Bước đầu xây dựng tiêu chuẩn cơ sở dược liệu thịt quả đào tiên (crescentia cujete l )

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC  - - NGUYỄN THỊ THANH THÚY ̀ ĐÂU XAY DƯNG BƯƠC THỊT QUẢ ĐÀO TIÊN (Crescentia cujete L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC HÀ NỘI- 2019 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC  - - NGUYỄN THỊ THANH THÚY ̀ ĐÂU XAY DƯNG BƯƠC THỊT QUẢ ĐÀO TIÊN (Crescentia cujete L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌCNGÀNH DƯỢC HỌC KHÓA: QH.2014 Người hướng dẫn: PGS.TS NGUYỄN THANH HẢI TS NGUYỄN THỊ HẢI YẾN HÀ NỘI- 2019 Lời cảm ơn Sau thời gian thực đề tài với nhiều nỗ lực cố gắng, thời điểm hồn thành khóa luận lúc tơi xin phép bày tỏ lịng biết ơn chân thành với người dạy dỗ, hướng dẫn giúp đỡ suốt thời gian qua Trước hết, xin gửi lời cảm ơn chân thành lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Thanh Hải, TS Nguyễn Thị Hải Yến, người tận tình hướng dẫn, hết lòng bảo tạo điều kiện giúp đỡ tơi suốt q trình nghiên cứu hồn thành khóa luận Tơi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến giảng viên thuộc Bộ môn Bào chế Công nghệ dược phẩm, Bộ môn Dược liệu Dược học cổ truyền, Bộ mơn Hóa dược Kiểm nghiệm thuốc, Khoa Y Dược, Đại học Quốc Gia Hà Nội giúp đỡ nhiều trình làm thực nghiệm trườ ng Xin cảm ơn Ban giám hiệu, Phòng đào tạo, phòng ban tạo điều kiện giúp đỡ tơi hồn thành khóa luận Cảm ơn thầy Khoa Y Dược, ĐHQGHN quan tâm dìu dắt truyền kiến thức cho năm học vừa qua Và cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè ln theo sát động viên, quan tâm giúp tơi hồn thành khóa luận Dù cố gắng, lần đầu làm nghiên cứu tơi khó tránh khỏi thiếu sót Tơi mong nhận ý kiến đóng góp thầy để khố luận thêm hồn thiện Một lần xin chân thành cảm ơn giúp đỡ quý báu Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Sinh viên Nguyễn Thị Thanh Thúy DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Kí hiệu CD CTCT CTPT DPPH EtOH MS PTN STT TT DANH MỤC CÁC BẢNG Tên bảng Bảng 1: Danh sách thực vật chi Crescentia Bảng 2: Giá trị trung bình nồng độ khống chất có trái Crescentia cujete L Bảng 3: Các hợp chất bật Crescentia cujete L Bảng 4: Các chất thuộc nhóm p-hydroxybenzoyloxy Bảng 5: Các hợp chất thuộc nhóm n- alkyl glycosid Bảng 6: Độ ẩm bột thịt đào tiên Bảng 7: Độ ẩm thịt đào tiên tươi Bảng 8: Tỷ lệ tro toàn phần dược liệu đào tiên Bảng 9: Tỷ lệ tro không tan acid dược liệu đào tiên Bảng 10: Kết định tính mẫu tươi Bảng 11: Kết định tính mẫu khơ Bảng 12: Độ hấp thụ quang dãy dung dịch chuẩn Bảng 13: Kết xác định độ lặp lại phương pháp đo quang Bảng 14: Kết xác định độ phương pháp đo quang Bảng 15: Một số số c dầu hạt đào tiên Bảng 16: Thành phần dầu hạt đào tiên DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Tên hình, đồ thị Hình 1: Cây đào tiên Hình 2: Quả hạt đào tiên Hình 3: Công thức