(Luận văn thạc sĩ) nghiên cứu rối loạn enzyme α–galactosidase a và phân tích trình tự gen GLA trên bệnh nhân phì đại cơ tim

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Lê Hiền Giang NGHIÊN CỨU RỐI LOẠN ENZYME α-GALACTOSIDASE A VÀ PHÂN TÍCH TRÌNH TỰ GEN GLA TRÊN BỆNH NHÂN PHÌ ĐẠI CƠ TIM LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội – 2014 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Lê Hiền Giang NGHIÊN CỨU RỐI LOẠN ENZYME α-GALACTOSIDASE A VÀ PHÂN TÍCH TRÌNH TỰ GEN GLA TRÊN BỆNH NHÂN PHÌ ĐẠI CƠ TIM Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 60420121 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC PGS.TS Nguyễn Thị Hồng Vân TS Nguyễn Thị Quỳnh Thơ Hà Nội – 2014 LỜI CẢM ƠN Với lịng kính trọng sâu sắc, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn TS Nguyễn Thị Quỳnh Thơ, người tận tình hướng dẫn, ủng hộ hướng dẫn tơi hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS TS Nguyễn Thị Hồng Vân, chủ nhiệm môn Sinh học di truyền trường ĐH KHTN Hà Nội, người thầy trực tiếp dạy dỗ, hướng dẫn thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn anh chị em labo Y sinh học di truyền, Kỹ thuật Y học trường Đại học Y Hải Phịng nhiệt tình hỗ trợ, tạo điều kiện cho suốt trình học tập thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn anh chị, thầy nhóm thực đề tài hợp tác quốc tế: “Nghiên cứu sàng lọc bệnh lý tích trữ lysosome bệnh nhân gan to, lách to phì đại tim chưa rõ nguyên nhân Việt Nam” trường ĐH Y Hải Phòng; Trung tâm nghiên cứu điều trị bệnh gặp, Bệnh viện đa khoa Cựu chiến binh Đài Bắc, người tận tình hướng dẫn kỹ thuật, giúp đỡ vật chất tinh thần cho thực đề tài Tôi xin cảm ơn thầy cô môn Sinh học di truyền, trường ĐH KHTN Hà Nội, anh chị bạn cao học khoá 2012 – 2014 nhiệt tình giúp đỡ cổ vũ tinh thần để tơi hồn thành đề tài Cuối tơi xin gửi lời cảm ơn từ đáy lịng tới gia đình, bạn bè tơi, người ln bên tôi, cổ vũ cho suốt thời gian qua Học viên Lê Hiền Giang MỤC LỤC MỞ ĐẦU Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan chứng phì đại tim 1.1.1 Lịch sử phát tần số mắc bệnh .3 1.1.2 Nguyên nhân triệu chứng bệnh 1.2 Bệnh Fabry 1.2.1 Lịch sử phát hiện, nguyên nhân tần số mắc bệnh .7 1.2.2 Triệu chứng bệnh 1.3 Gen GLA Enzyme α – galactosidase A .11 1.3.1 Gen GLA 11 1.3.2 Enzyme α – galactosidase A 12 1.4 Tổng quan nghiên cứu giới Việt Nam đột biến gen GLA; bệnh Fabry bệnh phì đại tim 15 1.4.1 Đột biến gen GLA 15 1.4.2 Tổng quan bệnh Fabry bệnh phì đại tim 18 1.5 Tổng quan siêu âm tim 22 1.6 Tổng quan phƣơng pháp xác định hoạt độ enzyme α – Gal A phân tích trình tự gen GLA 24 1.6.1 Phương pháp xác định hoạt độ enzyme 24 1.6.1.1 Phương pháp sắc ký lỏng siêu hiệu UPLC 24 1.6.1.2 Phương pháp khối phổ hai lần (MS/MS) 24 1.6.2 Phương pháp phân tích trình tự gen GLA 26 1.6.2.1 Phương pháp PCR 26 1.6.2.2 Phương pháp điện di 26 1.6.2.3 Phương pháp xác định trình tự gen [3] 26 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .28 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu .28 