Sốt rét là bệnh nhiễm ký sinh trùng sốt rét (KSTSR) cấp tính, gây dịch do muỗi truyền. Bệnh được lây truyền từ người sang người bởi trung gian truyền bệnh là muỗi Anophen, là một trong những bệnh do ký sinh trùng lây truyền qua động vật chân đốt lây lan nhanh nhất. Bệnh có thể gây thành dịch lớn và có tỷ lệ tử vong tương đối cao.
2017 JOURNAL OF COMMUNITY MEDICINE ĐẶC ĐIỂM GEN KHÁNG THUỐC CỦA KÝ SINH TRÙNG SỐT RÉT KHU VỰC TÂY NGUYÊN Nguyễn Văn Chuyên1, Nguyễn Văn Ba1, Nguyễn Bá Tùng2, Nguyễn Trọng Chính1 TĨM TẮT Nghiên cứu vector truyền bệnh ký sinh trùng sốt rét số tỉnh khu vực Tây Nguyên năm 2016 cho thấy: - Có lồi KSTSR gây bệnh người, P falciparum chiếm 60,0%; P.vivax chiếm 35,0%; P malariae chiếm 3,0%; P ovale chiếm 2,0% Tỷ lệ nhiễm đơn P falciparum chiếm 50,0%; nhiễm đơn P vivax chiếm 20,0%; nhiễm đơn P Malariae chiếm 8,0%; nhiễm phối hợp loài 19,0%; nhiễm phối hợp loài 3,0% Tỷ lệ P.falciparum mang gen Pfcrt đột biến kháng chloroquin 46,74% Đáp ứng in vitro với chloroquin IC50 = 51,18 – 233,37 nM, mức độ kháng có xu hướng giảm dần từ 1/2014 (IC50 = 266,85 ± 87,63nM) đến 12/2014 (IC50 = 213,33 ± 78,78 nM) Tỷ lệ P.falciparum mang gen Pfdhfr đột biến kháng pyrimethamin 85,33% Đáp ứng in vitro với pyrimethamin IC50 = 72,12 – 1768,25 nM, mức độ kháng có xu hướng giảm dần từ 1/2014 (IC50 =1965,71 ± 1539,64nM) đến 12/2014 (IC50 = 1625,00 ± 1170,15nM) P.falciparum nhạy cycloguanil tỷ lệ cao 77,0% đáp ứng in vitro IC50 = 18,22 -128,22nM Tỷ lệ P.falciparum mang gen Pfmdr1 đột biến 184F (ảnh hưởng đến tính kháng P.falciparum với mefloquin artemisinin) 15,0% Đáp ứng in vitro P.falciparum với mefloquin nồng độ thấp IC50 = 153,71 - 943,16 nM với artesunat IC50 = 23,62 ±12,54nM Từ khóa: Ký sinh trùng sốt rét; Gen; Đột biến ABTRACT CHARACTERISTICS OF DRUG - RESISTANT GENES IN MALARIA PARASITES IN TAY NGUYEN Research vector and Plasmodium in in the Highlandscommunity in 2016 showed that: - There are four species of malaria parasites cause disease in humans, which accounted for 60.0% of P falciparum; Vivax accounted for 35.0%; P malariae accounted for 3.0%; P ovale infection was 2.0% P falciparum infection rates accounted for 50.0% shares; P vivax infections accounted for 20.0% shares; P malariae single infections accounted for 8.0%; species mixed infections was 19.0%; species mixed infections was 3.0% - The proportion of P falciparum genes carry mutations Pfcrt chloroquine resistance is 46.74% Meet with chloroquine in vitro IC50 = 51.18 to 233.37 nM, resistance levels tend to decrease since 1/2014 (IC50 = 266.85 ± 87,63nM) and 12/2014 (IC50 = 213.33 ± 78 , 78 nM) - The proportion of P falciparum genes carry mutations pfdhfr pyrimethamine