Một số đặc điểm sinh học của vi khuẩn nitrate hóa tuyển chọn và ứng dụng của nó trong nuôi trồng thủy sản

Bài viết tổng quan các nghiên cứu về nhóm vi khuẩn này với các điều kiện thích hợp cho sinh trưởng và hoạt tính nitrate hóa của chúng (như nguồn cacbon, nhiệt độ, pH, cơ chất, chất mang…), lựa chọn một số chủng điển hình để xác định được vị trí phân loại của chúng bằng trình tự gen 16S rRNA, chúng thuộc chi Nitrosomonas và Nitrobacter.

VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA VI KHUẨN NITRATE HÓA TUYỂN CHỌN VÀ ỨNG DỤNG CỦA NÓ TRONG NUÔI TRỒNG THỦY SẢN Hoàng Phương Hà1*, Đỗ Thị Tố Uyên1, Đỗ Thị Liên1, Cung Thị Ngọc Mai1, Vũ Ngọc Huy1, Nguyễn Hồng Thu1, Lê Lợi2, Lê Thị Nhi Công1 TÓM TẮT Vi khuẩn nitrate hóa đóng vai trò quan trọng vào quá trình chuyển đổi amonia thành nitrate thông qua sự tạo thành nitrite Chúng được biết đến bởi hai nhóm vi khuẩn tự dưỡng: oxy hóa amoni và oxy hóa nitrite, việc phát hiện vi khuẩn này bằng phương pháp nuôi cấy truyền thống là khó khăn chúng sinh trưởng chậm, nên môi trường nuôi cấy và các điều kiện nuôi phù hợp với vi khuẩn này là rất cần thiết Trong báo cáo này, tổng quan các nghiên cứu về nhóm vi khuẩn này với các điều kiện thích hợp cho sinh trưởng và hoạt tính nitrate hóa của chúng (như nguồn cacbon, nhiệt độ, pH, chất, chất mang…), lựa chọn một số chủng điển hình để xác định được vị trí phân loại của chúng bằng trình tự gen 16S rRNA, chúng thuộc chi Nitrosomonas và Nitrobacter Các vi khuẩn này được sử dụng cho nghiên cứu tạo chế phẩm sinh học để ứng dụng xử lý nước nuôi trồng thủy sản Chế phẩm sinh học nitrate hóa nghiên cứu đã đạt hiệu quả chuyển hóa amoni 95% hệ lọc ở điều kiện phòng thí nghiệm Chế phẩm này còn được ứng dụng thành công tại các đầm, ao nuôi trồng thủy sản của các tỉnh Thanh Hóa và Sóc Trăng, hàm lượng ammonia tổng (TAN) luôn thấp 0,1 mg/L sử dụng chế phẩm nitrate hóa nghiên cứu Từ khóa: Chế phẩm nitrate hóa, Nuôi trồng thủy sản, Vi khuẩn tự dưỡng, Vi khuẩn oxy hóa ammonia, Vi khuẩn oxy hóa nitrite I ĐẶT VẤN ĐỀ Quá trình nitrate hóa là quá trình mà ammonia bị oxy hóa thành nitrite sau đó thành nitrate, được coi một quá trình sinh học chính vòng nitơ toàn cầu Houzeau đã phát hiện được quá trình này từ năm 1872 (Houzeau,1872), mười ba năm sau, với sự phân lập được các vi khuẩn oxy hóa amoni đã được khẳng định (Winogradsky, 1890), từ năm 18902004 các nhà khoa học đã chứng minh và tin rằng có vi khuẩn làm trung gian cho sự oxy hóa amoni hiếu khí, chúng gồm các chi Nitrosomonas, Nitrosococcus, Nitrosospira, Nitrosolobus và Nitrosovibrio (Watson, 1986; Koop, 2006) Cho đến nay, nhiều nghiên cứu đã chứng minh sự tồn tại của nhóm các vi khuẩn này, ngoài những chi đã công bố còn phát hiện loài Nitrosopumilus maritimus là vi khuẩn cổ thuộc một ngành vi khuẩn cổ mới là ngành Thaumarchaeota cũng tham gia vào sự oxy hóa amoni thành nitrite (Krummel, 1982; BrochierArmanet, 2008) Bước thứ hai của quá trình là sự oxy hóa nitrite thành nitrate với sự tham gia các các loài thuộc chi Nitrobacter, Nitrococcus, Nitrospira và Nitrospina, Nhu cầu thủy sản (TS) của người toàn cầu ngày gia tăng để phù hợp với tình hình phát triển dân số ngày càng tăng Khi nguồn hải sản tự nhiên chưa đáp ứng đủ với nhu cầu thực tiễn tình trạng khai thác hải sản cịn tràn lan q mức, hoạt động ni trồng thủy sản (NTTS) nguồn cung cấp cho người NTTS đóng góp vào phát triển kinh tế xã hội cộng đồng địa phương, Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam Trường Cao đẳng Sơn La * Email: ha27682002@yahoo.com TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 02/2017 43 VIỆN NGHIÊN CỨU NI TRỒNG THỦY SẢN II tạo tác động tiêu cực đến môi trường việc sản xuất không theo hướng bền vững Trong 15 năm qua, NTTS phát triển mạnh mẽ Việt Nam, trở thành ngành kinh tế mũi nhọn chiến lược phát triển Việt Nam quốc gia sản xuất thủy sản (TS) lớn giới Với tăng trưởng nhanh hiệu quả, TS đóng góp tích cực chuyển đổi cấu kinh tế nơng nghiệp, đóng góp hiệu cho cơng xóa đói, giảm nghèo, giải việc làm cho triệu lao động, nâng cao đời sống cho cộng đồng dân cư khắp vùng nông thôn, ven biển, đồng bằng, trung du, miền núi…, đồng thời góp phần quan trọng bảo vệ an ninh quốc phòng vùng biển đảo Tổ quốc (Tổng quan ngành Thủy sản Việt Nam, 2015) Tổng sản lượng thủy sản đạt 6,56 triệu (năm 2015); đó, khai thác 3,03 triệu tấn, ni trồng 3,53 triệu tấn; diện tích ni trồng 1,28 triệu