Độc lực của các chủng Vibrio đối với tôm sú và tôm thẻ chân trắng

Nghiên cứu này được thực hiện nhằm so sánh độc lực của các chủng vi khuẩn Vibrio campbellii (LMG21363), V. harveyi (BB120) và V. harveyi (LMG11226) đối với tôm sú Penaeus monodon và tôm thẻ chân trắng P. vannamei sạch bệnh.

VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN ĐỘC LỰC CỦA CÁC CHỦNG VIBRIO ĐỐI VỚI TÔM SÚ VÀ TÔM THẺ CHÂN TRẮNG Lê Hồng Phước1, Nguyễn Thị Hiền1, Võ Hồng Phượng1, Nguyễn Phạm Hồng Huy1, Ngơ Thị Bích Phượng1, Nguyễn Trung Hiếu1 TÓM TẮT Nghiên cứu thực nhằm so sánh độc lực chủng vi khuẩn Vibrio campbellii (LMG21363), V harveyi (BB120) V harveyi (LMG11226) tôm sú Penaeus monodon tôm thẻ chân trắng P vannamei bệnh Tôm gây nhiễm với liều x 105, 106, x 106, 107, x 107, 108 x 108 CFU/tơm Nhóm đối chứng tiêm nước muối sinh lý Tỷ lệ chết cao tìm thấy tiêm tơm với V campbellii (LMG21363) so với hai chủng lại Tỷ lệ chết cộng dồn tiêm tôm với V campbellii (LMG21363) liều 107 CFU cao có khác biệt có ý nghĩa thống kê so với tiêm liều chủng V harveyi (LMG11226) V harveyi (BB120) (p < 0,05) Tỷ lệ chết 96% ghi nhận sau 12 gây nhiễm với V campbellii (LMG21363) liều 107 CFU/tôm 30% 4% tỷ lệ chết tìm thấy gây nhiễm liều chủng V harveyi (LMG11226) V harveyi (BB120) Ba chủng vi khuẩn cho thấy có độc lực tôm sú tôm thẻ chân trắng Từ khóa: Penaeus monodon, Penaeus vannamei, virulence, Vibrio I ĐẶT VẤN ĐỀ Trong thời gian gần tôm nuôi phát triển nhiều nước đặc biệt Đơng Nam Châu Á Sản lượng tơm có liên quan đáng kể với ô nhiễm môi trường bệnh truyền nhiễm hay không truyền nhiễm (Primavera, 1997) Báo cáo dịch bệnh vi khuẩn phát sáng trang trại ni tơm cho thấy có liên quan đáng kể đến sản lượng nuôi (Karunasagar ctv., 1994) Vi khuẩn thuộc giống Vibrio xem dồi vi sinh vật tự môi trường nước biển Ví dụ đại diện gần 80% quần thể vi khuẩn nước bề mặt vùng biển Tây Thái Bình Dương (Tsukamoto ctv , 1993) Leaño ctv (1998) phân lập định danh 172 chủng vi khuẩn từ tơm bệnh tìm thấy khoảng 90% chủng vi khuẩn phân lập thuộc giống Vibrio V harveyi V campbellii nhiễm tôm giai đoạn ấu trùng, tôm trưởng thành giai đoạn tơm bố mẹ (Gómez-Gil ctv., 1998; Lavilla-Pitogo ctv., 1998) V harveyi xem loài vi khuẩn quan trọng gây nên bệnh phát sáng tôm nuôi trại giống tôm sú nuôi thương phẩm (Lavilla-Pitogo ctv., 1990) Tại Philippines, mật độ vi khuẩn V harveyi mức thấp 102 CFU/ml gây thiệt hại nghiêm trọng trại sản xuất giống tôm sú (Lavilla-Pitogo ctv., 1990) Bệnh nhiễm khuẩn có liên quan đến lồi vi khuẩn phát sáng V harveyi báo cáo gây thiệt hại ương ni ấu trùng tôm Úc (Pizzutto Hirst, 1995), Nam Mỹ (Álvarez ctv., 1998; Robertson ctv., 1998) Mexico (Vandenberghe ctv., 1999) Bệnh thường xảy tháng nuôi gây tỷ lệ chết đến 50% Vi khuẩn phát sáng Trung Tâm Quốc Gia Quan Trắc Cảnh Báo Mơi Trường & Phịng Ngừa Dịch Bệnh Thủy Sản Khu Vực Nam Bộ, Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản Email: lehongphuoc@yahoo.com TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - - THAÙNG 11/2013 83 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN Vibrio vi khuẩn hội thường kết hợp với yếu tố bất lợi khác Nghiên cứu mô bệnh học cho thấy tơm nhiễm vi khuẩn phát sáng có tập trung sinh khối lớn vi khuẩn vùng miệng (Lavilla-Pitogo ctv., 1990) với teo hoại tử ống gan tụy (Robertson ctv., 1998) Nhiều kiểu gây nhiễm nghiên cứu phương pháp ngâm (Roque ctv., 1998; Soto-Rodríguez ctv., 2006), qua đường miệng (De la Peña ctv., 1995) phương pháp tiêm (Pizarro Alfaro, 1994; Wang Chen, 2006) Nhiều lồi tơm sử dụng gây nhiễm P monodon (Prayitno Latchford, 1995; Lee ctv., 1996), P vannamei (Robertson ctv., 1998; Wang Chen, 2006), P setiferus, P duorarum, P aztecus (Lightner Lewis, 1975), P indicus, P semisculatus (Hameed, 1995), P stylirostris (Saulnier ctv., 2000) Mục đích nghiên cứu để xác định chủng vi khuẩn có độc lực thấp để nghiên cứu vai trò protein sốc nhiệt kích thích hệ thống miễn dịch tơm sú đồng thời so sánh độc lực chủng vi khuẩn lồi tơm khác II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Tôm thí nghiệm điều kiện ni Tơm sú tơm thẻ chân trắng bệnh dùng thí nghiệm Tơm ni bể tuần hồn nhiệt độ 28-30oC, độ mặn 20 gL-1, pH từ 7,8-8,1 Tôm cho ăn với thức ăn viên Lucky star từ công ty Đài Loan Tôm cho ăn 2,5% trọng lượng thể Tôm chuyển lên bể kính 100 lít dưỡng tuần trước tiến hành thí nghiệm 84 2.2 Chuẩn bị vi khuẩn gây nhiễm Ba chủng vi khuẩn Vibrio campbellii (LMG21363), V harveyi (LMG11226) V harveyi (BB120) có nguồn gốc từ phịng thí nghiệm Vi sinh vật Đại Học Ghent, Bỉ dùng cho thí nghiệm gây nhiễm Các chủng vi khuẩn giữ giống 20% glycerol giữ -80oC sau cấy mơi trường Thiosulfate Citrate Bile Succrose Agar (TCBS) ủ 28oC 24 Khuẩn lạc đơn chuyển sang môi trường Nutrient Broth + 2%o NaCl tăng sinh qua đêm 28oC với tốc độ lắc 150 vòng/phút Canh khuẩn chuyển sang ống ly tâm ly tâm tốc độ 2200 g 15 phút, bỏ dịch nổi, rửa cặn lần với nước muối sinh lý vô trùng Mật độ vi khuẩn xác định cách đo mật độ quang sau tính OD =1 tương ứng với 1,2 x 109 CFU/ml 2.3 Thí nghiệm gây nhiễm Nước biển ni tơm có độ mặn 20 gL-1 xử lý với 30 mgL-1 chlorine ngày với sục khí mạnh sau trung hịa Na2S2O3 để loại trừ dư lượng chlorine Thí nghiệm 1: Gây nhiễm tôm sú P monodon với liều khác V harveyi (BB120), V harveyi (LMG11226) V campbellii (LMG21363) Tơm ni với trọng lượng trung bình 8,5 ± 0,9g gây nhiễm với V campbellii (LMG21363), V harveyi (BB120) V harveyi (LMG11226) Gây nhiễm cách tiêm vào (giữa đốt bụng thứ 3) với liều 106 107 CFU tơm-1 Nhóm đối chứng tiêm với nước muối sinh lý vô trùng với thể tích tơm gây nhiễm với Vibrio (0,1 ml/tôm) Sau tiêm tôm nuôi theo dõi bể kính dung tích 100 lít chứa 60 lít nước biển với sục khí liên tục nhiệt độ TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - - THÁNG 11/2013 VIỆN NGHIÊN CỨU NI TRỒNG THỦY SẢN trì mức 28-300C Tơm cho