Ứng dụng nấm trichoderma trong quản lý nấm gây bệnh đốm trắng trên thanh long tại bình thuận

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ỨNG DỤNG NẤM TRICHODERMA TRONG QUẢN LÝ NẤM GÂY BỆNH ĐỐM TRẮNG TRÊN THANH LONG TẠI BÌNH THUẬN Ngành: Cơng nghệ sinh học Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Giảng viên hướng dẫn: TS Nguyễn Thị Hai Sinh viên thực hiện: Huỳnh Lê Trúc Giang MSSV: 1151110109 Lớp: 11DSH04 TP Hồ Chí Minh, 2015 LỜI CẢM ƠN Sau thời gian làm đề tài Phòng thí nghiệm, khoa Cơng nghệ sinh học – Thực phẩm – Môi trường, giúp đỡ, bảo dìu dắt tận tình thầy cơ, hổ trợ gia đình, bạn bè với cố gắng nỗ lực thân, em hồn đề tài tốt nghiệp Em xin bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Thị Hai tận tình hướng dẫn truyền đạt cho em kiến thức vơ quan trọng, q báu suốt q trình học tập nghiên cứu Em xin chân thành cảm ơn thầy cô khoa Công nghệ sinh học – Thực phẩm – Môi trường tạo điều kiện giúp đỡ em suốt trình thực đề tài Em xin gửi lời cảm ơn tới sinh viên Lê Huỳnh Hồi Thương, sinh viên khoa Cơng nghệ sinh học – Thực phẩm – Mơi trường tận tình giúp đỡ trình thu thập mẫu Thanh long Bình Thuận hổ trợ em trình thực đề tài nghiên cứu Cuối cùng, với tất lòng kính trọng biết ơn, em xin gửi lời cảm ơn tới Bố, Mẹ, người thân bạn bè, người bên cạnh động viên, hết lòng giúp đỡ em suốt q trình học tập hoàn thành đề tài tốt nghiệp TP.HCM, Ngày 20 tháng 08 năm 2015 Sinh viên Huỳnh Lê Trúc Giang LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đốn: - Những nội dung đề tài thực hướng dẫn trực tiếp TS Nguyễn Thị Hai - Các só liệu phân tích đề tài có nguồn gốc rõ ràng , công bố theo quy định - Mọi tham khảo đề tài trích dẫn rõ ràng tên tác giả, tên cơng trình, thời gian nghiên cứu - Các kết thể đề tài cho tự nghiên cứu, phân tích cách trung thực, khách quan - Nếu có chép, vi phạm qui định hay gian trá, tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm Sinh viên Huỳnh Lê Trúc Giang MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT iv DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC ẢNH vi HÌNH MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài: Tình hình nghiên cứu: Mục đích nghiên cứu: Nội dung nghiên cứu: Các kết đạt đề tài: Kết cấu đồ án tốt nghiệp: CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu long: 1.1.1 Tình hình long nước: 1.1.2 Tình hình long ngồi nước: 1.1.3 Thành phần dinh dưỡng trái long: 1.1.4 Phân loại: 1.1.5 Thanh long Bình Thuận: 1.1.5.1 Đặc điểm long Bình Thuận: 1.1.5.2 Diện tích phân bố suất long Bình thuận: 10 1.1.5.3 Tình hình xuất long Bình Thuận: 10 1.2 Giới thiệu bệnh đốm trắng hại long biện pháp phòng trừ: 11 1.2.1 Sâu bệnh hại long biện pháp phòng trừ: 11 1.2.1.1 Côn trùng: 11 1.2.1.2 Bệnh, dịch hại: 13 1.2.1.3 Các tượng sinh lý 15 1.2.2 Bệnh đốm trắng hại long: 15 1.2.2.1 Tác nhân gây bệnh: 15 1.2.2.2 Thiệt hại bệnh đốm trắng gây ra: 17 1.2.3 Biện pháp phòng trừ: 18 1.3 Giới thiệu nấm Trichoderma: 19 1.4 Cơ chế đối kháng nấm gây bệnh nấm Trichoderma: 22 1.4.2 Hiện tượng “giao thoa sợi nấm”: 22 1.4.3 Cơ chế tiết kháng sinh: 23 1.4.4 Cạnh tranh dinh dưỡng không gian sống: 25 1.4.5 Khả kích thích sinh trưởng thực vật: 26 1.5 