Phân lập các loài vi nấm kí sinh trên nấm linh chi và đánh giá khả năng đối kháng nấm bệnh hại cây trồng của những loài có triển vọng​

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP PHÂN LẬP CÁC LỒI VI NẤM KÍ SINH TRÊN NẤM LINH CHI VÀ ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG ĐỐI KHÁNG NẤM BỆNH HẠI CÂY TRỒNG CỦA NHỮNG LỒI CĨ TRIỂN VỌNG Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn : TS NGUYỄN THỊ HAI Sinh viên thực MSSV: 1051110073 : NGUYỄN THÁI MINH HIẾU Lớp: 10DSH01 TP Hồ Chí Minh, 2014 LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu Các số liệu kết Đồ án trung thực Mọi thơng tin trích dẫn Đồ án ghi rõ nguồn gốc Tơi xin hồn toàn chịu trách nhiệm lời cam đoan Tp Hồ Chí Minh, ngày 31 tháng năm 2014 Sinh viên thực Nguyễn Thái Minh Hiếu LỜI CÁM ƠN Xin chân thành gửi lời cảm ơn sâu sắc đến Ban Giám hiệu Trường Đại học Công Nghệ Tp Hồ Chí Minh tạo điều kiện thuận lợi để em học tập hồn thành tốt khóa học 2010 – 2014 Xin cảm ơn thầy cô khoa Công nghệ sinh học, Thực phẩm Môi trường giảng dạy truyền đạt cho em kiến thức quan trọng tạo tảng kiến thức vững để hồn thành tốt Đồ án sau ứng dụng vào công việc thực tiễn Xin chân thành cám ơn TS Nguyễn Thị Hai tận tình hướng dẫn, giúp đỡ em suốt trình thực để em hoàn thành tốt Đồ án tốt nghiệp Và em gửi lời cảm ơn đến bạn khóa đặc biệt em Huỳnh Nhi tận tình hỗ trợ, giúp đỡ, động viên khích lệ tinh thần, em trải qua khó khăn suốt trình thực Đồ án tốt nghiệp Cuối cùng, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến gia đình ln bên cạnh, cổ vũ, động viên tinh thần, tạo điều kiện để hoàn thành tốt Đồ án tốt nghiệp Tp HCM, Ngày 31 tháng năm 2014 Sinh viên thực Nguyễn Thái Minh Hiếu Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC  - - MỤC LỤC i DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT v DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH ẢNH vii MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục đích nghiên cứu Mục tiêu nghiên cứu CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu nấm Linh chi 1.1.1 Phân loại (Sissi Wachtel-Galor Iris F.F.Benzie, 2011) 1.1.2 Hình thái thể nấm Linh chi (Nguyễn Lân Dũng, 2001) 1.1.3 Thành phần hóa học giá trị dược liệu nấm Linh chi đỏ 1.1.4 Tình hình sản xuất tiêu thụ nấm Linh chi giới Việt Nam .6 1.1.5 Nấm bệnh thường gặp trồng nấm (Lê Duy Thắng, 2005) 1.2 Giới thiệu nấm Trichoderma 12 1.2.1 Phân loại 12 1.2.2 Đặc điểm hình thái 12 1.2.3 Đặc điểm sinh lí, sinh hóa (Gary J Samuels, 2004) 13 1.2.4 Cơ chế đối kháng nấm Trichoderma phòng trừ nấm gây bệnh trồng (Gary J Samuels, 2004; Gary E Harman cộng sự, 2005) 14 1.2.5 Một số nghiên cứu ứng dụng nấm Trichoderma giới Việt Nam 18 -i- Đồ án tốt nghiệp 1.3 Giới thiệu với nấm Aspergillus 1.3.1 Phân loại 1.3.2 Đặc điểm hình thái 1.3.3 Đặc điểm sinh lý, hóa sinh 1.3.4 Một số nghiên cứu ứng dụng nấm Aspergillus giới Việt Nam 1.4 Bệnh nấm Rhizoctonia spp gây (Vũ Triệu Mân, 2007; Roger Shivas, 2005) 23 1.5 Bệnh nấm Fusarium spp gây (Vũ Triệu Mân, 2007; Roger Shivas, 2005) 1.6 Bệnh nấm Colletotrichum spp gây CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 2.2 Vật liệu 2.2.1 Nguồn mẫu phân lập 2.2.2 Nguồn nấm bệnh 2.2.3 Dụng cụ thiết bị 2.2.4 Hóa chất 2.2.5 Các loại môi trường 2.3 Nội dung nghiên cứu 2.4 Phương pháp nghiên cứu 2.4.1.Phương pháp phân lập nấm kí sinh gây bệnh nấm Linh chi (Agrios, 2005) 2.4.2 