ăn thức ăn viên lần/ngày Thí nghiệm bố trí với lần lặp lại nghiệm thức (3 bể, bể gồm 10 tôm) Tôm chết ghi nhận sau tiêm 148 Tôm yếu chết thu mẫu cho nghiên cứu mô học, mẫu tôm cố định dung dịch Davidson’s theo quy trình xử lý Bell Lightner (1988) Mẫu xử lý, đúc cắt nhuộm hematoxylin eosin Thí nghiệm 2: Gây nhiễm tơm sú P monodon với liều khác V harveyi (BB120) V harveyi (LMG11226) Mục đích thí nghiệm để so sánh độc lực harveyi (BB120) V harveyi (LMG11226) sau gây nhiễm với liều thấp cao harveyi (BB120) V harveyi (LMG11226) (từ x 105 đến x 108 CFU tơm-) Tơm với trọng lượng trung bình 8,9 ± 0,8g dùng cho thí nghiệm gây nhiễm thực giống mơ tả thí nghiệm Thí nghiệm 3: Gây nhiễm tôm sú P monodon với liều khác V harveyi (BB120) Mục đích thí nghiệm lặp lại thí nghiệm từ lần khẳng định độc lực V harveyi BB120 tôm sú Tôm với trọng lượng trung bình 11 ± 1,2g gây nhiễm cách tiêm V harveyi (BB120) với liều 106, 107, 108, x 108 CFU tơm-1 Thí nghiệm bố trí thí nghiệm Thí nghiệm 4: Gây nhiễm tôm thẻ chân trắng P vannamei với liều khác V harveyi (BB120), V harveyi (LMG11226) and V campbellii (LMG21363) Mục đích thí nghiệm nhằm để kiểm chứng chủng Vibrio có độc lực tơm sú tơm thẻ chân trắng Tôm thẻ chân trắng với trọng lượng trung bình 7,8 ± 0,7g gây nhiễm với liều khác Vibrio Thí nghiệm bố trí thí nghiệm nêu 2.4 Xử lý số liệu: Tỷ lệ tôm chết quy chuyển sang giá trị ArcSin, khác nghiệm thức xử lý thống kê theo ANOVA với phần mềm SPSS (version 18.0 for Windows) III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Thí nghiệm 1: Gây nhiễm tơm sú P monodon với liều khác V harveyi (BB120), V harveyi (LMG11226) V campbellii (LMG21363) Ở thí nghiệm tơm sú tiêm với liều khác Vibrio Kết thí nghiệm đồ thị 3.1 cho thấy tỷ lệ chết thấp gây nhiễm với V harveyi (BB120) V harveyi (LMG11226) 106 CFU tôm-1 sau ngày theo dõi thí nghiệm Ngược lại, với liều gây nhiễm V campbellii (LMG21363) gây chết tôm khoảng 40% sau 24 gây nhiễm Với liều 107 CFU tơm1- cho thấy V campbellii (LMG21363) có độc lực cao gây chết gần 100% tôm vòng 6-9 sau gây nhiễm Kết cho thấy V harveyi (BB120) có độc lực thấp số chủng khảo sát Độc lực chủng vi khuẩn tiếp tục kiểm tra thí nghiệm TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - - THÁNG 11/2013 85 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN Đồ thị 3.1 Tỷ lệ chết cộng dồn tôm sú sau gây nhiễm với liều khác V harveyi (BB120), V harveyi (LMG11226) V campbellii (LMG21363) 3.2 Thí nghiệm 2: Gây nhiễm tôm sú P monodon với liều khác V harveyi (BB120) V harveyi (LMG11226) Kết thí nghiệm đồ thị 3.2 cho thấy Vibrio harveyi (LMG11226) có độc lực cao so với chủng BB120 Tỷ lệ chết 100% ghi nhận gây nhiễm với Vibrio harveyi (LMG11226) từ liều x 106 CFU tôm-1 cao Đối với nồng độ gây nhiễm cao (5 x 106-107 CFU tôm-1 chủng LMG11226 x 107-5 x 108 CFU tôm-1 chủng BB120) tơm chết cấp tính vịng 2-8 sau gây nhiễm 100% tỷ lệ chết ghi nhận sau 12 Có khác biệt