Giới thiệu thuốc bảo vệ thực vật: 26 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1 Địa điểm thời gian: 30 2.1.1 Địa điểm: 30 2.1.2 Thời gian: 30 2.2 Vật liệu: 30 2.2.1 Nguyên liệu: 30 2.2.1.1 Cành long: 30 2.2.1.2 Chủng nấm Trichoderma: 30 2.2.2 Hóa chất: 30 2.2.3 Dụng cụ thiết bị: 30 2.2.3.1 Dụng cụ: 30 2.2.3.2 Thiết bị: 31 2.2.3.3 Môi trường phân lập nuôi cấy nấm: 31 2.3 Phương pháp nghiên cứu: 32 2.3.1 Xác định tác nhân gây bệnh đốm trắng: 32 2.3.2 Chọn lọc chủng Trichoderma theo phương pháp đối kháng trực tiếp đĩa petri (in vitro): 35 2.3.3 Đánh giá hiệu phòng trừ bệnh đốm trắng chủng Trichoderma có triển vọng điều kiện in vivo: 36 2.3.4 2.4 Ảnh hưởng loại thuốc trừ nấm: 39 Phương pháp xử lí số liệu: 41 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 42 3.1 Xác định tác nhân gây bệnh đốm trắng: 42 3.1.1 Kết phân lập: 42 3.1.2 Đặc điểm đặc trưng nấm N1: 43 3.1.2.1 Đặc điểm đại thể: 43 3.1.2.2 Đặc điểm vi thể: 45 3.1.3 Kết lây bệnh nhân tạo theo quy tắc Koch: 46 3.2 Chọc lọc chủng nấm Trichoderma đối kháng với nấm Neoscytalidium dimidiatum đĩa petri (in vitro): 48 3.3 Đánh giá hiệu phòng trừ bệnh đốm trắng chủng Trichoderma có triển vọng điều kiện in vivo: 54 3.4 Ảnh hưởng loại thuốc trừ nấm: 60 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO 66 Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT BVTV: Bảo vệ thực vật Ctv: Cộng tác viên PDA: Potato D – Glucose Agar Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần sinh hóa 100g thịt long Bảng 1.2 Các loại thuốc tham gia thí nghiệm hoạt chất 27 Bảng 2.1 Số cành số vết bệnh lây nhiễm long khỏe 38 Bảng 2.2 Liều lượng thuốc BVTV sử dụng cho 100ml môi trường 40 Bảng 3.1 Đặc điểm hình thái đường kính trung bình nấm N1 ni cấy môi trường PDA 43 Bảng 3.2 So sánh nấm N1 với nấm Neoscytalidium dimidiatum 46 Bảng 3.3 Kết lây nhiễm bệnh long khỏe theo quy tắc Koch 47 Bảng 3.4 Đường kính trung bình tản nấm phần trăm ức chế chủng nấm Trichoderma với nấm Neoscytalidium dimidiatum: 49 Bảng 3.5 Phần trăm ức chế chủng nấm Trichoderma với nấm gây bệnh: 52 Bảng 3.6 Tỷ lệ nhiễm bệnh long sau xử lí đối kháng 54 Bảng 3.7 Chỉ số bệnh đốm trắng xuất cành long sau xử lí đối kháng 56 Bảng 3.8 Ảnh hưởng loại thuốc đến phát triển nấm Trichoderma ngày sau cấy 60 Bảng 3.9 Tỷ lệ ức chế thuốc nấm Trichoderma điều kiện invitro 61 Võ Thị Lan Thanh, 2011 Xác định tác nhân gây bệnh đốm trắng long bước đầu nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng đến tác nhân gây bệnh Khóa luận tốt nghiệp chun ngành Cơng nghệ sinh học Trường Đại học Công nghệ TP Hồ Chí Minh TÀI LIỆU NƯỚC NGỒI Agrios, G N , 2005 Plant Pathology Academic Press, USA Crous, P W., Slipper, B., Wingfield M J., Rheeder, J., Marasas, W F O., Philips, A J L., Alves, A., Burgess, P., Groenewald, J Z (2006) Phylogenetic lineeages in the Botryosphaeriaceae Studies in Mycology Chuang, M F., Ni, H F., Yang, H R., Shu, S L and Lai, S Y (2012) First report of stem canker disease of pitaya cause by Neoscytalidium Dimidiatum in Taiwan Ezra, D., Liarzi, O., Gat, T and Hershcovich, M (2013) First report of internal black rot caused by Neoscytalidium Dimidiatum on Hylocereus undatus fruit in