Xây dựng tiêu chuẩn cơ sở dược liệu sâm vũ diệp (panax bipinnatifidus)

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Sâm là dược liệu quý có giá trị cao được sử dụng trong nhiều bài thuốc y học cổ truyền.. Đề tài này là một phần trong đề tà

Trang 1

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI

Trang 2

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI

Trang 3

LỜI CẢM ƠN

Sau một thời gian thực hiện đề tài với nhiều nỗ lực và cố gắng, thời điểm hoàn thành luận văn là lúc tôi xin phép được bày tỏ lòng biết ơn chân thành của mình với những người đã dạy dỗ, hướng dẫn, dìu dắt và giúp đỡ tôi trong suốt thời gian qua

Đầu tiên tôi xin gửi lời cám ơn đến toàn thể Ban Giám hiệu Khoa Y Dược, Đại học Quốc Gia Hà Nội và Bộ môn Hóa dược và Kiểm nghiệm thuốc

đã tạo điều kiện cho tôi được làm khóa luận tốt nghiệp Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô giáo trong trường đã dìu dắt, giúp đỡ tôi hoàn thành chương trình học tập suốt 5 năm qua

Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc và tri ân tới GVHD, TS Nguyễn Hữu Tùng, người đã dành nhiều thời gian và tâm huyết hướng dẫn, giúp đỡ tôi trong quá trình thực hiện đề tài

Tôi cũng xin cảm ơn tập thể lớp Dược học khóa QH.2014.Y đặc biệt là các bạn Hà, Nhung, Thảo, Vân đã luôn đồng hành cùng tôi trong suốt thời gian qua Đồng thời xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến thành viên trong nhóm nghiên cứu của tôi chị Đặng Thị Ngần, Nguyễn Thị Thu Thủy người đã nhiệt tình giúp đỡ và chỉ bảo tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài

Tôi cũng xin cảm ơn đề tài cấp Nhà nước: “Ứng dụng các giải pháp khoa học công nghệ để phát triển nguồn nguyên liệu và tạo sản phẩm từ

hai loài cây thuốc Sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) và Tam thất hoang (Panax stipuleanatus Tsai & Feng) vùng Tây Bắc”,mã số: KHCN-

TB.07C/13-18, 2015- 2017 (Chương trình Tây Bắc) của PGS.TS Dương Thị

Ly Hương chủ nhiệm đã tài trợ kinh phí để tôi thực hiện nội dung nghiên cứu này

Cuối cùng, tôi vô cùng biết ơn gia đình đã nuôi dạy, khích lệ và sát cánh, giúp tôi có thêm động lực cố gắng để có kết quả như ngày hôm nay

Một lần nữa, xin chân thành cảm ơn!

Trang 4

Hà Nội, ngày 10 tháng 05 năm 2019

Sinh viên

Nông Mỹ Hoa

Trang 5

DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT

SVD Sâm vũ diệp

HPLC Sắc ký lỏng hiệu năng cao (High performace liquid

chromatography)

UV Ultra violete

FLD Đầu dò huỳnh quang

DAD Detector mảng điốt (Detector Diod Array)

Rf Hệ số di chuyển

RSD Độ lệch chuẩn tương đối (Relative Standard Deviation)

R2 Hệ số tương quan tuyến tính

LOD Giới hạn phát hiện (Limit of Detection)

LOQ Giới hạn định lượng (Limit of Quantitation)

SKLM Sắc ký lớp mỏng

Trang 6

DANH MỤC CÁC BẢNG

Bảng 1.1 Các hợp chất saponin đã phân lập từ Sâm vũ diệp 7 Bảng 3.1 Kết quả xác định độ ẩm của các mẫu Sâm vũ diệp 22 Bảng 3.2 Kết quả xác định tro toàn phần của các mẫu Sâm vũ diệp 22 Bảng 3.3 Kết quả xác định độ tro không tan trong acid của các mẫu

Sâm vũ diệp

23

Bảng 3.6 Kết quả khảo sát khoảng tuyến tính của stipuleanosid R2 29

Bảng 3.8 Hàm lượng stipuleanosid R2 trong các mẫu Sâm vũ diệp 31

Trang 7

Hình 3.3 Sắc ký đồ TLC định tính dược liệu Sâm vũ diệp 23 Hình 3.4 Sắc ký đồ dung dịch mẫu trắng, mẫu chuẩn và mẫu thử 27 Hình 3.5 Đồ thị biểu diễn đường chuẩn của stipuleanosid R2 29 Hình 3.6 Sắc ký đồ HPLC của stipuleanosid R2 (A) và dược liệu

