Nghiên cứu ứng dụng enzyme lipase từ mủ đu đủ để làm giàu dha và epa của dầu cá hồi

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA KHOA HĨA ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP CHUN NGÀNH: CƠNG NGHỆ THỰC PHẨM ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG ENZYME LIPASE TỪ MỦ ĐU ĐỦ ĐỂ LÀM GIÀU DHA VÀ EPA CỦA DẦU CÁ HỒI Người hướng dẫn: PGS TS ĐẶNG MINH NHẬT Sinh viên thực hiện: NGUYỄN THỊ UYỂN NHI Số thẻ sinh viên: 107130078 Lớp: 13H2A Đà Nẵng, 6/2018 TÓM TẮT Hiện nay, giới có nhiều phương pháp để lập làm giàu omega 3, phương pháp sử dụng enzyme mang nhiều ưu điểm vượt trội Tuy nhiên, hầu hết enzyme nghiên cứu chủ yếu sử dụng enzyme lipase từ vi sinh vật, lipase từ thực vật chiếm phần nhỏ công nghiệp sản xuất enzyme với nhiều ưu điểm giá thành thấp, enzyme cố định tự nhiên sử dụng trực tiếp chất xúc tác sinh học dạng chế phẩm thô nên việc nghiên cứu ứng dụng loại enzyme thực cần thiết Trong nghiên cứu này, tiến hành thu nhận enzyme lipase thô từ mủ đu đủ ứng dụng đặc tính, tính đặc hiệu lipase xác định nghiên cứu trước để làm giàu DHA, EPA dầu cá hồi Với mục đích làm giàu DHA, EPA dạng glyceride, đảm bảo trình bảo quản đồng thời tăng khả hấp thụ, trình thực gồm bước: xà phịng hóa dầu cá hồi với kiềm mạnh axit hóa trở lại để thu nhận axit béo tự do; tiếp theo, dùng phương pháp kết tủa ure để loại bỏ axit béo no, thu nhận axit béo không no nhiều nối đôi PUFA; cuối cùng, thực phản ứng este hóa có xúc tác lipase để tổng hợp glycerides có nồng độ DHA, EPA cao Kết nhận sau: Nồng độ EPA, DHA trước phản ứng este tương ứng 0,176M, 0,44M Nồng độ EPA, DHA sau phản ứng este tương ứng 0,061M, 0,11M Hiệu suất chuyển hóa phản ứng DHA, EPA 75,5%, 65,34% Ngồi ra, để tăng hiệu suất chuyển hóa DHA, EPA, phản ứng thực tối ưu hóa Đầu tiên, tối ưu phản ứng tạo phức axit béo với ure gồm yếu tố: tỉ lệ ure: axit béo FFA từ 3:1 -5:1 (w/w), thời gian phản ứng 8-24 tìm điều kiện tối ưu để đạt kết tủa lớn (2,76g) thời gian phản ứng 8h tỉ lệ ure: axit béo FFA 3:1 Tiếp theo, tiến hành khảo sát ảnh hưởng hàm lượng nước ban đầu đến hiệu suất phản ứng este có lipase xúc tác tìm hàm lượng nước tối ưu 2% (trên tổng thể tích) ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG CỘNG HỊA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Độc Lập - Tự Do - Hạnh Phúc KHOA HÓA NHIỆM VỤ ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: NGUYỄN THỊ UYỂN NHI Lớp: 13H2A Khoa: Hóa Số thẻ sinh viên: 107130078 Ngành: Công nghệ thực phẩm Tên đề tài: Nghiên cứu ứng dụng enzyme lipase từ mủ đu đủ để làm giàu DHA EPA dầu cá hồi Đề tài thuộc diện: □ Có ký kết thỏa thuận sở hữu trí tuệ kết thực Các số liệu liệu ban đầu Nội dung phần thuyết minh tính tốn: MỞ ĐẦU Chương 1: TỔNG QUAN Chương 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN KẾT LUẬN KIẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC Các vẽ, đồ thị (ghi rõ loại kích thước vẽ): Họ tên người hướng dẫn: PGS.TS ĐẶNG MINH NHẬT Th.S PHAN THỊ VIỆT HÀ Ngày giao nhiệm vụ đồ án: 23/01/2018 Ngày hoàn thành đồ án: Trưởng Bộ môn 30/05/2018 Đà Nẵng, ngày tháng năm 2018 Người hướng dẫn LỜI CẢM ƠN Em xin bày tỏ lòng cảm ơn chân thành đến thầy Đặng Minh Nhật, thầy giúp đỡ em từ việc chọn đề tài hoàn thành đồ án tốt nghiệp Trong suốt thời gian em thực đồ án, thầy ln định hướng, góp ý sửa chữa chỗ sai, để từ giúp em nắm bắt kĩ lưỡng, chi tiết nội dung, vấn đề liên quan đến đồ án, hoàn thành đồ án cách tốt Bên cạnh đó, em xin gửi lời cảm ơn đến Phan Thị Việt Hà, cô hướng dẫn, hỗ trợ, động viên tạo điều kiện tốt để em hồn thành tốt đồ án tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo môn Công nghệ Thực phẩm – Sinh học, thầy phịng thí nghiệm bạn bè, người thân giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi, khích lệ động viên em suốt thời gian thực đề tài tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn! i CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đồ án “Nghiên cứu ứng dụng enzyme lipase từ mủ đu đủ để làm giàu DHA, EPA dầu cá hồi” hướng dẫn thầy Đặng Minh Nhật cơng trình nghiên cứu độc lập thực thân Các số liệu, kết luận văn trung thực Nếu có trích dẫn tơi thích rõ ràng Nếu khơng trên, tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm đề tài Đà Nẵng, ngày 30 tháng năm 2018 Sinh viên NGUYỄN THỊ UYỂN NHI ii MỤC LỤC TÓM TẮT NHIỆM VỤ ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP LỜI CẢM ƠN i CAM ĐOAN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH VẼ vi DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT vii LỜI MỞ ĐẦU Chương 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan đu đủ 1.1.1 Hình thái sinh lý đu đủ 1.1.2 Công dụng, đặc tính dược lý đu đủ 1.1.3 Mủ đu đủ 1.2 Tổng quan enzyme lipase 1.2.1 Định nghĩa 1.2.2 Phân loại cấu trúc lipase 1.2.2.1 Phân loại 1.2.2.2 Trình tự amino acid 1.2.2.3 Cấu trúc không gian lipase 1.2.3 Tính chất enzyme lipase 1.2.4 Cơ chế xúc tác 1.2.5 Một số phản ứng đặc trưng enzyme lipase 1.2.6 Ưu xúc tác lipase so với phương pháp sử dụng xúc tác hóa học 10 1.2.7 Ứng dụng lipase 11 1.3 Giới thiệu cá hồi 13 1.3.1 Đặc điểm sinh học cá hồi 13 1.3.2 Đặc điểm dinh dưỡng 14 1.3.3 Thành phần dinh dưỡng cá hồi 14 1.4 Dầu cá axit béo không no đa nối đôi n-3 PUFA 15 1.5 Tình hình nghiên cứu ứng dụng cơng nghệ enzyme chiết xuất làm giàu DHA, EPA nước 16 Chương 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Đối tượng, hóa chất thiết bị nghiên cứu 20 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 20 2.1.2 Hóa chất 20 2.1.3 Thiết bị sử dụng 20 2.2 Phương pháp nghiên cứu 22 iii 2.2.1 Phương pháp phân tích 22 2.2.1.1 Phương pháp phân tích vật lý 22 2.2.1.2 Phương pháp phân tích hóa sinh số hóa sinh dầu cá hồi 22 2.2.1.3 Phương pháp phân tích hóa lý 24 2.2.2 Phương pháp thực nghiệm 24 2.2.2.1 Phương pháp thu nhận chế phẩm enzyme thô 24 2.2.2.2 Phương pháp thu nhận dầu cá hồi 25 2.2.2.3 Phương pháp làm giàu DHA, EPA dầu cá hồi xúc tác lipase 26 2.2.2.4 Tối ưu hóa phản ứng tạo phức với urea axit béo 29 2.2.2.5 Khảo sát ảnh hưởng hàm lượng nước ban đầu đến hiệu suất phản ứng este có enzyme lipase xúc tác 30 Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 31 3.1 Nghiên cứu thu nhận chế phẩm lipase thô từ mủ đu đủ 31 3.2 Đánh giá số tiêu chất lượng dầu cá hồi 33 3.3 Xây dựng đường chuẩn xác định DHA, EPA phân tích HPLC 34 3.4 Nghiên cứu thử nghiệm làm giàu DHA, EPA dầu cá hồi nhờ xúc tác enzyme lipase từ mủ đu đủ 38 3.5 Tối ưu hóa phản ứng kết tủa với urea quy hoạch thực nghiệm 41 3.5.1 Lập phương trình hồi quy 41 3.5.2 Tìm giá trị tối ưu 43 3.6 Kết khảo sát ảnh hưởng hàm lượng nước ban đầu đến hiệu suất phản ứng este 45 Chương 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 47 4.1 Kết luận 47 4.2 Kiến nghị 47 TÀI LIỆU THAM KHẢO 48 iv DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Cho biết tính đặc hiệu số enzyme lipase Bảng 1.2 Thành phần dinh dưỡng cá hồi Na Uy 14 Bảng 2.1 Hóa chất sử dụng 20 Bảng 2.2 Giá trị mã hóa giá trị thực nghiệm yếu tố thực nghiệm 30 Bảng 3.1 Hiệu suất thu nhận lipase thô từ mủ đu đủ 33 Bảng 3.2 Chế phẩm enzyme lipase thô 33 Bảng 3.3 Các tiêu chất lượng dầu cá 34 Bảng 3.4 Các mức nồng độ pha loãng chất chuẩn DHA EPA 35 Bảng 3.5 Nồng độ DHA, EPA mẫu dầu trước sau phản ứng este 39 Bảng 3.6 Hàm lượng DHA EPA mẫu dầu trước sau phản ứng este 40 Bảng 3.7 Ma trận kế hoạch hóa kết thực nghiệm 41 Bảng 3.8 Kết phân tích thống kê ANOVA 42 Bảng 3.9 Phân tích phương sai ANOVA phương trình hồi quy 43 Bảng 10 Khảo sát ảnh hưởng hàm lượng nước ban đầu đến nồng độ DHA, EPA sau phản ứng este 45 v DANH MỤC HÌNH VẼ Hình 1.1 Cây đu đủ Hình 1.2 Cấu trúc không gian lipase từ Candida rugosa Hình 1.3 Mơ hình hoạt động lipase chất hồ tan khơng tan nước Hình 1.4 Phản ứng thủy phân Hình 1.5 Phản ứng ester hóa Hình 1.6 Phản ứng chuyển vị este Hình 1.7 Phản ứng trao đổi este 10 Hình 1.8 Cá hồi Đại Tây Dương 14 Hình 1.9 Cấu trúc số acid béo nhóm n-3 PUFA 15 Hình 2.1 Lườn cá hồi 20 Hình 2.2 Cây đu đủ 20 Hình 2.3 Cân điện tử 21 Hình 2.4 Cân phân tích 21 Hình 2.5 Máy quay 21 Hình 2.6 Tủ lắc 21 Hình 2.7 Bể ổn nhiệt 21 Hình 2.8 Máy đo pH 21 Hình 2.9 sơ đồ bố trí thí nghiệm thu nhận lipase thô 25 Hình 2.10 Quy trình thu nhận dầu cá hồi 26 Hình 2.11 Sơ đồ quy trình làm giàu DHA EPA dầu cá hồi xúc tác lipase 27 Hình 2.12 Sự hình thành mạng lưới tinh thể rỗng urea 28 Hình 2.13 Chuẩn bị mẫu với hàm lượng nước khác 30 Hình 3.1 Mủ đu đủ sau sấy thăng hoa 32 Hình 3.2 Lipase thô 32 Hình 3.3 Dầu cá hồi 34 Hình 3.4 Mẫu chuẩn EPA với nồng độ 0,3mM 35 Hình 3.5 Mẫu chuẩn DHA với nồng độ 5mM 36 Hình 3.6 Hỗn hợp mẫu chuẩn DHA 18mM EPA 1mM 36 Hình 3.7 Đường chuẩn DHA 37 Hình 3.8 Đường chuẩn EPA 37 Hình Mẫu dầu trước phản ứng este 38 Hình 3.10 Mẫu dầu sau phản ứng este 39 Hình 3.11 Mơ hình bề mặt đáp ứng cho trình tạo phức axit béo với urea 44 Hình 3.12 Khảo sát ảnh hưởng hàm lượng nước ban đầu đến nồng độ DHA, EPA 45 vi DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT DHA EPA FFA : Docosahexaenoic acid : Eicosapentaenoic acid : Free Fatty Acid PUFA HPLC : Polyunsaturated fatty acid : High Performance Liquid Chromatography TCVN : Tiêu chuẩn Việt Nam vii Nghiên cứu ứng dụng enzyme lipase từ mủ đu đủ để làm giàu DHA, EPA dầu cá hồi DHA 20 y = 0,8491x + 3,1391 R² = 0,9971 18 Diện tích peak 16 14 12 10 0 10 15 20 Nồng độ (mM) Hình 3.7 Đường chuẩn DHA EPA 300 y = 322,41x - 56,481 R² = 0,9756 Diện tích peak 250 200 150 100 50 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,2 Nồng độ (mM) Hình 3.8 Đường chuẩn EPA Nhận xét: Giá trị hệ số tương quan R2 phương trình đường chuẩn cho thấy nồng độ DHA, EPA với diện tích peak có tương quan tuyến tính Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thị Uyển Nhi Người hướng dẫn: PGS.TS Đặng Minh Nhật ThS Phan Thị Việt Hà 37 Nghiên cứu ứng dụng enzyme lipase từ mủ đu đủ để làm giàu DHA, EPA dầu cá hồi tốt Từ phương trình đường chuẩn xây dựng suy nồng độ DHA, EPA dựa vào diện tích peak biết 3.4 Nghiên cứu thử nghiệm làm giàu DHA, EPA dầu cá hồi nhờ xúc tác enzyme lipase từ mủ đu đủ Để làm giàu DHA, EPA dạng glycerides, trình thực gồm bước: -Xà phịng hóa với kiềm mạnh axit hóa trở lại HCl 3N để thu nhận axit béo tự FFA -Thực kết tủa axit béo ure để loại bỏ axit béo no, thu nhận axit béo bất bão hòa đa PUFA -Phản ứng este hóa axit béo bất bão hịa đa với glycerol có lipase xúc tác Q trình thực tiến hành trình bày mục 2.2.2.3 Sau chúng tơi tiến hành phân tích hàm lượng DHA EPA có mẫu dầu trước sau phản ứng este hóa Kết sắc ký đồ mẫu dầu trước sau phản ứng thể hình 3.9 hình 3.10 Hình Mẫu dầu trước phản ứng este (EPA DHA peak 5) Theo kết sắc kí đồ hình 3.9 peak EPA, DHA xuất phút thứ 7, 934 12,603 có diện tích peak có giá trị 376,718 509, 905 Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thị Uyển Nhi Người hướng dẫn: PGS.TS Đặng Minh Nhật ThS Phan Thị Việt Hà 38 Nghiên cứu ứng dụng enzyme lipase từ mủ đu đủ để làm giàu DHA, EPA dầu cá hồi Hình 3.10 Mẫu dầu sau phản ứng este (EPA DHA peak 6) Theo kết sắc kí đồ hình 3.10 peak EPA, DHA xuất phút thứ 7, 905 12,503 có diện tích peak có giá trị 95,400 140,256 Dựa vào quan hệ tuyến tính chặt chẽ nồng độ diện tích peak, từ kết phương trình đường chuẩn dựng mục 3.3, tính nồng