khảo sát thành phần hóa học phân đoạn a5 cao chloroform rễ cây hà thủ ô trắng streptocaulon juventas

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA HĨA HỌC  KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC PHÂN ĐOẠN A5 CAO CHLOROFORM RỄ CÂY HÀ THỦ Ô TRẮNG Streptocaulon juventas NGUYỄN HỮU TỒN Thành phố Hồ Chí Minh, ngày 05 tháng 05 năm 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA HĨA HỌC  KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC PHÂN ĐOẠN A5 CAO CHLOROFORM RỄ CÂY HÀ THỦ Ô TRẮNG Streptocaulon juventas Giảng viên hƣớng dẫn: TS Bùi Xuân Hào Sinh viên thực hiện: Nguyễn Hữu Toàn Mã số sinh viên: K40.201.094 Thành phố Hồ Chí Minh, ngày 05 tháng 05 năm 2019 NHẬN XÉT CỦA GIẢNG VIÊN PHẢN BIỆN Thành phố Hồ Chí Minh, ngày 05 tháng 05 năm 2019 Giảng viên phản biện Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Hữu Toàn LỜI CẢM ƠN Nghiên cứu đƣợc thực phịng thí nghiệm Hợp chất thiên nhiên, khoa Hóa học, trƣờng Đại học Sƣ phạm thành phố Hồ Chí Minh Em xin chân thành cảm ơn giáo viên hƣớng dẫn Thầy Bùi Xuân Hào tận tâm việc truyền đạt kiến thức kinh nghiệm quý báu Thầy theo dõi trình làm việc em để kịp thời phát hiện, điều chỉnh, sửa chữa sai sót Tất nhằm tạo điều kiện tối ƣu để em hồn thành Khóa luận tốt nghiệp Song song với học thực nghiệm, Thầy truyền cho em tinh thần nghiên cứu khoa học, giúp em có động lực việc học tập nghiên cứu Em xin cảm ơn quý Thầy Cô phịng thí nghiệm Hợp chất thiên nhiên nói riêng nhƣ q Thầy Cơ khoa Hóa học – trƣờng Đại học Sƣ phạm thành phố Hồ Chí Minh nói chung tận tâm công tác giảng dạy, truyền thụ cho em nhiều kiến thức khoa học hữu ích suốt thời gian em học tập trƣờng Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến bạn Trần Thị Tú Quyên, bạn Nguyễn Thị Ngọc Nƣơng, chị Trần Thị Thu Sƣơng đồng hành em suốt thời gian qua Xin chân thành cảm ơn Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Hữu Tồn MỤC LỤC MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC LỜI MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT 1.1.1 Mô tả chung 1.1.2 Vùng phân bố 1.2 CÁC NGHIÊN CỨU VỀ DƢỢC TÍNH 1.2.1 Dƣợc tính theo y học cổ truyền 1.2.2 Nghiên cứu dƣợc tính 1.3 CÁC NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CHƢƠNG THỰC NGHIỆM 12 2.1 HOÁ CHẤT, THIẾT BỊ, PHƢƠNG PHÁP 12 2.1.1 Hoá chất 12 2.1.2 Thiết bị 12 2.1.3 Phƣơng pháp tiến hành 12 2.2 NGUYÊN LIỆU 12 2.2.1 Thu hái nguyên liệu 12 2.2.2 Xử lý mẫu nguyên liệu 13 2.3 ĐIỀU CHẾ CÁC LOẠI CAO 13 2.4 CÔ LẬP CÁC HỢP CHẤT HỮU CƠ TRONG CAO CHLOROFORM 14 2.4.1 Sắc kí cột silica gel cao chloroform 14 2.4.2 Sắc kí cột silica gel phân đoạn A5 bảng 2.1 14 2.4.3 Sắc kí cột pha đảo phân đoạn A5.4 bảng 2.2 15 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 17 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 20 4.1 KẾT LUẬN 20 4.2 ĐỀ XUẤT 20 TÀI LIỆU THAM KHẢO 21 Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Hữu Toàn MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu, chữ viết tắt H-NMR 13 C-NMR HSQC Prot Carb Reso Hete Corr HMBC Hete s Sing d Dou t Trip dd Dou m Mul δ Chem J Cou ppm Part UV Ultra EA Ethy C Chlo Me Meth Et Etha H n-He AcOH Acet Ac Acet SKC SKLM g Gam mg Mili MHz Meg Hz Hert cm Cent mm Mili m Micr nm Nan Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Hữu Toàn DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Các nghiên cứu thành phần hóa học Bảng 2.1 Sắc kí cột silica gel cao chloroform 14 Bảng 2.2 Sắc kí cột silica gel phân đoạn A5 15 Bảng 3.1 So sánh số liệu phổ hợp chất SJ1 hợp chất 5-pregnen-3,17,20-triol .19 Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Hữu