resistance was 85.33% Meet in vitro with IC50 = pyrimethamin 72,12 to 1768,25 nM, resistance levels tend to decrease since 1/2014 (IC50 = 1965.71 ± 1539,64nM) and 12/2014 (IC50 = 1625.00 ± 1170 , 15nm) Falciparum sensitivity high rate 77.0% cycloguanil meet -128,22 nM vitro IC50 = 18,22 - The proportion of P falciparum genes carry mutations Pfmdr1 184F (very little influence of P falciparum resistance to mefloquine and artemisinin with) is 15.0% Response of P falciparum in vitro with mefloquine in very low concentrations IC50 = 153.71 to 943.16 nMwith artesunate IC50 = 23.62 ± 12,54nM Keywords: Plasmodium; Gen; Mutation I ĐẶT VẤN ĐỀ Sốt rét bệnh nhiễm ký sinh trùng sốt rét (KSTSR) cấp tính, gây dịch muỗi truyền [2] Bệnh lây truyền từ người sang người trung gian truyền bệnh muỗi Anophen, bệnh ký sinh trùng lây truyền qua động vật chân đốt lây lan nhanh Bệnh gây thành dịch lớn có tỷ lệ tử vong tương đối cao [2] Chương trình phịng chống sốt rét số chương trình y tế thành cơng Việt Nam Bệnh sốt rét Học viện Quân y Tác giả chính: Nguyễn Văn Chuyên ĐT: 0983.407.484 - Email: nguyenvanchuyenk40@gmail.com Bộ tư lệnh Công binh Ngày nhận bài: 07/02/2017 Ngày phản biện: 11/02/2017 Ngày duyệt đăng: 18/02/2017 SỐ 37 - Tháng 3+4/2017 Website: yhoccongdong.vn 123 VIỆN S EC KHỎ ỘNG G ỒN Đ ỨC NGHIÊN CỨU KHOA HỌC khống chế, thu hẹp phạm vi lưu hành bệnh, nhiều nơi khơng cịn sốt rét lưu hành [1] Tuy nhiên, số địa phương khu vực Tây Nguyên, sốt rét tồn dai dẳng, hàng năm ghi nhận ca mắc chỗ [3] Nguyên nhân tình trạng tác động tác động tượng biến đổi khí hậu tình trạng kháng thuốc ký sinh trùng sốt rét [3],[4] Do vậy, việc nghiên cứu đặc điểm gen kháng thuốc KSTSR cần thiết Kết nghiên cứu sở khoa học giúp nâng cao hiệu cơng tác phịng điều trị bệnh tình hình Xuất phát từ vấn đề trên, nghiên cứu tiến hành nhằm mục tiêu: Mô tả đặc đặc điểm thành phần loài gen kháng thuốc ký sinh trùng sốt rét khu vực Tây Nguyên, năm 2016 II ĐỐI TƯỢNG, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng, địa điểm, thời gian nghiên cứu - Đối tượng nghiên cứu: Ký sinh trùng sốt rét - Địa điểm nghiên cứu: Nghiên cứu tiến hành tỉnh khu vực Tây Nguyên, gồm: Lâm Đồng, Đắk Lắk, Gia Lai, Kon Tum, Đăk Nông - Thời gian nghiên cứu: Từ tháng 01/2016 đến tháng 12/2016 2.2 Phương pháp nghiên cứu kĩ thuật sử dụng Đề tài sử dụng phương pháp nghiên cứu mô tả cắt ngang dịch tễ học Đồng thời, số phương pháp, kỹ thuật cụ thể sau sử dụng trình triển khai thực đề tài: 2.2.1 Phương pháp lấy mẫu Lựa chọn bệnh nhân lấy mẫu bệnh phẩm theo Quyết định số 3232/QĐ-BYT Bộ trưởng Bộ Y tế ký ngày 30 tháng năm 2013 việc Hướng dẫn chẩn đoán, điều trị bệnh sốt rét 2.2.2 Kỹ thuật chẩn đoán ký sinh