Ứng dụng nấm trichoderma trong quản lý nấm gây bệnh đốm trắng trên thanh long tại bình thuận​

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ỨNG DỤNG NẤM TRICHODERMA TRONG QUẢN LÝ NẤM GÂY BỆNH ĐỐM TRẮNG TRÊN THANH LONG TẠI BÌNH THUẬN Ngành: Cơng nghệ sinh học Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Giảng viên hướng dẫn: TS Nguyễn Thị Hai Sinh viên thực hiện: Huỳnh Lê Trúc Giang MSSV: 1151110109 Lớp: 11DSH04 TP Hồ Chí Minh, 2015 LỜI CẢM ƠN Sau thời gian làm đề tài Phịng thí nghiệm, khoa Cơng nghệ sinh học – Thực phẩm – Môi trường, giúp đỡ, bảo dìu dắt tận tình thầy cơ, hổ trợ gia đình, bạn bè với cố gắng nỗ lực thân, em hồn đề tài tốt nghiệp Em xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Thị Hai tận tình hướng dẫn truyền đạt cho em kiến thức vơ quan trọng, q báu suốt q trình học tập nghiên cứu Em xin chân thành cảm ơn thầy cô khoa Công nghệ sinh học – Thực phẩm – Môi trường tạo điều kiện giúp đỡ em suốt trình thực đề tài Em xin gửi lời cảm ơn tới sinh viên Lê Huỳnh Hồi Thương, sinh viên khoa Cơng nghệ sinh học – Thực phẩm – Mơi trường tận tình giúp đỡ trình thu thập mẫu Thanh long Bình Thuận hổ trợ em trình thực đề tài nghiên cứu Cuối cùng, với tất lịng kính trọng biết ơn, em xin gửi lời cảm ơn tới Bố, Mẹ, người thân bạn bè, người bên cạnh động viên, hết lịng giúp đỡ em suốt q trình học tập hoàn thành đề tài tốt nghiệp TP.HCM, Ngày 20 tháng 08 năm 2015 Sinh viên Huỳnh Lê Trúc Giang LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đốn: - Những nội dung đề tài thực hướng dẫn trực tiếp TS Nguyễn Thị Hai - Các só liệu phân tích đề tài có nguồn gốc rõ ràng , công bố theo quy định - Mọi tham khảo đề tài trích dẫn rõ ràng tên tác giả, tên cơng trình, thời gian nghiên cứu - Các kết thể đề tài cho tự nghiên cứu, phân tích cách trung thực, khách quan - Nếu có chép, vi phạm qui định hay gian trá, tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm Sinh viên Huỳnh Lê Trúc Giang MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT iv DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH ẢNH vi MỞ ĐẦU .1 Tính cấp thiết đề tài: Tình hình nghiên cứu: Mục đích nghiên cứu: .2 Nội dung nghiên cứu: .2 Các kết đạt đề tài: .3 Kết cấu đồ án tốt nghiệp: CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu long: .4 1.1.1 Tình hình long nước: 1.1.2 Tình hình long nước: .5 1.1.3 Thành phần dinh dưỡng trái long: 1.1.4 Phân loại: 1.1.5 Thanh long Bình Thuận: 1.1.5.1 Đặc điểm long Bình Thuận: .9 1.1.5.2 Diện tích phân bố suất long Bình thuận: .10 1.1.5.3 Tình hình xuất long Bình Thuận: 10 1.2 Giới thiệu bệnh đốm trắng hại long biện pháp phòng trừ: 11 1.2.1 Sâu bệnh hại long biện pháp phòng trừ: 11 1.2.1.1 Côn trùng: 11 1.2.1.2 Bệnh, dịch hại: 13 1.2.1.3 Các tượng sinh lý 15 1.2.2 Bệnh đốm trắng hại long: 15 1.2.2.1 Tác nhân gây bệnh: 15 1.2.2.2 Thiệt hại bệnh đốm trắng gây ra: 17 1.2.3 Biện pháp phòng trừ: 18 1.3 Giới thiệu nấm Trichoderma: 19 1.4 Cơ chế đối kháng nấm gây bệnh nấm Trichoderma: 22 1.4.2 Hiện tượng “giao thoa sợi nấm”: 22 1.4.3 Cơ chế tiết kháng sinh: 23 1.4.4 Cạnh tranh dinh dưỡng không gian sống: 25 1.4.5 Khả kích thích sinh trưởng thực vật: 26 1.5 Giới thiệu thuốc bảo vệ thực vật: 26 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .30 2.1 Địa điểm thời gian: 30 2.1.1 Địa điểm: 30 2.1.2 Thời gian: 30 2.2 Vật liệu: 30 2.2.1 Nguyên liệu: 30 2.2.1.1 Cành long: 30 2.2.1.2 Chủng nấm Trichoderma: 