Toàn CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN KHẢO SÁT CẤU TRÚC HỢP CHẤT SJ1 Hợp chất SJ1 (122,5 mg) thu đƣợc đƣợc từ phân đoạn A5.4 cao chloroform, có tính chất sau: - Dạng tinh thể hình kim, khơng màu, tan hồn tồn dung mơi methanol - Sắc kí lớp mỏng cho vết nhúng H2SO4 20% sấy nóng đến vết, bảng mỏng cho vết màu nâu rêu  Phổ H-NMR (MeOD): Phụ lục 1a  Phổ 13 C-NMR (MeOD): Phụ lục 1b  Phổ HSQC (MeOD): Phụ lục 1c  Phổ HMBC (MeOD): Phụ lục 1d  BIỆN LUẬN CÁU TRÚC Phổ H-NMR hợp chất SJ1 (phụ lục 1a) cho thấy diện tín hiệu cộng hƣởng ba nhóm methyl δH 1.19 (3H, d, J = 6.0 Hz); 0.8 (3H, s) 1.05 (3H, s) Trên phổ H-NMR cịn cho thấy tín hiệu cộng hƣởng proton olefin δH 5.37 (1H, m), hai proton methine gắn oxygen δH 3.42 (1H, m) 3.80 (1H, dd, J = 6.3; 12.5 Hz) Ngoài ra, phổ proton cịn có diện tín hiệu cộng hƣởng proton methylene methine khoảng δH 1.3 - 2.2 ppm Phổ 13 C-NMR hợp chất SJ1 (phụ lục 1b) cho thấy diện 21 carbon, gồm có tín hiệu cộng hƣởng ba carbon methyl δC 14.8 (C-18); 18.8 (C-21); 19.8 (C-19), tám carbon methylene, sáu carbon methine có hai carbon methine gắn với oxygen δC 72.4 (C-3) δC 72.9 (C-20), carbon methine olefin δC 122.4 (C-6), bốn carbon bậc bốn có carbon olefin δC 142.3 (C-5), carbon gắn với oxygen δC 87 (C-17) Phổ HMBC hợp chất SJ1 (phụ lục 3d) cho thấy có tƣơng quan proton nhóm methyl δH 1.05 (3H, s, H-19) với carbon olefin δC 142.3 (C-5) carbon δC 38.6 (C-1), 51.5 (C-9), 37.7 (C-10) Đồng thời proton olefin δH 5.37 (1H, m, H-6) tƣơng quan với carbon δC 33.2 (C-7), 33.3 (C-8), 37.7 (C-10) xác nhận diện liên kết đơi vị trí C5-C6 Proton nhóm methyl δH 1.19 (3H, d, H-21) tƣơng quan với hai carbon δC 87 17 Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Hữu Toàn (C-17); 72.9 (C-20) Đồng thời proton nhóm methyl δH 0.8 (3H, s, H-18) tƣơng quan với carbon δC 87.0 (C-17), 47 (C-13), 52.6 (C-14) xác nhận diện hai nhóm hydroxyl vị trí C-17 C-20 Các tƣơng quan HMBC cịn lại đƣợc trình bày cụ thể Hình 3.2 Bảng 3.1 Từ số liệu phổ trên, kết hợp với so sánh tài liệu tham khảo (đƣợc trình bày Bảng 3.1) [12], cấu trúc SJ1 đƣợc đề nghị 5-pregnen-3,17,20-triol Hình 3.1 Cấu trúc hợp chất SJ1 Hình 3.2 Một số tƣơng quan HMBC hợp chất SJ1 18 Khóa luận tốt nghiệp Bảng 3.1 So sánh số liệu phổ hợp chất SJ1 hợp chất 5-pregnen-3,17 Vị trí carbon 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Hữu Toàn CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 4.1 KẾT LUẬN Từ mẫu rễ Hà thủ ô trắng thu hái đƣợc huyện Tịnh Biên, tỉnh An Giang, tơi khảo sát thành phần hố học cao chlorofom rễ Hà thủ ô trắng Bằng kỹ thuật sắc ký cột silica gel pha thƣờng, pha đảo, sắc ký lớp mỏng, cô lập đƣợc hợp chất: 5pregnen-3,17, 20-triol 4.2 ĐỀ XUẤT Trong thời gian tới tiếp tục khảo sát phân đoạn khác với hy vọng cô lập thêm hợp chất có cấu trúc Với mong muốn đóng góp chứng khoa học có giá trị Y học, tiến hành thử nghiệm hoạt tính sinh học hợp chất lập đƣợc 20 Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Hữu Tồn TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt [1] Đỗ Tất Lợi (2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, 836-837 [2] Phạm Thanh Tâm, Trần Hùng (2002), Chuyên đề Nghiên cứu Khoa học Dƣợc, Y Học TP Hồ Chí Minh, 49-52 Tài liệu Tiếng Anh [3] Bui Xuan Hao, Nguyen Thi Hong Yen, Nguyen Minh Duc, Tran Le Quan (2009), Chemical constituents from the roots of Streptocaulon juventas, Science & Technology Development, 12(10), 72-77 [4] Chun Ye, Hua Wang, Rui Xue, Na Han, Lihui Wang, Jingyu Yang, Yu Wang, Jun Yin (2015), Minor cytotoxic cardenolide glycosides from the