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 28 2.1.2 Tiêu chuẩn lựa chọn bệnh nhân 28 2.2 Cỡ mẫu nghiên cứu [68] 28 2.3 Nguyên liệu .29 2.3.1 Mẫu máu 29 2.3.2 Các loại hóa chất trang thiết bị .30 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu .31 2.4.1 Phương pháp xác đinh hoạt độ enzyme α-galactosidase A 31 2.4.1.1 Tiến hành phản ứng enzyme 31 2.4.1.2 Phương pháp sắc ký lỏng kết hợp đo khối phổ 33 2.4.2 Phân tích trình tự gen GLA 34 2.4.2.1 Khuếch đại gen GLA từ mẫu máu toàn phần 34 2.4.2.2 Điện di sản phẩm PCR gel agarose 37 2.4.2.3 Tách ADN từ gel Agarose 37 2.4.2.4 Định lượng ADN dung dịch phương pháp quang phổ kế 38 2.4.2.5 Giải trình tự gen GLA 39 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .41 3.1 Kết xác định hoạt độ enzyme α-Gal A 41 3.1.1 Hoạt độ enzyme α-Gal A 41 3.1.2 Số lượng mẫu hoạt độ enzyme α-Gal A theo nhóm tuổi 45 3.2 Kết giải trình tự gen GLA 47 3.2.1 Đặc điểm 26 mẫu giải trình tự 47 3.2.2 Kết nhân phân đoạn gen GLA 49 3.2.2.1 Kết điện di sản phẩm PCR 49 3.2.2.2 Kết đo OD sản phẩm tinh 51 3.2.3 Phát đột biến gen GLA 51 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DBS Dry Blood Spot ERT Enzyme replacement therapy (Liệu pháp enzyme thay thế) Gb3 Globotriaosylceramide HPLC High Performance Liquid Chromatography (sắc ký lỏng hiệu cao) IS Internal standard (nội chuẩn) IVS Intervening sequence (trình tự intron) LC - MS Liquid chromatography–mass spectrometry (sắc ký lỏng khối phổ) LVMI Left Ventricular Mass Idex (khối lượng thất trái) LVPWd Left Ventricular end Diastolic Post Wall (bề dày thành sau thất trái cuối tâm trương) MS Mass spectrometry (khối phổ) PCR Polymerase Chain Reaction S Substrate (cơ chất) UPLC Ultra Performance Liquid Chromatography (Sắc ký lỏng hiệu siêu cao) UTR Untranslated region (vùng trình tự khơng mã hoá axit amin) α-Gal A Enzyme α –galactosidase A DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Những dấu hiệu triệu chứng có bệnh Fabry [38] .9 Bảng 1.2 Vị trí độ dài exon intron gen GLA 11 Bảng 1.3 Kích thước exon gen GLA người số lượng đột biến liên quan [23] 18 Bảng 2.1 Các thành phần có dung dịch phản ứng 32 Bảng 2.2 Các thông số phương pháp khối phổ 33 Bảng 2.3 Trình tự nhiệt độ bắt cặp mồi, kích thước sản phẩm PCR 36 Bảng 2.4 Chu trình nhiệt phản ứng PCR 36 Bảng 2.5 Thành phần phản ứng nhân .39 Bảng 2.6 Hàm lượng ADN khn cho phản ứng PCR giải trình tự 39 Bảng 2.7 Chu trình nhiệt cho phản ứng PCR giải trình tự 40 Bảng 3.1 Đặc điểm 26 mẫu giải trình tự .47 Bảng 3.2 Các số LVMI, LVPWd người bình thường bệnh nhân phì đại tim .48 Bảng 3.3 Kết đo OD260; OD280 nồng độ ADN sản phẩm PCR mẫu FB01 51 Bảng 3.4 Kết giải trình tự 26 mẫu 52 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Hình ảnh tim bình thường (A) tim bị phì đại (B) Hình 1.2 Vị trí gen GLA NST X .11 Hình 1.3 Cấu trúc khơng gian α-galactosidase A 12 Hình 1.4 Globotriaosylceramide vị trí cắt enzyme α – galactosidase A 13 Hình 1.5 Gen GLA hoạt động bình thường sinh α-Gal A phân cắt Gb3 14 Hình 1.6 Khiếm khuyết gen GLA gây tích đọng Gb3 lysosome 14 Hình 