30 2.2.2 Hóa chất: 30 2.2.3 Dụng cụ thiết bị: 30 2.2.3.1 Dụng cụ: 30 2.2.3.2 Thiết bị: 31 2.2.3.3 Môi trường phân lập nuôi cấy nấm: 31 2.3 Phương pháp nghiên cứu: 32 2.3.1 Xác định tác nhân gây bệnh đốm trắng: 32 2.3.2 Chọn lọc chủng Trichoderma theo phương pháp đối kháng trực tiếp đĩa petri (in vitro): 35 2.3.3 Đánh giá hiệu phòng trừ bệnh đốm trắng chủng Trichoderma có triển vọng điều kiện in vivo: 36 2.3.4 Ảnh hưởng loại thuốc trừ nấm: 39 2.4 Phương pháp xử lí số liệu: 41 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 42 3.1 Xác định tác nhân gây bệnh đốm trắng: 42 3.1.1 Kết phân lập: 42 3.1.2 Đặc điểm đặc trưng nấm N1: 43 3.1.2.1 Đặc điểm đại thể: 43 3.1.2.2 Đặc điểm vi thể: 45 3.1.3 Kết lây bệnh nhân tạo theo quy tắc Koch: 46 3.2 Chọc lọc chủng nấm Trichoderma đối kháng với nấm Neoscytalidium dimidiatum đĩa petri (in vitro): 48 3.3 Đánh giá hiệu phòng trừ bệnh đốm trắng chủng Trichoderma có triển vọng điều kiện in vivo: 54 3.4 Ảnh hưởng loại thuốc trừ nấm: 60 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO 66 Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT BVTV: Bảo vệ thực vật Ctv: Cộng tác viên PDA: Potato D – Glucose Agar Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần sinh hóa 100g thịt long Bảng 1.2 Các loại thuốc tham gia thí nghiệm hoạt chất 27 Bảng 2.1 Số cành số vết bệnh lây nhiễm long khỏe 38 Bảng 2.2 Liều lượng thuốc BVTV sử dụng cho 100ml môi trường 40 Bảng 3.1 Đặc điểm hình thái đường kính trung bình nấm N1 nuôi cấy môi trường PDA 43 Bảng 3.2 So sánh nấm N1 với nấm Neoscytalidium dimidiatum 46 Bảng 3.3 Kết lây nhiễm bệnh long khỏe theo quy tắc Koch 47 Bảng 3.4 Đường kính trung bình tản nấm phần trăm ức chế chủng nấm Trichoderma với nấm Neoscytalidium dimidiatum: 49 Bảng 3.5 Phần trăm ức chế chủng nấm Trichoderma với nấm gây bệnh: 52 Bảng 3.6 Tỷ lệ nhiễm bệnh long sau xử lí đối kháng 54 Bảng 3.7 Chỉ số bệnh đốm trắng xuất cành long sau xử lí đối kháng 56 Bảng 3.8 Ảnh hưởng loại thuốc đến phát triển nấm Trichoderma ngày sau cấy 60 Bảng 3.9 Tỷ lệ ức chế thuốc nấm Trichoderma điều kiện invitro 61 Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Cây long trái long Hình 1.2 Trái long vỏ hồng, ruột trắng Hình 1.3 Trái long vỏ hồng, ruột đỏ Hình 1.4 Trái long vỏ vàng, ruột trắng Hình 1.5 Nấm Neoscytalidium dimidiatum 16 Hình 1.6 Khuẩn ty bào tử số lồi nấm Trichoderma 20 Hình 1.7 Hiện tượng giao thoa sợi nấm (Agrios, 2005) 23 Hình 2.1 Thanh long ươm trồng chậu 37 Hình 3.1 Cành long bệnh thu vườn long Bình Thuận 42 Hình 3.2 Cành long bị bệnh trước sau lây nhiễm theo quy tắc Koch 47 Hình 3.3 Nấm phân lập từ cành long nhiễm bệnh theo quy tắc Koch 48 Hình 3.4 Kết đối kháng chủng Trichoderma với nấm gây bệnh Neoscytalidium dimidiatum 53 Hình 3.5 Mẫu long đối chứng phun nấm N1 57 Hình 3.6 Mẫu long thí nghiệm phun nấm N1 phun thuốc BVTV Dipomate 80WP 58 Hình 3.7 Mẫu long thí nghiệm phun nấm N1 phun bào tử Trichoderma T5 58 Hình 3.8 Mẫu long thí nghiệm phun nấm N1 phun bào tử Trichoderma T6 59 Hình 3.9 Mẫu long thí nghiệm phun nấm N1 phun bào tử Trichoderma T7 59 Hình 3.10 Ảnh hưởng thuốc chủng Trichoderma T5 62 Hình 3.11 Ảnh hưởng thuốc chủng Trichoderma T6 63 Hình 3.12 Ảnh hưởng thuốc chủng Trichoderma T7 64 Đồ án tốt nghiệp ❖ A.5 Đối kháng chủng nấm Trichoderma T5 với nấm gây bệnh: CT ĐKT (m ĐKT (m %Ứ A.6 Đối kháng chủng nấm Trichoderma T6 với nấm gây bệnh: CT ĐKT (m ĐKT (m %Ứ Đồ án tốt