ha; kim ngạch xuất khoảng 6,72 tỷ USD (Thu Hiền, 2015) Chỉ tính riêng đối với ni tơm thì tổng diện tích ni tơm nước đạt gần 676 nghìn ha, sản lượng đạt gần 476 nghìn tấn, kim ngạch xuất gần tỷ USD gần 6,2 tỷ USD tổng giá trị xuất ngành thủy sản Tuy nhiên nghề NTTS bộc lộ số nhược điểm như: dịch bệnh nhiều, rủi ro cao, lạm dụng thuốc thú y hóa chất dẫn đến khơng đảm bảo vệ sinh an toàn thực phẩm… nguyên nhân dẫn đến dịch bệnh cho tôm, cá là nguồn gốc giống chưa được đảm bảo triệt để, các sản phẩm sinh học được người dân sử dụng tràn lan chưa có nguồn gốc rõ ràng, đặc biệt ô nhiễm môi trường nuôi, làm cân sinh thái Nguyên nhân gây ô nhiễm môi trường lượng thức ăn dư thừa không tôm, cá sử dụng hết thải môi trường đã hình thành các hợp chất hữu thối rữa, chất thải dạng phân chất hữu dư thừa Các vi sinh vật yếm khí phát triển mạnh phân hủy hợp chất hữu dư thừa tạo khí H2S, NH3, CH4… ao nuôi tôm thâm canh đặc biệt ở mật độ nuôi cao, hàm lượng chất thải ao tăng cao chứa nitơ, phốt chiếm 30-40% chất hữu khác gây nên tượng phú dưỡng môi 44 trường nước phát sinh tảo độc dẫn đến dịch bệnh tăng, tôm chết hàng loạt Hàm lượng nitơ các đầm ao nuôi thủy sản được coi là nhân tố nguy kịch, chỉ với hàm lượng ammonia ở 0,425 mg/l mơi trường nước gây độc cho tơm, cá động vật thuỷ sinh khác (Slil, 2007), môi trường pH tăng cao, NH4+ sẽ chuyển thành NH3 thì NH3 lại rất độc với liều lượng rất nhỏ, với hàm lượng 0,01 mg NH3/L đã là nguyên nhân gây chết hoặc dẫn đến bệnh lý, giảm tỷ lệ sinh trưởng đối với ấu trùng tôm (Liu, 2004; Ostrensky, 1995), nitrite (tạo thành từ quá trình oxy hóa ammonia) cũng cực kỵ độc đối với ấu trùng tôm, nó làm giảm vận chuyển oxy máu (Cheng, 1995), nhiên nó không độc bằng NH3 và nó chỉ gây độc tồn tại lâu môi trường nuôi (Alcaraz, 1999) Việc sử dụng chế phẩm vi sinh vật xử lý nước bị ô nhiễm ngày càng phổ biến lợi thế của chúng làm tăng cường khả phục hồi và thúc đẩy quá trình tự làm sạch các hệ tái sử dụng nước nuôi hải sản, bên cạnh đó nó còn có tính ổn định cao và thân thiện với môi trường (Martins, 2010) Do vậy, sử dụng chế phẩm sinh học được coi là biện pháp hữu hiệu NTTS để giải vấn đề ô nhiễm môi trường ao nuôi để loại những nguyên nhân ban đầu dẫn đến dịch bệnh, bên cạnh đó, nó có đặc tính an tồn người, vật ni Trên thế giới đã có một số chế phẩm nitrate hóa dùng cho công nghệ tái sử dụng nước nuôi tôm dạng dịch Novozymes Biological, PondProtect-L (David, 2011) Tại Việt Nam cũng xuất hiện một số chế phẩm nitrate hóa thị trường thường dùng cho các ao nuôi tôm, cá giống các chế phẩm này còn một số hạn chế và cũng chưa đáp ứng được nhu cầu thực tiễn của các sở nuôi giống hải sản Do vậy, các nghiên cứu tổng quan của chúng về nhóm vi khuẩn nitrate hóa được phân lập tại Việt Nam với các đặc tính sinh lý, sinh hóa, vị trí phân loại một dữ liệu khoa học và từ đó tiến hành nghiên cứu tạo chế phẩm nitrate hóa để ứng dụng xử lý môi trường nước NTTS II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 2.1 Vật liệu: Các mẫu nước từ các ng̀n TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 02/2017 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II thải chế biến lương thực tại Phú Đô, Minh Khai, nhà máy nước Linh Đàm (Hà Nội) Sử dụng trấu, tro trấu, mút nhẹ hạt sỏi nhẹ làm giá thể để nghiên cứu tạo chế phẩm 2.2 Xác định số tính chất sinh lý, sinh hóa chủng vi khuẩn Bớn chủng vi khuẩn nghiên cứu PĐ58, PĐ60, 2NM, 5NM đã được phân lập tại ao lắng của làng Phú Đô và Hoài Đức (Hà Nội), là nơi sản xuất thực phẩm (bún và miến) Ảnh hưởng nguồn carbon hữu (sucrose, glucose, lactose, citrate, acetate, succinate với nồng độ g/l, nguồn carbon vô NaHCO3 nồng độ g/l coi công thức đối chứng) đã được thông báo các cơng bớ trước (Hồng Phương Hà, 2006, 2010) Ảnh hưởng của nguồn cacbon vô cơ: NaHCO3 và CaCO3 với nồng độ 2g/L Môi trường nuôi tạp dưỡng kết hợp nguồn carbon hữu vô (NaHCO3) Ảnh hưởng hàm lượng ammonia hay nitrite đến chủng vi khuẩn tuyển chọn: Vi khuẩn nuôi mơi trường khống sở Winogradsky I II chứa N-NH4 (hoặc N-NO2) với hàm lượng cuối khác nhau: 1; 2; 4; 10; 100; 200; 500 1.000 mg/l Ảnh hưởng chất mang (giá thể): hạt sỏi nhẹ keramzit (công ty BEMES) có đường kính 3-5 mm miếng mút nhẹ có kích thước (1 x1 x1) cm (Viện hóa học, Viện Hàn Lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam) dùng để cố định chủng vi khuẩn PĐ58, PĐ60, 2NM 5NM, đối chứng chủng vi khuẩn trạng thái lơ lửng không cố định chất mang Tỉ lệ chất mang với môi trường 1: (v/v), hàm lượng ammonia hoặc nitrite ban đầu 10 mg N/l Ảnh hưởng nồng độ oxy hòa tan: Sinh khối vi khuẩn (PĐ58, PĐ60, 2NM, 5NM) bổ sung vào bình thuỷ tinh dung tích 2,5 lit chứa 1,5 lít mơi trường lỏng N-NH4 ban đầu 10 mg/l Nồng độ oxy hịa tan khác 4-6 mg/l (bình 1); 2-3 mg/l (bình 2); 0,5-1mg/l (bình 3) bình đối chứng có hàm lượng oxy (bình khơng sục khí) Đã sử dụng máy đo oxy (DOT-0204, Viện Khoa học Vật liệu, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam) để đo lượng oxy hịa tan bình Ảnh hưởng nồng độ NaCl: Chế phẩm nitrate hóa nghiên cứu sau tạo thành, chuyển vào bình ni bổ sung NaCl với nồng độ cuối khác nhau: 0; 10‰; 20‰; 30‰; 40‰ 2.3 Xác định sinh khối vi khuẩn - Sự gia tăng sinh khối vi khuẩn xác định hàm lượng protein theo Bradford (1976): dung dịch mẫu nghiên cứu cho vào ống Eppendorf ly tâm 13.000 vòng/phút, loại dịch Tủa hoà lại đệm (chứa g NaCl 12 g NaOH hòa tan nước cất đến thể tích cuối 1.000 ml) ủ 30 phút 90oC Sau ly tâm với 13.000 vòng/phút, 0,8 ml dịch (hoặc pha loãng với nồng độ thích hợp) bổ sung 0,2 ml thuốc thử Bradford, sau phút, độ hấp thụ ánh sáng đo bước sóng 595 nm Dựng đồ thị chuẩn biểu diễn tương quan độ hấp thụ ánh sáng máy quang phổ kế nồng độ protein chuẩn từ dung dịch BSA 100 mg/l với nồng độ 2, 4, 6, 8, 10 mg/l Lượng protein tế bào mẫu nghiên cứu tính dựa vào đồ thị chuẩn - Xác định mật độ vi khuẩn chế phẩm bằng phương pháp pha loãng tới hạn: Pha loãng mẫu môi trường đặc trưng cho từng nhóm vi khuẩn (Winogradski I và II) theo cấp độ 10-1 tới 10-9 và cấy trang các đĩa thạch tương ứng, sau 5-7 ngày đếm các khuẩn lạc có đĩa thạch, từ đó tính số lượng khuẩn lạc có g chế phẩm (Nguyễn Lân Dũng, 1983) 2.4 Xác định hàm lượng ammonia, nitrite, nitrate Các số ammonia phân tích theo Nessler, NO2- theo Griss, NO3- theo Brucine (Franson, 1995) Hoạt tính oxy hóa hợp chất nitrogen xác định thông qua hàm lượng ammonia nitrite tạo thành (đối với chủng vi khuẩn oxy hóa ammonia), hàm lượng nitrite nitrate tạo thành (đối với chủng vi khuẩn oxy hóa nitrite) 2.5 Các phương pháp nghiên cứu tạo chế phẩm nitrate hóa Sử dụng trấu (được nghiền nhỏ có kích thước 2-3 mm) và tro trấu (được tạo thành từ quá trình nhiệt hóa trấu) làm chất mang cho quá TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 02/2017 45 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II trình lên men xốp tạo chế phẩm Sinh khối vi khuẩn nitrate hóa được nhân nuôi đạt tới 108 CFU/L (tương đương với OD600 = 0,12) và phối trộn theo tỷ lệ: 200 gram chất mang + 100 ml môi trường + 10 ml sinh khối vi khuẩn; chế phẩm được lên men xốp ngày ở nhiệt độ 28±2oC; độ ẩm thích hợp cho quá trình lên men là 50% ± Sau đó chế phẩm được sấy bằng máy sấy bơm nhiệt ở nhiệt đợ 40oC (Hồng Phương Hà, 2006) III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Phân lập tuyển chọn chủng vi khuẩn nitrate hóa Từ mẫu nước thải nước ngầm tại Phú Đơ, Hồi Đức, Bách Khoa, Pháp Vân, Linh Đàm Hàm lượng amoni mẫu nước thải khoảng 100 - 150 mg/l, nước máy số hộ gia đình thuộc phường Bách Khoa Linh Đàm khoảng 20 - 30 mg/l Trên môi trường khoáng Winogradsky đã phân lập 21 chủng vi khuẩn oxy hóa amoni và 17 chủng vi khuẩn oxy hóa nitrit Các chủng vi khuẩn này đều có hoạt tính nitrate hóa chỉ có chủng vi khuẩn PĐ58; PĐ60 (vi khuẩn oxy hóa ammonia) 2NM, 5NM (vi khuẩn oxy hóa nitrit) được lựa chọn cho các nghiên cứu tiếp theo hoạt tính nitrate hóa của chúng cao các chủng còn lại 3.2 Ảnh hưởng nguồn cacbon Bốn chủng vi khuẩn này được coi là vi khuẩn tự dưỡng sinh trưởng môi trường khoáng vô cơ, sử dụng nguồn cacbon từ CaCO3 môi trường nuôi cấy và nguồn nitơ được lấy từ quá trình oxy hóa các hợp chất nitơ vô (ammonia và nitrite) Nhưng vì chúng sinh trưởng chậm nên việc tìm kiếm một nguồn cacbon phù hợp cho sinh trưởng của chúng là rất cần thiết nên NaHCO3 được coi là nguồn cacbon vô để so sánh với CaCO3 (Hình 1) Kết nhận từ Hình cho thấy, môi trường chứa nguồn cacbon NaHCO3 tất chủng vi khuẩn oxy hóa amoni có khả sinh trưởng (biểu thị sinh khối bằng hàm lượng protein) tốt từ 1,5 đến 1,9 lần so với môi trường chứa CaCO3 sau 6-7 ngày nuôi cấy Hình Ảnh hưởng của nguồn cacbon vô NaHCO3 và CaCO3 đến sinh trưởng của vi khuẩn Rất mơi trường dịch thể, NaHCO3 chất dễ phân ly để tạo thành CO2, nên vi khuẩn dễ dàng sử dụng Đặc biệt, sử dụng muối bicarbonat pH mơi trường ln giữ khoảng 