Phương pháp quan sát đặc điểm hình thái nấm sợi (Agrios, 2005) - ii - Đồ án tốt nghiệp 2.4.3 Phương pháp lây bệnh nhân tạo kiểm chứng tác nhân gây bệnh (Agrios, 2005) 36 2.4.4 Phương pháp khảo sát khả sinh enzyme ngoại bào (cellulase, chitinase) số chủng nấm kí sinh gây bệnh (Tơ Duy Khương, 2007) 37 2.4.5 Phương pháp khảo sát khả đối kháng nấm Trichoderma nấm bệnh gây hại trồng điều kiện in vitro (Laila Naher cộng sự, 2012) 38 2.4.6 Phương pháp xử lý số liệu thí nghiệm 39 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 40 3.1 Kết phân lập nấm kí sinh gây bệnh nấm Linh chi .40 3.1.1 Kết phân lập nấm kí sinh nấm Linh chi .40 3.1.2 Đặc điểm hình thái chủng nấm T1, T2, A1 41 3.1.3 Kết định danh đến loài chủng nấm T1, T2 A1 44 3.1.4 Kiểm chứng tác nhân gây bệnh theo quy tắc Koch điều kiện in vitro 47 3.2 Khảo sát khả sinh enzyme ngoại bào (cellulase chitinase) hai loài Trichoderma virens Trichoderma harzianum kí sinh nấm Linh chi 51 3.3 Khảo sát khả đối kháng loài nấm Trichoderma virens Trichoderma harzianum kí sinh nấm Linh chi nấm bệnh gây hại trồng điều kiện in vitro 52 3.3.1 Khả đối kháng với nấm Fusarium sp 53 3.3.2 Khả đối kháng với nấm Rhizoctonia sp 55 3.3.3 Khả đối kháng với nấm Colletotrichum sp1 .57 3.3.4 Khả đối kháng với nấm Colletotrichum sp2 .59 3.3.5 Khả đối kháng với nấm Colletotrichum sp3 .61 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 64 - iii - Đồ án tốt nghiệp 4.1 Kết luận 64 4.2 Kiến nghị 64 TÀI LIỆU THAM KHẢO 66 PHỤ LỤC - iv - Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT -  - CMC: Carboxymethyl cellulose ĐC:Đối chứng MSM: Minimal Synthetic Medium PGA: Potato D-Glucose Agar TN:Thí nghiệm VSV: Vi sinh vật -v- Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC BẢNG -  Bảng Trang Bảng 1.1 Một số lồi nấm mốc thường gặp ni trồng nấm 10 Bảng 2.1 Nguồn nấm Linh chi bị bệnh 31 Bảng 3.1 Tần suất xuất chủng nấm phân lập nấm Linh chi bệnh 41 Bảng 3.2 Tỷ lệ tai nấm Linh chi bị nhễm bệnh sau lây bệnh nhân tạo 48 Bảng 3.3 Đặc điểm hình thái T virens T harzianum phân lập ban đầu .50 Bảng 3.4 Đường kính vịng phân giải hai lồi nấm Trichoderma virens Trichoderma harzianum sau ngày nuôi cấy 52 Bảng 3.5 Khả đối kháng T virens T harzianum với nấm Fusarium 54 Bảng 3.6 Khả đối kháng T virens T harzianum với nấm Rhizoctonia sp 56 Bảng 3.7 Khả đối kháng T virens T harzianum với nấm Colletotrichum sp1 58 Bảng 3.8 Khả đối kháng T virens T harzianum với nấm Colletotrichum sp2 60 Bảng 3.9 Khả đối kháng T virens T harzianum với nấm Colletotrichum sp3 62 - vi - Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC HÌNH ẢNH -  - Hình Trang Hình 1.1 Nấm Linh chi (Gerdonama luciadum) Hình 1.2 Hình thái thể nấm Linh chi đỏ Hình 1.3 Nấm bệnh thường gặp trồng nấm Hình 1.4 Hình thái nấm Trichoderma harzianum 12 Hình 1.5 Trichoderma kí sinh nấm Pythium gây bệnh họ đậu (Nấm Trichoderma (màu vàng) công nấm Pythium (màu xanh)) 15 Hình 1.6 Trichoderma tiết enzyme chitinase kháng sinh peptaibols phân hủy vách tế bào nấm bệnh 16 Hình 1.7 Ức chế phát triển nấm Pythium ultimum chất kháng sinh tiết từ Trichoderma hazianum 17 Hình 1.8 Hệ bào tử đính giống nấm sợi Aspergillus 21 Hình 1.9 Biểu bệnh Rhizoctonia gây 25 Hình 1.10 Héo Fusarium chuối F oxysporum f.sp.cubense 26 Hình 1.11 Biểu bệnh héo vàng nấm Fuasarium spp gây cà chua 27 Hình 1.12 Biểu bệnh thán thư nấm Colletotrichum spp gây loại