1.7 Hình ảnh siêu âm tim bệnh nhân FB64 (trên) FB334(dưới) 23 Hình 1.8 Hệ thống sắc ký lỏng siêu hiệu kết hợp đo khối phổ song song (UPLC – MS/MS) hãng Aligent 25 Hình 2.1 Mẫu máu giấy thấm DBS 30 Hình 2.2 Cơ chất, nội chuẩn sản phẩm phản ứng enzyme 32 Hình 3.1 Hoạt độ enzyme α- Gal A bệnh nhân phì đại tim .41 Hình 3.2 Hoạt độ enzyme α-Gal A nhóm đối chứng bệnh nhân 43 Hình 3.3 Số lượng mẫu theo nhóm tuổi 45 Hình 3.4 Hoạt độ enzyme α-Gal A theo nhóm tuổi .46 Hình 3.5 Hình ảnh điện di sản phẩm PCR mẫu FB01 49 Hình 3.6 Kết điện di sản phẩm PCR exon intron mẫu FB26, FB44; FB64; FB69 50 Hình 3.7 Đoạn trình tự exon đột biến c.[178 C>T] ; [0], p.P60S .54 Hình 3.8 Đoạn trình tự exon có đột biến 5'UTR -12 G>A 56 Hình 3.9 Đoạn trình tự exon có đột biến 5'UTR -10 C>T 56 Hình 3.10 Đoạn trình tự nucleotide có đột biến IVS1+17 A>G 57 MỞ ĐẦU Bệnh phì đại tim (Hypertrophic cardiomyopathy - HCM) bệnh tim dày bất thường tâm thất trái, thất phải, mỏm tim toàn tim Phần lớn trường hợp bị phì đại vách liên thất, làm tắc nghẽn đường thất trái Hầu hết bệnh nhân mắc bệnh khơng có triệu chứng họ sống sống bình thường người bình thường Trên thực tế, bệnh hay gặp người trẻ tuổi vận động viên thể thao Triệu chứng cuối bệnh phì đại tim đột tử Tuy nhiên, số bệnh nhân có triệu chứng sau đây: đau ngực, chóng mặt hoa mắt, lúc vận động mạnh thay đổi tư đột ngột, khó thở, thường xuyên mệt mỏi, hay bị ngất xỉu Trong số bệnh nhân phì đại tim, có đến 40% chưa tìm ngun nhân gây bệnh Gần đây, số biến thể khơng điển hình bệnh tích đọng chất lysosome xác định thu hút ý bác sĩ, đặc biệt kiểu hình khơng điển hình bệnh Fabry, với biểu phì đại tim triệu chứng tương tự Bệnh Fabry bệnh di truyền liên quan đến gen GLA mã hóa enzyme lysosome α –galactosidase A (α – Gal A) NST X gây tích đọng chất lysosome Bệnh phát năm 1898 hai nhà da liễu học hoạt động độc lập Johannes Fabry người Đức, William Anderson người Anh bệnh cịn gọi bệnh Anderson – Fabry Khi enzyme α –galactosidase A bị thiếu phần hồn tồn dẫn đến việc khơng chuyển hóa glycosphingolipid mà chủ yếu globotriaosylceramide (Gb3 GL-3) Gb3 khơng chuyển hóa tích đọng tế bào mạch máu, gây tắc nghẽn trình vận chuyển máu Gb3 tích đọng tế bào thần kinh, tế bào tim, loại khác tế bào thận Sự rối loạn chức Czech and Slovak population”, Journal of Molecular Medicine, 83, pp.647654 64 Sawada K, Mizoguchi K, Hishida A, Kaneko E, Koide Y, Nishimura K, Kimura M (1996), “Point mutation in the alpha-galactosidase A gene of atypical Fabry disease with only nephropathy”, Clin Nephrol, 45, pp 289-294 65 Scott C Garman (2007), “Structure–function relationships in α-galactosidase A”, Acta Paediatr suppl, 96(455), pp.6-16 66 Senechal M, Germain (2003), “Fabry disease: a functional and anatomical study of cardiac manifestations in 20 hemizygous male patients”, Clin Genet, 63(1), pp 46 – 52 67 Sheng-Hung Lee, Cheng-Fang Li, Hsiang-Yu Lin, Chien-Hsing Lin, HaoChuan Liu, Shih-Feng Tsai, Dau Ming Niu (2014), “High-throughput detection of common sequence variations of Fabry disease in Taiwan