(Luận văn thạc sĩ) phân lập và tuyển chọn nấm mốc sinh enzyme họ GH61 hỗ trợ thủy phân lignocellulose

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Phạm Thị Huyền Nhung PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN NẤM MỐC SINH ENZYME HỌ GH61 HỖ TRỢ THỦY PHÂN LIGNOCELLULOSE Chuyên ngành: Vi sinh vật học Mã số: 60 42 40 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS VŨ NGUYÊN THÀNH Hà Nội - 2012 MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Lignocellulose 1.1.1 Cellulose 1.1.2 Hemicellulose 1.1.3 Lignin 1.2 Họ GH 61 (Glycoside Hydrolase 61) 12 1.2.1 Glycoside hydrolase 12 1.2.2 Họ GH 61 15 1.3 Giới thiệu chung nấm mốc 16 1.3.1 Định nghĩa 16 1.3.2 Hình thái cấu trúc 17 1.3.3 Sinh sản nấm mốc 18 Chƣơng 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1 Đối tƣợng 24 2.2 Hóa chất, trang thiết bị máy móc 24 2.2.1 Hóa chất 24 2.2.2 Dụng cụ trang thiết bị máy móc: 25 2.3 Thành phần môi trƣờng dùng nghiên cứu 25 2.3.1 Môi trường Czapeck bột giấy 25 2.3.2 Môi trường PDA 26 2.3.3 Môi trường nuôi cấy tách chiết enzyme 26 2.3.4 Môi trường YM 27 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 27 2.4.1 Phương pháp phân lập 27 2.4.2 Làm giống 28 2.4.3 Quan sát hình thái khuẩn lạc, tế bào: 28 2.4.4 Tách chiết enzyme 28 2.4.5 Xác định hoạt tính cellulase (IU) DNS 29 2.4.6 Xác định hoạt tính Xylanase theo phương pháp DNS 30 2.4.7 Định lượng protein theo phương pháp Lowry 32 2.4.8 Điện di protein 33 2.4.9 Phương pháp finger printing 35 2.4.10 Phương pháp phân tích D – gluconic acid 37 Chƣơng 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 40 3.1 Kết phân lập 40 3.2 Khảo sát hoạt tính enzyme cellulase, xylanase phƣơng pháp DNS 41 3.3 Phân tích hoạt tính enzyme cellulase xylanase loại chất carbon khác 44 3.4 Định lƣợng protein phƣơng pháp Lowry 46 3.5 Phân tích thành phần protein hệ enzyme 47 3.6 Xác định có mặt enzyme GH61 phân tích D – gluconic acid 52 3.7 Phân nhóm dựa vào hình thái khuẩn lạc, tế bào kỹ thuật fingerprinting 52 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO 60 MỞ ĐẦU Ngày với phát triển xã hội, ngành công – nông – lâm nghiệp … phát triển cách mạnh mẽ Bên cạnh phát triển lượng chất thải từ ngành thải môi trường ngày nhiều, làm ô nhiễm môi trường sống không sinh vật mà gây ảnh hưởng nghiêm trọng tới người Ngồi chất thải nhân tạo khó bị phân hủy có số chất thải có nguồn gốc từ sinh vật khó bị phân hủy điều kiện thường hay sinh vật thơng thường chintin, lignocellulose, pectin… Trong lingocellulose chủ yếu Sự tồn đọng lignocellulose môi trường khơng gây nhiễm mơi trường mà cịn làm đứt qng chu trình tuần hồn vật chất tự nhiên Do việc phân giải lignocellulose có vai trị quan trọng không môi trường mà sinh vật Nhiều nghiên cứu chứng minh khả triển vọng sử dụng enzyme vào việc biến đổi