trái nhiệt đới 28 Hình 1.13 Biểu bệnh thán thư nấm Colletotrichum acutatum gây trái ớt ớt 29 Hình 1.14 Biểu bệnh thán thư nấm Colletotrichum gloeosporioides gây trái long cành long 30 Hình 2.1 Phương pháp cấy đối kháng trực tiếp 40 Hình 3.1 Hình thái đại thể chủng nấm T1 ni cấy mơi trường PGA 42 Hình 3.2 Hình thái vi thể chủng nấm T1 quan sát kính hiển vi vật kính 40X 42 Hình 3.3 Hình thái đại thể chủng nấm T2 ni cấy môi trường PGA 43 - vii - Đồ án tốt nghiệp TÀI LIỆU NƯỚC NGOÀI A K Mukherjee, S Kranthi, A Sampath Kumar, P K Mukherjee (2014) Original article: Biocontrol potential of three novel Trichoderma strains: isolation, evaluation and formulation, This article is published with open access at Sp.ringerlink.com Agrios G.N (2005) Plant pathology, 5th edition, Elsevier Academic Press: San Diego, California Bao X, Wang X, Dong Q, Fang J, Li X (2002) Structural features of immunologically active polysaccharides from Ganoderma lucidum, Phytochemistry Boh B, Berovic M, Zhang J, Zhi-Bin L (2007) Ganoderma lucidum and its pharmaceutically active compounds, Biotechnol Annu Rev Borchers A T, Stern J S, Hackman R M, Keen C L, Gershwin M E (1999) Minireview: Mushrooms, tumors and immunity, Proc Soc Exp Biol Med Burgess L.W., Knight T.E., Tesoriero L and Phan H.T (2008) Diagnostic manual for plant diseases in Vietnam, ACIAR Monograph No 129, 210 pp ACIAR: Canberra Chang S T, Buswell J A (1996) Mushroom nutriceuticals, World J Microbiol Biotechnol Chang S T, Buswell J A (1999) Ganoderma lucidum (Curt.: Fr.) P Karst (Aphyllophoromycetideae): A mushrooming medicinal mushroom, Int J Med Mushrooms Chang S T, Buswell J A (2008) Safety, quality control and regulational asp.ects relating to mushroom nutriceuticals, Mushroom Biology and Mushroom Products Chet, L, G.E.Harman, and R.Baker (1981) Trichoderma hamatum: Its hyphal interactions with Rhizoctonia solani and Pythium spp., Microb Ecol 7, pp 28 – 29 Elad and Y., I.Chet, P.Boyle and Y.Hennis (1983) Parasitism of Trichoderma -68- Đồ án tốt nghiệp spp on Rhizoctonia solani and Sclerotium rolfsii scaning electron microscopy and fluorescence microscopy, Phytopathology 73: pp 85 – 88 Elad Y, Chet I, Henuls Y (1982) Degradation of plant pathogenic fungi by Trichoderma harzianum, J Can J Microbiol, 28: 719 – 725 Esp.osito E, Silva D.M (1998) Systematics and environmental application of the Genus Trichodema, Crical reviews in Microbiology 24 (2), pp 89 – 98 Francesco Vinale (2008) Trichoderma–plant–pathogen interactions Soil Biology & Biochemistry: p 1-10 Gao Y, Zhou S (2009) Cancer prevention and treatment by Ganoderma, a mushroom with medicinal properties, Food Rev Int Gary E Harman, C P Kubicek (2005) Trichoderma And Gliocladium: Enzymes, Biological Control and commercial applications, Volume 2, This edition published in the Taylor & Francis e-Library Gary J Samuels (2004) Trichoderma aguide to identification and biology, United States Department of Agriculture Research Service Systematic Botany and Mycology Laboratory 304, B-011A Beltsville, MD 20705-2350, USA Hadden J F and L L Black (1989) Anthranose of pepper caused by Collettotrichum spp proceeding of the international symposium on integrated management practices: Tomato and pepper production in the tropics, Asian Vegetable Research and Development Centre, Taiwan, 189 – 199 Harman G E., et al (2004) Trichoderma sp.ecies opportunistic, avirulent plant symbionts, Nat Rev Microbiol, 2(1): p 43-56 Hatvani L, et al (2012) Mushroom Green Mould Disease In Croatia, Arh Hig Rada Toksikol, 63:481-487 Holliday P (1980) Fungus diseases of tropical crops, Published by Cambrige University Press, England Hubbard, et al (1983) Phytopathology ,73:655-659 Jaw-Fen Wang (2010) Characterization of Colletotrichum spp.Characterization -69- Đồ án tốt nghiệp of Colletotrichum spp causing pepper anthracnose and development of resistant pepper lines, Asian Seed Congress Kim B S (2007) Country report of anthranose research in Korea, First international symposium on chi li anthranose, National hoticultural research institute, Rural development of administration republic of Korea Kimura Y, Taniguchi M, Baba K (2002) Antitumor and antimetastatic effects on liver of triterpenoid fractions of Ganoderma lucidum: Mechanism of action and isolation of an active substance, Anticancer Res L Kredics, L García Jimenez, S Naeimi, D Czifra, P Urbán, L Manczinger, L Hatvani, C Vágvölgyi and L Hatvani (2010) A challenge to mushroom growers: the green mould disease of cultivated champignons, Department of Microbiology, Faculty of Science and Informatics, University of Szeged, Közép fasor 52 H-6726 Szeged, Hungary Laila Naher, Umi Kalsom Yusuf, Shafiquzzaman Siddiquee, Jannatul Ferdous and M Aminur Rahman Effect of media on growth and antagonistic activity of selected Trichoderma strains against Ganoderma, African Journal of Microbiology Research Vol 6(48), pp 7449-7453 Lin S C (2000) Beijing, China: Chinese Agricultural Press, Medicinal Fungi of China-Production and Products Development Masanto Masyahit, Kamaruzaman Sijam, Yahya Awang and Mohd Ghazali Mohd Satar (2009) The First Report of the Occurrence of Anthracnose Disease Caused by Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz & Sacc on Dragon Fruit (Hylocereus spp.) in Peninsular Malaysia, American Journal of Applied Sciences (5): 902-912 Mau J L, Lin H C, Chen C C (2001) Non-volatile components of several medicinal mushrooms, Food Res Int Mau J L, Lin H C, Chen C C (2002) Antioxidant properties of several medicinal mushrooms, J Agric Food Chem Mendoza-Mendoza A, Pozo MJ, Grzegorski D, Martínez P, García JM, Olmedo-70- Đồ án tốt nghiệp Monfil V, Cortés C, Kenerley C, Herrera-Estrella A (2003) Enhanced biocontrol activity of Trichoderma through inactivation of a mitogenactivated protein kinase, Proc Natl Acad Sci U S A Mukherjee PK, Latha J, Hadar R, et al (2004) Role of two G-protein alpha subunits, TgaA and TgaB, in the antagonism of plant pathogens by Trichoderma virens, Appl Environ Microbiol Pai-Feng Kao, Shwu-Huey Wang, Wei-Ting Hung, Yu-Han Liao, Chun-Mao Lin and Wen-Bin Yang (2012) Structural Characterization and Antioxidative Activity of Low-Molecular-Weights Beta-1,3-Glucan from the Residue of Extracted Ganoderma lucidum Fruiting Bodies, Journal of Biomedicine and Biotechnology, Volume 2012 (2012), Article ID 673764, pages Phoulivong S, McKenzie EHC, Hyde KD (2012) Cross infection of Colletotrichum sp.ecies; a case study with tropical fruits, Current Research in Environmental & Applied Mycology 2(2), 99–111, Doi 10.5943/cream/2/2/2 Silva RN, da Silva SP., Brandão RL, Ulhoa CJ Regulation of N-acetyl-beta-Dglucosaminidase produced by Trichoderma harzianum: evidence