độ DHA EPA trước sau phản ứng este (bảng 3.6) Bảng 3.5 Nồng độ DHA, EPA mẫu dầu trước sau phản ứng este Axit béo Trước phản ứng este hóa Sau phản ứng este hóa DHA(M) 0,44 0,108 EPA(M) 0,176 0,061 Từ xác định hiệu suất phản ứng chuyển hóa DHA, EPA tự thành dạng glycerides hàm lượng DHA, EPA trước sau phản ứng este nhờ lipase xúc tác Hiệu suất phản ứng DHA, EPA • Hiệu suất phản ứng DHA: 𝐻% = 𝑙ượ𝑛𝑔 𝐷𝐻𝐴 𝑏𝑎𝑛 đầ𝑢−𝑙ượ𝑛𝑔 𝐷𝐻𝐴 𝑠𝑎𝑢 𝑝ℎả𝑛 ứ𝑛𝑔 𝑙ượ𝑛𝑔 𝐷𝐻𝐴 𝑏𝑎𝑛 đầ𝑢 = Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thị Uyển Nhi 0,44−0,108 0,44 = 75,5% Người hướng dẫn: PGS.TS Đặng Minh Nhật ThS Phan Thị Việt Hà 39 Nghiên cứu ứng dụng enzyme lipase từ mủ đu đủ để làm giàu DHA, EPA dầu cá hồi 𝑙ượ𝑛𝑔 𝐸𝑃𝐴 𝑏𝑎𝑛 đầ𝑢−𝑙ượ𝑛𝑔𝐸𝑃𝐴 𝑠𝑎𝑢 𝑝ℎả𝑛 ứ𝑛𝑔 • Hiệu suất phản ứng EPA: H% = = 𝑙ượ𝑛𝑔 𝐸𝑃𝐴 𝑏𝑎𝑛 đầ𝑢 0,176−0,061 0,176 = 65,34% Nhận xét: Hiệu suất phản ứng chuyển hóa DHA EPA 75,5%, 65,34% Hiệu suất không cao so sánh với nghiên cứu tương tự L.Esteban Cerdan cs, 1998 [43], đạt hiệu suất chuyển hóa 84,7% Tuy nhiên, nghiên cứu L.Esteban Cerdan cs sử dụng enzyme lipase từ vi sinh vật, đồng thời nghiên cứu tiến hành tối ưu hóa yếu tố phản ứng este hóa nên hiệu suất đạt cao hiển nhiên Từ cho thấy, hiệu suất chuyển hóa DHA, EPA nghiên cứu nâng lên thực tối ưu hóa yếu tố phản ứng Nhận xét hàm lượng DHA, EPA có mẫu dầu trước sau phản ứng este Bảng 3.6 Hàm lượng DHA EPA mẫu dầu trước sau phản ứng este Trước phản ứng este Sau phản ứng este Thể tích mẫu dầu, ml 23,55ml 1,57ml Khối lượng mẫu dầu, g 22 1,6 Nồng độ DHA (M) 0,44 0,108 % DHA (w/w) 15,45% 10,7% Nồng độ EPA (M) 0,176 0,061 % EPA (w/w) 5,7% 1,8% Trong đó: % Khối lượng DHA (EPA) trước phản ứng∶ 𝑉.𝐶𝑀 𝑀 𝑘ℎố𝑖 𝑙ượ𝑛𝑔 𝑚ẫ𝑢 % Khối lượng DHA (EPA) sau phản ứng: 𝑉 𝐶𝑀 𝑐ℎ𝑢𝑦ể𝑛 ℎó𝑎 𝑀 𝑉 (𝐶𝑀 𝑡𝑟ướ𝑐 𝑝ℎả𝑛 ứ𝑛𝑔 − 𝐶𝑀 𝑠𝑎𝑢 𝑝ℎả𝑛 ứ𝑛𝑔 ) 𝑀 = 𝑘ℎố𝑖 𝑙ượ𝑛𝑔 𝑚ẫ𝑢 𝑘ℎố𝑖 𝑙ượ𝑛𝑔 𝑚ẫ𝑢 Với: M khối lượng mol, g/mol CM nồng độ mol, mol/l V thể tích mẫu, ml Nhận xét: Để thu chế phẩm glycerides giàu DHA, EPA mẫu dầu sau phản ứng cần chưng cất phân đoạn để loại bỏ glycerol dư khỏi hỗn hợp glyceride Tuy nhiên, nghiên cứu chưa thực công đoạn Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thị Uyển Nhi Người hướng dẫn: PGS.TS Đặng Minh Nhật ThS Phan Thị Việt Hà 40 Nghiên cứu ứng dụng enzyme lipase từ mủ đu đủ để làm giàu DHA, EPA dầu cá hồi Dựa theo số nghiên cứu giới, cụ thể theo nghiên cứu Hee-Guk Buyn cs (2007) [48], để thu nhận sản phẩm dạng monoglyceride tỷ lệ mol glycerol: PUFA 6:1, từ dự đoán khối lượng glycerol dư sau phản ứng este nghiên cứu 1,25gam khối lượng glyceride thu nhận sau loại bỏ glycerol dư 0,35gam Theo đó, hàm lượng DHA, EPA chế phẩm glycerides dự đoán 48,6% 8,6%, tương ứng với khả làm giàu ước tính 3,15 lần 1,51 lần 3.5 Tối ưu hóa phản ứng kết tủa với urea quy hoạch thực nghiệm 3.5.1 Lập phương trình hồi quy Để tìm điều kiện tối ưu xác cho