Cô lập một số hợp chất phenolic từ cao acetone thô của loài địa y Parmotrema Tsavoense

Xuất phát từ những ứng dụng y học quý giá và kế thừa những nghiên cứu đã có về chi Parmotrema trong nước cũng như nghiên cứu hóa học trên loài địa y Parmotrema tsavoense, trong nghiên cứu này, tác giả tiếp tục nghiên cứu trên loài địa y Parmotrema tsavoense (Krog & Swincow) Krog & Swincow nhằm tìm kiếm các hợp các hợp chất mới và thử nghiệm hoạt tính sinh học của chúng.

Kỉ yếu Hội nghị sinh viên NCKH CÔ LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT PHENOLIC TỪ CAO ACETONE THƠ CỦA LỒI ĐỊA Y PARMOTREMA TSAVOENSE Nguyễn Thị Quỳnh Như, Nguyễn Thị Thanh Hương (Sinh viên năm 3, Khoa Hóa học) GVHD: TS Dương Thúc Huy TĨM TẮT Từ cao acetone thơ loài địa y Parmotrema tsavoense thu hái tỉnh Bình Thuận, hợp chất parmosidone-F lập Cấu trúc hóa học hợp chất xác định phương pháp phổ nghiệm so sánh với tài liệu tham khảo Parmosidone-F thử nghiệm hoạt tính ức chế enzyme -glucosidase mạnh với giá trị IC50 5.86±1.40 g/ mL HO O 8' OH 7' 9' 11 O 3' 5' 1' O 10 O O OH O 12 Hình Cấu trúc hóa học parmosidone-F Tổng quan Trong năm gần đây, nghiên cứu hóa học sinh học địa y giới trở nên phổ biến Ngay từ thời trung đại, nhiều người làm nghề y sử dụng loài địa y làm thuốc chữa bệnh Ngồi cơng dụng chữa bệnh, địa y sử dụng làm thực phẩm, mĩ phẩm, phẩm nhuộm, nước hoa [1] Theo tác giả Muller (2001) [1], Boustie (2007) [2], Huneck (1999) [3], từ xưa có khoảng gần 1000 hợp chất địa y lập thử nghiệm hoạt tính sinh học kháng khuẩn, kháng virus, chống oxy hóa, kháng ung thư, kháng viêm, kháng enzyme… Xuất phát từ ứng dụng y học quý giá kế thừa nghiên cứu có chi Parmotrema nước nghiên cứu hóa học lồi địa y Parmotrema tsavoense (Huynh BLC 2014 [4], Duong T.H 2015 [5]), chúng tơi tiếp tục nghiên cứu lồi địa y Parmotrema tsavoense (Krog & Swincow) Krog & Swincow nhằm tìm kiếm hợp hợp chất thử nghiệm hoạt tính sinh học chúng 14 Năm học 2016 - 2017 Thực nghiệm 2.1 Máy móc, thiết bị Phổ 1H-NMR, 13C-NMR, HSQC, HMBC ghi máy Bruker Avance 500 Phịng Phân tích trung tâm, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên - Đại học Quốc gia TPHCM (phổ 1H-NMR đo tần số 500 MHz phổ 13C-NMR đo tần số 125 MHz) Dung môi sử dụng cung cấp hãng Chemsol (Việt Nam) Sắc kí cột pha thuận sử dụng silica gel kích thước hạt (0.040–0.063 mm, Merck) Sắc kí lớp mỏng sử dụng mỏng 20 cm x 20 cm phủ silica gel 60 F254 (Merck) Hình Lồi địa y Parmotrema tsavoense 2.2 Thu hái xử lí mẫu ngun liệu, li trích lập hợp chất Loài địa y Parmotrema tsavoense (Krog & Swinscow) Krog & Swinscow thu hái đá núi Tà Cú, tỉnh Bình Thuận (tháng 8/2012-12/2012) Tên khoa học xác định tiến sĩ Wetchasart Poliiam, Tổ nghiên cứu địa y, Bộ môn Sinh học, Khoa Khoa học, Đại học Ramkhamhaeng, Bangkok, Thái Lan Mẫu kí hiệu số US-B027 lưu tiêu thực vật Bộ môn Hóa hữu cơ, Khoa Hóa, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – ĐHQG TPHCM Bột khô địa y nghiền nhỏ (1.350 g) ngâm dầm methanol