sinh học chất thải lignocellulose để tạo đường đơn hữu ích từ phế phụ liệu chứa lignocellulose [3] Tuy nhiên, lignocellulose chất khó bị phân giải điều kiện thường, có số sinh vật có khả phân hủy chúng Bên cạnh đó, q trình đòi hỏi tham gia nhiều enzyme khác đặc biệt enzyme họ Glycoside Hydrolase Nhằm mục đích tăng suất q trình thủy phân lignocellulose thành đường đơn, đường đôi từ phế phụ phẩm nơng – lâm nghiệp, để từ đưa vào ứng dụng rộng rãi sản xuất sản phẩm có giá trị đời sống người vật nuôi (nhiên liệu sinh học, thức ăn chăn nuôi…), thực đề tài: Phân lập tuyển chọn chủng nấm mốc sinh enzyme họ GH61 hỗ trợ thủy phân lignocellulose CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Lignocellulose Lignocellulose thành phần cấu trúc thành tế bào thực vật Thành phần chủ yếu lignocellulose cellulose, hemicellulose lignin (Hình 1.1) Cellulose hemicellulose đại phân tử cấu tạo từ gốc đường khác nhau, lignin polymer dạng vòng tổng hợp từ tiền phenylpropanoid Thành phần cấu tạo hàm lượng polymer thực vật khác loài Ngồi ra, cịn tùy thuộc vào độ tuổi, giai đoạn sinh trưởng, phát triển điều kiện mơi trường Thành phần lignocellulose trình bày bảng 1.1 [10] Hình 1.1: Thành phần lignocellulose Nguồn lignocellulose Cellulose (%) Hemicellulose (%) Lignin (%) Thân gỗ cứng 40-55 24-40 18-25 Thân gỗ mềm 45-50 25-35 25-35 Vỏ lạc 25-30 25-30 30-40 Lõi ngô 45 35 15 Giấy 85-99 0-15 Vỏ trấu 32.1 24 18 Vỏ trấu lúa mì 30 50 15 Rác phân loại 60 20 20 Lá 15-20 80-85 Hạt 80-95 5-20 Giấy báo 40-55 25-40 18-30 Giấy thải từ bột giấy hóa học 60-70 10-20 5-10 Chất rắn nước thải 8-15 - 24-29 Chất thải lợn 28 - Phân bón gia súc 1.6-4.7 1.4-3.3 2.7-5.7 Cỏ bờ biển Bermuda 25 35.7 6.4 Cỏ mềm 45 31.4 12.0 Các loại cỏ 25-40 25-50 10-30 Bã thô 33.4 30 18.9 ban đầu Bảng 1.1: Thành phần lignocellulose rác thải phế phụ liệu nông nghiệp phổ biến [8] Lượng lớn lignocellulose thải từ ngành lâm nghiệp, nông nghiệp, công nghiệp giấy gây ô nhiễm môi trường Tuy nhiên, lượng lớn sinh khối thực vật dư thừa coi rác thải biến đổi thành nhiều sản phẩm có giá trị khác nhiên liệu sinh học, hóa chất, nguồn lượng rẻ cho trình lên men, bổ sung chất dinh dưỡng cho người thức ăn cho động vật [10] 1.1.1 Cellulose Cellulose hợp chất hữu có cơng thức (C6H10O5)n, polysaccharide gồm chuỗi tuyến tính gồm từ vài trăm đến 10.000 đơn phân D – glucose nối với liên kết 1,4 β - glucoside [6] [8] Cellulose thành phần cấu trúc thành tế bào thực vật, nhiều loại tảo lớp nấm trứng (Oomycetes) Một số loài vi khuẩn chế tiết cellulose để tạo thành màng sinh học Cellulose hợp chất hữu phổ biến trái đất Khoảng 33% khối lượng khô thực vật cellulose (sợi 90%, gỗ 40 -50% gai dầu khô khoảng 75%) [9] [23] [24] Khác với carbohydrate phức tạp khác tinh bột, glycogel có cấu trúc cuộn lại phân nhánh, phân tử mở rộng cấu