Israel Lan, G B and He, Z F and Xi, P G and Jiang, Z D (2012) First report of brown spot disease cause by Neoscytalidium Dimidiatum in Guangdong, Chinese Mainland Mohd, M H., Salleh, B., Zakaria, L., (2013) Identification and molecular characterizations of Neoscytalidium Dimidiatum causing stem canker of red- fleshed dragon fruit in Malaysia TÀI LIỆU INTERNET Nguyễn Thành Hiếu, Nguyễn Văn Hòa Nguyễn Minh Châu Biện pháp quản lý tạm thời bệnh đốm trắng long, Viện Cây ăn miền Nam, http://sofri.org.vn/NewsDetail.aspx?l=&id=545&cat=1&catdetail=5 Nguyễn Thành Hiếu, Nguyễn Văn Hòa, Nguyễn Minh Châu Bệnh đốm trắng long 2013, giải pháp quản lý tạm thời, http://nongnghiep.vn/nongnghiepvn/vi -vn/25/113540/khuyen -nong/benhdom- trang-thanh-long-giai-phap-quan-ly-tam-thoi.html Nguyễn Văn Hòa Những yếu tố cần thiết bảo vệ thực vật long sản xuất theo hướng GAP, Viện Cây ăn miền Nam, 2013, http://thanhlongchauthanhlongan.com/bao-ve-thuc-vat/bao-ve-thuc-vat-56.html Trần Thanh Phong Phòng trừ bệnh đốm trắng long, 2013, http://baoapbac.vn/khoa-hoc/201307/phong-tru-benh-dom-trang-tren-thanhlong-318453/ Nông Nghiệp Việt Nam Hướng điều trị bệnh đốm trắng (đốm nâu) long, 2013, http://nongnghiep.vn/nongnghiepvn/vi -vn/25/118246/ky-thuat- nghe- nong/huong-moi-dieu -tri-benh-dom-trang-dom-nau-ca y-thanh-long.html Nông Nghiệp Việt Nam Sớm ban hành quy trình quản lý bệnh đốm trắng long, 2014, http://nongnghiep.vn/nongnghiepvn/vi -vn/25/121413/ky-thuat- nghe- nong/som-ban-hanh-quy-trinh-quan-ly-benh-dom-trang-thanh-long.html PHỤ LỤC PHỤ LỤC A CÁC BẢNG SỐ LIỆU THÔ A.1 Đối kháng chủng nấm Trichoderma T1 với nấm gây bệnh: C T T N N Đ K T B Đ K T B 19 63 % 0 Ứ N 9 70 9 70 2 2 A.2 Đối kháng chủng nấm Trichoderma T2 với nấm gây bệnh: C T T ĐD N S N S N S N 4 7 9 %9 Ứ c 0 7 7 K T B Đ K T B A.3 Đối kháng chủng nấm Trichoderma T3 với nấm gây bệnh: C T T ĐD N S N S N S N 7 2 9 %6 Ứ1 c 7 3 8 K T B Đ K T B A.4 Đối kháng chủng nấm Trichoderma T4 với nấm gây bệnh: C T T ĐD N S N S N S N 7 9 %4 Ứ c 9 2 K T B Đ K T B ❖ A.5 Đối kháng chủng nấm Trichoderma T5 với nấm gây bệnh: C T T ĐD K T B Đ K T B N S N S 4 5 9 0 %7 Ứ c 7 N S N 7 9 4 9 4 A.6 Đối kháng chủng nấm Trichoderma T6 với nấm gây bệnh: C T T ĐD K T B Đ K T B N S 37 37 N S 7 N S N 6 5 9 0 37 %1 Ứ c 7 9 3 9 3 A.7 Đối kháng chủng nấm Trichoderma T7 với nấm gây bệnh: C T T ĐD N S 5 N S %5 Ứ c K T B Đ K T B N S N 2 0 9 0 7 4 9 4 A.8 Ảnh hưởng loại thuốc trừ nấm đến đường kính nấm ngày sau cấy: Đường kính N nấm Ngày sau i cấyT(mm)T T t 11 1 C 89 9 u 11 2 p 89 2, 55 5 C ar be nz iS zo 55 5 5 55 5 5 55 5 5 55 5 5 55 5 5 55 5 M ex yl M z D ip o m K h ô n 55 5 5 59 5 11 1 88 7 3 6 1 8 86 7 39 8 A.9 Hiệu lực (%) thuốc nấm Trichoderma điều kiện in vitro: N g h i 7 C u p 2, 69 39 9 S zo le C ar be nz 9 9 M ex yl M 97 D ip o m 9 PHỤ LỤC B KẾT QUẢ XỬ LÝ SỐ LIỆU B.1 Đánh giá khả đối kháng chủng Trichoderma nấm gây bệnh: ▪ ngày sau cấy ANOVA Table for PIGM by Chung So Su ur m Be 70 tw Wi 20 thi To 91 tal Df M F- Pea Ra Va 11 0.0 45 01 13 15 79 19 Multiple Range Tests for PIGM by Chung Method: 95.0 percent LSD C h ou X H o XX XX 17 X 19 X 21 X X ▪ ngày sau cấy: ANOVA Table for PIGM by Chung So Su ur m