root of Streptocaulon juventas, Steroids, 93, 39-46 [5] Iman Omer, Ibrahim Abdurrahman, Yang Cai-Xia (2017), New Triterpenoid from the roots of Calotropis gigantea (L) Dryand (Asclepiadaceae), American Journal of Organic Chemistry, 7(1), 13-15 [6] Jun-ya Ueda, Yasuhiro Tezuka, Arjun Hari Banskota, Quan Le Tran, Qui Kim Tran, Ikuo Saiki, and Shigetoshi Kadota (2003), Antiproliferative Activity of Cardenolides Isolated from Streptocaulon juventas, Biol Pharm Bull, 26(10), 1431-1435 [7] Luay J.Rashan, Katrin Franke, Myint Myint Khine, Gerhard Kelter, Heinz H.Fiebig, Joachim Neumann, Ladger A Wessjohann (2011), Characterization of the anticancer properties of monoglycosidic cardenolides isolated from Nerium oleander and Streptocaulon tomentosum, Journal of Ethnopharmacology, 134, 781-788 [8] Ma Chunhui, Huang Tianfang, Qi Huayi, Li Bogang, Zhang Guolin (2005), Chemical study of Streptocaulon Griffithii, Chin j Appl Environ Biol, 11(3), 265-270 [9] Myint Myint Khine, Norbert Arnold, Katrin Franke, Andrea Porzel, Jurgen Schimidt, Ludger Wessjohann (2007), Phytoconstituents from the root of Streptocaulon tomentosum and their chemotaxonomical relevance for separation from S juventas, Biochemical Systematics and Ecology, 35, 517-524 21 Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Hữu Toàn [10] Rui Xue, Na Han, Chun Ye, Hai-bo, Jun Yin (2013), Cardenolide glycosides from root of Streptocaulon juventas, Phytochemistry, 88, 105-111 [11] Rui Xue, Na Han, Chun Ye, Lihui Wang, Jingyu Yang, Yu Wang, Jun Yin (2014), The cytotoxic activities of cardiac glycosides from Streptocaulon juventas and the structureactivity relationships, Fitoterapia, 98, 228-233 [12] Rui Xue, Na Han, Mingyu Xia, Chun Ye, Zhihui Hao, Lihui Wang, Yu Wang, Jingyu Yang, Ikuo Saiki, Jun Yin (2015), TXA9, a cardiac glycoside from Streptocaulon juventas, exerts a potent anti-tumor activity against human non-small cell lung cancer cells in vitro and in vivo, Steroids, 94, 51-59 [13] Yi-Chao Ge, Yu-Chun Cheng, Kui-Wu Wang, Hong Wang (2017), Unusual 28, 29- nor-9, 19 cycloartane triterpenoids from Chinese medical plant Streptocaulon giffithii Hook, Phytochemistry Letters, 22, 185-188 [14] Zhihui Liu, Songbo Li, Na Han, Dongxue Sun, Yunfeng Cao, Jun Yin (2008), Studies on the chemical constituents of the vines of Streptocaulon juventas (Lour.) Merr., Asian Journal of Tranditional Medicines, 3(5), 193-198 22 Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Hữu Tồn PHỤ LỤC 23 Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Hữu Toàn Phụ lục 1a 24 Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Hữu Tồn Phụ lục 1a 25 Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Hữu Tồn Phụ lục 1b 26 Nguyễn Hữu Tồn Khóa luận tốt nghiệp Phụ lục 1c 27 Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Hữu Tồn Phụ lục 1c 28 Nguyễn Hữu Tồn Khóa luận tốt nghiệp Phụ lục 1d 29 Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Hữu Toàn Phụ lục 1d ... đƣợc năm phân đoạn phụ ký hiệu từ A5. 1 đến A5. 5 Bảng 2.2 Sắc kí cột silica gel phân đoạn A5 Phân STT đoạn A5. 1 A5. 2 A5. 3 A5. 4 A5. 5 2.4.3 Sắc kí cột pha đảo phân đoạn A5. 4 bảng 2.2 Phân đoạn A5. 4... đề tài ? ?Khảo sát thành phần hóa học phân đoạn A5 cao chloroform rễ Hà thủ trắng? ?? đóng góp phần nhỏ chứng khoa học có giá trị vào kho dƣợc liệu Y học dân tộc Việt Nam Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn.. .Thành phố Hồ Chí Minh, ngày 05 tháng 05 năm 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA HĨA HỌC  KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC PHÂN ĐOẠN