using ADN mass spectrometry”, Molecular Genetics and Metabolism, 111,pp.507512 68 Suresh K P, Chandrashekara S (2012), “Sample size estimation and power analysis for clinical research studies”, Journal of Human Reproductive Sciences, 5(1), pp 7- 13 69 Wuh-Liang Hwu, Yin-Hsin Chien, Mi-Chung Lee, Shu-Chuan Chiang (2009), “Newborn Screening for Fabry disease in Taiwan Reveals a high incidence of the later-onset mutation c.936+919>A (IVS4+919G>A)”, Human mutation, 30(10), pp 1397-1405 70 Yasuda M, Shabbeer J, Osawa M, Desnick R J (2003), “Fabry disease: novel alpha-galactosidase A 3-prime-terminal mutations result in multiple transcripts due to aberrant 3-prime-end formation”, Am J Hum Genet, 73, pp 162-173 71 Yokoi T, Shinoda K, Ohno I, Kato K, Miyawaki T, Taniguchi N (1991), “A 3' splice site consensus sequence mutation in the intron of the α-galactosidase 68 A gene in a patient with Fabry disease”, Jpn J Human Genet, 36, pp 245250 72 Zhang X K, Elbin C S, Chuang W L, Cooper S K, Marashio C A, Beauregard C, Keutzer J M (2008), “Multiplex enzyme assay screening of dried blood spots for lysosomal storage disorders by using tandem mass spectrometry”, Clinical Chemistry, 54(10), pp 1725 – 1728 Các trang web 73 http://asia.ensembl.org 74 http://www.agilent.com/ 75 http://www.fabrazyme.com/ 76 http://www.lysosomalstorageresearch.ca/Fabry_RenalClinic 77 https://www.heart.org 69 PHỤ LỤC Hoạt độ enzyme α – Gal A (µmol/h/L) tuổi 421 bệnh nhân Kí hiệu mẫu Hoạt độ enzyme tuổi FB01 FB02 FB03 FB04 FB05 FB06 FB07 FB08 FB09 FB10 FB11 FB12 FB13 FB14 FB15 FB16 FB17 FB18 FB19 FB20 FB21 FB22 FB23 FB24 FB25 1.79 1.40 0.89 1.59 2.13 1.52 1.92 1.61 2.62 1.46 1.39 1.90 1.09 3.21 1.36 1.64 1.54 1.46 2.38 1.21 1.50 1.81 1.54 1.70 0.97 75 81 78 80 29 80 59 73 65 59 39 44 41 32 61 64 62 76 71 54 65 81 69 53 82 Kí hiệu Hoạt độ mẫu enzyme FB26 FB27 FB28 FB29 FB30 FB31 FB32 FB33 FB34 FB35 FB36 FB37 FB38 FB39 FB40 FB41 FB42 FB43 FB44 FB45 FB46 FB47 FB48 FB49 FB50 0.54 0.97 1.49 0.95 1.96 1.20 1.20 1.45 1.95 2.91 2.00 1.08 3.39 1.93 0.78 1.11 1.00 0.66 0.47 1.18 1.02 2.40 2.68 1.55 2.43 tuổi 21 55 65 67 50 60 55 54 64 59 58 67 61 39 66 45 59 60 58 53 75 40 57 50 57 Kí hiệu Hoạt độ mẫu enzyme FB51 FB52 FB53 FB54 FB55 FB56 FB57 FB58 FB59 FB60 FB61 FB62 FB63 FB64 FB65 FB66 FB67 FB68 FB69 FB70 FB71 FB72 FB73 FB74 FB75 1.70 0.95 1.60 1.11 1.22 1.06 1.36 0.89 1.89 0.63 0.74 0.81 0.68 0.17 0.81 1.57 2.22 0.83 0.53 0.61 0.97 0.97 0.77 0.54 1.41 tuổi 72 41 40 59 55 58 55 55 48 85 53 55 73 56 83 48 54 47 60 74 57 46 72 72 64 Kí hiệu Hoạt độ Kí hiệu Hoạt độ Kí hiệu Hoạt độ mẫu enzyme mẫu enzyme mẫu enzyme FB76 1.22 57 FB101 2.10 70 FB126 6.96 48 FB77 1.50 45 FB102 1.57 70 FB127 1.48 62 FB78 0.94 73 FB103 1.98 67 FB128 5.72 74 FB79 0.52 56 FB104 0.73 56 FB129 3.03 81 FB80 0.61 76 FB105 1.37 52 FB130 1.87 54 FB81 1.05 56 FB106 1.04 58 FB131 2.02 39 FB82 1.90 54 FB107 1.28 43 FB132 1.50 42 FB83 0.66 40 FB108 1.13 51 FB133 0.32 60 FB84 0.50 52 FB109 1.51 57 FB134 0.94 71 FB85 0.32 75 FB110 0.88 50 FB135 0.86 63 