that cAMP controls its expression, Laboratório de Enzimologia, Instituto de Ciências Biológicas, Universidade Federal de Goiás, Brazil Sissi Wachtel-Galor and Iris F.F.Benzie (2011) Lingzhi Polyphorous Fungus (Ganoderma lucidum), Herbal and Traditional Medicine: Biomolecular and Clinical Asp.ects, ISBN – Master e-book TSBN Stanley Freeman, Dror Minz, Inna Kolesnik, Olga Barbul, Aida Zveibil1, Marcel Maymon, Yehuda Nitzani, Benny Kirshner, Dalia Rav-David, Alon Bilu, Arnon Dag, Sharoni Shafir and Yigal Elad (2004) Trichoderma biocontrol of Colletotrichum acutatum and Botrytis cinerea and survival in strawberry, European Journal of Plant Pathology 110: 361–370 Steve Bost (2013) Tomato Wilt Problems, Plant deseases, University of Tennessee Institute of Agriculture, U.S -71- Đồ án tốt nghiệp Susanne Zeilinger and Markus Omann (2007) Trichoderma Biocontrol: Signal Transduction Pathways Involved in Host Sensing and Mycoparasitism, Gene Regul Syst Bio 2007; 1: 227–234 Susanne Zeilinger, Dr Kurt Brunner, Dipl Ing Barbara Reithner, Isabel Peissl Signal transduction in host sensing and mycoparasitic resp.onse of Trichoderma atroviride th The International Aspergillus Meeting (2009): “Asp.erfest 7”, NH Conference Centre Leeuwenhorst, The Netherlans Upton R (2000) American Herbal Pharmacopeia and Therapeutic Compendium: Reishi Mushroom, Ganoderma lucidum, Standards of Analysis, Quality Control and Therapeutics,U.S.A Canada: Santa Cruz Weindling, R (1932) Trichoderma lignorum as a parasite of other soil fungi, Phytopathology 22, 837-845 Zhang L, Zhang M, Chen J (2001) Solution properties of antitumor carboxymethylated derivatives of a-(1→3)-D-Glucan from Ganoderma lucidum, Chin J Polym Sci Zhang W, Tang Y J (2008) A novel three-stage light irradiation strategy in the submerged fermentation of medicinal mushroom Ganoderma lucidum for the efficient production of ganoderic acid and Ganoderma polysaccharides, Biotechnol Prog Zhou X, Lin J, Yin Y, Zhao J, Sun X, Tang K (2007) Ganodermataceae: Natural products and their related pharmacological functions, Am J Chin Med Zofia Olempska-Beer (2008) Asp.araginase from Aspergillus niger expressed in A Niger, Chemical and Technical Assessment -72- Đồ án tốt nghiệp TÀI LIỆU INTERNET Cổ Đức Trọng (2012), Gía loại nấm Linh chi thị trường TP Hồ Chí Minh, Cơng ty TNHH Linh chi Vina http://linhchivina.com.vn/?frame=khoahoc&id=&p=6 Hình ảnh nấm Trichderma harzianum CBS 102174 http://www.mycobank.org/BioloMICS.asp.x?Link=T&TargetKey=14682616 000002126&Rec=4818 Nấm Linh chi Việt Nam - Nguồn gốc thực trạng http://www.linhchivietnam.net/linh-chi-viet-nam/nam-linh-chi-viet-namnguon-goc-va-thuc-trang.html Trương Mạnh Hoài (2012), Phát triển nghề trồng nấm, Báo Nhân dân http://linhchivina.com.vn/?frame=news_detail&id=382 Lê Xuân Thám cộng (2011) Nấm Linh chi Việt Nam - Dược tính vừa phát hiện, Trung tâm Hạt nhân TP Hồ Chí Minh http://www.linhchivietnam.net/linh-chi-viet-nam/nam-linh-chi-viet-namduoc-tinh-moi-nhat-vua-duoc-phat-hien.html Nghiên cứu ứng dụng nấm Trichoderma giới http://www.cabi.org/ -73- Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC Phụ lục A Danh mục thành phần môi trường sử dụng nghiên cứu A.1 Mơi trường ½ Potato D-Glucose Agar (½ PGA) Thành phần (g/l): Khoai tây D-Glucose Agar Nước cất Môi trường dùng để phân lập nấm bệnh môi trường PGA giảm hàm lượng