cấu tạo iridoid Crescentia cujete L Hình 4: Hoạt tính chống oxi hóa Cresscentia cujete L dung mơi chiết Hình 5: Bảng xác định đường glucoza Hình 6: Ruột tươi Đào tiên Hình 7: Ruột khơ đào tiên Hình 8: Vi phẫu thịt Hình 9: Bột thịt đào tiên kính hiển vi Hình 10: Phổ hấp thụ dung dịch khoảng bước sóng từ 330-800nm Hình 11: Đồ thị biểu diễn phụ thuộc mật độ quang vào nồng độ chất chuẩn bước sóng 347,5nm Hình 12: Sắc ký đồ acid béo dầu hạt đào tiên MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN VỀ CRESCENTIA CUJETE L 1.1 TỔNG QUAN VỀ CHI CRESCENTIA 1.2 TỔNG QUAN VỀ DƯỢC LIỆU CRESCENTIA CUJETE L (QUẢ ĐÀO TIÊN) 1.2.1 Thành phần hóa học 1.2.2 Tác dụng dược lý 15 1.2.3 Công dụng 17 1.2.4 Độc tính 17 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Nguyên liệu, hóa chất máy móc, thiết bị 19 2.2 Phương pháp nghiên cứu 20 2.2.1 Mô tả 20 2.2.2 Vi phẫu 20 2.2.3 Độ ẩm 20 2.2.4 Tro toàn phần 20 2.2.5 Tro khơng tan acid 2.2.6 Định tính 21 21 2.2.7 Định lượng 25 2.2.8 Nghiên cứu dầu từ hạt đào tiên 25 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 35 3.1 Mô tả 35 3.2 Đặc điểm vi phẫu thịt soi bột 36 3.3 Độ ẩm 37 3.4 Tro toàn phần 37 3.5 Tro không tan acid 38 3.6 Định tính 39 3.7 Định lượng 41 3.8 Nghiên cứu dầu từ hạt đào tiên 25 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 47 Tài liệu tham khảo 49 ĐẶT VẤN ĐỀ Ngày giới, xu hướng tìm kiếm sử dụng sản phẩm chăm sóc sức khỏe có nguồn gốc tự nhiên ngày tăng Con người có khuynh hướng sử dụng nhiều thuốc có nguồn gốc từ thiên nhiên Việt Nam khơng nằm ngồi xu hướng Điều kiện tự nhiên ưu đãi cho đất nước ta có hệ sinh thái phong phú đa dạng, có tiềm to lớn tài nguyên thuốc Đất đai khí hậu nhiệt đới gió mùa phù hợp với nhiều loại trồng, có nhiều lồi thuốc q Đây tiền đề tốt để ngành Dược phát triển thuốc từ Dược liệu [8] Cây Đào tiên có tên khoa học Crescentia cujete L., loại thân gỗ, sống lâu năm thuộc họ Chùm Ớt (Bignoniaceae) Quả c đào tiên có hình cầu trơng giống bưởi vừa phải, màu xanh lục bóng, đường kính 6-12 cm, đến 20cm.Trong dân gian người ta hay s dụng thịt đào tiên tươi khô ngâm với rượu để uống nhằm đem lại tác dụng chữa bệnh Công dụng đào tiên biết đến bồi bổ sức khỏe, chữa ho, nhuận tràng [9] Theo số nghiên cứu nước ngồi thịt đào tiên cịn có tác dụng dược lý như: hoạt tính kháng khuẩn từ chiết xuất thịt [28], tác dụng chống oxi hóa [26], tác dụng hạ đường huyết thử nghiệm chuột [25].… Đây loại hữu ích tiềm việc nghiên cứu phát triển thuốc từ dược liệu Tuy nhiên, nay, nước ta nghiên cứu loại Vì việc xây dựng tiêu chu ẩn sở cho dược liệu điều cần thiết Để góp phần cung cấp nh ững sở tiền đề cho nghiên cứu sau này, thực đề tài: "Bước đầu xây dựng tiêu chuẩn sở dược liệu thịt đào tiên" với mục tiêu sau: - Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu với số tiêu chí chung Dược điển Việt Nam IV - Bước đầ u nghiên cứu dầu từ hạt đào tiên CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN VỀ CRESCENTIA CUJETE L 1.1 TỔNG QUAN VỀ CHI CRESCENTIA Chi Crescentia thuộc họ Chùm Ớt (Bignoniaceae) thuộc nhóm thực vật hạt kín (thực vật có hoa) Crescentia chi sáu lồi thực vật có hoa thuộc họ Chùm Ớt, phân bố chủ yếu vùng nhiệt đới Châu Mỹ, châu Phi, châu Úc vùng Đông nam Á [5], [7] Lồi có kích thước vừa phải, cao tới 10m tạo hình cầu lớn, vỏ mỏng, cứng cùi mềm, đường kính lên đến 25cm [41] Cây gỗ nhỏ hay lớn, mọc so le, đơn Hoa nách lá, có tràng hoa hình ống lớn, phình bụng, mọng Hạt nhiều, kích thước khoảng 8mm x 9mm, mặt ngồi nhẵn, khơng có cánh, nằm lẫn [43] Theo The Plant List [40] bao gồm 45 tên thực vậ t khoa học xếp hạng loài cho chi Crescentia Trong số có tên lồi chấp nhận Dưới tên lồi đó: Bảng 1: Danh sách thực vật chi Crescentia Crescentia cujete Crescentia linearifolia Crescentia portoricensis Crescentia cujete L Theo tài liệu thực vật nước nước ngồi, vị trí Đào tiên xếp bậc taxon sau [4, 5, 6, 14]: *Mẫu tươi X= 10.10.0,99.100.1,25.1.(100 − 84,12) c, Thẩm định đánh giá phương pháp Xác định khoảng tuyến tính Tiến hành pha dãy dung dịch chuẩn glucose với nồng độ bảng Hút xác 1ml dung dịch chuẩn, 4ml dung dịch thử 1, 4ml dung dịch thử vào bình định mức 10ml sau cho nước cất đến vạch Khuấy đều, đun cách thủy Làm nguội vòi nước Sau dung dịch nguội tiến hành đo quang bước sóng 347,5nm Mẫu trắng chuẩn bị song song, không chứa dung dịch chiết Dựa phần mềm excel để vẽ đồ thị đường chuẩn Bảng 12: Độ hấp thụ quang dãy dung dịch chuẩn Nồng độ (mg/ml) Abs Phương trình hồi quy tuyến tính: y = 3,6317x - 0,0015 1.4 0.8 0.6 0.4 Độ hấp thụ quang (Abs) 1.2 0.2 0 Hình 11 : Đồ thị biểu diễn phụ thuộc mật độ quang vào nồng độ chất chuẩn bước sóng 347,5nm Từ kết bảng hình cho thấy với nồng độ chất chuẩn từ 0,052- 0,54 (mg/ml) có tương quan tuyến tính nồng độ độ hấp thụ quang Ta y = 3,6317x - 0,0015 với hệ số tương quan R = 0,9989 Khảo sát độ lắp lại phương pháp Để xác đinh độ lặp lại phương pháp tiến hành với thí nghiệm riêng biệt cho mẫu chiết khô thịt đào tiên điều kiện chiết Tiến hành: Hút xác 1ml dung dịch chiết, 4ml dung dịch thử 1, 4ml dung dịch thử vào bình định mức 10ml sau cho nước cất đến vạch Khuấy đều, đun cách thủy Làm nguội vòi nước Sau dung dịch nguội tiến hành đo quang bước sóng 347,5nm Mẫu trắng chuẩn bị song song, không chứa dung dịch chiết Kết thu sau: Bảng 13: Kết xác định độ lặp lại phương pháp đo quang STT Abs Khối lượng bột khô (g) Kết bảng cho thấy phương pháp có độ lặp chấp nhận thông qua RSD= 1,576% Độ phương pháp Để xác định độ thực với dung dịch chuẩn glucose có nồng độ xác 0,135 (mg/ml) Các bước tiến hành lặp lại lần Bảng 14: Kết xác định độ phương pháp STT Abs Nồng độ Glucose (mg/ml) = t tn n Tra bảng t(0.95;5)=2,57 > ttn=2,17 Như vậy: tc > ttn: khơng có khác kết giá trị trung bình so với giá trị tham chiếu mức ý nghĩa 5%, tức phương pháp có độ đạt yêu cầu 3.7.2 Xác định hàm lượng đường tổng phương pháp Bertrand * Mẫu tươi: Khối lượng mẫu ban đầu đem định lượng 10g, thể tích KMnO4 đem chuẩn độ 24,7ml (tra bảng xác định đường glucoza tương đương với 87mg đường glucoza) Lượng dung dịch th đem làm thí nghiệm 10ml Thể tích dung dịch sau định mức 76,4ml T áp dụng cơng thức ta tính hàm lượng đường tồn phần là: X= * Mẫu khô: Khối lượng mẫu ban đầu đem định lượng 2g, thể tích KMnO4 đem chuẩn độ 25,5ml (tra bảng xác định đường glucoza tương đương với 90mg đường glucoza) Lượng dung dịch thử đem làm thí nghiệm 10ml Thể tích dung dịch sau định mức 77,5ml Từ áp dụng cơng thức ta tính hàm lượng đường tồn phần là: X= Nhận xét: Hàm lượng đường thịt khô cao thịt tươi Định lượng đườ ng phương pháp đo quang (36,23%) cho kết cao với phương pháp Bertrand (đơi với mẫu khơ) định lượng mẫu khác d ẫn tới kết khác Quá trình định lượng theo phương pháp Bertrand thực nhiều bước, kết sai số lớn dẫn tới chênh lệch kế t 3.8 Nghiên cứu dầu từ hạt đào tiên 3.8.1 Đánh giá tính chất cảm quan số lý hóa của dầu a, Mơ tả Dầu thơ chiết từ hạt đào tiên có màu vàng nâu đậm, suốt, có mùi thơm nhẹ, đặc trưng b, Chỉ số lý hóa Kết thực nghiệm ghi lại bảng Bảng 15: Một số số dầu hạt đào tiên Chỉ số acid (mg KOH/g) 4,02 Về mặt ý nghĩa số, số acid tương đối cao cho thấy dầu dễ bị phân hủy oxi hóa Cịn số cịn lại bình thường 3.8.2 Định lượng dầu thô phương pháp cân Sau trích ly dầu từ 39g hạt hệ thống soxlet cô quay chân không để tách hết dung môi thu dầu có màu vàng nâu đậm m1 = 271,74g; m2= 278,16; m = 39,04g; % chất béo = 3.8.3 Định tính thành phần acid béo của dầu phương pháp GC/MS Từ lượng dầu trích ly, tiến hành methyl hóa sau sử dụng phương pháp sắc ký khí khối phổ để định tính acid béo có dầu Thu kết sau: Hình 12: Sắc ký đồ acid béo dầu hạt đào tiên Kết phân tích GC- MS thấy peak có cường độ lớn thời gian lưu 21,949, cho thấy thành phần chiếm nhiều dầu hạt đào tiên Qua nhận dạng cấu trúc hóa học khối phổ xác định hợp chất có thời gian lưu 21,949 14,17- Octadecadienoic acid Dưới kết tóm tắt thành phần hóa học d ầ u hạt đào tiên phân tích phương pháp sắc ký khí khối phổ (GC- MS): Bảng 16: Thành phần dầu hạt đào tiên STT Qua kết thấy dầu hạt đào tiên chứa thành phần, chủ yếu 14,17- Octadecadienoic acid, Palmitic acid Hàm lượng acid béo không no chiếm nhiều tổng lượng acid có dầu hạt đào tiên, loại acid có lợi cho s ức khỏe người Đây nguồn nguyên liệu tiềm để nghiên cứu phát triển dầu ăn KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Sau thời gian thực đề tài thu kết sau: - Đã mơ tả hình thái thực vật đào tiên đặc điểm vi ph ẫ u thịt - Đã định tính xác định số nhóm chất có thịt đào tiên là: tanin phenol, flavonoid, iridoid, glycosid tim mẫu thịt tươi Trong mẫu thịt khô định tính sơ được: acid hữu cơ, acid amin, saponin, chất béo, polysacarid, tanin, saponin, flavonoid, đường khử - Đây nghiên cứu bước đầu góp phần bước hồn thành chuyên luận tiêu chuẩn sở cho dược liệu thịt đào tiên theo tiêu chuẩn DĐVN V Trong đó, độ ẩm khơng q 15% với thịt khơ 85% với thịt tươi; tro tồn phần khơng 8%; tro không tan acid không 2% Định lượng đường tổng theo phương pháp: phương pháp Bertrand phương pháp đo quang thu kết 6,72%, 7,55% với thịt tươi 35,01%, 36,23% với thịt khô - Nghiên cứu dầu từ hạt đào tiên xác định số acid, peroxid, iod, xà phịng hóa là: 4,02; 9,6; 92; 188,5 Định lượng dầu thơ tính dầu chiếm 16,44% Định tính chất có dầu phương pháp GC- MS thu chất là: Palmitoleic acid, Palmitic acid, 12,15- Octadecadienoic acid, 14,17- Octadecadienoic acid, Stearate acid, 11- Eicosenoic acid, Eicosanoic acid, Nonadecanoic acid Kiến nghị Do thời gian có hạn, đề tài xây dựng tiêu chuẩn sở với mẫu trồng Lạng Sơn Do đó, cần tiến hành nghiên cứu cỡ mẫu nhiều để việc kế t luận tiêu mang tính đại diện cho dược liệu thịt đào tiên - Đề xuấ t xây dựng tiêu định lượng thành phần chính, đặc trưng dược liệu thị t đào tiên phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao góp phần đánh giá xác hàm lượng hóa chất thực vật hữu ích có thịt đào tiên - Đề xuất xác định tỉ lệ tạp chất dược liệu, tỉ lệ vụn nát xác định hàm lượng kim loại nặng cho dược liệu thịt đào tiên - Đề xuất tiếp tục nghiên cứu hoàn thiện xây dựng tiêu chuẩn sở dược liệu thịt đào tiên để bổ sung chuyên luận dược liệu Đào tiên Dược điển Việt Nam Tài liệu tham khảo Tiếng việt [1] Bộ môn dược liệu (2010), Thực tập dược liệu, Trường đại học dược Hà Nội [2] Bộ Y tế (2007), Kiểm nghiệm dược phẩm, Nhà xuất y học, Hà Nội, tr68-79 [3] Bộ Y tế (2007), Dược điển Việt Nam IV, Nhà xuất y học, Hà Nội, tr857-862 [4] Bộ môn thực vật, Trường ĐH Dược Hà Nội (2005), Thực vật học, Nhà xuất Y học [5] Phạm Hoàng Hộ (2000), Cây cỏ Việt Nam- tậ p III, Nhà xuất trẻ, tr83- 85 [6] Võ Văn Chi (1997), Cây cỏ thường thấy Việt Nam- tập I, Nhà xuất khoa học kỹ thuật, tr136 [7] Viện Dược liệu (2006), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam- tập I, Nhà xuất khoa học kĩ thuật, tr209, 305, 747- 748 [8] Nguyễn Văn Thành, Nguyễn Hoàng Thanh Đinh Hoa Lĩnh (2004),"Luận văn Nghiên cứu số thu ốc, thuốc dân gian cộng đồng dân tộc thiểu số buôn Đrăng Phôk –vùng lõi vườn quốc gia Yokđôn –huyện Buôn Đôn –tỉnh Đaklak" [9] Đỗ Tất Lợi (1962), Cây thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất y học, Hà Nội, tr897 [10] Nguyễn Qu ốc Tuấn (2012), Xây dựng phương pháp định tính, định lượng flavonoid nụ vối, Luận văn thạc sĩ- Trường ĐH Khoa học tự nhiên [11] Nguyễ n Thị Huế (2017), Bước đầu xây dựng tiêu chuẩn sở dược liệu Tam thất hoang (Panax stipuleanatus H.T.Tsai et K.M Feng) Trồng SapaLào Cai, Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học- Khoa Y Dược, ĐHQGHN [12] Trần Hà Ngân (2010), Nghiên cứu đặc điểm thực vật thành phần hóa học Đào tiên, Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học- Trường ĐH Dược Hà Nội [13] Dược điển Việt Nam (2010), Tập IV [14] Nguyễn Thế Cường (2011), Nghiên cứu thành phần hóa học số tác dụng sinh học thịt đào tiên (Crescentia cujete Linn.), họ Núc Nác (Bignoniaceae), Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học- Trường ĐH Dược Hà Nội [15] Trần Bích Lam, Lê Xuân Hải, Nguyễn Thị Triều My, Lâm Quốc Trình (2011), “Nghiên cứu trình thu nhận dầu thơ phương pháp ép trích ly từ hạt cao su Nam Bộ”, Science and Technology Development, Vol 14, No.K3- 2011 Tiếng anh [16] Tetsuo Kaneko, Kazuhiro Ohtani, Ryoji Kasai, Kazuo Yamasaki and Nguyen Minh Duc (1997), “Iridoid and Iridoid Glucosides from fruits of Crescentia cujete”, Phytochemistry, 46, pp.907 -910 [17] Tetsuo Kaneko, Kazuhiro Ohtani, Ryoji Kasai, Kazuo Yamasaki and Nguyen Minh Duc (1998), “n-alkyl glycosides and p-hydoxybenzoyloxy glucose from fruit of Crescentia cujete”, Phytochemistry, 47, pp.259-263 [18] Michael, 2004; Burkill, 1985; Plant Database, 2004 [19] Khandaker Rayhan Mahbub, Md Mojibul Hoq, Monzur Morshed Ahmed, Animesh Sarker (2011), “In vitro Antibacterial activity of Crescentia cujete and Moringa oleifera” [20] Julia F Morton, “The Calabash (Crescentia cujete) in Folk Medicine” [21] Linda B Nielsen, Riskiono Slamet, Dieter Wege (2009), “The synthesis of 3-hydroxymethylfuro[3,2-b] naphtho [2,3-furan-5,10-dione, a novel metabolite isolated from Crescentia cujete” [22] Sinval Garcia Pereira1 & Sandra Alves de Araújo1 & Giselle Maria Skelding Pinheiro Guilhon & Lourivaldo Silva Santos &Livio Martins Costa Junior (2016), “In vitro acaricidal activity of Crescentia cujete L fruit pulp against Rhipicephalus microplus” [23] The chemical constituents of calabash ( Crescentia cujete) / Ejelonu BC, Lasisi AA,Olaremu AG and Ejelonu OC/ African Journal of Biotechnology Vol 10(84), pp 19631-19636, 26 December, 2011 / DOI: 10.5897/AJB11.1518 [24] B A Smith, F G Dollear,“Oil from calabash seed, Crescentia cujete L.”, Journal of the American Oil Chemists' Society 24(2):52-54 February 1947 / DOI: 10.1007/BF02642127 [25] C Alay-ay, A Hermoso, R Li, M Quinto, P Santos, I Tan, M Villa, R Cadiang, M Corpuz, “Hypoglycemic Effect Of Crescentia Cujete Linn (Bignoniaceae) Fruit Juice In Normal Sprague-Dawley Rats”, Planta Med 2016; 82 - PB2 / DOI: 10.1055/s-0036-1578650 [26] Syaefudin, D Nitami, M D M Utari , M Rafi and U Hasanah, “Antioxidant and Antibacterial Activities of Several Fractions from Crescentia cujete L Stem Bark Extract”, Earth and Environmental Science 197 (2018) [27] Sri Rahmaningsih, Arief Prajitno, Aulanni’am Aulanni’am, “Maftuch, Bioactive Compounds From Majapahit Fruit (Crescentia cujete) As a Potential Natural Antibacterial”, International Journal of ChemTech Research, Vol.10 No.3, pp 90-99 [28] U Hasanah, HT Widhiastuti and Syaefudin, “Potency of Ethanol Extract from Berenuk (Crescentia cujete L.) Fruit Rind and Flesh as Antibacterial Agents”, Earth and Environmental Science 187 (2018) [29] Leopold, B (1962), “Spectrophotometric Determination of Sugars Using p-Aminobenzoic Acid”, Analytical Chemistry, 34(1), 170-171 [30] Mesoamerica, A.F (2008), The Mysterious Tree, Biologist mirtha cano [31] The stephen H.B., Crescentia alata The Institute of Food and Agricultural Sciences, U.S Department of Agricultural, Cooperative Extension Service, University of Florida, IFAS, Florida A.& M [32] G Bertrand, N Gabriel Le dosage des sucres reducteurs Bul Soc Chim Paris, 35: 1285 -1299 1906 [33] GOST 31665-2012 Animal and vegetable fats and oils- Preparation of methyl esters of fatty acids Euro- Asian council for standardization, metrology and certification 2012 [34] The United Nations Conferencen on trade and Development (2005), Market Brief in the European Union for selected natural ingredients from native species Crescentia cujete, United Nation [35] David W Nellis (1997), “Poisonous plants and animal of Florida and the Caribbean”, Pineapple Press, Inc., pp.156- 157 [36] Ogbuagu, M.N (2008), “The nutritive and Anti-Nutritive Compositions of Calabash (Cresscentia cujete) Fruit pulp”, Journal of Food Technology, 6, pp.267- 270 [37] Frantisek S (1998), “The Natural Guide to Medicinal Herb Plants”, Tiger book Intenrational Plc, Twickers 8:20 [38] Finar IL (2000), “Stereochemistry and the Chemistry of Natural Products”, Organic Chemistry vol 5th Edn pp.603, 811 [39] Turner (1965), “A screening Methods in Pharmacology”, Academic Press, New York and London, pp.66-68 Internet [40] The Plant List Crescentia [Accessed: 23/3/2019] [41] Wikipedia Crescentia [Accessed: 2/4/2019] [42] Plant for a future Crescentia cujete- L [Accessed: 2/4/2019] [43] United States Department of Agriculture Crescentia cujete L [Accessed: 2/4/2019] [44] Philippine medicinal plant Cujete [Accessed: 2/4/2019] [45] Vĩnh Sinh Ngọc Hà, 2015 Đào Tiên [Ngày truy cập 16/5/2019] ... "Bước đầu xây dựng tiêu chuẩn sở dược liệu thịt đào tiên" với mục tiêu sau: - Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu với số tiêu chí chung Dược điển Việt Nam IV - Bước đầ u nghiên cứu dầu từ hạt đào tiên. .. ( %) Potassium ( %) Sodium (ppm) Manganese (ppm) Iron (ppm) Zinc (ppm) Copper (ppm) Phosphorus (ppm) Lead (ppm) Chromium (ppm) Nickel (ppm) Cobalt (ppm) Cadmium (ppm) Selenium (ppm) Arsenic (ppm)... gọi Calabacero (Tây Ban Nha), Cujeté (Brazil), Totumo (Panama, Colombia, Venezuela Peru), Tutumo (Bolivia), Taparo (Venezuela), Mate (Ecuador), Huinga (Peru), Pate (Peru), Cuyabra (Colombia), Morro