7,5-7,8 Đây pH lý tưởng cho môi trường sống vi khuẩn 46 Một số tác giả giới Campos et al., (1999); Ruiz et al., (2003) cho rằng, NaHCO3 vi khuẩn sử dụng nguồn cacbon vô cần thiết, mà cịn trì pH kiềm thích hợp mơi trường ni vi khuẩn nitrat hóa Do vậy, NaHCO3 được sử TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 02/2017 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II dụng làm nguồn cacbon vô cho nhóm vi khuẩn nitrate hóa này Các chủng vi khuẩn này sử dụng nguồn cacbon vô cho sinh trưởng và lấy lượng từ các quá trình chuyển hóa, nên chúng thuộc nhóm vi khuẩn tự dưỡng, một số nghiên cứu đã chứng minh nhóm vi khuẩn nitrate hóa còn có thể sử dụng được một số nguồn cacbon hữu cơ, chúng được coi là vi khuẩn tạp dưỡng (Clark, 1966; Krummel, 1982; Norman, 2003) Do vậy, các chủng vi khuẩn nghiên cứu PĐ58; PĐ60, 2NM và 5NM cũng được nghiên cứu khả sử dụng một số nguồn cacbon hữu sucrose, glucose, lactose, acetate, citrate và succinate Kết quả nghiên cứu đã cho thấy, hai chủng PĐ58 PĐ60 có thể sinh trưởng bình thường các nguồn cacbon này, số nguồn carbon sucarose, lactose succinate lại ức chế sinh trưởng chủng 2NM, 5NM Nghiên cứu còn chỉ rằng, hai chủng vi khuẩn PĐ58 PĐ60 sinh trưởng tốt mơi trường có nguồn carbon vơ NaHCO3 kết hợp glucose, hai chủng vi khuẩn 2NM 5NM sinh trưởng tốt môi trường chứa NaHCO3 acetate, tăng lên 1,35 lần và 1,2 lần tương ứng hoạt tính của chúng lại giảm khoảng 1,4 lần so với môi trường nuôi chỉ sử dụng ng̀n vơ (Hồng Phương Hà, 2006) 3.3 Ảnh hưởng nồng độ chất, nồng độ oxy hòa tan và chất mang Trong thơng báo trước (Hồng Phương Hà, 2015; 2006), nghiên cứu ảnh hưởng số điều kiện ngoại cảnh đến sinh trưởng hoạt tính nitrate hóa số chủng vi khuẩn oxy hóa ammonia oxy hóa nitrite đề cập, kết cho thấy, chủng vi khuẩn nitrate hóa nghiên cứu thích nghi 28 - 30oC pH 7,5 - Cơ chất hay chính là nguồn nitơ mà nhóm vi khuẩn này sử dụng để chuyển hóa là ammonia (đối với vi khuẩn oxy hóa ammonia) hay nitrite (đối với vi khuẩn oxy hóa nitrite), các nghiên cứu đã chỉ ở nồng độ từ 10-100 mgN/L các vi khuẩn lựa chọn đều sinh trưởng tốt nhất so với các nồng độ khác từ 1-1000 mgN/L (Hình 2) Hình Ảnh hưởng của nồng độ nitơ Nghiên cứu ảnh hưởng của nhiệt độ đến sinh trưởng của vi khuẩn nitrate hóa thì Bhaskar Charyulu (2005) cho 30oC Nitrosomonas Nitrobacter sinh trưởng tốt, khả sinh trưởng giảm đến 50% nhiệt độ môi trường 20oC 40oC Khi nghiên cứu về các chất ảnh hưởng đến sinh trưởng của nhóm vi khuẩn nitrate hóa thì Yutaka Okano et al., (2004) thấy rằng, nồng độ amoni từ 20 - 100mg/l (≈ 1,5 - 7,5 mM), tế bào vi khuẩn oxy hóa amoni sau ngày nuôi cấy tăng từ 1,3x105 đến 66x106 tế bào/g TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 02/2017 47 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II đất khô Nghiên cứu Lisa et al.,(1988) cho thấy, hoạt tính oxy hóa amoni Nitrosomnas europaea bị bất hoạt lượng nitrit tạo thành môi trường nuôi cấy đạt từ 20 mM (≈267 mgN/l) trở lên Hoạt tính oxy hóa nitrite chủng vi khuẩn thuộc chi Nitrobacter bị ức chế hàm lượng nitrate hình thành mơi trường đạt 30 - 60mM (khoảng 400-800 mgN/l) Vi khuẩn nitrat hóa vi khuẩn hiếu khí, nên oxy cần thiết cho tồn chúng Theo tính tốn dựa vào phương trình phản ứng oxy hóa q trình nitrat hóa lượng oxy cần thiết để oxy hóa mg N-NH4 3,43 mg oxy hóa mg N-NO2 cần 1,14 mg oxy Nồng độ oxy hịa tan khơng ảnh hưởng đến sinh trưởng mà ảnh hưởng lớn đến tốc độ nitrat hóa q trình Các nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ oxy đến tốc độ chuyển hóa các hợp chất nitơ vô hệ lọc chứa vi khuẩn tuyển chọn đã được tiến hành Hình Ảnh hưởng oxy đến khả chuyển hoá hợp chất chứa nitơ A Hàm lượng amoni đi: ♦ NH4 (4-6 mg O2/l);  NH4 (2-3 mg O2/l); NH4 (0,5-1 mg O2/l); x NH4 (đối chứng mg O2/l) B Hàm lượng nitrite nitrate tạo thành: + NO2 (4-6 mg O2/l); ∆ NO2 (2-3 mg O2/l);  NO2 (0,5-1 mg O2/l);  NO2 (đối chứng 0mg O2/l ); º NO3 (4-6 mg O2/l); • NO3 (2-3 mg O2/l); ο NO3 (0,5-1 mg O2/l); - NO3 (đối chứng 0mg O2/l) Kết nhận cho thấy, khơng có oxy (bình đối chứng) khả chuyển hóa nitơ với tham gia nhóm vi khuẩn nitrat hóa lựa chọn khơng xảy (Hình 3) Ở bình có hàm lượng oxy 0,5-1 mg/l (bình 3) hoạt tính chuyển hóa amoni vi khuẩn xuất thấp nhiều so với bình có hàm lượng oxy 2-3 mg/l (bình 2) 4-6 mg O2/l (bình 1) Sau hoạt động hệ nitrat hóa, lượng amoni bình giảm 50% so với ban đầu, bình hàm lượng amoni giảm gần