tạo giống hình que cứng, cellulose có cấu trúc mạch thẳng Sự khác biệt đơn phân cellulose nối với cầu nối 1,4 β – glycoside; carbohydrate khác lại liên kết 1,4 α – glycoside Nhờ đặc tính mà phân tử cellulose dai hơn, bền hơn, khó phân hủy điều kiện thường [2] [14] Cellulose cấu tạo thành chuỗi dài gồm 500 phân tử glucose Các chuỗi cellulose xếp đối song song tạo thành vi sợi cellulose có đường kính khoảng 3,5 nm Mỗi chuỗi có nhiều nhóm OH tự do, sợi cạnh liên kết với liên kết hydro Các vi sợi lại liên kết với tạo thành vi sợi lớn hay cịn gọi bó mixen có đường kính 20 nm, sợi mixen có khoảng trống lớn Khi tế bào non, khoảng chứa đầy nước, tế bào già chứa đầy lignin hemicellulose Cellulose có nguồn gốc từ thực vật thường tìm thấy hỗn hợp với hemicellulose, lignin, pectin chất khác, cellulose vi khuẩn tinh khiết, có hàm lượng nước cao nhiều [23] Các mạch cellulose liên kết với nhờ liên kết hydro lực Van der Waals, hình thành hai vùng cấu trúc kết tinh vơ định hình Trong vùng kết kinh, phân tử cellulose liên kết chặt chẽ với nhau, vùng khó bị cơng enzyme hóa chất Ngược lại, vùng vơ định hình, cellulose liên kết lỏng lẻo nên dễ bị cơng Có hai kiểu cấu trúc cellulose đưa nhằm mô tả vùng kết tinh vơ định hình [4] Hình 1.2: Cấu trúc cellulose: kiểu nhiều sợi nhỏ hợp thành (Fringed fibrillar) kiểu chuỗi gấp khúc (Folding chain) [4] - Kiểu nhiều sợi nhỏ hợp thành (Fringed fibrillar): phân tử cellulose kéo thẳng định hướng theo chiều dài sợi Vùng tinh thể có chiều dài 500 A, xếp xen kẽ với vùng vơ định hình - Kiểu chuỗi gấp khúc (Folding chain): phân tử cellulose gấp khúc theo chiều dài sợi Mỗi đơn vị lặp lại có độ trùng hợp khoảng 1000, giới hạn hai điểm a b hình vẽ Các đơn vị xếp thành chuỗi nhờ vào mạch glucose nhỏ, vị trí dễ bị thủy phân Đối với đơn vị lặp lại, hai đầu vùng vô định hình, vào giữa, tính chất kết tinh cao Trong vùng vơ định hình, liên kết β – glucoside monomer bị thay đổi góc liên kết, cuối đoạn gấp, ba phân tử monomer xếp tạo thay đổi 1800 cho toàn mạch Vùng vơ định hình dễ bị cơng tác nhân thủy phân vùng tinh thể thay đổi góc liên kết liên kết cộng hóa trị (β – glucoside) làm giảm độ bền nhiệt động liên kết, đồng thời vị trí khơng tạo liên kết hydro Nhiều tính chất cellulose phụ thuộc vào độ dài chuỗi mức độ trùng hợp, số lượng đơn phân glucose tạo nên phân tử polymer Cellulose từ bột gỗ có độ dài chuỗi điển hình 300 1700 đơn phân, bơng sợi thực vật khác cellulose vi khuẩn có độ dài chuỗi khác nhau, từ 800 đến 10.000 đơn phân [5] Các phân tử với chiều dài chuỗi nhỏ kết từ phân hủy cellulose, gọi cellodextrin, trái ngược với chuỗi cellulose dài, cellodextrin thường hịa tan nước dung mơi hữu Một số động vật, đặc biệt động vật nhai lại mối, tiêu hóa cellulose với giúp đỡ vi sinh vật sống cộng sinh ruột Con người tiêu hóa cellulose