nghiệp A.7 Đối kháng chủng nấm Trichoderma T7 với nấm gây bệnh: CTTD ĐKTB CĐK (mm) ĐKTB CĐC (mm) % Ức chế A.8 Ảnh hưởng loại thuốc trừ nấm đến đường kính nấm ngày sau cấy: Nghiệm thức Cup 2,9 Carbenzim Saizole Đồ án tốt nghiệp Mexyl Mz Dipomate Không bổ sung A.9 Hiệu lực (%) thuốc nấm Trichoderma điều kiện in vitro: Nghiệm thức Cup 2,9 Carbenzim Saizole Đồ án tốt nghiệp Mexyl Mz Dipomate Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC B KẾT QUẢ XỬ LÝ SỐ LIỆU B.1 Đánh giá khả đối kháng chủng Trichoderma nấm gây bệnh: ▪ ngày sau cấy ANOVA Table for PIGM by Chung Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for PIGM by Chung Method: 95.0 percent LSD Chung T ▪ ngày sau cấy: ANOVA Table for PIGM by Chung Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for PIGM by Chung Đồ án tốt nghiệp Method: 95.0 percent LSD Chung T ▪ ngày sau cấy: ANOVA Table for PIGM by Chung Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for PIGM by Chung Method: 95.0 percent LSD Chung T Đồ án tốt nghiệp ▪ 10 ngày sau cấy: ANOVA Table for PIGM by Chung Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for PIGM by Chung Method: 95.0 percent LSD Chung B.2 Ảnh hưởng thuốc trừ nấm ngày sau cấy: ▪ Đường kính tản nấm T5: ANOVA Table for Duong kinh nam Trichoderma T5 by Thuoc BVTV Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for Duong kinh nam Trichoderma T5 by Thuoc BVTV Đồ án tốt nghiệp Method: 95.0 percent LSD Thuoc BVT Mexyl Mz Carbenzim Saizole Cup 2,9 Dipomate DC ▪ Đường kính tản nấm T6: ANOVA Table for Duong kinh nam Trichoderma T6 by Thuoc BVTV Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for Duong kinh nam Trichoderma T6 by Thuoc BVTV Method: 95.0 percent LSD Thuoc BVT Saizole Carbenzim Mexyl Mz Dipomate Cup 2,9 DC Đồ án tốt nghiệp ▪ Đường kính tản nấm T7: ANOVA Table for Duong kinh nam Trichoderma T7 by Thuoc BVTV Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for Duong kinh nam Trichoderma T7 by Thuoc BVTV Method: 95.0 percent LSD T C B.2 Hiệu lực thuốc trừ nấm ngày sau cấy: ▪ Chủng nấm T5: ANOVA Table for Hieu luc dv T5 by Thuoc BVTV Source Between groups Within groups Total (Corr.) Đồ án tốt nghiệp Multiple Range Tests for Hieu luc dv T5 by Thuoc BVTV Method: 95.0 percent LSD Thuoc BVTV dipomate 80wp cup 2,9 sl Mexyl mz 72wp carbenzim saizole ▪ Chủng nấm T6: ANOVA Table for Hieu luc dv T6 by Thuoc BVTV Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for Hieu luc dv T6 by Thuoc BVTV Method: 95.0 percent LSD Thuoc BVT cup 2,9 sl dipomate 80 Mexyl mz 72 saizole carbenzim Đồ án tốt nghiệp ▪ Chủng nấ m T7: ANOVA Table for Hieu luc dv T7 by Thuoc BVTV Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for Hieu luc dv T7 by Thuoc BVTV Method: 95.0 percent LSD Thuoc BVTV cup 2,9 sl dipomate 80wp Mexyl mz 72wp saizole carbenzim ... thực đề tài ? ?Ứng dụng nấm Trichoderma quản lý nấm gây bệnh đốm trắng long Bình Thuận” nhằm góp phần hạn chế bệnh gây thiệt hại lớn lao cho người nơng dân cho nước Tình hình nghiên cứu: Tại Việt Nam... 1.2.2 Bệnh đốm trắng hại long: Bệnh đốm trắng long xuất có triệu chứng ban đầu vết lõm màu trắng (nên số nơng dân cịn gọi bệnh đốm trắng) , sau vết bệnh lên thành đốm tròn màu nâu mắt cua Trong. .. nhân gây bệnh đốm trắng long Bình Thuận - Chọn lọc chủng Trichoderma có khả đối kháng với tác nhân gây Đồ án tốt nghiệp bệnh đốm trắng điều kiện in vitro - Đánh giá hiệu phòng trừ bệnh đốm trắng