lớn có ý nghĩa thống kê tỷ lệ chết gây nhiễm liều x 106 CFU V harveyi (BB120) (LMG11226) (p < 0,05) Bảng 3.1 Tỷ lệ chết cộng dồn tôm sú tổng hợp từ thí nghiệm đến thời điểm kết thúc thí nghiệm Thí nghiệm Thí nghiệm Nghiệm thức Tỷ lệ chết (%) Nghiệm thức Tỷ lệ chết (%) V harveyi (BB120) (106) ± 0a V harveyi (BB120) (5 x 106) 6,7 ± 5,8a V harveyi (BB120) (107) 6,7 ± 5,8a V harveyi (BB120) (5 x107) 100 ± 0c V harveyi (LMG11226) (106) 10,0 ± 10,0a V harveyi (BB120) (5 x 108) 100 ± 0c V harveyi (LMG11226) (107) 53,3 ± 15,3b V harveyi (LMG11226) (5 x 105) 26,7 ± 5,8b V campbellii (LMG21363) (106) 36,7 ± 5,8ab V harveyi (LMG11226) (5x 106) 100 ± 0c V campbellii (LMG21363) (107) 100 ± 0c V harveyi (LMG11226) (5 x 107) 100 ± 0c 86 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - - THÁNG 11/2013 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN Đồ thị 3.2 Tỷ lệ chết cộng dồn tôm sú (%) sau gây nhiễm với liều khác V harveyi (BB120) V harveyi (LMG11226) 3.3 Thí nghiệm 3: 107 CFU tơm‑1 (đồ thị 3.3) Mặc dù 100% tỷ lệ Gây nhiễm tôm sú với liều khác V harveyi (BB120) chết ghi nhận nồng độ cao 108 x 108 Tôm gây nhiễm với liều khác V harveyi (BB120) 106, 107, 108, x108 CFU tôm-1 Kết tỷ lệ chết tương thích với thí nghiệm trước Tỷ lệ chết thấp (< 10%) tiêm tôm với liều 106 xem chủng có độc lực thấp tôm sú CFU tôm‑1 V harveyi (BB120) thơng thường tiêm liều q cao gây chết tơm tơm chết sốc với lượng lớn vi khuẩn tiêm vào Đồ thị 3.3 Tỷ lệ chết cộng dồn tôm sú sau gây nhiễm với liều khác V harveyi (BB120) TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - - THAÙNG 11/2013 87 VIỆN NGHIÊN CỨU NI TRỒNG THỦY SẢN 3.4 Thí nghiệm 4: Gây nhiễm tôm thẻ chân trắng với liều khác V harveyi (BB120), V harveyi (LMG11226) V campbellii (LMG21363) Cũng giống kết thí nghiệm tơm sú, V campbellii (LMG21363) xem chủng có độc lực cao Từ kết thí nghiệm cho thấy tôm sú tôm thẻ chân trắng mẫn cảm với loài Vibrio kiểm tra khơng thấy có tính chun biệt cho tơm sú hay tôm thẻ chân trắng (đồ thị 3.4) Đồ thị 3.4 Tỷ lệ chết cộng dồn tôm thẻ chân trắng (%) sau gây nhiễm với liều khác V harveyi (BB120), V harveyi (LMG11226) V campbellii (LMG21363) Ở tất thí nghiệm, tơm yếu chết có chung tượng đục chỗ tiêm Đối với tơm sống sót chỗ tiêm chuyển sang đốm đen tượng Hình 3.1 Tơm bị đục chỗ tiêm Hình 3.2 Hiện tượng huy động tế báo máu chỗ tiêm Vi khuẩn có độc lực thấp dùng làm thí nghiệm thăm dị việc hoạt hóa hệ thống miễn dịch tôm sú cách kết hợp vi 88 melanine hóa Hầu hết lát cắt mơ học ghi nhận trường hợp tập trung tế bào máu vùng tiêm quan khác tim, quan bạch huyết (lympho) khuẩn có độc lực thấp Heat Shock Protein 70 (Hsp70) Tơm tiêm 10 µg of Hsp70 sau tiếp tục tiêm V harveyi (BB120) liều 106 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - - THÁNG 11/2013 VIỆN NGHIÊN CỨU NI TRỒNG THỦY SẢN CFU tơm-1 Kết thăm dị cho thấy gen tổng hợp Phenoloxidase proPO1 tăng 6,03 lần so với đối chứng không