FB86 1.15 73 FB111 1.52 48 FB136 0.83 67 FB87 1.02 62 FB112 0.81 60 FB137 2.17 59 FB88 1.00 55 FB113 1.09 80 FB138 1.62 65 FB89 0.80 57 FB114 0.82 66 FB139 9.18 43 FB90 2.13 41 FB115 1.01 70 FB140 1.75 58 FB91 1.61 59 FB116 1.06 74 FB141 1.31 60 FB92 0.83 71 FB117 1.06 23 FB142 1.96 42 FB93 1.37 67 FB118 1.10 73 FB143 2.00 41 FB94 1.90 68 FB119 1.54 59 FB144 1.07 55 FB95 1.42 49 FB120 0.96 58 FB145 0.89 47 FB96 1.78 36 FB121 1.19 55 FB146 2.72 58 FB97 1.05 61 FB122 1.32 42 FB147 1.16 73 FB98 1.54 70 FB123 1.73 65 FB148 1.54 43 FB99 0.84 53 FB124 1.77 38 FB149 1.32 58 FB100 1.87 73 FB125 2.05 59 FB150 0.69 57 Tuổi Tuổi Tuổi Kí hiệu Hoạt độ Kí hiệu Hoạt độ Kí hiệu Hoạt độ mẫu enzyme mẫu enzyme mẫu enzyme FB151 2.95 57 FB176 1.79 49 FB201 2.80 53 FB152 2.76 52 FB177 1.48 60 FB202 2.00 57 FB153 1.67 77 FB178 2.00 45 FB203 1.03 35 FB154 2.72 28 FB179 1.95 44 FB204 1.86 59 FB155 2.94 33 FB180 1.92 61 FB205 0.64 45 FB156 3.53 51 FB181 1.42 57 FB206 1.73 70 FB157 1.73 36 FB182 1.20 67 FB207 1.77 40 FB158 3.84 60 FB183 1.73 57 FB208 2.39 39 FB159 1.96 57 FB184 1.26 53 FB209 1.35 68 FB160 1.92 31 FB185 1.74 40 FB210 5.16 63 FB161 2.07 55 FB186 2.85 53 FB211 2.97 70 FB162 1.71 60 FB187 2.31 61 FB212 1.19 50 FB163 1.09 68 FB188 2.52 54 FB213 1.03 39 FB164 0.74 50 FB189 2.07 82 FB214 2.70 51 FB165 1.05 42 FB190 1.25 63 FB215 1.05 50 FB166 1.31 76 FB191 2.54 89 FB216 1.83 35 FB167 1.08 60 FB192 1.57 51 FB217 1.45 57 FB168 2.12 62 FB193 1.16 63 FB218 2.08 54 FB169 2.12 64 FB194 1.13 71 FB219 1.33 61 FB170 0.93 45 FB195 1.30 51 FB220 1.84 52 FB171 1.24 55 FB196 1.95 80 FB221 1.20 55 FB172 1.40 42 FB197 2.26 70 FB222 1.38 62 FB173 1.02 40 FB198 3.61 42 FB223 0.84 43 FB174 0.96 68 FB199 2.18 39 FB224 4.38 66 FB175 2.01 53 FB200 1.65 54 FB225 1.69 58 Tuổi Tuổi Tuổi Kí hiệu Hoạt độ Kí hiệu Hoạt độ Kí hiệu Hoạt độ mẫu enzyme mẫu enzyme mẫu enzyme FB226 5.10 63 FB251 1.74 63 FB276 2.43 40 FB227 1.26 71 FB252 1.96 48 FB277 1.73 66 FB228 1.50 48 FB253 1.36 69 FB278 1.94 67 FB229 0.91 62 FB254 1.69 47 FB279 2.70 67 FB230 0.90 71 FB255 1.27 46 FB280 1.05 50 FB231 1.79 52 FB256 1.57 52 FB281 2.21 61 FB232 1.03 58 FB257 1.18 62 FB282 1.36 72 FB233 1.66 75 FB258 1.64 64 FB283 1.35 83 FB234 1.85 46 FB259 1.20 67 FB284 1.08 39 FB235 1.53 44 FB260 1.80 52 FB285 1.04 41 FB236 1.83 64 FB261 2.17 54 FB286 3.77 59 FB237 1.27 53 FB262 2.30 56 FB287 2.00 70 FB238 2.56 43 FB263 1.19 52 FB288 2.48 82 FB239 1.58 56 FB264 1.47 55 FB289 1.27 80 FB240 1.40 63 FB265 2.65 55 FB290 1.00 41 FB241 1.39 59 FB266 2.36 65 FB291 2.17 48 FB242 2.57 58 FB267 2.29 86 FB292 0.89 60 FB243 1.57 57 FB268 2.13 51 FB293 1.54 62 FB244 1.73 56 FB269 1.96 82 FB294 1.85 43 FB245 1.98 60 FB270 0.94 26 FB295 4.04 63 FB246 1.89 50 FB271 1.95 60 FB296 0.85 60 FB247 2.05 57 FB272 1.40 48 FB297 2.04 56 FB248 2.06 47 FB273 1.32 45 FB298 1.83 77 FB249 2.23 70 FB274 1.87 44 FB299 1.54 44 FB250 2.65 71 FB275 1.89 47 FB300 0.83 42 Tuổi Tuổi Tuổi Kí hiệu Hoạt độ Kí hiệu Hoạt độ Kí hiệu Hoạt độ mẫu enzyme mẫu enzyme mẫu enzyme FB301 1.91 56 FB326 