trùng sốt rét * Phương pháp tách tinh khiết DNA Áp dụng phương pháp Kain K.C, Lannar cộng (1995) tách tinh khiết DNA Chelex100 * Phản ứng PCR Vật liệu Hóa chất dùng để tách chiết DNA hãng Sigma Hoá chất dung cho phản ứng PCR: + dATP, dTTP, dCTP, dGTP (Abgene) + Tag polymerase (Abgene) + Primer (mồi): PLU5, PLU6 (Poligo), FAL,VIV, MAL, OVA (Sigma) Lam kính, thuốc nhuộm giêmsa Giấy thấm Whatman 3MM Nested 1: Phản ứng PCR để nhân gen đặc hiệu Plasmodium Mồi sử dụng Plu5, Plu6 Trình tự mồi: 124 SỐ 37- Tháng 3+4/2017 Website: yhoccongdong.vn Plu5 5’-CCT GTT GTT GCC TTA AAC TTC -3’ Plu6 5’-TTA AAA TTG TTG CAG TTA AAA CG-3’ Điều kiện phản ứng: 950C – phút (1 chu kỳ) 940C – phút 580C – phút 720C – phút (25 chu kỳ) 720C – phút (1 chu kỳ) Nested 2: Phản ứng PCR nhân gen đặc hiệu cho loài P falciparum, P vivax, P malariae, P ovale Sử dụng cặp mồi đặc hiệu cho lồi Trình tự mồi: FAL1 5’-TTA AAC TGG TTT GGG AAA ACC AAA TAT ATT-3’ FAL2 5’-ACA CAA TGA ACT CAA TCA TGA CTA CCC GTC-3’ VIV1 5’-CGC TTC TAG CTT AAT CCA CAT AAC TGA TAC-3’ VIV2 5’-ACT TCC AAG CCG AAG CAA AGA AAG TCC TTA-3’ MAL1 5’-ATA ACA TAG TTG TAC GTT AAG AAT AAC CGC-3’ MAL2 5’-AAA ATT CCC ATG CAT AAA AAA TTA TAC AAA-3’ OVA1 5’-ATC TCT TTT GCT ATT TTT TAG TAT TGG AGA-3’ OVA2 5’-GGA AAA GGA CAC ATT AAT TGT ATC CTA GTG-3 Thành phần phản ứng Nested 1, khác DNA khuôn lấy từ sản phẩm Nested Điều kiện phản ứng Nested 1, khác từ bước đến bước lặp lại 30 chu kỳ Bảng 2.1 Kích thước sản phẩm PCR Phản ứng PCR (Nested 2) Kích thước sản phẩm PCR P falciparum 204 bp P vivax 120 bp P malariae 145 bp P ovale 800 bp * Phương pháp phân tích kết quả: Sản phẩm PCR phân tích kết kỹ thuật chạy điện di gelagarose 2% có chứa ethidium bromide Kích thước sản phẩm PCR đặc hiệu loài bảng * Kỹ thuật ứng dụng nghiên cứu xác định gene kháng thuốc - Kỹ thuật sinh học phân tử: + Xác định chủng loại ký sinh trùng sốt rét 2017 JOURNAL OF COMMUNITY MEDICINE + Xác định kiểu gen P.falciparum: MSP1, MSP2, GLURP + Xác định kiểu gen P vivax: PvMSP1, PvMSP + Tìm dấu ấn phân tử liên quan đến tính kháng thuốc: • Xác định P.falciparum mang gen Pfcrt đột biến kháng chloroquin kỹ thuật PCR - RFLP vμ sequencing DNA • Xác định P.falciparum mang gen Pfdhfr đột biến kháng pyrimethamin kỹ thuật PCR - RFLP sequencing DNA • Xác định P.falciparum mang gen Pfmdr1 đột biến đa kháng thuốc kỹ thuật sequencing DNA • Xác định P.vivax mang gen Pvdhfr đột biến kháng pyrimethamin kỹ thuật PCR-RFLP sequencing DNA - Kỹ thuật thử nghiệm in vitro - micro đánh giá tính nhạy cảm P.falciparum với thuốc: CQ, MEF, AS, PYR, CYC sử dụng microscoper test (soi kính hiển vi), isotopic test (đồng vị phóng xạ) 2.3 Phân tích sử lý số số liệu Số liệu thu thập