thấy tăng proPO2 Ngược lại nghiệm thức tiêm đơn vi khuẩn Hsp70 không thấy tăng đáng kể proPO1 IV THẢO LUẬN Có nhiều kiểu gây nhiễm thực nhiều tác giả nước dùng để kiểm tra tác nhân gây bệnh nghiên cứu sinh bệnh Vibrio tơm Các thí nghiệm lây nhiễm quan tâm đến yếu tố làm ảnh hưởng đến kết thí nghiệm lồi tơm, cỡ tơm, chủng vi khuẩn dùng để thí nghiệm, liều gây nhiễm, kiểu gây nhiễm, điều kiện gây sốc (nhiệt độ, độ mặn, ammonia) Phần lớn thí nghiệm trước đối tượng tôm bệnh nguồn tôm chọn lọc di truyền định Vì vậy, nghiên cứu việc dùng tơm bệnh làm thí nghiệm điểm thuận lợi làm hạn chế yếu tố vi sinh (vi khuẩn gây bệnh khác) lảm ảnh hưởng đến kết Bệnh Vibrio tơm tìm thấy với nhiều loài gây Vibrio anguillarum (Lightner, 1996), V alginolyticus (Selvin Lipton, 2003), V parahaemolyticus (AlapideTendencia Dureza, 1997), V harveyi (Prayitno Latchford, 1995), V penaeicida (Saulnier ctv., 2000), V campbellii-like (Hameed, 1995) có V splendidus (Lavilla Pitogo ctv., 1998) V harveyi xem loài nguy hiểm gây nên tượng bệnh phát sáng trại giống ngồi ao ni tơm sú thương phẩm (LavillaPitogo ctv., 1990) V harveyi báo cáo gây thiệt hại nghiêm trọng trại giống Philippine (Lavilla-Pitogo ctv., 1990), Úc (Pizzutto Hirst, 1995), Nam Mỹ (Álvarez ctv., 1998; Robertson ctv., 1998) Mexico (Vandenberghe ctv., 1999) Trong nghiên cứu này, tất chủng khảo sát vi khuẩn phát sáng Tuy nhiên, chủng cho thấy có độc lực khác tôm sú tôm thẻ chân trắng Điều kết luận khơng phải tất loài vi khuẩn phát sáng có độc lực cao Theo Ruwandeepika ctv (2011), V harveyi 11226 cho có độc lực thấp Artemia kể V harveyi BB120 có độc lực thấp Tuy nhiên qua nghiên cứu cho thấy V harveyi 11226 có độc lực cao tôm sú tôm thẻ chân trắng Trái lại, V harveyi BB120 vừa độc lực thấp tôm sú lẫn Artemia (Defoirdt ctv., 2005) Điều cho thấy mức độ mẫn cảm Vibrio tùy thuộc vào vật chủ Trong nghiên cứu này, tượng đục chỗ tiêm ghi nhận tôm chết Tuy nhiên tơm sống sót lại thấy tượng melanine hóa Hiện tượng ghi nhận nhóm tác giả Sarathi ctv (2007) Nhóm tác giả quan sát thấy tượng huy động tế bào máu melanine hóa nơi tiêm tôm Fenneropenaeus indicus với Vibrio alginolyticus Trong nghiên cứu này, tỷ lệ tôm chết tập trung 9-24 sau gây nhiễm Điều tương tự quan sát Nash ctv (1992) Nhóm tác giả kết luận liều tiêm tùy thuộc vào độc lực vi khuẩn, lồi tơm, cỡ tơm thí nghiệm Lê Hồng Phước ctv (2008) ghi nhận tôm chết khoảng 6-12 sau tiêm tôm thẻ chân trắng với V campbellii liều 107 CFU tôm-1 V KẾT LUẬN Khơng phải lồi Vibrio phát sáng có độc lực cao tôm sú tôm thẻ chân trắng Trong số loài Vibrio kiểm tra V campbellii (LMG21363) có độc lực cao tôm sú tôm thẻ chân trắng Tỷ lệ chết 96% ghi nhận khoảng 12 sau tiêm gây nhiễm tôm sú liều 107 CFU tơm-1 V harveyi BB120 có độc lực thấp số loài vi khuẩn kiểm tra Loài vi khuẩn TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - - THÁNG 11/2013 89 VIỆN NGHIÊN CỨU NI TRỒNG THỦY SẢN gây chết