Sâm vũ diệp (B)

31

Trang 8

MỤC LỤC

DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT

DANH MỤC CÁC BẢNG

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

CHƯƠNG 1 - TỔNG QUAN 3

1.1 TỔNG QUAN VỀ SÂM VŨ DIỆP 3

1.1.1 Tên khoa học 3

1.1.2 Đặc điểm thực vật 3

1.1.3 Đặc điểm phân bố và sinh thái 4

1.1.4 Thành phần hóa học 5

1.1.5 Tác dụng dược lý 8

1.1.6 Công dụng 8

1.2 TỔNG QUAN VỀ TIÊU CHUẨN DƯỢC LIỆU 8

CHƯƠNG 2 – ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 11

2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 11

2.1.1 Nguyên liệu 11

2.1.2 Dung môi, hóa chất 12

2.1.3 Máy móc, thiết bị 12

2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13

2.2.1 Mô tả 13

2.2.2 Vi phẫu 13

2.2.3 Soi bột 13

Trang 9

2.2.4 Độ ẩm 13

2.2.5 Tro toàn phần 13

2.2.6 Tro không tan trong acid 14

2.2.7 Tạp chất 14

2.2.8 Định tính 15

2.2.9 Định lượng 16

3.1 Mô tả 20

3.2 Vi phẫu 20

3.3 Soi bột 21

3.4 Độ ẩm 21

3.5 Tro toàn phần 22

3.6 Tro không tan trong acid 22

3.7 Định tính 23

3.8.Định lượng 24

3.9 Bàn luận 32

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO

PHỤ LỤC I: PHIẾU GIÁM ĐỊNH TÊN KHOA HỌC

PHỤ LỤC II: DỰ THẢO TIÊU CHUẨN CƠ SỞ DƯỢC LIỆU SÂM VŨ DIỆP

Trang 10

1

ĐẶT VẤN ĐỀ

Sâm là dược liệu quý có giá trị cao được sử dụng trong nhiều bài thuốc

y học cổ truyền Hiện nay, nhiều loài trong chi Sâm (Panax), đặc biệt là các loài nhân sâm (Panax ginseng C.A Meyer), sâm Việt Nam (Panax

vietnamensis Ha et Grushv.), tam thất (Panax notoginseng (Burk.) F.H Chen

ex C.Y Wu et K.M Feng; syn.: P pseudoginseng all.), sâm Nhật (Panax

japonicus C.A.Meyer), sâm Mỹ (Panax quynquefolius L.), sâm Siberia

(AcanthoPanax senticosus (Rupr et Maxim.) Harms; syn.: Eleutherococcus

senticosus Maxim.) , là những cây thuốc quý, được ưa chuộng, rất nổi tiếng

và có giá trị cao Sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) là một cây thuốc

quý đang được sử dụng trong các bài thuốc truyền thống và có tiềm năng để phát triển thành sản phẩm chăm sóc sức khỏe như các loài khác cùng chi [2,14]

Ngày nay, xu hướng sử dụng các sản phẩm chăm sóc sức khỏe có nguồn gốc tự nhiên ngày càng tăng kèm theo đó là sự làm hàng giả, hàng nhái, hàng kém chất lượng cũng tăng theo Điều này gây ảnh hưởng xấu đến sức khỏe con người và gây mất lòng tin của người sử dụng đối với thuốc và các sảm phẩm từ dược liệu Để có thể sử dụng dược liệu làm nguyên liệu làm thuốc thì đòi hỏi cần phải xây dựng các tiêu chuẩn chất lượng, đồng thời xây dựng các phương pháp thử để đánh giá các tiêu chuẩn đó Do đó, chúng tôi

thực hiện đề tài: “Xây dựng tiêu chuẩn cơ sở dược liệu Sâm vũ diệp

(Panax bipinnatifidus Seem.)” Đề tài này là một phần trong đề tài cấp bộ

“Ứng dụng các giải pháp khoa học công nghệ để phát triển nguồn nguyên

liệu và tạo sản phẩm từ hai loài cây Sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) và Tam thất hoang (Panax stipuleanatus H.Tsai et K.M.)” của

Khoa Y Dược Đại Học Quốc Gia Hà Nội

Mục tiêu đề tài: xây dựng tiêu chuẩn cơ sở của dược liệu Sâm vũ diệp

Để đạt được mục tiêu trên, đề tài thực hiện với các nội dung sau:

Trang 11

Trang 12

cm [3] Lá kép chân vịt, mọc vòng ở ngọn, thường gồm 2 - 3 cái [3] Lá kép

có 3 - 7 lá chét, thuôn dài 2,5 - 14 cm, rộng 1,5 - 4 cm, gốc tròn, đầu thuôn thành mũi nhọn, xẻ thùy lông chim không đều, mép khía răng, có lông [1]

Hình 1.1 Hình ảnh Sâm vũ diệp [15]

Trang 13

4

Cụm hoa tán đơn, mọc ở ngọn; cuống cụm hoa 5 - 10 cm, mang từ 20 -

90 hoa; cuống hoa mảnh, dài 1 - 1,5 cm Hoa màu trắng lục, 5 lá dài nhỏ, 5 cánh hoa, 5 nhị, bầu 2 - 3 ô, đầu vỏ nhụy chẻ đôi Quả mọng, hình cầu hơi dẹt, đường kính 0,6 - 1,2 cm, khi chín màu đỏ, có chấm đen to ở đầu Chứa 2 - 3 hạt, hình cầu, màu xám trắng, vỏ cứng, có rốn hạt [1,3]

1.1.3 Đặc điểm phân bố và sinh thái

SVD đặc biệt ưa ẩm và ưa bóng, mọc rải rác dưới tán rừng kín thường xanh núi cao, ở độ cao từ 1600 – 2300 m [3] SVD sinh trưởng và phát triển mạnh trong mùa mưa ẩm Hàng năm vào cuối tháng 2 đầu tháng 3, từ phần đầu mầm thân rễ phân nhánh ngang nằm sát mặt đất sẽ mọc lên một hoặc vài chồi thân (tùy thuộc vào số đầu mầm thân rễ phân nhánh) Chồi này sinh trưởng nhanh trong vòng một tháng đã ra lá và gần đạt được chiều cao cực đại Đến tháng 4, mỗi thân mang lá có thể cho ra một cụm hoa Quả xanh quan sát được vào cuối tháng 4 – 6, đến tháng 7 quả đã chín và rụng xuống xung quanh gốc cây mẹ Do quả chín đúng vào thời kì có lượng mưa lớn tháng 7 – 8 nên hạt giống thường bị cuốn trôi, ảnh hưởng đến khả năng tái sinh tự nhiên của SVD Sau khi quả chín, từ tháng 9 đến tháng 10, toàn bộ phần thân trên mặt đất tàn lụi qua mùa đông để lộ ra những vết sẹo trên thân

rễ khá rõ – dấu hiệu giúp cho xác định tuổi của cây Cũng vào lúc này chồi mới bắt đầu hình thành ở phía đầu thân rễ Phương thức sinh trưởng này làm cho phần thân rễ ngày một phát triển thêm về chiều dài [1]

Trong tự nhiên, SVD phân bố ở Trung Quốc, Ấn Độ, Nê Pan ( vùng cận Himalaya) và điểm phân bố cuối cùng của sâm vũ diệp về phía nam là Sa

Pa của Việt Nam, ở khu vực núi Hoàng Liên Sơn ( Sa Pa, Bát Xát, Than Uyên,…) Do hậu quả của nạn phá rừng và khai thác bừa bãi, vùng phân bố SVD ở nước ta đã bị thu hẹp dần, SVD đang phải đối mặt với nguy cơ tuyệt chủng và việc bảo vệ đang được ưu tiên ở Việt Nam [1,16]

Hiện nay, SVD đang được trồng thử nghiệm ở Sa Pa (Lào Cai) và Hà Giang và cho những kết quả khả quan [15,16]

Trang 14

Năm 1989, nhóm nghiên cứu Trung Quốc công bố phân lập 13 saponin khung dammaran từ lá của cây này ở Trung Quốc trong đó bao gồm một số ginseng saponin đặc trưng như ginsenosid F, F2, F3, Rg2, Rb, Rd, Re, Rb3, 24(S)-pseudoginsenosid F11, panasenosid, majorosid F1 và bipinnatifidusosid

F1, F2 [23,24]

Rễ SVD chứa saponin thuộc nhóm oleanan gồm những chất như chikusetsusaponin IV, zingibrosid R1, ginsenosid R0, Rb1, Rd, Re, Rg1 và Rg2[1] Nhóm nghiên cứu Việt Nam - Hàn Quốc năm 2011, phân lập một nhóm

10 saponin khung oleanan (hình 1.2) từ dịch chiết methanol của rễ SVD thu hái ở núi Hoàng Liên Sơn, Việt Nam, trong đó có 3 chất mới bifinosid A-C và bảy hợp chất được biết bao gồm narcissiflorin methyl este, chikusetsusaponin IVa, pseudoginsenosid RP1 methyl este, stipuleanosid R1, pseudoginsenosid

RT1 methyl este, momordin IIe và stipuleanosid R2 methyl este [22]

Năm 2018, nhóm nghiên cứu Việt Nam đã phân lập và xác định cấu trúc hóa học của 2 saponin từ thân rễ SVD là stipuleanosid R2, aralosid A methyl ester [16]

Trang 15

Hình 1.2 10 hợp chất saponin tách từ rễ của cây Sâm vũ diệp [22]

Trang 16

Trang 17

SVD thường được dùng trong một số bài thuốc truyền thống ở nước ta

và Trung Quốc, nhưng chưa có nhiều tài liệu và công trình khoa học nghiên cứu về tác dụng dược lý được công bố Một số nghiên cứu về tác dụng dược

lý của SVD trên động vật thí nghiệm cho thấy SVD có tác dụng tăng cường chức năng sinh lý, ảnh hưởng tốt đến hệ thần kinh trung ương, tăng sức dẻo dai của cơ thể, tăng sức đề kháng, tác dụng tán huyết [1], chống stress, chống trầm cảm, bảo vệ gan, tăng cường hệ miễn dịch, có hoạt tính ức chế sự phát triển của các tế bào ung thư…[9-11,13,18-20]

1.1.6 Công dụng

Theo đông y, SVD có công dụng hoạt huyết khứ ứ, tiêu đờm, giảm đau, thũng trướng tích tụ, đau gân cốt, rắn độc cắn, tâm vị khí thống, thổ huyết, chảy máu mũi, xuất huyết dạ dày,[1,3]…, một vị thuốc quý có tác dụng chống ung thư, chống oxy hóa, bổ dưỡng, tăng trí nhớ [15], tốt cho phụ nữ sau đẻ và người cao tuổi SVD còn được dùng để ngâm rượu rồi chiết dưới dạng tinh sâm hoặc nấu cao rồi pha với nước hoặc rượu để uống có tác dụng kích thích sinh dục [1]

1.2 TỔNG QUAN VỀ TIÊU CHUẨN DƯỢC LIỆU

Tiêu chuẩn cơ sở được xây dựng dựa trên các kết quả nghên cứu khoa học và công nghệ, tiến bộ kỹ thuật, kinh nghiệm, nhu cầu và khả năng thực tiễn

Những quy định chung về tiêu chuẩn dược liệu bao gồm việc mô tả, định tính, các phép thử tinh khiết, xác định hàm lượng chất chiết được và định lượng hoạt chất trong dược liệu [4]:

Trang 18

9

• Mô tả: Bao gồm những mô tả về hình thái, kích thước, màu sắc, mùi

vị, các đặc điểm của bề mặt, vết bẻ hay mặt cắt của dược liệu hoặc đặc điểm thể chất của dược liệu

• Định tính: Là những phương pháp dùng đề nhận biết dược liệu, bao gồm các kinh nghiệm truyền thống, phương pháp vi học và các phương pháp

lý hóa

- Nhận biết dược liệu dựa theo kinh nghiệm bằng phương pháp đơn giản và truyền thống như sự chìm hay nổi trong nước, tiếng nổ, màu của ngọn lửa hay khói và mùi khi đốt cháy dược liệu v.v

- Định tính dược liệu bằng phương pháp vi học là việc quan sát đặc điểm của các tế bào, các mô của lát cắt, của bột hay của bề mặt dược liệu dưới kính hiển vi

- Định tính lý học là việc xác định các chỉ số như độ tan, tỉ trọng, chiết xuất, năng suất quay cực, v.v… của các dược liệu

- Định tính hóa học là phép thử một vài thành phần trong dược liệu bằng các phản ứng hóa học Phương pháp tiến hành được trình bày ở các chuyên luận dược liệu cụ thể

- Định tính sắc ký là việc sử dụng các phương pháp sắc ký như sắc ký lớp mỏng, sắc ký khí, sắc ký lỏng hiệu năng cao,,,, để phát hiện một số thành phần có trong dược liệu; so sánh với chất chuẩn hay thành phần trong dược liệu chuẩn