từ phiếu điều tra kết lâm sàng xét nghiệm thống kê Microsoft office Excel - 2013, sử lý số liệu phần mềm SPSS 22.0 Hình 3.1.Hình ảnh điện di nhiễm đơn P falciparum (Nguyễn Thị H, 55 tuổi, Gia Lai) Hình 3.2 Hình ảnh điện di nhiễm phối hợp P falciparum, P vivax P.ovale (Trần Thị T, 35 tuổi, Kon Tum) III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN Đặc điểm ký sinh trùng sốt rét Tổng số mẫu thu thập 500 mẫu Số mẫu phân tích kỹ thuật Nested PCR 500 mẫu Kết có 100 mẫu (+) Thành phần cấu tỷ lệ nhiễm phối hợp KST (xem bảng dưới) Hình ảnh điện di sản phẩm PCR bệnh nhân nhiễm đơn P.falciparum, nhiễm đơn P vivax, nhiễm đơn P malarie, nhiễm phối hợp loài, nhiễm phối hợp lồi biểu hình 1, 2, 3, Trên hình ảnh điện di kích thước sản phẩm PCR đặc hiệu cho lồi Plasmodium Bảng 3.1.Thành phần loài KST Kỹ thuật Nested PCR Giemsa Nhiễm đơn n (%) P.f P.v 50 (50,0) 20 (20,0) 62 (62,0) 25 (25,0) P.m (8,0) (3,0) Phối hợp n (%) P.f +P.v P.f +P.v +P.o 19 (19,0) (3,0) 10 (10,0) (0,0) Tổng số 100 100 Cho thấy khu vực nghiên cứu tồn loài KSTSR (P falciparum, P vivax, P malarie, P ovale) Trong đó, tỷ lệ nhiễm đơn P falciparum cao (50,0%) Bảng 3.2 Tỷ lệ thành phần loài KSTSR khu vực nghiên cứu (n=100) Kỹ thuật Nested PCR Giemsa P.f (%) 60,0 63,0 P.v (%) 35,0 35 P.m (%) 3,0 2,0 P.o (%) 2,0 Tổng cộng (%) 100 100 Nhận xét: - Trong tổng số 100 ca KSTSR (+) lấy khu vực nghiên cứu, chúng tơi thấy có tất lồi KSTSR (P.falciparum, P.vivax, P.malarie, P.ovale) Tỷ lệ P.falciparum chiếm cao P.vivax SỐ 37 - Tháng 3+4/2017 Website: yhoccongdong.vn 125 VIỆN S EC KHỎ ỘNG G ỒN Đ ỨC NGHIÊN CỨU KHOA HỌC - Về cấu KSTSR, tỷ lệ nhiễm đơn P falciparum 50,0%; tỷ lệ nhiễm đơn P vivax 20,0% Tỷ lệ nhiễm phối hợp loài P falciparum P vivax 19,0% - Trong nghiên cứu này, chúng tơi thấy khơng có khác biệt nhiều kỹ thuật Giemsa Nested PCR (p= 0,85) cấu KST SR Tuy nhiên số 100 ca KSTSR (+) có 12 ca có khác biệt kết Giemsa NestedPCR Còn lại ca thiếu loài nhiễm phối hợp Có thể nhiễm phối hợp có lồi trội cịn lồi mật độ q thấp, ngưỡng phát kính hiển vi Theo nghiên cứu “Áp dụng kỹ thuật sinh học phân tử để nghiên cứu thành phần cấu loài KSTSR tỉnh Quảng Bình 2004-2005” Đồn Hạnh Nhân, Nơng Thị Tiến cho thấy so với kỹ thuật nhuộm Giem sa, kỹ thuật PCR phát tỷ lệ nhiễm phối hợp cao (30% so với 4,6%) [2] - Kỹ thuật PCR kỹ thuật có tính xác địi hỏi mức độ chun hóa cao chi phí tốn nhiên góp phần vào việc tìm biện pháp phịng chống sốt rét có hiệu Đặc điểm KSTSR mang gen đột biến kháng thuốc số đột biến gen kháng 3.2.1 Đặc điểm P.falciparum mang gen Pfcrt đột biến số đột biến gen Pfcrt kháng với chloroquin - So sánh kết xác định P.falciparum mang gen Pfcrt đột biến kỹ thuật PCR - RFLP, sequencing