chừng mực [13], nhiên chủ yếu hoạt động chất hỗ trợ tiêu hóa thường gọi "chất xơ" Cellulose dùng công nghiệp ngày chủ yếu lấy từ bột giấy Chúng chủ yếu sử dụng để sản xuất bìa giấy, phạm vi nhỏ chuyển thành sản phẩm dẫn xuất giấy bóng kính tơ nhân tạo Chuyển đổi cellulose từ trồng nhiên liệu vào nhiên liệu sinh học ethanol cellulosic nghiên cứu nguồn nhiên liệu thay 1.1.2 Hemicellulose Hemicellulose polymer carbohydrate phức tạp chiếm 25-30% tổng trọng lượng khơ gỗ Nó polysaccharide với trọng lượng phân tử thấp cellulose [12] Nó thường tìm thấy liên kết với cellulose thành tế bào thứ cấp thực vật, chúng có mặt thành tế bào sơ cấp [19] Hemicellulose thuật ngữ nhóm homo - heteropolymer bao gồm đơn phân chính: D – xylose, D – mannose, D – galactose, D – glucose, nhóm thế: L – arabinose, acid – O – methyl – glucuronic, D – galacturonic D – glucuronic Các phân tử đường liên kết với liên kết 1,4 β 1,3 β – glycoside Sự khác biệt với cellulose hemicellulose có phân nhánh với chuỗi bên ngắn gồm loại đường khác nhau; đó, chúng dễ bị thủy phân so với cellulose [12] Thành phần hemicellulose gỗ cứng glucuronoxylan gỗ mềm Glucomannan Glucuronoxylan gỗ cứng thực vật thân thảo gồm mạch 1,4 β – D – xylan với nhóm 1,2 α – – O – methyl – D – giucuronic acid (hoặc 1,2 α – D – glucuronic acid), chiếm khoảng 10% dư lượng xylose (Hình 1.3) Xylan trong gỗ mềm thực vật thân thảo khác với xylan gỗ cứng chỗ chúng có arabinofuranose liên kết với mạch xylan liên kết 1,3 α (Hình 1.4) [20] KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Sau q trình nghiên cứu chúng tơi thu kết sau: Phân lập 40 chủng nấm mốc thu từ mẫu địa bàn khác Hà Nội, Sơn Tây, Hưng n Tuy Hịa Trong có 19 chủng có hoạt tính xylanase cao (IU/ml >5) Các chủng nấm mốc phát triển mơi trường có chất carbon bã lúa mì tốt so với chất hỗn hợp avicel Hàm lượng protein dịch chiết enyme 10 chủng nấm mốc (có IU/ml > 10) cao với số lượng băng protein nhiều (trừ FEC 523, FEC 544) Các chủng khác nuôi chất carbon khác cho số lượng băng cellulase xylanase khác Phân nhóm định tên chi 19 chủng nấm mốc dựa vào đặc điểm hình thái khuẩn lạc, tế bào phổ finger printing Từ chọn 10 nhóm nấm mốc khác thuộc chi: Penicillium, Aspergillus, Fumarium / Acremonium, Trichoderma chi chưa rõ Các chủng nấm mốc phân lập khơng có chứa enzyme GH61 KIẾN NGHỊ Cần tiến hành giải trình tự để xác định xác tên lồi 10 nhóm nấm mốc phân lập Cần tiếp tục phân lập tuyển chọn chủng nấm mốc có khả sinh enzyme họ GH61 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Nguyễn Văn Bá cs (2005), “Giáo trình nấm học”, trường Đại học Cần Thơ, Viện nghiên cứu phát triển công nghệ sinh học Nguyễn Huy Phiêu, Phùng Ngọc Bộ – Nghiên cứu cấu tạo lignin bồ đề tre nứa Tạp chí Hố học ứng dụng số 3-2002 tr.17 Trần Đình Toại, Trần Thị Hồng (2007),”Tương lai ứng dụng Enzyme xử lý phế thải”, Tạp chí Khoa học Đại học Quốc gia Hà Nội, Khoa học Tự nhiên Công nghệ 23: 75-85 Tài liệu tiếng anh Arja M O (2004), Trichoderma reesei strains for production of cellulases for the textile industry, Espoo 2004, VTT Publication 550 Chandrakant P, Bisaria V.S (1998), “Simultaneous Bioconversion of Cellulose and Hemicellullose to Ethanol”, Critical Reviews in Biotechnology, 18 (4), pp 295-331 Crawford, R L (1981), “Lignin biodegradation and transformation”, John Wiley and Sons, New York David Cannella et al, (2012), “Biotechnology for Biofuels”, Frederksberg C, Denmark E Sjöström (1993), Wood Chemistry: Applications, Academic Press 60 Fundamentals and G Buschle-Diller, C Fanter, F Loth (April 1999), “Structural changes in hemp fibers as a result of enzymatic hydrolysis with mixed enzyme systems", Textile Research Journal 69 (4), 244-251 10 Higuchi T (1978) “Lignin structure and morphological distribution in plant cell walls”, Lignin Biodegradation: Microbiology, Chemistry, and Potential Applications, 1, 1-17 11 Howard R.L., Abotsi E., Jansen van Rensburg and Howard S (2003) “Lignocellulose biotechnology: issues of bioconversion and enzyme production” African Journal of Biotechnology, 2, 602 – 619 12 J Pe´rez et al (2002) “Biodegradation and biological treatments of cellulose, hemicelluloses and lignin: an overview”, Int Microbiol 5, 53–63 13 Joshi, S; Agte, V (1995) "Digestibility of dietary fiber components in vegetarian men", Plant foods for human nutrition (Dordrecht, Netherlands) 48 (1), 39–44 14 Klemm, Dieter; Brigitte Heublein, Hans-Peter Fink, Andreas Bohn (2005) "Cellulose: Fascinating Biopolymer and Sustainable Raw Material, ChemInform 36 (36) 15 Lebo, Stuart E Jr.; Gargulak, Jerry D and McNally, Timothy J (2001), “Kirk-Othmer Encyclopedia of Chemical Technology”, John Wiley & Sons 16 Martone, Pt; Estevez, Jm; Lu, F; Ruel, K; Denny, Mw; Somerville, C; Ralph, J (2009), "Discovery of Lignin in Seaweed Reveals Convergent Evolution of Cell-Wall Architecture", Current biology, CB 19 (2): 169–75 17 Paul V Harris et al (2010) “Stimulation of Lignocellulosic Biomass Hydrolysis by Proteins of Glycoside Hydrolase Family 61: Structure and Function of a Large, Enigmatic Family”, Biochemistry, 49 (15) 61 18 Sinnott, M L (1990) "Catalytic mechanisms of enzymatic glycosyl transfer" Chem Rev, 90, 1171-1202 19 Slavin, JL; Brauer, PM; Marlett, JA (1981) "Neutral detergent fiber, hemicellulose and cellulose digestibility in human subjects", The Journal of Nutrition, 111 (2): 287–97 20 Thomas W Jeffries (1994), “Biodegradation of lignin and hemicelluloses”, Biochemistry of Microbial Degradation, 233-277.hemi4 21 Updegraff DM (1969) "Semimicro determination of cellulose in biological materials".Analytical