Phân đoạn A5.4 có SKLM cho nhiều vết tách rõ. Tiến hành SKC pha đảo, C-18 nhiều lần với hệ dung môi giải ly MeOH: H2O 9:1 thu đƣợc hợp chất SJ1 có dạng tinh thể hình kim, không màu, tan hoàn toàn trong dung môi methanol. Quá trình thực hiện đƣợc tóm tắt theo sơ đồ 2.2.
Cao chloroform (400 gam)
- Sắc kí cột silica gel
- Giải ly H:EA, EA:Me:H2O - Cô quay thu hồi dung môi
A1 A2 3.6 g 5.0 g -Sắc kí cột silica gel - Giải ly Hexane:Ethanol A5.1 960 mg -Sắc kí cột pha đảo, C-18 - Giải ly hệ MeOH:H2O 9:1 SJ1 122.5 mg
Sơ đồ 2.2. Quy trình cô lập hợp chất
CHƢƠNG 3
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
KHẢO SÁT CẤU TRÚC HỢP CHẤT SJ1
Hợp chất SJ1 (122,5 mg) thu đƣợc đƣợc từ phân đoạn A5.4 của cao chloroform, có các tính chất sau:
- Dạng tinh thể hình kim, không màu, tan hoàn toàn trong dung môi methanol.
- Sắc kí lớp mỏng cho một vết duy nhất khi nhúng bằng H2SO4 20% và sấy nóng đến khi hiện vết, bảng mỏng cho vết màu nâu rêu.
Phổ 1H-NMR (MeOD): Phụ lục 1a.
Phổ 13C-NMR (MeOD): Phụ lục 1b.
Phổ HSQC (MeOD): Phụ lục 1c.
Phổ HMBC (MeOD): Phụ lục 1d.
BIỆN LUẬN CÁU TRÚC
Phổ 1H-NMR của hợp chất SJ1 (phụ lục 1a) cho thấy sự hiện diện tín hiệu cộng hƣởng của ba nhóm methyl ở δH 1.19 (3H, d, J = 6.0 Hz); 0.8 (3H, s) và 1.05 (3H, s).
Trên phổ 1H-NMR còn cho thấy tín hiệu cộng hƣởng của proton olefin ở δH 5.37 (1H,
m), hai proton methine gắn oxygen ở δH3.42 (1H, m) và 3.80 (1H, dd, J = 6.3; 12.5 Hz). Ngoài ra, phổ proton còn có sự hiện diện của các tín hiệu cộng hƣởng proton methylene và methine trong khoảng δH 1.3 - 2.2 ppm.
Phổ 13C-NMR của hợp chất SJ1 (phụ lục 1b) cho thấy sự hiện diện của 21 carbon, gồm có tín hiệu cộng hƣởng của ba carbon methyl ở δC 14.8 (C-18); 18.8 (C-21); 19.8 (C-19), tám carbon methylene, sáu carbon methine trong đó có hai carbon methine gắn với oxygen
ở δC 72.4 (C-3) và δC 72.9 (C-20), một carbon methine của olefin ở δC 122.4 (C-6), và bốn carbon bậc bốn trong đó có một carbon olefin ở δC 142.3 (C-5), một carbon gắn với oxygen ở δC 87 (C-17).
Phổ HMBC của hợp chất SJ1 (phụ lục 3d) cho thấy có sự tƣơng quan của proton nhóm
methyl δH 1.05 (3H, s, H-19) với carbon olefin δC 142.3 (C-5) và các carbon ở δC 38.6 (C-1), 51.5 (C-9), 37.7 (C-10). Đồng thời proton olefin ở δH 5.37 (1H, m, H-6) tƣơng quan với carbon δC 33.2 (C-7), 33.3 (C-8), 37.7 (C-10) xác nhận sự hiện diện của liên kết đôi ở vị trí C5-C6. Proton nhóm methyl ở δH 1.19 (3H, d, H-21) tƣơng quan với hai carbon ở δC 87
(C-17); 72.9 (C-20). Đồng thời proton nhóm methyl ở δH 0.8 (3H, s, H-18) tƣơng quan với carbon ở δC 87.0 (C-17), 47 (C-13), 52.6 (C-14) xác nhận sự hiện diện của hai nhóm hydroxyl ở vị trí C-17 và C-20. Các tƣơng quan HMBC còn lại đƣợc trình bày cụ thể trong Hình 3.2 và Bảng 3.1.
Từ các số liệu phổ trên, kết hợp với so sánh tài liệu tham khảo (đƣợc trình bày trong
Bảng 3.1) [12], cấu trúc của SJ1 đƣợc đề nghị là5-pregnen-3,17,20-triol.
Hình 3.1. Cấu trúc hợp chất SJ1
Hình 3.2. Một số tƣơng quan HMBC của hợp chất SJ1
18
Vị trí carbon 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21
CHƢƠNG 4
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT