Nghiên cứu này nhằm đánh giá tình hình bệnh PED và khả năng tạo kháng thể sau khi sử dụng phương pháp “gut feedback” ở đàn lợn tại tỉnh Thanh Hoá. Một cuộc điều tra được tiến hành trên 16.443 con lợn nuôi tại các trại ở 6 huyện của tỉnh bằng phiếu theo dõi kết hợp với sử dụng Test kit PED Ag và phương pháp RT-PCR
Vietnam J Agri Sci 2020, Vol 18, No 8: 599-606 Tạp chí Khoa học Nơng nghiệp Việt Nam 2020, 18(8): 599-606 www.vnua.edu.vn TÌNH HÌNH DỊCH TIÊU CHẢY CẤP (PORCINE EPIDEMIC DIARRHEA - PED) VÀ XÁC ĐỊNH KHÁNG THỂ PED SAU KHI SỬ DỤNG PHƯƠNG PHÁP “GUT FEEDBACK” Ở ĐÀN LỢN TẠI TỈNH THANH HỐ Hồng Văn Sơn1,2*, Phạm Ngọc Thạch3, Nguyễn Thị Lan3 NCS Học viện Nông nghiệp Việt Nam, 2Trường Đại học Hồng Đức Học viện Nông nghiệp Việt Nam * Tác giả liên hệ: hoangsonhdu@gmail.com Ngày nhận bài: 10.01.2020 Ngày chấp nhận đăng: 10.07.2020 TÓM TẮT Nghiên cứu nhằm đánh giá tình hình bệnh PED khả tạo kháng thể sau sử dụng phương pháp “gut feedback” đàn lợn tỉnh Thanh Hoá Một điều tra tiến hành 16.443 lợn nuôi trại huyện tỉnh phiếu theo dõi kết hợp với sử dụng Test kit PED Ag phương pháp RT-PCR Sử dụng phương pháp test ELISA để xác định kháng thể phương pháp “gut feedback” 60 lợn nái chửa tuần thứ 13 Kết cho thấy tỷ lệ mắc PED lợn Thanh Hoá 14,56% tỷ lệ tử vong 53,38% Trong tỷ lệ mắc bệnh cao đàn lợn thuộc huyện Tĩnh Gia (16,12%), đàn lợn thuộc huyện Yên Định có tỷ lệ mắc bệnh thấp (12,08%) Tỷ lệ mắc bệnh tử vong cao nhóm lợn theo mẹ (22,01% 72,63%) thấp nhóm lợn đực giống (5,81% 0%) Lợn mắc bệnh tử vong cao mùa Đông thấp mùa Hè Các trại lớn có tỷ lệ mắc bệnh cao (15,79%) tỷ lệ tử vong lại thấp (50,75%) Sau sử dụng phương pháp “gut feedback” 100% mẫu kháng thể có OD từ 0,05 đến 1,04 Ở thời điểm 14 ngày có 78,33% mẫu 21 ngày có 80,00% mẫu có OD ≥ Cut off: Dương tính, với Cut off có giá trị = 0,21 Từ khố: Dịch tiêu chảy cấp lợn (PED), tình hình mắc bệnh, Gut feedback, kháng thể, Thanh Hoá The Prevalence of Porcine Epidemic Diarrhea (PED) and Detection of Antibody against PED Virus in Pigs Infected by “Gut Feedback” Method in Thanh Hoa Province ABSTRACT A survey on the prevalence of PED and detection of antibody against PED virus in pigs infected by “gut feedback” method was conducted in Thanh Hoa province A total of16.443 pigs raised in six districts of Thanh Hoa province was daily observed, the pigs with symptoms of PED were confirmed by PED Ag Test kits and RT-PCR technique.A total of sixty gestation sows (at 13th weeks of pregnancy) was used in an experiment to detect antibodies against PED virus by protein-based enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) testing method The results showed that the prevalence of PED in pigs in Thanh Hoa province was 14.56% with the case fatality rate (CFR)was 53.38% Of all districts, the prevalence was the highest in Tinh Gia district (16.12%), while it was the lowest in Yen Dinh district (12.08%) The prevalence and CFR of PED were the highest in suckling pigs (22.01% and 72.63%, respectively) but they were lowest in boars (5.81% and 0%, respectively) In this study, the prevalence of PED was higher in the winter than in the summer (33% and 18%, respectively) The size of farms has also affected the results, in which the large farm showed the highest prevalence (15.79%) but the lowest CFR (50.75%) The results indicated that after infected with PED by “gut feedback” method, all of the serum samples from experimental pigs presented antibodies against PED virus At 14 days and 21 