Biochemistry, 32 (3): 420–424 22 W Boerjan, J Ralph, M Baucher (2003), "Lignin bios", Ann Rev Plant Biol, 54 (1), 519–549 Các nguồn khác 23 http://en.wikipedia.org/wiki/Cellulose 24 http://www.cazy.org/Glycoside-Hydrolases.html 25 http://en.wikipedia.org/wiki/Lignin 62 PHỤ LỤC 1: ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI VÀ NGUỒN GỐC CỦA 40 CHỦNG NẤM MỐC PHÂN LẬP ĐƢỢC STT Kí hiệu chủng Địa điểm Môi trƣờng Nguồn gốc FEC 500 Mẫu phân hủy PDA FEC 501 Lá nhãn phân hủy PDA FEC 502 Vỏ trấu phân hủy PDA FEC 504 FEC 505 Đất mùn Thân mục Czapeck Czapeck FEC 507 FEC 508 FEC 509 Thân mục Lá nhãn phân hủy Vỏ trấu phân hủy PDA PDA Czapeck FEC 511 Rơm phân hủy PDA 10 11 FEC 512 FEC 513 Rơm phân hủy Rơm phân hủy Czapeck PDA ĐHSP 63 Đặc điểm khuẩn lạc Sợi trắng dài, thạch có màu đen để lâu Sợi bơng trắng dài, phía màu vàng chanh Sợi trắng, phía có màu đen, thạch chuyển màu Dạng sợi màu trắng, phía thạch có màu tím nhạt (ít) Dạng hạt màu rêu xám Sợi bơng trắng dài, phía màu vàng chanh Dạng hạt, màu vàng chanh Dạng sợi màu trắng Màu xám, bề mặt gồ ghề, mép khuẩn lạc nhăn nheo Dạng sợi màu trắng, phía thạch có màu tím nhạt Sợi bơng, trắng 12 13 14 FEC 514 FEC 515 FEC 516 Rơm phân hủy Rơm phân hủy Đất mùn PDA PDA Czapeck 15 16 17 FEC 517 FEC 518 FEC 519 Đất mùn Đất mùn Đấ tmùn Czapeck Czapeck Czapeck 18 19 20 FEC 520 FEC 521 FEC 523 Thân mục Rơm phân hủy Rơm phân hủy PDA Czapeck Czapeck 21 FEC 531 Cành mục PDA 22 FEC 532 cànhcâymục PDA 23 FEC 534 Cây mục PDA 24 FEC 535 vỏ khô Czapeck 25 FEC 536 vỏ khô Czapeck 26 27 FEC 537 FEC 538 vỏ khô vỏ khô PDA Czapeck Thành cổ SơnTây 64 Dạng len xốp, màu xanh lá, thạch chuyển màu nâu đỏ Dạng len xốp, màu xanh Dạng hạt, màu xanh nhạt Dề mặt dạng hạt, màu xám đen, phía màu đen Dạng hạt, màu xanh nhạt Dạng hạt, màu xanh nhạt Sợi trắng, sau chuyển phần sang màuxanh Dạng hạt, màu xanh nhạt Bề mặt sợi trắng, phía màu tím Màu xám, bề mặt gồ ghề, mép khuẩn lạc nhăn nheo Bề mặt gồ ghề, màu xanh, thạch chuyển màu vàng xanh Bề mặt ghồ ghề, màu xanh, thạch chuyển sang vàng Bề mặt dạng sợi màu trắng, phía màu đen Bề mặt dạng hạt, màu xám đen, phía màu đen Xanh rêu, có sợi trắng,thạch chuyển màu nâu Bề mặt dạng hạt, màu xám đen, phía 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 FEC 540 FEC 543 FEC 544 FEC 545 FEC 546 FEC 447 FEC 548 FEC 550 FEC 551 FEC 552 FEC 553 FEC 554 FEC 556 Hưng Yên Lá mục Gỗ mục Gỗ mục Gỗ mục Gỗ mục Gỗ mục Gỗ mục Tuy Hòa Gỗ mục Czapeck Czapeck PDA Czapeck Czapeck PDA PDA PDA PDA PDA PDA PDA PDA 65 màu đen Dạng hạt nhỏ, màu be Bề mặt gồ ghề, màu trắng Sợi bông, trắng Đen, tạo khối Dạng hạt, màuxanhnhạt Màu xám, hạt nhỏ Sợi bông, trắng Đen, hạt Nâu đồng, dạng hạt Xanh nhạt, thạch chuyển màu vàng Xanh xám Đen, xám, dạng hạt Đen, tạo thành khối PHỤ LỤC 2: HÌNH THÁI KHUẨN LẠC VÀ TẾ BÀO CỦA