dịch chiết quay áp suất thấp Trong q trình methanol bay hơi, tủa trắng P (30.3 g) xuất dần lọc riêng Phần dung dịch lọc lại tiếp tục cô quay thu cao methanol thô (249.8 g) Phần cao methanol thô tiến hành nghiên cứu Duong T.H (2015) [5] Phần bột địa y khơ cịn lại tiếp tục ngâm dầm acetone thu cao acetone thô AC (8.54 g) Tiến hành sắc kí cột silica gel pha thường cao acetone, giải li với hệ dung môi n-hexane: ethyl acetate: acetone: acetic acid (12:5:1:1) để thu phân đoạn AC1 (1.2 g), AC2 (2.3 g), AC3 (209.0 mg), AC4 (264.9 mg), AC5 (1.31 g), AC6 (476.3 mg), AC7 (971.1 mg), AC8 (1.2 g) AC9 (1.1 g) Phân đoạn AC5 (1.31 g) thực sắc kí cột, giải li với hệ dung môi nhexane: ethyl acetate: acetone: acetic acid (30:5:1:1) để thu phân đoạn kí hiệu từ AC9.1 - AC9.8 Từ Phân đoạn AC9.5 (2.0 mg) thực sắc kí lớp mỏng điều chế, 15 Kỉ yếu Hội nghị sinh viên NCKH giải li với hệ dung môi chloroform: ethyl acetate: acetone: acetic acid (10:4:2.4:0.8) thu hợp chất T2A Kết thảo luận Phổ 1H–NMR vùng từ trường yếu cho thấy diện tín hiệu proton vịng thơm δH 6.76 (1H, s), hai proton nhóm olefin δH 8.01 (1H, d, J=16.5 Hz) δH 7.13 (1H, d, J=16.5 Hz), proton nhóm hydroxy δH 11.66 (1H, s) Ngồi ra, phổ 1H–NMR cịn cho thấy tín hiệu nhóm oxymethylene –CH2–O– δH 4.49 (2H, s), nhóm methoxy δH 3.23 (3H, s) hai tín hiệu hai nhóm methyl gắn với vòng thơm δH 2.44 (3H, s) δH 2.33 (3H, s) Phổ 13C–NMR kết hợp với phổ HSQC cho thấy hợp chất có 22 carbon, gồm có nhóm carbonyl (δC 198.5), nhóm carboxyl (δC 170.3, 161.5), carbon olefin (δC 132.9, 131.1), nhóm methylene (δC 62.2), nhóm methoxy (δC 57.4), nhóm methyl (δC 27.7, 20.7, 15.5) carbon tứ cấp khác (δC 161.8, 161.3, 155.2, 145.9, 145.4, 142.5, 130.7, 116.0, 115.7, 115.5, 112.0, 111.3) So sánh liệu phổ 1H–NMR phổ 13C-NMR hợp chất T2A hợp chất 8’-O-methylprotocetraric acid nhận thấy liệu phổ chúng có tương đồng nhân thơm B Điều củng cố tương quan HMBC proton H-8’ với carbon δC 155.2 (C-2’), δC 115.7 (C-3’), δC 145.9 (C-4’) proton H-9’ với carbon δC 115.5 (C-1’), δC 142.5 (C-5’), δC 130.7 (C-6’) Nhân thơm A hợp chất T2A có khác biệt nhóm C-3 so với hợp chất 8’-Omethylprotocetraric acid Trên nhân thơm A, nhóm methyl CH3-9 tương quan với carbon δC 115.5 (C-1), δC 116 (C-5), δC 145.4 (C-6) Proton H-5 tương quan với carbon δC 20.7 (C-9), δC 161.8 (C-4), δC 111.3 (C-3) Từ giúp xác định hợp chất T2A mang khung sườn depsidone Phổ 1H-NMR kết hợp với phổ HSQC giúp xác định hai tín hiệu proton olefin ghép trans với với số ghép 16.5 Hz δH 8.01 (δC 132.9, C-8) δH 7.13 (δC 131.1, C-10) Ngoài phân tích độ dịch chuyển hóa học proton chứng tỏ phải có cộng hưởng với nhóm C=O lân cận (–CH=CH-C(O)-) Trên phổ HMBC, proton H-8 tương quan với carbon δC 111.3 (C-3), δC 161.8 (C-4), δC 131.1 (C-10), δC 198.4 (C-11), proton H-10 tương quan với carbon δC 111.3 (C-3), δC 161.8 (C-4), δC 132.9 (C-8), δC 198.4 (C-11), δC 27.7 (C-12), giúp xác định diện nhóm but-1-en-3-onyl (-CH=CH-C(O)-CH3) C-3 Từ tất liệu trên, cấu