hết, đó, hàm lượng amoni bình vi 48 khuẩn nitrit hóa chuyển hóa hết sau Hình B biểu diễn tạo thành nitrate thơng qua việc hình thành nitrit, hàm lượng nitrate bình lớn so với bình Ở bình đối chứng lượng nitrate gần Điều chứng tỏ q trình nitrat hóa xảy điều kiện hiếu khí nồng độ oxy hịa tan mg/l nồng độ thích hợp cho trình nitrat hóa xảy nhanh Như vậy, hàm lượng oxy có ảnh hưởng khác đến tốc độ nitrat hóa hệ thống xử lý nước Chất mang hay chính là giá thể để vi khuẩn bám dính, vi khuẩn nitrate hóa có khả tạo biofilm ở mức độ cao nên chúng rất thích nghi bám vào giá thể Trong nghiên cứu này, sử dụng chất mang là miếng mút và hạt sỏi nhẹ làm giá thể bám dính của vi khuẩn, kết quả ở Bảng cho thấy, có chất mang hoạt tính chuyển hóa nitơ của các chủng vi khuẩn nghiên cứu cao từ 1,2 – 1,3 lần so với trạng thái lơ lửng TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 02/2017 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II Bảng Ảnh hưởng chất mang đến khả loại bỏ nitơ chủng vi khuẩn Vi khuẩn oxy hóa amoni (PĐ58; PĐ60) Vi khuẩn oxy hóa nitrit (2NM; 5NM) N-NO2Lơ thí nghiệm N- NH4+ Hiệu suất ban đầu oxy hóa N- tạo thành (mg/l) NH4+ (%) (mg/l) N-NO2ban đầu (mg/l) Hiệu suất N-NO3oxy hóa tạo thành N-NO2 (%) (mg/l) Đối chứng (không chất mang) 10 66 ± 0,3 6,2 ± 0,3 10 58 ± 0,2 5,5 ± 0,3 Hạt sỏi nhẹ 10 ± 0,7 8,2 ± 0,6 10 77 ± 0,5 6,88 ± 0,5 Miếng mút 10 79 ± 0,4 7,3 ± 0,7 10 69 ± 0,4 6,5 ± 0,5 Tóm lại qua tất cả các nghiên cứu đã chỉ rằng, bốn chủng vi khuẩn lựa chọn PĐ58, PĐ60, 2NM và 5NM có khả chuyển hóa các hợp chất nitơ vô (ammonia và nitrite), sinh trưởng và hoạt tính chuyển hóa nitơ của chúng tốt sử dụng nguồn các bon vô là NaHCO3 Chúng có thể sinh trưởng được môi trường có nguồn cacbon hữu glucose và acetate hiệu quả nitrate hóa của chúng lại bị giảm rõ rệt Các chủng vi khuẩn này sinh trưởng tối ưu ở nhiệt độ 28±2oC, pH 7,5-8 Nồng độ oxy hòa tan mg O2/L trở đạt hiệu quả cao quá trình nitrate hóa, có chất mang khả loại bỏ các hợp chất chứa nitơ của vi khuẩn cao 1,2 lần so với trạng thái lơ lửng Các chủng vi khuẩn này đã được xác định vị trí phân loại, chủng PĐ58 và PĐ60 thuộc chi Nitrosomonas, còn 2NM và 5NM tḥc chi Nitrobacter (Hồng Phương Hà, 2010) 3.4 Nghiên cứu tạo chế phẩm sinh học – chế phẩm nitrate hóa Dựa vào các tính chất sinh lý, sinh hóa của chủng vi khuẩn lựa chọn, tiến hành các nghiên cứu tạo chế phẩm sinh học để ứng dụng xử lý nước bị ô nhiễm ammonia đặc biệt nuôi trồng thủy sản Các nghiên cứu trước của chúng cho thấy, chủng vi khuẩn lựa chọn đều sinh trưởng được môi trường chứa muối NaCl, là thành phần chính nước biển Bên cạnh đó, chủng vi khuẩn này hoàn toàn khơng đới kháng (Hồng Phương Hà, 2006) Đây là những tính chất cực kỳ quan trọng nghiên cứu tạo chế phẩm sinh học và có thể ứng dụng được môi trường thủy sản nước lợ Vì vi khuẩn nitrate hóa thích nghi điều kiện bám dính nên việc lựa chọn chất mang, phụ gia và điều kiện lên men là cần thiết Các nghiên cứu của chúng đã được tiến hành lên men xốp nền chất mang là trấu và tro trấu, là nguồn nguyên liệu rẻ tiền, dễ kiếm và sẵn có tại Việt Nam Các nghiên cứu cũng cho thấy, sử dụng trấu và tro trấu làm giá thể cho quá trình lên men xốp thì cả hai loại chất mang này đều rất phù hợp, mật độ tế bào sau lên men đạt ≥ 108 CFU/g và ổn định sau tháng theo rõi Hoạt tính nitrate hóa của loại chế phẩm đều tốt với chế phẩm tro có hoạt tính cao chế phẩm trấu, thời gian xử lý của hệ lọc chứa chế phẩm tro ln rút ngắn khoảng 1/3 ÷ 1/2 lần so với hệ lọc chứa chế phẩm trấu cùng mợt điều kiện (Hồng Phương Hà, 2006) Do vậy, với chất mang là tro sẽ là lựa chọn cho nghiên cứu tạo chế phẩm nitrate hóa Với mục đích ứng dụng chế phẩm nghiên cứu môi trường thủy sản nước lợ nên chế phẩm nitrate hóa sau được hình thành một lần nữa đã được kiểm tra mật độ tế bào cũng hoạt tính của chúng môi trường nước lợ (Bảng và Hình 4) TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 02/2017 49 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II Bảng Mật độ tế bào vi khuẩn chế phẩm môi trường chứa muối NaCl Nồng độ muối NaCl AOB NOB 0‰ 3x10 6x108 10‰ 4x108 7x108 20‰ 5x10 4x108 30‰ 7x108 7x108 40‰ 4x10 3x108 Chú thích AOB: vi khuẩn oxy hóa ammonia; NOB: vi khuẩn oxy hóa nitrite Hình Hoạt tính chế phẩm mơi trường chứa muối NaCl Kết quả nhận được từ Bảng và Hình cho Chế phẩm cũng đã được theo dõi, đánh giá thấy, các chủng vi khuẩn này có hoạt tính nitrate