tôm nuôi liều gây nhiễm cho tơm 107 CFU cao Các lồi vi khuẩn kiểm tra cho thấy độc lực tương đồng tôm sú tôm thẻ chân trắng LỜI CẢM ƠN Nghiên cứu thực với nguồn kinh phí từ Quỹ Phát Triễn Khoa Học & Công Nghệ Quốc Gia NAFOSTED (National Foundation for Science and Technology Development) Nhóm tác giả chân thành cám ơn Quỹ tài trợ cho chương trình nghiên cứu Cám ơn GS.TS Peter Bossier có nhiều góp ý cho nghiên cứu TÀI LIỆU THAM KHẢO Alapide-Tendencia, E.V and Dureza, L.A., 1997 Isolation of Vibrio spp from Penaeus monodon (Fabricius) with red disease syndrome Aquaculture, 154, p.107-14 Álvarez, J.D., Austin, B., Álvarez, A.M and Reyes, H., 1998 Vibrio harveyi: a pathogen of penaeid shrimps and fish in Venezuela J Fish Dis, 21, p.313-16 Bell, T.A and Lightner, D.V., 1988 A handbook of normal penaeid shrimp histology The World Aquaculture Society, Baton Rouge De la Peña, L.D., Nakai, T and Muroga, K., 1995 Dynamics of Vibrio sp in organs of orally infected Kuruma prawn, Penaeus japonicus Fish Pathol, 30(1), p.39-45 Defoirdt, T., Bossier, P., Sorgeloos, P and Verstraete, W., 2005 The impact of mutations in the quorum sensing systems of Aeromonas hydrophila, Vibrio anguillarum and Vibrio harveyi on their virulence towards gnotobiotically cultured Artemia franciscana Environ Microbiol, (8), p.1239-47 Gómez-Gil, B., Herrera-Vega, M.A., Abreu-Grobois, F.A and Roque, A., 1998b Bioencapsulation of two different Vibrio species in nauplii of the brine shrimp (Artemia franciscana) Appl Environ Microbiol, 64, p.2318-22 90 Hameed, A.S.S., 1995 Susceptibility of three Penaeus species to a Vibrio campbelli-like bacterium J World Aquacult Soc, 26(3), p.315-19 Karunasagar, I., Pai, R., Malathi, G.R and Karunasagar, I., 1994 Mass mortality of Penaeus monodon larvae due to antibiotic-resistant Vibrio harveyi infection Aquaculture, 128, p.203-09 Lavilla-Pitogo, C.R.M., Baticados, C.L., Cruz Lacierda, E.R and de La Peña, L.D., 1990 Occurrence of luminous bacterial disease of Penaeus monodon larvae in the Philippines Aquaculture, 91, p.1-13 Lavilla-Pitogo, C.R., Leaño, E.M and Paner, M.G., 1998 Mortalities of pond-cultured juvenile shrimp, Penaeus monodon, associated with dominance of luminescent vibrios in the rearing environment Aquaculture, 164, p.337-49 Leaño, E.M., Lavilla-Pitogo, C.R and Paner, M.G., 1998 Bacterial flora in the hepatopancreas of pond-reared Penaeus monodon juveniles with luminous vibriosis Aquaculture, 164, p.367-74 Lightner, D.V and Lewis, D.H., 1975 A septic bacterial disease syndrome of penaeid shrimp Mar Fish Rev, 37, p.25-28 Lightner, D.V., 1996 A Handbook of Pathology and Diagnostic Procedures for Diseases of Penaeid Shrimp World Aquaculture Society, Baton Rouge Nash, G., Nithimathachoke, C., Tungmandi, C., Arkarjarmorin, A., Prathampipat, P and Ruamthaveesub, P., 1992 Vibriosis and its control in pond-reared Penaeus monodon in Thailand In: Shariff, I.M., Subasinghe, R.P., Arthur, J.R (Eds.), Diseases in Asian Aquaculture, Fish Health Section, Asian Fisheries Society, Manila, The Phillippines p 143-155 Phuoc, L.H., Corteel, M., Nauwynck, H.J., Pensaert, M.B., Alday-Sanz, V., van den Broeck, W., Sorgeloos, P and Bossier, P., 2008 Increased susceptibility of white spot syndrome virusinfected Penaeus vannamei to Vibrio campbellii J Environ Microbiol, 10(10), 2718-27 Pizarro, F and Alfaro, J., 1994 Reproductive performance of Penaeus stylirostris females injected with heat-killed Vibrio alginolyticus J World Aquacult Soc, 25, p.576-78 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - - THÁNG 11/2013 VIỆN NGHIÊN CỨU NI TRỒNG THỦY SẢN Pizzutto, M and Hirst, R.G.,1995 Classification of isolates of Vibrio harveyi virulent to Penaeus monodon larvae by protein profile analysis and M13 DNA fingerprinting Dis Aquat Org 21, p.6168 Pfaffl, M.W., 2001 A new mathematical model for relative quantification in real-time RT-PCR Nucleic Acids Res 29, p.2002-07 Prayitno, S.B and Latchford, J.W., 1995 Experimental infection of crustaceans with luminous bacteria related to Photobacterium and Vibrio Effect of salinity and pH on infectiosity Aquaculture, 132, p.105-112 Primavera, J.H., 1997 Socio-economic impacts of shrimp culture Aquacult Res, 28, p.815-27 Ruwandeepika, H.A., Defoirdt, T., Bhowmick, P.P., Karunasagar, I., Karunasagar, I., Bossier P., 2011 In vitro and in vivo expression of virulence genes in Vibrio isolates belonging to the Harveyi clade in relation to their virulence towards gnotobiotic brine shrimp (Artemia franciscana) J Environ Microbiol, 13(2), p.506-17 Robertson, P.A.W., Calderon, J., Carrera, L., Stark, J.R., Zherdmant, M and Austin, B., 1998 Experimental Vibrio harveyi infections in Penaeus vannamei larvae Dis Aquat Org, 32, p.151-155 Roque, A., Turnbull, J.F., Escalante, G and GomezGil, B., 1998 Development of a bath challenge for the marine shrimp Penaeus vannamei Boone, 1931 Aquaculture, 169, p 283-90 Sarathi, M., Ishaq Ahmed, V.P., Venkatesan, C., Balasubramanian, G., Prabhi anhavathy, J and Sahul Hameed, A.S., 2007 Comparative study on immune response of Fenneropenaeus indicus to Vibrio alginolyticus and white spot syndrome virus Aquaculture, 271, p.8-20 Saulnier, D., Haffner, P., Goarant, C., Levy, P and Ansquer, D., 2000 Experimental infection models for shrimp vibriosis studies: a review Aquaculture, 191, p.133-144 Selvin, J.L and Lipton, A.P., 2003 Vibrio alginolyticus associated with white spot disease of Penaeus monodon Dis Aquat Org, 57, p.147-150 Soto-Rodríguez, S.A., Simoes, N., Roque, A and Gómez Gil, B., 2006 Pathogenicity and colonization of Litopenaeus vannamei larvae by luminescent vibrios Aquaculture, 258, p.109-15 Tsukamoto, K.K., Oyaizu, H., Nanba, K and Simidu, U., 1993 Phylogenic relationship of marine bacteria, mainly members of the family Vibrionaceae, determined