0.7642 0.8551 0.8977 Height : max 1277.41 1244.96 5042.213 1702.737 261.9492 1742.265 2427.667 1925.668 4760 731.6968 1796.882 2613.552 1538.453 719.9575 1780.401 5273.795 5009.927 Rf : end 0.044 0.0682 0.108 0.1406 0.1747 0.2543 0.3097 0.3452 0.4077 0.5014 0.5611 0.6278 0.669 0.7216 0.7798 0.8764 0.9588 Height : end 460.9111 505.2627 1282.787 47.33887 29.43555 31.74317 1104 899.0005 234.001 731.6968 1796.882 1245.978 595.9937 502.6021 1692.672 4296.86 396.5605 115482.9 162253 14.65574 20.59126 Area Area [%] 20122.8 9995.512 87846.88 24144.39 3389.732 42896.43 46521.34 33627.35 101926.4 11669.04 55634.21 79843.71 30310.74 19269.47 48868.29 251817.9 170583.3 1.93774 0.962525 8.459281 2.325002 0.326417 4.130744 4.479807 3.238171 9.815077 1.123679 5.357338 7.68861 2.918796 1.855568 4.705808 24.24899 16.42645 GX4 Rf : start 0.0114 0.0483 0.0682 0.1108 0.1477 0.1875 0.2628 0.3125 0.3494 0.4702 0.5057 0.571 0.6307 0.6747 0.7259 0.7812 0.8778 Bảng PL5.2 Số liệu sắc ký đồ dịch chiết sau thủy phân mẫu Dây thìa canh thị trường Track 14 Peak 10 11 12 13 14 15 16 17 Track 15 Peak GX1 Rf : start 0.0147 0.0279 0.0441 0.0765 0.1956 0.25 0.2824 0.3853 0.4515 0.5 0.5412 0.5971 0.6279 0.675 0.7809 0.8529 Height : start 1667.813 879.999 2411.964 2901.036 974.7021 1604.333 1225.776 1438.407 735.7773 863.5918 2456.592 1173.777 1285.185 796.4805 633.5176 805.1104 1115.073 Rf : max 0.0029 0.0235 0.0353 0.0471 0.1088 0.2206 0.2735 0.3088 0.4118 0.4809 0.5015 0.5676 0.5985 0.65 0.7088 0.8368 0.8897 Height : max 1821.63 2452.519 3735.479 3204.333 1901.813 4861.556 1660.332 3022.999 1825.962 3875.556 2471.11 2437.519 1288.888 1339.852 1972.999 1442.073 3042.37 Rf : end 0.0118 0.025 0.0441 0.0735 0.1324 0.25 0.2794 0.3441 0.4485 0.5 0.5221 0.5941 0.625 0.6721 0.7765 0.8485 0.9397 Height : end 921.7022 2407.813 2901.036 988.1103 936.3701 1225.776 1520.259 755.4814 898.7031 2456.592 1278.777 1274.888 801.1475 589.333 776.0742 1117.703 31.48047 Height : start 1812.557 855.668 Rf : max 0.0029 0.0206 Height : max 1872 1106.889 Rf : end 0.0132 0.0235 Height : end 945.1113 986.9258 Area Area [%] 13307.75 12871.46 34347.12 38234.98 55855.18 117085.3 29179.67 82047.89 55859.76 83690.04 29402.12 67976.5 19452.68 28723.07 70615.98 51175.64 106135.9 1.485305 1.436609 3.833551 4.267483 6.234109 13.06812 3.256802 9.15753 6.23462 9.340814 3.281629 7.586994 2.171152 3.20584 7.881592 5.711816 11.84604 Area Area [%] 13935.24 5021.113 2.561526 0.922963 GX2 Rf : start 0.0162 10 11 12 13 14 15 Track 16 Peak 10 11 12 13 14 Track 17 Peak 10 11 12 0.0235 0.0794 0.1441 0.2074 0.2574 0.2838 0.3882 0.4294 0.5044 0.5471 0.6779 0.7721 0.8588 986.9258 322.5938 240 473.5547 578.5557 1111.333 122.8896 299.7783 1993.444 593.4814 710.9258 406.7412 881.704 0.0309 0.0897 0.1559 0.2294 0.2765 0.3147 0.4 0.4912 0.5147 0.5824 0.7147 0.8309 0.8912 1429.186 718.1113 566.7402 1851.371 1252.074 3265.814 743.4082 2194.556 2252.704 2915.001 2567.704 1571.223 1427.667 0.0529 0.1029 0.175 0.2574 0.2824 0.3456 0.425 0.5015 0.5441 0.6059 0.7662 0.8574 0.9588 499.1484 360.8887 334.6309 578.5557 1159.481 341.7783 316.9629 2043.593 607.2588 760.667 453.4443 891.7031 454.334 Height : start 741.5557 487.666 308 367.5918 438.7773 387.5186 299.9258 340.9619 634.4072 447.5547 733.9258 409.7773 520 687.2949 Rf : max 0.0029 0.0324 0.1191 0.1765 0.3118 0.3412 0.4206 0.4912 0.5118 0.5618 0.6059 0.6544 0.7088 0.8868 Height : max 889.3701 1105.223 701.7402 663.2598 832.333 621.0361 656.8887 699.9258 841.6299 1107.666 862.4815 1025.333 1011.296 1178.11 Rf : end 0.0162 0.0603 0.1279 0.2 0.3324 0.3662 0.4397 0.5029 0.5426 0.5809 0.6294 0.6779 0.7515 0.9647 Height : end 502.4063 