1.39 52 FB351 1.51 46 FB302 2.26 45 FB327 2.38 69 FB352 1.89 48 FB303 3.48 55 FB328 3.02 72 FB353 1.24 62 FB304 2.74 45 FB329 2.40 45 FB354 2.40 55 FB305 2.33 68 FB330 1.23 72 FB355 1.97 60 FB306 2.07 65 FB331 0.80 48 FB356 3.22 53 FB307 2.34 56 FB332 1.31 55 FB357 3.15 52 FB308 1.73 47 FB333 1.43 37 FB358 2.37 42 FB309 1.86 53 FB334 1.11 41 FB359 2.82 55 FB310 1.83 77 FB335 2.63 52 FB360 1.47 61 FB311 3.35 48 FB336 3.18 51 FB361 2.66 58 FB312 1.79 57 FB337 1.67 55 FB362 1.85 62 FB313 2.07 70 FB338 1.39 67 FB363 2.18 61 FB314 2.12 40 FB339 2.54 68 FB364 1.26 64 FB315 2.39 70 FB340 1.54 50 FB365 3.08 45 FB316 2.04 54 FB341 2.76 67 FB366 3.18 70 FB317 3.72 45 FB342 1.89 42 FB367 3.13 68 FB318 2.86 46 FB343 1.51 42 FB368 2.68 68 FB319 2.66 50 FB344 3.82 46 FB369 1.76 67 FB320 2.50 55 FB345 1.17 43 FB370 1.55 67 FB321 1.95 62 FB346 1.59 70 FB371 2.36 59 FB322 2.32 65 FB347 3.20 55 FB372 1.76 64 FB323 1.64 72 FB348 3.75 56 FB373 2.43 57 FB324 1.56 75 FB349 1.50 65 FB374 2.21 84 FB325 2.91 45 FB350 3.18 53 FB375 2.04 70 Tuổi Tuổi Tuổi Kí hiệu Hoạt độ Kí hiệu Hoạt độ mẫu enzyme mẫu enzyme FB376 2.83 65 FB401 1.65 73 FB377 2.50 73 FB402 1.41 40 FB378 0.99 50 FB403 1.80 68 FB379 2.08 69 FB404 2.13 57 FB380 1.48 75 FB405 2.36 73 FB381 2.29 56 FB406 3.65 39 FB382 2.75 60 FB407 2.76 42 FB383 2.93 59 FB408 3.60 56 FB384 2.17 46 FB409 2.00 62 FB385 1.25 83 FB410 2.20 77 FB386 1.63 60 FB411 3.75 60 FB387 1.62 74 FB412 1.33 83 FB388 1.92 39 FB413 4.00 73 FB389 1.72 40 FB414 1.01 48 FB390 2.81 45 FB415 3.84 43 FB391 3.42 40 FB416 1.87 59 FB392 2.04 51 FB417 2.74 50 FB393 1.28 56 FB418 2.54 56 FB394 2.99 62 FB419 3.37 46 FB395 1.43 58 FB420 3.37 57 FB396 3.07 40 FB421 2.21 56 FB397 2.52 57 FB398 3.63 42 FB399 2.16 43 FB400 2.62 73 Tuổi Tuổi PHỤ LỤC Kết đo OD260; OD280 nồng độ sản phẩm PCR 25 mẫu Mẫu FB02 FB03 FB04 FB05 Sản phẩm Exon Exon Exon Exon Exon 5,6 Exon Intron Exon Exon Exon Exon Exon 5,6 Exon Intron Exon Exon Exon Exon Exon 5,6 Exon Intron Exon Exon Exon Exon Exon 5,6 Exon Intron OD260 0.0310 0.0307 0.0295 0.0287 0.0330 0.0327 0.0303 0.0320 0.0311 0.0301 0.0297 0.0341 0.0325 0.0325 0.0302 0.0299 0.0291 0.0289 0.0334 0.0325 0.0320 0.0320 0.0302 0.0298 0.0289 0.0355 0.0340 0.0325 OD280 0.0162 0.0159 0.0158 0.0154 0.0172 0.0169 0.0168 0.0167 0.0162 0.0166 0.0162 0.0183 0.0167 0.0167 0.0164 0.0156 0.0154 0.0154 0.0176 0.0167 0.0162 0.0167 0.0167 0.0156 0.0160 0.0196 0.0182 0.0167 260/280 1.914 1.931 1.867 1.864 1.919 1.935 1.804 1.916 1.920 1.813 1.833 1.863 1.946 1.946 1.841 1.917 1.890 1.877 1.898 1.946 1.975 1.916 1.808 1.910 1.806 1.811 1.868 1.946 Nồng độ 3.10 3.07 2.95 2.87 3.30 3.27 3.03 3.2 3.11 3.01 2.97 3.41 3.25 3.25 3.02 2.99 2.91 2.89 3.34 3.25 3.20 3.20 3.02 2.98 2.89 3.55 3.40 3.25 Mẫu FB06 FB07 FB08 FB09 Sản phẩm OD260 OD280 260/280 Nồng độ Exon 0.0301 0.0163 1.847 3.01 Exon 0.0299 0.0161 1.857 2.99 Exon 0.0294 0.0156 1.885 2.94 Exon 0.0285 0.0155 1.839 2.85 Exon 5,6 0.0335 0.0185 1.811 3.35 Exon 0.0321 0.0176 1.824 3.21 Intron 0.0302 0.0164 1.841 3.02 Exon 0.0313 