khả sinh tưởng và hoạt tính của chúng hóa cao nhất ở nồng độ NaCl 20‰ và hoàn toàn tháng Kết quả chỉ ở Bảng và Hình thích nghi môi trường nước lợ Bảng Mật độ tế bào vi khuẩn của chế phẩm tháng Thời gian bảo quản (ngày) 30 60 90 120 150 180 AOB 60x109 54x109 25x109 22x109 20x108 18x108 NOB 71x109 58x109 25x109 22x109 10x109 11x108 Hình 5: Đánh giá hoạt tính chế phẩm tháng 50 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 02/2017 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II Kết nhận từ Bảng và Hình cho thấy, mật độ tế bào vi khuẩn chế phẩm sinh trưởng tốt đạt ≥ 108 CFU/g sau 180 ngày (6 tháng), hoạt tính nitrate hóa chế phẩm đảm bảo và hiệu suất loại bỏ amoni đạt 70% 3.5 Thử nghiệm chế phẩm nghiên cứu phòng thí nghiệm và ngoài thực địa Chế phẩm đã được chúng thử nghiệm hệ lọc có dung tích 10 lít chứa lít môi trường, hàm lượng chế phẩm bổ sung là 1%, sau ngày quay vòng hệ lọc, tiến hành cho dòng chảy qua với tốc độ L/giờ, hàm lượng ammonia đầu vào là 10 mg N/L, thí nghiệm được theo dõi giờ, hiệu suất xử lý ammonia trung bình giờ 92,6 % (Hoàng Phương Hà, 2006)) Như vậy chế phẩm nghiên cứu đã được thử nghiệm có hiệu quả phòng thí nghiệm, chế phẩm này cũng đã được ứng dụng ngoài thực tế tại một số địa phương nuôi tôm nước lợ Thanh Hóa, Quảng Ninh và Sóc Trăng Kết quả thử nghiệm suốt vụ tôm (72 ngày) diện tích 4000m2 tại Trung tâm ni trồng thủy sản Sóc Trăng thể Hình và Hình Hình Sử dụng chế phẩm nitrate hóa nghiên cứu 72 ngày nuôi tôm (1 vụ) Hình Hàm lượng TAN đo được 72 ngày Như vậy, sau 72 ngày sử dụng chế phẩm nitrate hóa có kết hợp với chế phẩm khử sulfide cho thấy hiệu việc sử dụng chế phẩm nitrate hóa sớ lượng chế phẩm nitrate hóa bở sung vào ao nuôi tôm tùy thuộc vào từng thời điểm tôm sinh trưởng, tổng lượng chế phẩm sử dụng là 80 kg Hàm lượng ammonia tổng số (TAN) cao đạt 2mg/L, tính theo nhiệt độ pH hàm lượng NH3 nhỏ 0,1 mg/L, tỷ lệ chết tôm đạt 1% nên chế phẩm hiệu nuôi tôm thương phẩm Đây kết có ý nghĩa quan trọng nghiên cứu khoa học ứng dụng thực tiễn Chế phẩm nitrate hóa nghiên cứu cũng được so sánh với một chế phẩm ngoài hiện trường TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 02/2017 51 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II Pondlus (sản phẩm cải tạo môi trường) của hãng novozyme-Trung Quốc có tính tương tự Vì chế phẩm Pondplus có ghi các thành phần vi sinh vật tham gia là vi khuẩn dị dưỡng thuộc chi Bacillus, mà nhóm vi khuẩn nghiên cứu lại là vi khuẩn tự dưỡng, nên so sánh chúng vẫn tiến hành phân lập các chủng vi khuẩn môi trường khoáng đặc trưng cho nhóm vi khuẩn nitrate hóa Sau phát hiện có vi khuẩn sinh trưởng và có hoạt tính nitrate hóa môi trường này mới tiến hành so sánh, các kết quả so sánh được chỉ ở bảng Bảng So sánh một số đặc tính của hai chế phẩm Nitrate hóa và Pond plus Đặc tính Vi khuẩn Chế phẩm nitrate hóa Vi khuẩn tự dưỡng thuộc chi Nitrosomonas và Nitrobacter 108 - 109 70 Mật độ tế bào (CFU/g) Hiệu quả xử lý ammonia (%) Liều lượng Liều lượng sử dụng/vụ (1000 m3) 15- 20 (kg) Giá thành 500.000 đ/1kg So sánh chế phẩm nghiên cứu và chế phẩm PondPlus cho thấy, mật độ tế bào và hoạt tính nitrate hóa của chế phẩm nghiên cứu cao hơn, liều lượng sử dụng là tương đương giá của chế phẩm PondPlus ngoài hiện trường cao khoảng 2,8 lần, vậy sản phẩm nghiên cứu nước có tính tương tự đã rẻ rất nhiều so với giá của chế phẩm nhập ngoại nên nó có thể cạnh tranh được Hy vọng chế phẩm nitrate hóa tạo nghiên cứu sản phẩm thương mại có triển vọng rộng cải tạo môi trường NTTS Việt Nam IV KẾT LUẬN Tính chất sinh lý, sinh hóa: Bốn chủng vi khuẩn nitrate hóa PĐ58, PĐ60 (tḥc chi Nitrosomanas), 2NM 5NM (thuộc chi Nitrobacter) sinh trưởng tốt môi trường khoáng sở có nguồn cacbon vô là NaHCO3 so với CaCO3; các chủng vi khuẩn này có thể sinh trưởng được môi trường chứa nguồn cacbon hữu glucose, acetate hoạt tính nitrate hóa của chúng lại giảm 1,2 lần; sinh trưởng thích hợp 28 - 30oC, pH 7,5 - 8, nồng độ hợp chất chứa nitrogen N-NH4 N-NO2 từ 10 - 100 mgN/l Hiệu suất chuyển hóa nitơ cao nồng độ oxy hòa tan từ mg O2/L, có chất mang khả loại bỏ các hợp chất chứa nitơ của vi khuẩn cao 1,2 lần so với trạng thái lơ lửng 52 Chế phẩm Pond plus Vi khuẩn dị dưỡng thuộc chi Bacillus 107 60 10-15 (kg) (ghi bao bì) 1.381.000 đ/kg Nghiên cứu tạo chế phẩm nitrate hóa: Sử dụng chất mang là trấu và tro trấu cho quá trình lên men xốp của vi khuẩn nitrate hóa đều