days after infection, the percentages of pigs showed positive results to antibodies against PED virus were 78.33% and80.00%, respectively Keywords: Porcine Epidemic Diarrhoea (PED), infection, Gut feedback, antibody concentration, Thanh Hoa 599 Tình hình dịch tiêu chảy cấp (Porcine Epidemic Diarrhea - PED) xác định kháng thể PED sau sử dụng phương pháp “Gut Feedback” đàn lợn tỉnh Thanh Hoá ĐẶT VẤN ĐỀ Dịch tiêu chảy cấp (PED) bệnh truyền nhiễm, virus thuộc nhóm Coronavirus gây ra, virus có cấu trúc phức tạp, đa dạng chủng mối quan hệ dạng đột biến với chức virus (Puranaveja & cs., 2009) Bệnh phát lần đầu Anh vào năm 1971 với đặc điểm lây lan nhanh, gây ói mửa, tiêu chảy nặng lợn lứa tuổi năm sau bệnh xuất Nhật, Trung Quốc nhiều nước Châu Âu, bệnh phân bố khắp nơi giới (Pospischil & cs., 2002; Song & Park, 2012) Năm 2013, dịch bệnh lây lan 200 trại nuôi lợn khắp nước Mỹ, 17 bang có dịch bệnh vòng tháng, với tỷ lệ chết lợn từ 50-100% (Huang & cs., 2013; Stevenson & cs., 2013) tạo kháng thể chủ động Nghiên cứu mục đích cung cấp số liệu tình hình bệnh PED xác định khả tạo kháng thể sau sử dụng phương pháp “gut feedback” đàn lợn để nhà Thú y phân tích dự báo trình tiến triển bệnh nhằm xây dựng biện pháp xử lý, giảm bớt thiệt hại dịch bệnh gây PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng phạm vi - Lợn nuôi trại lợn thuộc huyện có số lượng lợn đặc điểm địa lý đặc thù cho tỉnh Thanh Hố là: huyện Yên Định Nông Cống (vùng đồng bằng), huyện Hoằng Hoá Tĩnh Gia (vùng ven biển), huyện Như Thanh Thạch Thành (vùng trung du miền núi) Ở Việt Nam, theo Do Tien Duy & cs (2011) Nguyễn Tất Toàn (2012), bệnh phát từ năm 2008 số tỉnh phía Nam với tỷ lệ bệnh độ tuổi đến 100%, tỷ lệ chết khác độ tuổi, đặc biệt cao lợn theo mẹ (50-100%) Ở khu vực phía Bắc, nghiên cứu tình hình dịch tiêu chảy cấp (PED) xảy 26 trại số tỉnh cho thấy, bệnh thường bùng phát vào mùa lạnh (từ tháng 11 đến tháng 4), lây lan nhanh, tỷ lệ lợn biểu tiêu chảy cao (trung bình 76,8%) Lợn tất lứa tuổi bị tiêu chảy (có thể lên tới 100%), tỷ lệ chết cao lợn theo mẹ (68,6%100%) Có khác biệt lớn mức độ cảm nhiễm, tỷ lệ biểu tiêu chảy, tỷ lệ chết, thời gian tiêu chảy trại nhóm tuổi, giới tính (Nguyễn Trung Tiến & cs., 2013; Nguyễn Văn Điệp & cs., 2014; Huỳnh Minh Trí & cs., 2017) - Lợn chia theo nhóm: lợn theo mẹ, lợn cai sữa, lợn thịt, lợn nái lợn đực giống Thanh Hố tỉnh có số lượng đàn lợn lớn.Theo Cục Thống kê Thanh Hoá thời điểm 01/4/2018, tồn tỉnh có 717.358 lợn, có 258.767 ni trại Tình hình bệnh PED xảy đàn lợn trại tỉnh, người chăn ni gặp nhiều khó khăn cơng tác kiểm sốt bệnh Để kiểm sốt dịch bệnh phương pháp “gut feedback” áp dụng (Thai Swine Veternary Association, 2015) Đây phương pháp dùng chất chứa mầm bệnh lợn mắc bệnh để gây nhiễm cho lợn khoẻ khác nhằm - Lấy 60 mẫu có kết RT-PCR dương tính với virus PED để tạo chế phẩm sử dụng phương pháp “Gut feedback”: Lấy toàn ruột (cả ruột non ruột già) lợn tuần tuổi xác định bị bệnh PED 600 - Quy mô đàn mức: Gia trại: Dưới 20 lợn nái 100 lợn thịt; Trại nhỏ: từ 20-50 lợn nái từ 100-250 lợn thịt; Trại lớn: 50 lợn nái 250 lợn thịt (Thông tư số 69/2000/TTLB-BNN-TCTK) 2.2 Lấy mẫu bệnh phẩm - Lấy mẫu bệnh phẩm xét nghiệm (phân hậu môn, ruột non) từ lợn có triệu chứng điển hình bệnh sau sử dụng Test kit PED Ag hãng Zoetis để sàng lọc, mẫu dương tính vận chuyển phịng thí nghiệm trọng điểm Cơng nghệ Sinh học Thú y Học viện Nông nghiệp Việt Nam để xác định có mặt virus PED phương pháp Real time Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Xác định lợn mắc bệnh PED Lợn trại theo dõi trực tiếp điền thông tin vào phiếu theo dõi Sau điều tra xác định đàn lợn nghi mắc PED, Hoàng Văn Sơn, Phạm Ngọc Thạch, Nguyễn Thị Lan tiến hành chọn đàn 1-2 lợn có biểu lâm sàng điển hình (tiêu chảy phân vàng xám, gầy sút nhanh, giảm ăn (bú), nằm dồn đống nằm bụng mẹ), sau tiến hành chẩn đốn nhanh Test kit PED Ag RT-PCR để xác định xác bệnh Những lợn lại đàn có biểu tương tự lợn có kết Test kit PED Ag RT-PCR dương tính xác định mắc PED 2.3.2 Xác định tỷ lệ mắc bệnh, tỷ lệ chết, tỷ lệ tử vong theo địa phương, theo đối tượng lợn, theo mùa năm quy mô đàn Tỷ lệ mắc bệnh (%) = Tỷ lệ chết (%) = Số mắc bệnh ×100 Tổng số theo dõi Số chết ×100 Tổng số theo dõi Tỷ lệ tử vong (%) = Số chết Tổng số mắc bệnh ×100 - Trộn 15ml chế phẩm “gut feedback” PED với 50g thức ăn cho ăn trước bữa ăn để lợn ăn hết Dùng đến lợn nái có biểu tiêu chảy, sau ngày khơng tiêu chảy dừng - Phương pháp xác định kháng thể sau sử dụng chế phẩm “gut feedback”: Lấy máu vịnh tĩnh mạch cổ lợn nái, dùng phương pháp “gut feedback” PED 14 21 ngày để kiểm tra kháng thể huyết Lấy máu vào sáng sớm trước cho ăn Dùng xilanh 5ml, lấy 3ml máu vào xilanh lấy 1ml khơng khí sau để nghiêng xilanh góc 45 để yên tĩnh cho máu đông Bảo quản nhiệt độ 2-8C, đưa phịng thí nghiệm thời gian nhanh nhất, không để ngày Sử dụng phương pháp test ELISA theo ISO/IEC 17025:2005 để xác định kháng thể huyết lợn nái dùng “gut feedback” PED Kết kháng thể số OD, OD ≥ Cut off: Dương tính Cut off có giá trị = 0,21 2.4 Địa điểm nghiên cứu 2.3.3 Phương pháp chế chếphẩm “Gut feedback” - Bước 1: Lấy ruột (cả ruột non ruột già) lợn tuần tuổi có kết dương tính với Test kit PED Ag RT-PCR, với biểu lâm sàng điển hình đem xay nhuyễn Phản ứng RT-PCR ELISA thực Phịng thí nghiệm trọng điểm Cơng nghệ sinh học Thú y-Học viện Nông nghiệp Việt Nam 2.5 Xử lý số liệu -Bước 2: Cho dung dịch nước muối sinh lý 0,9% vào với tỷ lệ 1/5 (1 phần ruột, phần nước muối sinh lý 0,9%) để chế phẩm Số liệu xử lý chương trình thống kê Minitab 16 với phương pháp Chi bình phương (2) để so sánh nhóm đối tượng lợn hay huyện - Bước 3: Cho Amoxicillin Colistin 10% liều 300ppm (để tiêu diệt vi khuẩn), tiếp tục xay (lắc) 1-2 phút chế phẩm “gut feedback” PED KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN - Bước 4: Đổ chế phẩm dụng cụ vô trùng bảo quản nhiệt độ 2-8C 2.3.4 Quy trình sử dụng phương pháp xác định kháng thể sau sử dụng chế phẩm “gut feedback” - Thí nghiệm thực 60 lợn nái mang thai tuần thứ 13 âm tính với PED 3.1 Tình hình dịch tiêu chảy cấp đàn lợn ni tỉnh Thanh Hố 3.1.1 Tình hình dịch tiêu chảy cấp đàn lợn ni huyện tỉnh Thanh Hố Kết theo dõi tình hình dịch PED đàn lợn số gia trại trang trại chăn nuôi huyện Thanh Hoá thể qua bảng 601 Tình hình dịch tiêu chảy cấp (Porcine Epidemic Diarrhea - PED) xác định kháng thể PED sau sử dụng phương pháp “Gut Feedback” đàn lợn tỉnh Thanh Hố Bảng Tình hình dịch tiêu chảy cấp đàn lợn nuôi huyện tỉnh Thanh Hoá Địa điểm (huyện) Số lợn điều tra (con) Số lợn mắc (con) Số lợn chết (con) Hoằng Hoá 2.771 398 198 Như Thanh 1.757 293 Tỷ lệ mắc bệnh (%) 14,36 149 16,68 2.982 414 207 Thạch Thành 3.459 521 294 15,06 Tĩnh Gia 2.642 426 241 16,12 2.832 342 189 Tổng 16.443 2.394 1.278 bce 7,15 bdfgh Nông Cống Yên Định Tỷ lệ chết (%) 13,88 8,48 bc Tỷ lệ tử vong (%) ace 49,75 aceg 50,85 ac 50,00 6,94 a acd ac bceg 8,50 bdfgh 56,43 bcef bdegh 9,12 bdfgh 56,57 bcef a 55,26 12,08 a 6,67 acd Trung bình 14,56 7,77 53,38 P