0.0163 1.920 3.11 Exon 0.0304 0.0164 1.854 3.04 Exon 0.0300 0.0160 1.875 3.00 Exon 0.0298 0.0158 1.886 2.98 Exon 5,6 0.0354 0.0185 1.914 3.54 Exon 0.0327 0.0179 1.827 3.27 Intron 0.0320 0.0162 1.975 3.20 Exon 0.0299 0.0159 1.881 2.99 Exon 0.0291 0.0151 1.927 2.91 Exon 0.0287 0.0157 1.828 2.87 Exon 0.0285 0.0155 1.839 2.85 Exon 5,6 0.0310 0.0170 1.824 3.10 Exon 0.0308 0.0165 1.867 3.08 Intron 0.0303 0.0163 1.859 3.03 Exon 0.0322 0.0172 1.872 3.22 Exon 0.0308 0.0168 1.833 3.08 Exon 0.0297 0.0157 1.892 2.97 Exon 0.0288 0.0159 1.811 2.88 Exon 5,6 0.0338 0.0180 1.878 3.38 Exon 0.0327 0.0179 1.827 3.27 Intron 0.0319 0.0173 1.844 3.19 Mẫu FB10 FB26 FB44 FB64 Sản phẩm OD260 OD280 260/280 Nồng độ Exon 0.0310 0.0160 1.938 3.10 Exon 0.0294 0.0153 1.922 2.94 Exon 0.0290 0.0156 1.859 2.90 Exon 0.0286 0.0152 1.882 2.86 Exon 5,6 0.0335 0.0185 1.811 3.35 Exon 0.0327 0.0177 1.847 3.27 Intron 0.0326 0.0176 1.852 3.26 Exon 0.0300 0.0150 2.000 3.00 Exon 0.0301 0.0160 1.881 3.01 Exon 0.0298 0.0157 1.898 2.98 Exon 0.0297 0.0156 1.904 2.97 Exon 5,6 0.0333 0.0183 1.820 3.33 Exon 0.0321 0.0171 1.877 3.21 Intron 0.0319 0.0169 1.888 3.19 Exon 0.0313 0.0163 1.920 3.13 Exon 0.0331 0.0181 1.829 3.31 Exon 0.0312 0.0162 1.926 3.12 Exon 0.0298 0.0157 1.898 2.98 Exon 5,6 0.0329 0.0179 1.838 3.29 Exon 0.0327 0.0177 1.847 3.27 Intron 0.0319 0.0169 1.888 3.19 Exon 0.0322 0.0172 1.872 3.22 Exon 0.0318 0.0168 1.893 3.18 Exon 0.0311 0.0161 1.932 3.11 Exon 0.0300 0.0150 2.000 3.00 Exon 5,6 0.0334 0.0184 1.815 3.34 Exon 0.0331 0.0181 1.829 3.31 Intron 0.0324 0.0174 1.862 3.24 Mẫu FB69 FB70 FB74 FB79 Sản phẩm OD260 OD280 260/280 Nồng độ Exon 0.0328 0.0174 1.885 3.28 Exon 0.0322 0.0168 1.917 3.22 Exon 0.0310 0.0156 1.987 3.10 Exon 0.0299 0.0152 1.967 2.99 Exon 5,6 0.0345 0.0191 1.806 3.45 Exon 0.0334 0.0180 1.856 3.34 Intron 0.0332 0.0178 1.865 3.32 Exon 0.0322 0.0168 1.917 3.22 Exon 0.0320 0.0166 1.928 3.20 Exon 0.0329 0.0175 1.880 3.29 Exon 0.0280 0.0154 1.818 2.80 Exon 5,6 0.0355 0.0190 1.868 3.55 Exon 0.0319 0.0167 1.910 3.19 Intron 0.0309 0.0157 1.968 3.09 Exon 0.0309 0.0155 1.994 3.09 Exon 0.0303 0.0156 1.942 3.03 Exon 0.0297 0.0150 1.980 2.97 Exon 0.0288 0.0150 1.920 2.88 Exon 5,6 0.0320 0.0166 1.928 3.20 Exon 0.0320 0.0166 1.928 3.20 Intron 0.0319 0.0165 1.933 3.19 Exon 0.0310 0.0156 1.987 3.10 Exon 0.0278 0.0151 1.841 2.78 Exon 0.0289 0.0156 1.853 2.89 Exon 0.0280 0.0154 1.818 2.80 Exon 5,6 0.0332 0.0175 1.897 3.32 Exon 0.0333 0.0178 1.871 3.33 Intron 0.0329 0.0167 1.970 3.29 Mẫu FB80 FB84 FB85 FB133 Sản phẩm OD260 OD280 260/280 Nồng độ Exon 0.0299 0.0159 1.881 2.99 Exon 0.0289 0.0156 1.853 2.89 Exon 0.0286 0.0151 1.894 2.86 Exon 0.0281 0.0153 1.837 2.81 Exon 5,6 0.0322 0.0170 1.894 3.22 Exon 0.0319 0.0167 1.910 3.19 Intron 0.0309 0.0157 1.968 3.09 Exon 0.0291 0.0151 1.927 2.91 Exon 0.0294 0.0154 1.909 2.94 Exon 0.0300 0.0160 1.875 3.00 Exon 0.0289 0.0151 1.914 2.89 Exon 5,6 0.0335 0.0183 1.831 3.35 Exon 0.0331 0.0179 1.849 3.31 Intron 0.0323 0.0171 1.889 3.23 Exon 0.0300 0.0160 1.875 3.00 Exon 0.0289 