q trình tạo phức ure sở mơ hình tính tốn, tơi áp dụng phương pháp qui hoạch thực nghiệm Chọn quy hoạch trực giao bậc Box- Wilson để tìm điều kiện tối ưu Với yếu tố k=2, số thí nghiệm tâm n0 = Phương trình hồi quy có dạng: Y= bo + b1x1 + b2x2 + b12x1x2 + b11x12 + b22x22 (3.1) Trong biến x1, x2 biến mã hóa mơ tả tương ứng với biến thực Z1, Z2 Trong bảng 3.4, để ma trận có tính trực giao cột xj2 biến đổi tuyến tính hành xj’ theo cơng thức: xj’ =xj2 - xj2= xj2 xj’ = xj2 - 2𝑘 +2𝛼2 𝑁 ∑𝑛 𝑖=1 xij N (3.2) Bảng 3.7 Ma trận kế hoạch hóa kết thực nghiệm STT xo x1 x2 x1x2 x1’ x2’ Y + - - + 0,397 0,397 2,74 + + - - 0,397 0,397 1,70 + - + - 0,397 0,397 2,62 + + + + 0,397 0,397 1,82 + +α 0 0,714 -0,603 1,52 + -α 0 0,714 -0,603 2,48 + +α -0,603 0,714 2,20 + -α -0,603 0,714 2,22 + 0 -0,603 -0,603 2,20 10 + 0 -0,603 -0,603 2,15 11 + 0 -0,603 -0,603 2,17 Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thị Uyển Nhi Người hướng dẫn: PGS.TS Đặng Minh Nhật ThS Phan Thị Việt Hà 41 Nghiên cứu ứng dụng enzyme lipase từ mủ đu đủ để làm giàu DHA, EPA dầu cá hồi Trong đó: -x1: tỷ lệ ure: axit FFA, w/w -x2: thời gian phản ứng, -y: hàm mục tiêu khối lượng kết tủa tạo thành, gam Xác định hệ số b phương trình hồi quy bo’= ∑𝑛𝑖=1 𝑦𝑢 𝑥𝑜𝑢 𝑁 bjj’= ∑𝑁 𝑢=1 𝑦𝑢 𝑥′𝑗𝑢 ′2 ∑𝑁 𝑖=1 𝑥𝑗𝑢 ∑𝑁 𝑢=1 𝑦𝑢 𝑥𝑗𝑢 bj’= bji’= j#i=1,2….k ∑𝑁 𝑖=1 𝑥𝑗𝑢 ∑𝑁 𝑢=1 𝑦𝑢 (𝑥𝑗 𝑥𝑖 )𝑢 u=1,2,…N ∑𝑁 𝑖=1(𝑥′𝑗𝑢 𝑥′𝑖𝑢 ) Kết hệ số b sau: bo= 3,861 b1= – 0,014 b2= –0,0950 b11= –0,062 b22=0,002007 b12=0,00750 Phương trình hồi quy cấp 2: Y= 3,861 – 0,014x1 – 0,0950x2 – 0,0716x12 + 0,002007x22 + 0,00750x1x2 Kiểm định ý nghĩa hệ số b phương trình: Dùng chuẩn Student Fisher để kiểm tra cách sử dụng giá trị P để kiểm tra đánh giá ý nghĩa hệ số b phương trình hồi qui, mức độ ảnh hưởng yếu tố tương tác yếu tố đến khối lượng kết tủa tạo thành Bảng 3.8 Kết phân tích thống kê ANOVA Yếu tố Tổng bình phương Bậc tự Trung bình bình phương Giá trị F Giá trị p Prob>F X1- tỉ lệ urea/FFA 1.30667 1.30667 251.86 0.000 X2-thời gian phản ứng 0.00027 0.00027 0.05 0.830 X1 X2 0.01440 0.01440 2.78 0.157 X1 0.01298 0.01298 2.50 0.175 X2 0.04178 0.04178 8.05 0.036 Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thị Uyển Nhi Người hướng dẫn: PGS.TS Đặng Minh Nhật ThS Phan Thị Việt Hà 42 Nghiên cứu ứng dụng enzyme lipase từ mủ đu đủ để làm giàu DHA, EPA dầu cá hồi Bảng 3.9 Phân tích phương sai ANOVA phương trình hồi quy cho trình tối ưu Nguồn Mơ hình (Model) Tổng bình phương Độ tự Trung bình bình phương Giá trị F Giá trị P 1.36691 0.27338 52.69 0.000 0.002467 0.00822 12.99 0.072 Sai số (Pure error) 0.00127 0.00063 Tổng (total) 1.39285 10 Không phù hợp (Lack of fit) R2=0.98 Nhận xét thảo luận: Giá trị nhân tố tuyến tính x1 giá trị bậc hai x22 thể mức độ ý nghĩa tin cậy cao (p0.05) Giá trị mơ hình Fisher F-test 52.69 giá trị xác suất p