- Định tính huỳnh quang là quan sát sự phát huỳnh quang của bề mặt hay mặt cắt dược liệu hay của dịch chiết dược liệu ở điều kiện thường hay sau khi cho tác dụng với acid, kiềm hay thuốc thử Trừ khi có quy định riêng trong chuyên luận, mẫu thử được quan sát dưới ánh sáng tử ngoại ở bước sóng 365 nm, cách nguồn sáng khoảng 10 cm

- Định tính vi thăng hoa thường được tiến hành như sau: Đặt một vòng kim loại đường kính khoảng 2 cm, cao khoảng 8 mm lên một tấm kim loại

Trang 19

10

mỏng có kích thước hơi lớn hơn Trải một lớp mỏng bột dược liệu trong vòng kim loại và đậy kín bằng một phiến kính bên trên có đặt một miếng bông tẩm nước lạnh Đặt tấm kim loại đã có dược liệu này lên một lưới amiant có 1 lỗ tròn đường kính khoảng 2 cm sao cho vòng kim loại có dược liệu nằm trên lỗ này Đun nóng nhẹ phía dưới lỗ cho đến khi bột dược liệu bị cháy xém Nhấc phiến kính ra và để nguội Quan sát hình dạng và màu sắc của tinh thể chất được thăng hoa đọng lại trên phiến kính bằng kính hiển vi và/hoặc tiến hành phản ứng hóa học thích hợp đối với chất đã được thăng hoa

• Thử tinh khiết: Là cách kiểm tra độ tinh khiết của dược liệu, tùy từng dược liệu mà có thể bao gồm một số hay tất cả các chỉ tiêu sau:

- Mất khối lượng do làm khô

- Tro toàn phần và tro không tan trong acid hydrochloric

- Các tạp chất hữu cơ, các bộ phận khác của dược liệu, các dược liệu bị biến màu, hư thối

- Tỉ lệ vụn nát của dược liệu

- Hàm lượng kim loại nặng

- Dư lượng các chất bảo vệ thực vật

- Xác định chất chiết được là xác định hàm lượng các chất trong dược liệu có thể chiết được bằng dung môi (nước, ethanol hay một dung môi khác)

• Định lượng: Là việc xác định hàm lượng một hay một số chất có trong dược liệu bằng phương pháp hóa học, lý học hoặc sinh học Định lượng bao gồm cả việc xác định hàm lượng chất béo, tinh dầu và xác định hoạt lực bằng các phép thử sinh học

Trang 20

Cây Sâm vũ diệp trồng ở huyện Sa Pa, Lào Cai 6 năm tuổi được thu

vào ngày 15/07/2016 Mẫu được giám định tên khoa học là Panax

bipinnatifidus Seem., họ Nhân sâm (Araliaceae) bởi ThS Nguyễn Quỳnh

Nga, Khoa Tài nguyên Dược liệu Viện Dược liệu Mẫu tiêu bản (DL 150716) được lưu giữ Phòng tiêu bản của Khoa Tài nguyên Dược liệu - Viện Dược liệu

-Mô tả đối tượng nghiên cứu: Thân rễ sâm vũ diệp có nhiều đốt và những vết sẹo, cong ngoằn ngoèo, dài 7-12 cm, đường kính 1,2-1,8 cm Thể chất cứng chắc, giòn, dễ bẻ, mặt bẻ lởm chởm, màu vàng nâu nhạt Mùi thơm nhẹ, vị đắng, hơi ngọt

Xử lí mẫu: thân rễ SVD rửa sạch, để khô, thái lát mỏng, sấy khô ở 500C đến hàm ẩm đạt dưới 10%, bảo quản trong túi nilong kín, để nơi khô ráo, thoáng mát để sử dụng trong nghiên cứu

Hình 2.1 Mẫu Sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) thu hái tại

Sa Pa, Lào Cai

Trang 21

12

2.1.2 Dung môi, hóa chất

Hóa chất, dung môi sử dụng trong nghiên cứu và phân tích đều đạt tiêu chuẩn công nghiệp và được chưng cất lại trước khi dùng

- Dung môi hóa chất: Methanol (CH3OH), ethanol (EtOH), ethyl acetat (EtOAc), acetonitrile (CH3CN), acid acetic (CH3COOH), nước cất hai lần,… dùng cho phân tích

- Thuốc thử: Acid sulfuric (Meck), acid acetic (CH3COOH) (Meck)

- Bản mỏng: Silica gel 60 RP-18 F254s (Meck)

- Chất chuẩn stipuleanosid R2

2.1.3 Máy móc, thiết bị

- Hệ thống sắc ký HPLC Agilent 1260 Infinity (Agilent Technologies, Mỹ)

- Tủ sấy Memmert (Memmert – Đức)

- Máy siêu âm Power sonic 405(Powersonic-Hàn Quốc)

- Máy cất quay Rotavapor R-220, Rotavapor R-200 (BUchi, Thụy Sĩ)

- Phễu lọc Buchner, bộ lọc dung môi, lọc mẫu với màng lọc 0,2 μm

- Cân kỹ thuật Precisa BJ 610C, cân phân tích Precisa 262SMA-FR (sai

số 0,0001g, Precisa – Thụy Sĩ)

- Cân xác định độ ẩm Precisa HA 60

- Hệ thống chiết hồi lưu dung tích bình cầu 1000ml

- Bình chạy sắc ký lớp mỏng

- Máy ly tâm HSCEN- 204- MRC

- Bếp điện, bếp đun cách thủy

Trang 22

13

- Kính hiển vi điện tử

- Máy ảnh

- Các dụng cụ thủy tinh khác: Bình định mức, pipet, ống đong…

2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu SVD dựa trên các tiêu chí chung được quy định trong DĐVN V tại phụ lục 12.2 gồm: Mô tả, vi phẫu, soi bột, độ ẩm dược liệu, tro toàn phần, tạp chất, định tính, định lượng,…

Trang 23

2.2.6 Tro không tan trong acid

Xác định theo DĐVN V, phụ lục 9.7:

Cho 25 ml dung dịch acid hydrocloric 2 M vào tro toàn phần, đun sôi 5 phút, lọc để tập trung những chất không tan vào một giấy lọc không tro, rửa bằng nước nóng rồi đem nung ở 500°C đến khối lượng không đổi (nung trong

a: Khối lượng tạp chất tính bằng gam

p: Khối lượng mẫu thử tính bằng gam

Trang 24

15

2.2.8 Định tính

Phương pháp sắc ký bản mỏng với điều kiện:

Pha động: Chọn một hệ dung môi đặc trưng cho nhóm saponin sau:

hệ dung môi được khoảng 8 cm, lấy bản mỏng ra, để bay hơi hết dung môi, phun thuốc thử Sấy bản mỏng ở 105°C trong 5 phút Quan sát bản mỏng dưới ánh sang tử ngoại UV 365 nm và ánh sáng thường

Kết quả: Sắc ký đồ của dung dịch thử và dung dịch đối chiếu được

chụp ảnh lưu giữ Các giá trị hệ số di chuyển (Rf) của stipuleanosid R2 và các

Trang 25

Chuẩn bị dung dịch thử, dung dịch chuẩn:

Dung dịch thử: Cân chính xác khoảng 1g bột dược liệu cho vào bình

tam giác dung tích 100 ml, thêm chính xác 50 ml hỗn hợp methanol : nước tỷ

lệ 70 : 30, cân, siêu âm 30 phút, để nguội, bổ sung bằng hỗn hợp dung môi trên lượng đã mất, lọc qua màng lọc kích cỡ 0,45 µm được dung dịch để tiêm sắc ký

Dung dịch mẫu chuẩn: Chuẩn bị một dãy dung dịch chuẩn

stipuleanosid R2 trong methanol có các điểm nồng độ chính xác gồm: 18,75 µg/ml, 37,5 µg/ml, 75 µg/ml, 150 µg/ml, 200 µg/ml, 300 µg/ml và 400 µg/ml

Khảo sát và lựa chọn điều kiện sắc ký:

Tham khảo một số tài liệu và điều kiện hiện có của phòng thí nghiệm, tiến hành khảo sát định lượng thành phần saponin trong thân rễ SVD như sau:

Cột sắc ký: Tiến hành khảo sát trên các cột C18 pha đảo

Pha động: Qua tham khảo tài liệu, khảo sát các loại pha động với thành phần, tỷ lệ, tốc độ dòng khác nhau

Detector: Lựa chọn sử dụng detector thích hợp trong 3 loại detector

UV, FLD, DAD để đảm bảo vừa phát hiện được được chất phân tích, vừa tiện lợi cho quá trình phân tích và phù hợp trong điều kiện phòng thí nghiệm

Thể tích tiêm mẫu: Khảo sát để lựa chọn thể tích tiêm mẫu phù hợp nhất

Định dạng
Số trang	51
Dung lượng	1,34 MB