MỘT SỐ CHỦNG NẤM MỐC FEC 504 FEC 513 FEC 515 66 FEC 516 FEC 518 FEC 519 67 FEC 520 FEC 521 FEC 523 68 FEC 532 FEC 538 FEC 544 69 FEC 546 FEC 548 70 KẾT QUẢ ĐO OD540 (XYLANASE) THEO PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH DNS PHỤ LỤC 3: STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 Kí hiệu chủng FEC 514 FEC 514A FEC 514W FEC 515 FEC 515A FEC 515W FEC 516 FCE 516A FEC 516w FEC 519 FEC 519A FEC 519W FEC 523 FEC 523A FEC 523W FEC 534 FEC 534A FEC 534W FEC 544 FEC 544A FEC 544W FEC 550 FEC 550A FEC 550W FEC 551 FEC 551A FEC 551W FEC 552 FEC 552A FEC 552W Độ pha loãng 90 100 70 150 150 100 50 50 80 50 70 40 10 50 50 70 20 20 50 60 40 80 60 60 80 50 70 OD mẫu thí nghiệm 0.471 0.705 0.658 0.551 0.532 0.636 0.43 0.211 0.673 0.233 0.442 0.64 0.322 0.422 0.535 0.431 0.4 0.566 0.698 0.371 0.387 0.25 0.164 0.987 0.474 0.232 0.206 0.311 0.28 0.571 71 OD mẫu đối chứng 0.116 0.078 0.079 0.026 0.061 0.119 0.103 0.095 0.094 0.1 0.068 0.134 0.062 0.104 0.092 0.175 0.111 0.156 0.134 0.092 0.116 0.117 0.058 0.162 0.134 0.104 0.129 0.129 0.122 0.132 IU/ml 25.05 49.16 31.78 61.74 55.39 40.53 12.82 4.55 36.31 5.21 0.29 27.77 8.15 2.49 17.37 10.04 0.23 22.50 8.84 4.37 10.62 6.26 3.32 51.74 15.99 6.02 4.83 7.13 0.12 24.09 PHỤ LỤC 4: KẾT QUẢ ĐO OD660 THEO PHƢƠNG PHÁP LOWRY Đƣờng chuẩn BSA: BSA (µg/ml) OD 660 nm 0 50 0.139 100 0.192 200 0.461 300 0.51 400 0.769 500 0.881 STT Kết đo OD STT Kí hiệu chủng Độ pha lỗng OD 660 µg/ml FEC 514 10 0.459 4590 FEC 514A 10 0.393 3930 FEC 514W 10 0.552 5520 FEC 515 10 0.543 5430 FEC 515A 10 0.238 2380 FEC 515W 10 0.537 5370 FEC 516 10 0.424 4240 72 FCE 516A 10 0.39 3900 FEC 516w 10 0.511 5110 10 FEC 519 10 0.452 4520 11 FEC 519A 10 0.426 4260 12 FEC 519W 10 0.457 4570 13 FEC 523 10 0.3 3000 14 FEC 523A 10 0.248 2480 15 FEC 523W 10 0.313 3130 16 FEC 534 10 0.368 3680 17 FEC 534A 10 0.229 2290 18 FEC 534W 10 0.392 3920 19 FEC 544 10 0.304 3040 20 FEC 544A 10 0.381 3810 21 FEC 544W 10 0.463 4630 22 FEC 550 10 0.411 4110 23 FEC 550A 10 0.253 2530 25 FEC 551 10 0.581 5810 26 FEC 551A 10 0.445 4450 27 FEC 551W 10 0.424 4240 28 FEC 552 10 0.424 4240 29 FEC 552A 10 0.399 3990 30 FEC 552W 10 0.316 3760 73 ... ăn chăn nuôi…), thực đề tài: Phân lập tuyển chọn chủng nấm mốc sinh enzyme họ GH61 hỗ trợ thủy phân lignocellulose CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Lignocellulose Lignocellulose thành phần cấu... glycoside hydrolase 61 phân loại dựa vào việc đo lường hoạt động endo-1,4-β-D-glucanase số thành viên họ hoạt động enzyme yếu Khác với enzyme GH khác, enzyme họ GH61 khả thủy phân liên kết glycoside... pháp phân lập Các loại mẫu lấy địa điểm thời gian khác Các mẫu có chứa nấm mốc pha loãng dung dịch muối NaCl 0.9% Sau nấm mốc phân lập mơi trường Czapeck bột giấy Quy trình tiến hành phân lập