khoai tây đường xuống nửa có bồ sung kháng khuẩn A.2 Môi trường Potato D-Glucose Agar (PGA) Thành phần (g/l): Khoai tây D-Glucose : Agar Nước cất Môi trường PGA dùng để nuôi cấy, giữ giống khảo sát khả đối kháng A.3 Môi trường Minimal Synthetic Medium (MSM) Thành phần (g/l): MgSO4.7H2O K2HPO4 KCl NH4NO3 FeSO4.7H2O Đệm phosphate 50mM , pH = 6,3 Đồ án tốt nghiệp Cơ chất để khảo sát hoạt tính enzyme cellulase chitinase CMC huyền phù chitin với thuốc thử lugol Phụ lục B Bảng số liệu B.1 Đường kính (mm) vịng phân giải CMC chitin sau ngày nuôi cấy Chủng T virens T harzianum B.2 Trung bình Đường kính (mm) vịng phân giải CMC chitin sau ngày nuôi cấy Summary Statistics for Vong phan giai Chitin Trichoderma T harzianum Count T virens Total 12 Summary Statistics for Vong phan giai CMC Trichoderma Count T harzianum T virens Total 12 -2- Đồ án tốt nghiệp B.3 Đường kính tản nấm Fusarium sp đĩa đối kháng đối chứng qua ngày nuôi cấy đối kháng Lần nhắc Công thức T virens T harzianum Đối chứng B.4 Trung bình tỷ lệ (%) đối kháng T virens T harzianum với nấm Fusarium sp qua ngày nuôi cấy Summary Statistics for Ty le doi khang Fusarium Tri Fu Count Har-Fu Har-Fu Har-Fu Vi-Fu Vi-Fu Vi-Fu Total 54 -3- Đồ án tốt nghiệp B.5 Đường kính tản nấm Rihzoctonia sp đĩa đối kháng đối chứng qua ngày nuôi cấy đối kháng Lần nhắc Công thức T virens T harzianum Đối chứng B.6 Trung bình tỷ lệ (%) đối kháng T virens T harzianum với nấm Rihzoctonia sp qua ngày nuôi cấy Summary Statistics for Ty le doi khang Rihzoctonia Tri Ri Total Count Vi-Ri Vi-Ri Vi-Ri Har-Ri Har-Ri Har-Ri 54 -4- Đồ án tốt nghiệp B.7 Đường kính tản nấm Colletotrichum sp1 đĩa đối kháng đối chứng qua ngày nuôi cấy đối kháng Lần nhắc Công thức T virens T harzianum Đối chứng B.8 Trung bình tỷ lệ (%) đối kháng T virens T harzianum với nấm colletotrichum sp1 qua ngày nuôi cấy Summary Statistics for Ty le doi khang Collettotrichum1 Tri Col Count Vi-Col1 Vi-Col1 Vi-Col1 Har-Col1 Har-Col1 Har-Col1 Total 54 -5- Đồ án tốt nghiệp B.9 Đường kính tản nấm Colletotrichum sp2 đĩa đối kháng đối chứng qua ngày nuôi cấy đối kháng Lần nhắc Công thức T virens T harzianum Đối chứng B.10 Trung bình tỷ lệ (%) đối kháng T virens T harzianum với nấm colletotrichum sp2 qua ngày nuôi cấy Summary Statistics for Ty le doi khang Colletotrichum2 Tri Col2 Count Vi-Col2 Vi-Col2 Vi-Col2 Har-Col2 Har-Col2 Har-Col2 Total 54 -6- Đồ án tốt nghiệp B.11 Đường kính tản nấm Colletotrichum sp3 đĩa đối kháng đối chứng qua ngày nuôi cấy đối kháng Lần nhắc Công thức T virens T harzianum Đối chứng B.12 Tỷ lệ (%) đối kháng T virens T harzianum với nấm colletotrichum sp3 qua ngày nuôi cấy Summary Statistics for Ty le doi khang Colletotrichum3 Tri Col3 Count Vi-Col3 Vi-Col3 Vi-Col3 Har-Col3 Har-Col3 Har-Col3 Total 54 -7- ... Linh chi để quản lý số bệnh hại trồng mặt đất khả thi cần thiết Xuất phát từ lý trên, sinh vi? ?n tiến hành đề tài “ Phân lập lồi vi nấm kí sinh nấm Linh chi đánh giá khả đối kháng nấm bệnh gây hại. .. Phân lập nấm kí sinh gây bệnh nấm Linh chi định danh đến loài chủng nấm phân lập − Khảo sát khả sinh enzyme ngoại bào (cellulase, chitinase) số chủng nấm kí sinh gây bệnh − Khảo sát khả đối kháng. .. harzianum kí sinh nấm Linh chi 51 3.3 Khảo sát khả đối kháng lồi nấm Trichoderma virens Trichoderma harzianum kí sinh nấm Linh chi nấm bệnh gây hại trồng điều kiện in vitro 52 3.3.1 Khả đối kháng