375.4805 372.4434 304.8887 304.8516 348.6289 291.4072 639.8145 447.5547 857.7783 529.8887 486.1103 377.333 47.99902 Height : start 2351.814 867.7412 842.2969 821.6299 657.9629 389.2959 1187.149 1154.519 1975.037 1681.815 730.1113 439.4443 Rf : max 0.0294 0.0985 0.1471 0.2221 0.2794 0.4868 0.5118 0.6074 0.6471 0.7118 0.8191 0.8912 Height : max 9920.187 1143.778 2469.89 3933.74 1095.815 1225.186 2946.668 3898 2123.371 5557.89 896.2598 2510.74 Rf : end 0.0559 0.1279 0.1676 0.2588 0.3059 0.4912 0.5529 0.6353 0.675 0.7721 0.8368 0.9544 Height : end 857.7412 834.5557 744.5557 553.2227 479.7412 1198.407 1151.408 1975.037 1626.481 732.8525 512.0381 113.9258 19433.08 8702.003 8404.542 39038.65 17046.84 76914.15 12951.75 48211.48 39501.86 73163.79 73987.37 58246.35 49462.89 3.572119 1.599571 1.544893 7.175945 3.133489 14.13808 2.380744 8.862061 7.26109 13.44871 13.60009 10.70664 9.092092 Area Area [%] 7900.865 20222.63 9707.252 22250.69 18257.99 9977.844 13404.8 11494.04 17022.6 22114.36 19447.41 21188.63 31041.91 59354.23 2.78803 7.136092 3.425461 7.851747 6.442817 3.520947 4.73024 4.055979 6.006876 7.803638 6.862535 7.476971 10.95396 20.94472 Area Area [%] 179836.3 41504.05 39663.69 106310.7 23359.27 16948.37 72069.99 119536.3 51292.28 188085.6 31680.86 87929.48 18.76781 4.331383 4.139323 11.09464 2.437785 1.768741 7.521261 12.47487 5.352888 19.62871 3.306231 9.176366 GX3 Rf : start 0.0191 0.1015 0.1309 0.2912 0.3338 0.3941 0.4706 0.5044 0.5426 0.5868 0.6338 0.6794 0.8294 GX4 Rf : start 0.0574 0.1309 0.1706 0.2632 0.4618 0.4926 0.5574 0.6353 0.6765 0.7765 0.8412 PHỤ LỤC CHI TIẾT NHÓM THẾ CÁC KHUNG SAPONIN PHÂN LẬP ĐƯỢC TỪ CÁC LOÀI TRONG CHI Gymnema R.Br 1) Cấu trúc phần aglycon acid gymnemic phân lập từ Gymnema sylvestre (Retz) R Br Ex Schult [52] Tig = Tigloyl Mba = 2-methylbutyroyl Bz Cấu trúc phần aglycon phân tử acid gymnemic phân lập từ Gymnema sylvestre (Retz) R Br Ex Schult [52] Cấu trúc phần đường phân tử acid gymnemic phân lập từ Gymnema sylvestre (Retz) R Br Ex Schult [52] Vị trí nhóm tương ứng acid gymnemic phân lập từ Gymnema sylvestre (Retz) R Br Ex Schult [52] Tên R1 R2 R3 R4 R5 R6 I GlcA H OH OAc OH OTig II GlcA H OH OAc OH OMba III GlcA H OH OH OH OMba IV GlcA H OH OH OH OTig V GlcA H OH OH OTig OTig VI A H OH OH OH OTig VII GlcA H OH OH H OH VIII B H OH OH OH OMba IX B H OH OH OH OTig X GlcA H OH OAc OH OH XI GlcA H OH OTig OH OTig XII A H OH OAc OH OTig XIII GlcA H OH OMba OH OH XIV GlcA H OH OTig OH OH XV GlcA H OH OH OTig OMba XVI GlcA H Tig OH OTig OH XVII GlcA H OH OH OH OBz XVIII GlcA H OH OBz OH OH GA 2) Cấu trúc phần aglycon C-4-gem-dimethylat olenan type acid phân lập từ Gymnema sylvestre (Retz) R Br Ex Schult nguồn gốc Việt Nam [52] 3) Cấu trúc phần aglycon 3β-hydroxy oleanan triterpenoid phân lập từ Gymnema latifolium Wall Ex Wight [38] [52] 4) Cấu trúc số chất phân lập từ loài Gymnema inodorum (Lour.) Decne [44] 5) Khung cấu trúc chung aglycon C21 phân lập từ Gymnema yunnanense Tsiang [28], [62] ... TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN VIỆT CƯỜNG Mã sinh viên: 1501069 NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG VÂN TAY SẮC KÝ LỚP MỎNG CỦA MỘT SỐ LOÀI THUỘC CHI DÂY THÌA CANH (Gymnema R. Br) KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC... Gymnema R. Br.; đề tài ? ?Nghiên cứu xây dựng vân tay sắc ký lớp mỏng số lồi thuộc chi dây thìa canh - Gymnema R. Br” thực với mục tiêu sau: - Xây dựng dấu vân tay sắc ký số loài thuộc chi Gymnema R. Br... cấu trúc khung chất loài chi Gymnema R. Br R R R R R R H R OH R1 R O OR H Khung saponin lồi G Khung saponin lồi G sylvestre nguồn gốc Ấn Độ sylvestre nguồn gốc Việt Nam R OR H R R R R1 OR OH OR OH