phù hợp hoạt tính nitrate hóa của chế phẩm sử dụng tro trấu cao hơn, rút ngắn thời gian xử lý ammonia từ 1/3 đến 1/2 lần Các vi khuẩn nitrate hóa chế phẩm có thể sinh trưởng và có hoạt tính tốt môi trường chứa NaCl từ 10‰ 40‰, hoạt tính tốt nhất ở nồng độ NaCl 20‰ Mật độ vi khuẩn nitrate hóa đạt cao 108 CFU/g và hiệu suất xử lý nitơ chế phẩm ổn định vẫn đạt 70% sau tháng khảo sát Ứng dụng chế phẩm: Chế phẩm đã được thử nghiệm phòng thí nghiệm, hiệu suất xử lý ammonia trung bình giờ 92,6 % hệ lọc có dung tích 10 lít Đã thử nghiệm chế phẩm nghiên cứu Trung tâm nuôi trồng thủy sản tỉnh Sóc Trăng, chế phẩm đạt hiệu xử lý hợp chất nitơ cao, hàm lượng NH3 ≤ 0,1 mgN/L đạt dưới ngưỡng qui định theo qui chuẩn Việt Nam So sánh chế phẩm nghiên cứu với chế phẩm PondPlus có tính tương tự, chế phẩm nghiên cứu có hoạt tính nitrate hóa tương đương so với chế phẩm trường giá thành rẻ 2,8 lần LỜI CẢM ƠN: Các thí nghiệm tiến hành nguồn kinh phí từ các đề tài sở thuộc Viện CNSH, VAST “Nghiên cứu sản xuất chế phẩm nitrate hóa xử lý mơi trường ni TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 02/2017 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II thủy sản” Sử dụng trang thiết bị Phịng thí nghiệm Trọng điểm Công nghệ Gen, Viện Công nghệ sinh học TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Hoàng Phương Hà, Đỗ Thị Liên và Nguyễn Thị Luân, 2015 Nghiên cứu tạo chế phẩm nitrate hóa để xử lý nước bị ô nhiễm ammonia Tạp chí Công nghệ sinh học 2-15: 13(3) 973-981 Hoàng Phương Hà, Trần Văn Nhị và Nguyễn thị Kim Cúc 2010 Một số tính chất sinh học bốn chủng vi khuẩn nitrate hóa phân lập Hà Nội Tạp chí Cơng nghệ Sinh học 2015: 8(2) 241-245 Hoàng Phương Hà, Nguyễn thị Kim Cúc và Trần Văn Nhị, 2006 Nghiên cứu đặc điểm sinh học mơt só chủng vi khuẩn nitrate hố phân lập từ nguồn nước ngầm nhiễm ammonia Hà Nội Tạp chí Cơng nghệ Sinh học 2006: 4(3) 371377 Ngũn Lân Dũng dịch,1983 Thực tập vi sinh vật học NXB Đại học và Trung học chuyên nghiệp, Hà Nội 1983: 75-79 Thu Hiền (27/12/2015) Ngành Thủy sản tổng kết công tác năm 2015 Tổng cục thủy sản Tổng quan ngành Thủy sản Việt Nam Hiệp hội chế biến xuất Thủy sản Việt Nam (VASEP) Tài liệu tiếng Anh Alcaraz, G., Chiappa-carrara, X., Espinoza, V., Vanegas, C., 1999 Acute toxicity of ammonia and nitrite to white shrimp Penaeus setfféms post larvae J World Aquacult Soc 30: 90-97 Bhaskar, K.V., Charyulu, P.B.B.N., 2005 Effect of environmental factors on nitrifying bacteria isolated from the rhizosphere of Setaria italica (L.) Beauv Afric J Biotechnol (10): 1145-1146 Bradford, M.M., 1976 A Rapid and Sensitive Method for the Quantitation of Microgram Quantities of Protein Utilizing the Principle of Dye Binding Analyti Biochem 72: 248–254 Brochier-Armanet, C., Boussau, B., Gribaldo, S., and Forterre, P 2008 Mesophilic Crenarchaeota: proposal for a third archaeal phylum, the Thaumarchaeota Nature Rev Microbiol 6, 245–252 Campos, J.L., et al., 1999 Nitrification at high ammonia loading rates in an activated sludge unit, Biores Technol 68: 141-148 Cheng, S.Y., Chen, J.C., 1995 Hemolymph oxygen content, oxyhemocyanin, protein levels and ammonia excretion in the shrimp Penaeus monodon exposed to ambient nitrite Comp Physiol.B 164, 530-535 Clark, C., and Schmidt, E.L., 1966 Effect of mixed culture on Nitrosomonas simulated by uptake and utilization of pyruvate J Bacteriol 91: 367–373 David, D.K., David, J.D., 2011 Nitrifier product improves nitrification in RAS Global aquaculture advocate Franson, M.A.H., 1995 Standard methods for the examiation of water and wastewater, Publication Office American Public Health AssociationWashington, DC 20005, 19th Ed: 225-227; 240243; 461-464 Houzeau, A 1872 Faits pour servir a l’histoire de la nitrification, composition des terreaux de tantah (basse-egypte) Ann Chim Phys 25, 161–167 Koop, H.P., Pulkho, U., Rőel, A.P., Timmermann, G and Wagner, M., 2006, The Lithoautotrophic Ammonia-Oxidizing Bacteria In The Prokaryotes, A handbook on the biology of bacteria: Proteobacteria: alpha and Beta Subclasses Martin, D (Editor-in-Chief), Stanley F., Eugene R., Karl-Heinz S., Erko S (eds), Third edition, Vo 5: 778-811 Krummel, A., and Harms, H., 1982 Effect of organic matter on growth and cell yield of ammonia oxidizing bacteria Arch Microbiol 133: 50-54 Lisa, Y S., and Daniel, J A., 1988 Loss of Ammonia Monooxygenase Activity in Nitrosomonas