on the basis of 16S rRNA sequences Int J Syst Bacteriol, 43, p.8-19 Vandenberghe, J., Verdonck, L., Robles Arozarena, R., Rivera, G., Bolland, A., Balladares, M., GómezGil, B., Calderón, J., Sorgeloos, P and Swings, J., 1999 Vibrios associated with Litopenaeus vannamei larvae, postlarvae, broodstock, and hatchery probionts Appl Environ Microbiol, 65, p 2592-97 Wang, F.I and Chen, J.C., 2006 The immune response of tiger shrimp Penaeus monodon and its susceptibility to Photobacterium damselae subsp damselae under temperature stress Aquaculture, 258, p.34-41 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - - THÁNG 11/2013 91 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN VIRULENCE OF VIBRIO STRAINS TO Penaeus monodon AND Penaeus vannamei SHRIMP Le Hong Phuoc1, Nguyen Thi Hien1, Vo Hong Phuong1, Nguyen Pham Hoang Huy1, Ngo Thi Bich Phuong1, Nguyen Trung Hieu1 ABSTRACT This study was conducted to test the virulence of Vibrio campbellii (LMG21363), V harveyi (BB120) and V harveyi (LMG11226) to specific pathogen free Penaeus monodon and P vannamei shrimp Juvenile shrimp were injection challenged with x 105, 106, x 106, 107, x 107, 108 or x 108 CFU shrimp-1 of Vibrio strains Control receiving blank inoculum was included High mortality was observed when injecting shrimp with V campbellii (LMG21363) compared to that of two other Vibrio strains Cumulative shrimp mortality after injection with 107 CFU of V campbellii (LMG21363) was significantly higher than that in shrimp injected with the same dose of V harveyi (LMG11226) and V harveyi (BB120) (p < 0.05) Ninety six percent mortality was obtained at 12 hours post injection (hpi) with 107 CFU shrimp-1 of V campbellii (LMG21363) while 30% and 4% mortality was observed in treatment with V harveyi (LMG11226) and V harveyi (BB120), respectively Three bacterial strains showed the same virulence trend to P monodon and P vannamei Keywords: Penaeus monodon, Penaeus vannamei, virulence, Vibrio Người phản biện: TS Đinh Thị Thủy Ngày nhận bài: 5/9/2013 Ngày thông qua phản biện: 20/9/2013 Ngày duyệt đăng: 15/10/2013 Southern Monitoring Center for Aquaculture Environment & Epidemic, Research Institute for Aquaculture No.2 Email: lehongphuoc@yahoo.com 92 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - - THAÙNG 11/2013 ... thấy tơm sú tơm thẻ chân trắng mẫn cảm với loài Vibrio kiểm tra khơng thấy có tính chun biệt cho tôm sú hay tôm thẻ chân trắng (đồ thị 3.4) Đồ thị 3.4 Tỷ lệ chết cộng dồn tôm thẻ chân trắng (%)... độc lực thấp Artemia kể V harveyi BB120 có độc lực thấp Tuy nhiên qua nghiên cứu cho thấy V harveyi 11226 có độc lực cao tôm sú tôm thẻ chân trắng Trái lại, V harveyi BB120 vừa độc lực thấp tôm. .. nhận tôm chết khoảng 6-12 sau tiêm tôm thẻ chân trắng với V campbellii liều 107 CFU tơm-1 V KẾT LUẬN Khơng phải lồi Vibrio phát sáng có độc lực cao tơm sú tơm thẻ chân trắng Trong số lồi Vibrio