trúc hợp chất T2A xác định Hình Đây hợp chất mới, đặt tên parmosidone-F Parmosidone-F thử nghiệm ức chế enzyme -glucosidase [6] thực Đinh Minh Hiệp, Ban Quản lí khu NN chất lượng cao Kết cho thấy hợp chất có hoạt tính mạnh với giá trị IC50 5.86±1.40 g/ mL 16 Năm học 2016 - 2017 Hình Một số tương quan HMBC hợp chất T2A Bảng So sánh số liệu phổ NMR hợp chất T2A 8’-O-methylprotocetraric acid T2A N 10 11 12 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ 6’ 7’ 8’ 9’ 8’-OCH3 δH δC 8’-O-methylprotocetraric acid [5] δH δC 112.0 161.3 111.3 161.8 6.76 (s) 116.0 6.84 (s) 145.9 161.5 8.01 (d, J=16.5) 132.9 10.58 (s) 2.33 (s) 20.7 2.42 (s) 7.13 (d, J=16.5) 131.1 198.4 2.35 (s) 27.7 115.5 155.2 115.7 145.9 142.5 130.7 170.5 4.49 (s) 62.2 4.50 (s) 2.44 (s) 15.5 2.40 (s) 3.23 (s) 57.4 3.22 (s) Cả hai hợp chất đo dung môi DMSO-d6 112.5 161.5 112.5 164.4 117.6 152.2 164.6 192.0 21.8 116.5 155.9 116.3 146.0 142.6 131.4 170.8 62.8 15.0 57.9 17 Kỉ yếu Hội nghị sinh viên NCKH Hình Phổ 1H-NMR T2A Hình Phổ 13C-NMR T2A 18 Năm học 2016 - 2017 Hình Phổ HMBC T2A Kết luận Một hợp chất parmosidone-F cô lập từ loài địa y Parmotrema stavoense Parmosidone-F thử nghiệm ức chế enzyme -glucosidase với giá trị IC50 5.86 ± 1.40 g/ mL TÀI LIỆU THAM KHẢO Muller K (2001), “Pharmaceuticalli relevant metabolites from lichens”, Applied Microbiology and Biotechnology, 56, 916 Boustie J., Grube M (2007), “Lichens - a promising source of bioactive secondary metabolites”, Plant Genetic Resources, 3(2), 273287 Huneck S., Yoshimura I (1997), Identification of lichen substsances, Springer Verlag, Berlin Duong T H., Warinthorn Chavasiri, Joel Boustie, Nguyen K P P (2015), “New meta-depsidones and diphenyl ethers from the lichen Parmotrema tsavoense (Krog & Swinscow) Krog & Swinscow, Parmeliaceae”, Tetrahedron,71, 96849691 Bùi Linh Chi Huỳnh, Thuc Huy Duong, Thi My Lien Do, Travis George Pinnock, Lawrence Michael Pratt, Shigeki Yamamoto, Hitoshi Watarai, Takao Tanahashi, Kim Phi Phung Nguyen (2016), “New γ-lactone carboxylic acids from the lichen Parmotrema praesorediosum (Nyl.) Hale, Parmeliaceae” Records of Natural Products, 10(3), 332–340 Ma H.Y., Gao H.Y., Sun L., Huang J., Xu X M., Wu L.J (2011), “Constituents with alphaglucosidase and advanced glication end-product formation inhibitory activities from Salvia miltiorrhiza Bge”, J Nat Med., 65(1), 37-42 19 ... 20 cm phủ silica gel 60 F254 (Merck) Hình Loài địa y Parmotrema tsavoense 2.2 Thu hái xử lí mẫu ngun liệu, li trích lập hợp chất Loài địa y Parmotrema tsavoense (Krog & Swinscow) Krog & Swinscow... NN chất lượng cao Kết cho th? ?y hợp chất có hoạt tính mạnh với giá trị IC50 5.86±1.40 g/ mL 16 Năm học 2016 - 2017 Hình Một số tương quan HMBC hợp chất T2A Bảng So sánh số liệu phổ NMR hợp chất. .. tiếp tục quay thu cao methanol thô (249.8 g) Phần cao methanol thô tiến hành nghiên cứu Duong T.H (2015) [5] Phần bột địa y khơ cịn lại tiếp tục ngâm dầm acetone thu cao acetone thô AC (8.54 g)