Be 14 tw 14 Wi 11 thi To 15 tal 29 Df M ea 23 13 82 19 F- PRa Va 26 0.0 00 Multiple Range Tests for PIGM by Chung Method: 95.0 percent LSD C C h o X 54 X H o X 56 X 58 X 70 72 X 75 X ▪ ngày sau cấy: ANOVA Table for PIGM by Chung So Su Df ur m Be 16 tw 30 Wi 41 13 thi 11 To 16 19 tal 71 M ea 27 16 F- PRa Va 85 0.0 93 00 Multiple Range Tests for PIGM by Chung Method: 95.0 percent LSD C C H n o oX X 76 X X 83 X 93 93 ▪ 10 ngày sau cấy: ANOVA Table for PIGM by Chung So Su Df ur m Be 20 tw 90 Wi 44 13 thi 26 To 21 19 tal 35 M ea 34 40 F- PRa Va 10 0.0 00 Multiple Range Tests for PIGM by Chung Method: 95.0 percent LSD C M H o e o 7X 7X 7X X X X X B.2 Ảnh hưởng thuốc trừ nấm ngày sau cấy: ▪ Đường kính tản nấm T5: ANOVA Table for Duong kinh nam Trichoderma T5 by Thuoc BVTV So Su ur m Be 13 tw 39 Wi thi 83 To 13 tal 40 Df M ea 26 79 12 31 17 F- PRa Va 83 0.0 88 00 Multiple Range Tests for Duong kinh nam Trichoderma T5 by Thuoc BVTV Method: 95.0 percent LSD T uo ou M y C b Sai M H o X X X 17X Di o 1X X ▪ Đường kính tản nấm T6: ANOVA Table for Duong kinh nam Trichoderma T6 by Thuoc BVTV So Su Df ur m Be 94 tw 38 Wi 56 12 thi 83 To 94 17 tal 95 M ea 18 87 73 F- PRa Va 39 0.0 00 Multiple Range Tests for Duong kinh nam Trichoderma T6 by Thuoc BVTV Method: 95.0 percent LSD T C M H uo o o X Sai C b M y Di o X X 14X X X ▪ Đường kính tản nấm T7: ANOVA Table for Duong kinh nam Trichoderma T7 by Thuoc BVTV So Su Df M F- Pur m ea Ra Va Be 12 24 21 0.0 tw 16 33 90 00 Wi 12 thi 33 11 To 12 17 tal 16 Multiple Range Tests for Duong kinh nam Trichoderma T7 by Thuoc BVTV Method: 95.0 percent LSD T C M H o o eo M 5X l C 5X e 5X Di m 1X X X B.2 Hiệu lực thuốc trừ nấm ngày sau cấy: ▪ Chủng nấm T5: ANOVA Table for Hieu luc dv T5 by Thuoc BVTV So Su ur m Be 85 tw Wi thi 52 To 85 tal Df M ea 21 10 15 14 F- PRa Va 13 0.0 97 00 Multiple Range Tests for Hieu luc dv T5 by Thuoc BVTV Method: 95.0 percent LSD Th C uo ou di po cu p M ex car be sai zol M H ea o 78 X 36 78 X 56 93 X 88 93 X 88 93 X 88 ▪ Chủng nấm T6: ANOVA Table for Hieu luc dv T6 by Thuoc BVTV So Su Df ur m Be 10 tw 54 Wi 81 10 thi 54 To 11 14 tal 36 M ea 26 15 F- PRa Va 32 0.0 33 00 Multiple Range Tests for Hieu luc dv T6 by Thuoc BVTV Method: 95.0 percent LSD T C M H uo o o c 72 X d 79X p M X e s 92 X c e 92 X ▪ Chủng nấ m T7: ANOVA Table for Hieu luc dv T7 by Thuoc BVTV So Su Df M F- Pur m ea Ra Va Be 10 26 32 0.0 tw 54 .33 00 Wi 81 10 thi 54 15 To 11 14 tal 36 Multiple Range Tests for Hieu luc dv T7 by Thuoc BVTV Method: 95.0 percent LSD T M H h ou eo c 7X 2 d 7X i M X e s X c X b ... thực đề tài Ứng dụng nấm Trichoderma quản lý nấm gây bệnh đốm trắng long Bình Thuận nhằm góp phần hạn chế bệnh gây thiệt hại lớn lao cho người nông dân cho nước Tình hình nghiên cứu: Tại Việt Nam... nuôi 1.2.2 Bệnh đốm trắng hại long: Bệnh đốm trắng long xuất có triệu chứng ban đầu vết lõm màu trắng (nên số nơng dân gọi bệnh đốm trắng) , sau vết bệnh lên thành đốm tròn màu nâu mắt cua Trong điều... nhân gây bệnh đốm trắng long Bình Thuận - Chọn lọc chủng Trichoderma có khả đối kháng với tác nhân gây Đồ án tốt nghiệp bệnh đốm trắng điều kiện in vitro - Đánh giá hiệu phòng trừ bệnh đốm trắng