Độ bền màng hồng cầu

Bài 3: Xác định độ bền màng tế bào hồng cầu I Yêu cầu học Phân biệt môi trường ưu, nhược đẳng trương Phản ứng tế bào động vật loại môi tr ường Thành phần cấu trúc màng tế bào hồng cấu giúp cho thay đổi thể tích giới hạn định Thế độ bền màng tế bào hồng cầu? Ý nghĩa? Thành thạo phương pháp sử dụng dunng dịch nhược tr ương để xác định độ bền màng tế bào hồng cầu II Nguyên lí Các mơi trường bên ngồi tế bào: • Mơi trường đẳng trương: nồng độ chất tan tế bào tương đương • Mơi trường ưu trương: nồng độ chất tan bên lớn bên tế bào • Môi trường nhược trương: nồng độ chất tan bên th ấp bên tế bào Phản ứng tế bào hồng cầu loại môi trường trên: • Mơi trường đẳng trương: tế bào hồng cầu nguyên vẹn màng tế bào hồng cầu bền mơi trường đẳng trương • Mơi trường ưu trương: tế bào hồng cầu co nhăn nhúm lại chịu áp suất thẩm thấu từ bên vào, làm cho l ượng n ước tế bào ngày thấp • Môi trường nhược trương: tế bào hồng cầu trương phồng lên màng bị bung phải chịu tác động l ực gây áp suất thẩm thấu từ bên làm cho lượng nước tế bào ngày tăng lên cuối giải phóng chất từ nơi bào bên ngoài, gây t ượng huy ết tiêu 3 Thành phần cấu trúc màng tế bào hồng cầu giúp chúng thay đổi thể tích giới hạn định • Cấu tạo màng tế bào hồng cầu nhìn chung giống màng sinh chất cuả loại tế bào khác gồm lớp kép • Điểm khác biệt: mặt màng tế bào hồng cầu tồn mạng lưới vật chất có nguồn gốc protein dạng sợi, gọi spectrin Hình 2: M ạng l ưới spectrin ràng bu ộc v ới actin s ợi ng ắn • Spectrin chiếm tỉ lệ 30% tổng số protein màng ph ưc hợp hai sợi polypeptit có trọng lượng phân tử khoảng 220.000 – 240.000Da Cùng với vài loại protein khác, spectrin tham gia vào trình biến đổi hình dạng h ồng cầu thông qua việc co ngắn hay duỗi dài dạng sợi tế bào hồng cầu biến dổi hình dạng, giúp cho qua mao mạch nhỏ li ti khắp thể Hình cầu mạch 3: Tế bào hồng qua mao nhỏ • Đặc biệt lách, tế bào hồng cầu già bị thối hố v ậy sơị spectrin bị giảm khả co dãn đàn hồi , tế bào hồng cầu khơng có khả qua mao mạch bị lách tiêu huỷ Độ bền màng hồng cầu: nồng độ dung dịch muối môi trường nhược trương, khơng xảy tượng tế bào hồng cầu bị huyết tiêu III Thực hành Nhiệm vụ: Xác định nồng độ nhược trương lớn để chưa đủ gây tượng huyết tiêu, chình nồng độ bền Hố chất dụng cụ: • ống nghiệm, pipet, máy li tâm • dung dịch NaCl 2%, nước cất, máu chống đông (chứa heparin) Các bước tiến hành: - Bước 1: lấy mẫu tế bào hồng cầu gà ( chuẩn bị sẵn) • Lấy máu gà chống đơng • Li tâm tách huyết tương (1200 vòng/ phút, phút) • Rửa tế bào hồng cầu dung dịch đẳng trương NaCl 0,9 lần - Bước 2: pha dung dịch NaCl, xác định độ bền màng tế bào hồng c ầu • Chuẩn bị 10 ống li tâm, đánh số từ đến 10 • Pha vào ống nghiệm ml dung dịch muối NaCl tương ứng nồng độ 0; 0,1; 0,2;….;0,9% từ dung dịch NaCl 2% Ống nghiệm (%) 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 100 200 300 400 500 600 700 800 900 100 900 800 700 600 500 400 300 200 100 • Thêm vào ống nghiệm 100 dung dịch hồng cầu gà chuẩn bị Hình 4: ống nghiệm sau thêm hồng cầu gà, chưa li tâm IV • Để ống nghiệm vào tủ ấm 37 15 phút, li tâm 3000 vịng/phút phút • Lấy đọc kết Kết thực hành: Hình 5: kết sau li tâm Bảng số liệu sau quan sát: Ống nghiệ m Màu săc Đỏ Đỏ Đỏ Đỏ Đỏ nhạ t Tron g suốt Tron g suốt Tron g suốt Tron g suốt Tron g suốt Nhận xét giải thích: - Ống nghiệm 0, 1, 2, tương ứng chứa nồng độ dung dịch NaCl 0; 0,1; 0,2; 0,3, dung dịch có màu đỏ mơi tr ường bên ngồi t ế bào hồng cầu nhược trương, nồng độ chất tan bên th ấp h ơn bên tế bào, nước vào tế bào hồng cầu, làm cho tế bào phình lên, vơ gây tượng huyết tiêu - Ống nghiệm số chứa dung dịch NaCl 0,4%, dung dịch có màu đ ỏ nhạt bắt đầu có tượng phân lớp dung dịch h ồng c ầu chưa bị vỡ Nguyên nhân nồng độ chất tan bên ngồi 0,4% số hồng cầu bị vỡ cịn số có s ự co dãn đàn hồi spectrin nên màng tế bào nguyên vẹn - Các ống nghiệm lại dung dịch có màu suốt h ồng cầu không bị vỡ tế bào hồng cầu có co dãn đàn hồi c mạng lưới sợi spectrin, nên màng tế bào hồng cầu khơng bị v ỡ thể tích bên tế bào tăng Kết luận: Vậy độ bền màng hồng cầu nồng độ dung dịch muối môi trường nhược trương mà không gây tượng huyết tiêu 0,4 -0,5% ... 0,2;….;0,9% từ dung dịch NaCl 2% Ống nghiệm (%) 0,1 0,2 0 ,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 100 200 30 0 400 500 600 700 800 900 100 900 800 700 600 500 400 30 0 200 100 • Thêm vào ống nghiệm 100 dung dịch hồng... chuẩn bị Hình 4: ống nghiệm sau thêm hồng cầu gà, chưa li tâm IV • Để ống nghiệm vào tủ ấm 37 15 phút, li tâm 30 00 vịng/phút phút • Lấy đọc kết Kết thực hành: Hình 5: kết sau li tâm Bảng số liệu sau... sợi tế bào hồng cầu biến dổi hình dạng, giúp cho qua mao mạch nhỏ li ti khắp thể Hình cầu mạch 3: Tế bào hồng qua mao nhỏ • Đặc biệt lách, tế bào hồng cầu già bị thối hố v ậy sơị spectrin bị