europaea upon Exposure to Nitrit Appl Environ Microbiol 64(10): 4098–4102 Liu, C.H., Chen, J.C., 2004 Effect of ammonia on the immune response of white shrimp Litopenaeus vannamei and its suscetibility to Vib/1’0 alginolyticus Fish Shellfish lmmunol 16, 321-334 Martins, C.I.M., Eding, E.H., Verdegem, M.C.J., Heinsbroek, L.T.N., Schneider, O., Blancheton, J.P., Roque d’Orbcastel, E., Verreth, J.A.J., 2010 New developments in recirculating aquaculture systems in Europe: A perspective on environmental sustainability Aquacul Eng 43(3) 83-93 Norman, G.H., Sayavedra-Soto, L,A., and Arp, TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 02/2017 53 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II D.J., 2003 Chemolithoorganotrophic Growth of Nitrosomonas europaea on Fructose J Bacteriol 185(23): 6809-6814 Ostrensky, A., Wasielesky, Jr.W., 1995 Acute toxicity of ammonia to various life stages of paulo shrimp, Penaeus paulensis PerezFarfate,l967 Aquaculture 132, 339-347 Ruiz, G., Jeison, D and Chamy, R., 2003 Nitrification with high nitrit accumulation for the treatment of wastewater with high ammonia concentration Appl Environ Microbiol 37: 1371-1377 Slil, S., Bruce, E.R., 2007 Diversity study of nitrifying bacteria in full-scale municipal wastewater treatment plants Water Res 41(5): 1110-1120 Watson, S.W., Bock, E., Harms, H., Koops, H., and Hooper, A.B (1989), Nitrifying bacteria In Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology Staley, J.T., Bryant, P.M., Pfennig, N.P., Holt, G.J (eds), Williams & Wilkins, Batimore pp 1808-1834 Winogradsky, S., 1890 Recherches sur les organismes de la nitrification Ann Inst Pasteur 4, 213–331 Yutaka, O., Krassimira, R.H., Christian, M.L., Louise, E.J., Denison, F.R., Binyam, G., David, L., Kate, M.S., 2004 Application of Real-Time PCR To Study Effects of Ammonia on Population Size of Ammonia-Oxidizing Bacteria in Soil Appl Environ Microbiol 70(2):1008-1016 NITRIFYING BACTERIA AND APPLICATION IN AQUACULTURE Hoang Phuong Ha1*, Do Thi To Uyen1, Do Thi Lien1, Cung Thi Ngoc Mai1, Vu Ngoc Huy1, Nguyen Hong Thu1, Le Loi2, Le Thi Nhi Cong1 ABSTRACT Nitrifying bacteria play a significant role in nitrification process that is the transformation of ammonia to nitrate via nitrite formation They are known as two groups of autotrophic bacteria: ammonia oxidizing bacteria (AOB) and nitrite oxidizing bacteria (NOB) The isolation and cultivation by traditional methods of nitrifying bacteria are quite problematic due to their slow growth rate, therefore suitable medium and suitable cultivation conditions are essential In this review, we present an overview of our research on nitrifying bacteria with suitable conditions for growth and nitrification activity (such as carbon source, temperature, pH, substrate, carrier ) Some typical strains were selected to determine their taxonomies by 16S rRNA gene sequencing, which showed that they belong to Nitrosomonas and Nitrobacter genera These bacteria were used for preparation of probiotic product for treatment of ammonia polluted aquaculture water This nitrification probiotic product has shown a conversion efficiency of 95 % ammonia in a biofilter system in the laboratory, and was successfully applied in the aquaculture ponds of Thanh Hoa and Soc Trang provinces Total ammonia nitrogen (TAN) was estimated as ≤ 0.1 mg/L when using this nitrification probiotic product Keywords: nitrification product, aquaculture, autotrophic bacteria, ammonia oxidizing bacteria, nitrite oxidizing bacteria Người phản biện: TS Nguyễn Thị Ngọc Tĩnh Ngày nhận bài: 25/11/2016 Ngày thông qua phản biện: 13/12/2016 Ngày duyệt đăng: 05/01/2017 Institute of Biotechnology, Vietnam Academy of Science and Technology Son La College * Email: ha27682002@yahoo.com 54 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ - THÁNG 02/2017 ... sinh lý, sinh hóa của chủng vi khuẩn lựa chọn, tiến hành các nghiên cứu tạo chế phẩm sinh học để ứng dụng xử lý nước bị ô nhiễm ammonia đặc biệt nuôi trồng thủy sản Các... chế phẩm sinh học và có thể ứng dụng được môi trường thủy sản nước lợ Vi? ? vi khuẩn nitrate hóa thích nghi điều kiện bám dính nên vi? ?̣c lựa chọn chất mang, phụ gia và điều... bảng Bảng So sánh một số đặc tính của hai chế phẩm Nitrate hóa và Pond plus Đặc tính Vi khuẩn Chế phẩm nitrate hóa Vi khuẩn tự dưỡng thuộc chi Nitrosomonas và Nitrobacter 108