0.0153 1.889 2.89 Exon 0.0287 0.0151 1.901 2.87 Exon 0.0291 0.0151 1.927 2.91 Exon 5,6 0.0344 0.0185 1.859 3.44 Exon 0.0323 0.0171 1.889 3.23 Intron 0.0333 0.0181 1.840 3.33 Exon 0.0319 0.0167 1.910 3.19 Exon 0.0300 0.0160 1.875 3.00 Exon 0.0301 0.0161 1.870 3.01 Exon 0.0299 0.0159 1.881 2.99 Exon 5,6 0.0328 0.0176 1.864 3.28 Exon 0.0319 0.0167 1.910 3.19 Intron 0.0308 0.0156 1.974 3.08 Mẫu FB331 FB334 FB345 FB378 FB414 Sản phẩm Exon Exon Exon Exon Exon 5,6 Exon Intron Exon Exon Exon Exon Exon 5,6 Exon Intron Exon Exon Exon Exon Exon 5,6 Exon Intron Exon Exon Exon Exon Exon 5,6 Exon Intron Exon Exon Exon Exon Exon 5,6 Exon Intron OD260 0.0324 0.0315 0.0301 0.0299 0.0356 0.0323 0.0333 0.0300 0.0294 0.0295 0.0286 0.0329 0.0326 0.0301 0.0299 0.0294 0.0289 0.0278 0.0332 0.0321 0.0310 0.0328 0.0301 0.0289 0.0285 0.0329 0.0323 0.0333 0.0310 0.0331 0.0312 0.0299 0.0306 0.0355 0.0350 OD280 0.0169 0.0160 0.0162 0.0160 0.0182 0.0171 0.0170 0.0161 0.0155 0.0156 0.0156 0.0170 0.0181 0.0162 0.0160 0.0155 0.0150 0.0164 0.0156 0.0166 0.0155 0.0174 0.0161 0.0155 0.0150 0.0167 0.0168 0.0181 0.0156 0.0178 0.0165 0.0159 0.0156 0.0182 0.0187 260/280 1.917 1.969 1.858 1.869 1.956 1.889 1.959 1.863 1.897 1.891 1.833 1.935 1.801 1.858 1.869 1.897 1.927 1.695 2.128 1.934 2.000 1.885 1.870 1.865 1.900 1.970 1.923 1.840 1.987 1.859 1.890 1.881 1.961 1.950 1.871 Nồng độ 3.24 3.15 3.01 2.99 3.56 3.23 3.33 3.00 2.94 2.95 2.86 3.29 3.26 3.01 2.99 2.94 2.89 2.78 3.32 3.21 3.10 3.28 3.01 2.89 2.85 3.29 3.23 3.33 3.10 3.31 3.12 2.99 3.06 3.55 3.50 PHỤ LỤC Mã HS: Số bệnh án:……… BỆNH ÁN NGHIÊN CỨU FABRY I Hành chính: Họ tên bệnh nhân: Giới:Nam/Nữ Sinh ngày: Nghền ghiệp: Địa Điện thoại nhà riêng: Di động: Email: Khi cần báo tin cho: Quan hệ với bệnh nhân: SĐT: Địa chỉ: II Thông tin bệnh: Diễn biến bệnh: - Lý đến khám bệnh: - Tiến triển bệnh: (từ nào, tiến triển) Khám: Cân nặng: kg Chiều cao: cm Mạch: .lần/phút Huyết áp: mmHg Các triệu chứng mà bác sĩ khám lâm sàng: Bộ phận khác: Tiền sử: 4.1 Bệnh nhân (các bệnh khác kèm theo): 4.2 Gia đình: Họ hàng đời có mắc bệnh tim khơng? Kết siêu âm tim (photo phiếu trả lời kết quả): Kết xét nghiệm khác (điện tim đồ, sinh hóa: photo kết quả): Ngƣời vấn (Xin lại Photo siêu âm KQ xét nghiệm) Tư vấn bệnh nhân: Xin đọc Giới thiệu nghiên cứu kèm theo Tơi đọc hiểu giải thích liên quan đến “Nghiên cứu sàng lọc bệnh bệnh nhân phì đại tim chưa rõ nguyên nhân Việt Nam” tự nguyện đồng ý tham gia vào nghiên cứu Ký tên ... TAT AGC CCC AGC TGG AAA TTC 3' 5’ GTT GGA CTT TGA AGG AGA CCT T 3’ 5’ GAA GGC TAC AAG TGC CTC CT 3’ 5’ GAG AGA GGT CGT TCC CAC AC 3’ 5’ TCA AGC CAA AGC TCT CCT TC 3’ 5’ TGG AGA AAA AGG TGG ACA...ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Lê Hiền Giang NGHIÊN CỨU RỐI LOẠN ENZYME α-GALACTOSIDASE A VÀ PHÂN TÍCH TRÌNH TỰ GEN GLA TRÊN BỆNH NHÂN PHÌ ĐẠI CƠ TIM. .. Bảng 2.3 Trình tự nhiệt độ bắt cặp mồi, kích thước sản phẩm PCR Tên cặp mồi GLA 1F GLA 1R GLA 2F GLA 2R GLA 3F GLA 3R GLA 4F GLA 4R GLA 5,6F GLA 5,6R GLA 7F GLA 7R IVS4F IVS4R Trình tự nucleotide