in vitro Bảng 3.3 Cấu trúc gen Pfcrt đáp ứng in vitro với chloroquin (một số phân lập ví dụ) TT Phân lập PCR-RFLP Sequencing 74 75 76 In vitro S/R IC50 (nM) S/R V21 R I E T R 231,26 R V34 R I E T R 216,35 R V5 R I E T R 212,73 R V3 R I D T R 192,42 R V19 R I D T R 185,26 R V9 R I D T R 168,64 R V8 S M N K S 121,93 S V10 S M N K S 98,67 S V11 S M N K S 52,81 S 10 V2 S M N K S 14,26 S 11 V40 S M N K S 13,72 S * I, E/D, T amino acid gen mã hoá đột biến * Thứ tự sếp theo mức độ kháng từ cao xuống thấp - Kết PCR - RFLP, sequencing vμ in vitro đồng Đột biến gen Pfcrt codon 76 có ý nghĩa định đến tính kháng, đột biến codon74, 75 ảnh hưởng tới mức độ kháng P.falciparum với chloroquin - Các phân lập P.falciparum mang gen Pfcrt đột biến, kháng chloroquin theo mức độ khác Gen Pfcrt mã hố tổng hợp amino acid có cấu trúc: I E T kháng mức cao (IC50 = 241,16± 54,55 nM), I D T mức độ thấp (IC50 = 177,9 ± 12,99 nM) 3.2.2 Đặc điểm P.falciparum mang gen Pfdhfr đột biến số đột biến gen Pfdhfr kháng với antifolat - Đáp ứng in vitro P falciparum với pyrimethamin cycloguanil 126 SỐ 37- Tháng 3+4/2017 Website: yhoccongdong.vn Bảng 3.4 Đáp ứng in vitro P falciparum với pyrimethamin, cycloguanil Thuốc PYR CYC Kháng Nhạy Số Số IC50 (nM) IC50 (nM) lượng lượng 75 1768,25±1266,55 22 72,12±23,68 25 128,22±88,63 77 18,22±14,12 * Ngưỡng kháng: PYR 100 nM; CYC 40nM - Kết in vitro cho thấy P.falciparum nhạy với cycloguanil tỷ lệ cao (77,0%) ngược lại kháng cao với pyrimethamin (75,0%), khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,001 - So sánh kết xác định P.falciparum mang gen Pfdhfr đột biến kỹ thuật PCR - RFLP, sequencing in vitro 2017 JOURNAL OF COMMUNITY MEDICINE Bảng 3.5 Cấu trúc gen Pfdhfr đáp ứng in vitro với pyrimethamin (một số phân lập ví dụ) TT Phân lập PCR-RFLP Sequencing 74 75 76 In vitro S/R IC50 (nM) S/R V9 R N R I R 2721,16 R V3 R N R I R 1042,37 R V2 R N R N R 313,52 R V11 R N R N R 312,43 R V4 R N R N R 298,54 R V12 R N C N R 254,71 R V10 S S C I S 36,58 S V5 S S C N S 31,15 S V8 S S C N S 25,32 S 10 V32 S S C N S 24,41 S 11 V36 S S C N S 22,41 S * N, R, I amino acid gen mã hoá đột biến * Thứ tự mẫu xếp theo mức độ kháng giảm dần - Đột biến gen Pfdhfr codon 108 có ý nghĩa định đến tính kháng pyrimethamin P.falciparum - Đột biến gen Pfdhfr codon 59 51 ảnh hưởng tới mức độ kháng pyrimethamin P.falciparum - Những phân lập P.falciparum đa đột biến (108N, 59R, 51I) mức độ kháng cao so với phân lập mang đột biến (108N, 59R) cao phân lập có đột biến đơn (108N) Vì bên cạnh phân lập kháng cao (2721,16 nM) có phân lập kháng thấp (254,71 nM), thấp 10,68 lần 3.2.3 Đặc điểm P.falciparum mang gen Pfmdr1 đột biến số đột biến gen Pfmdr1 đa kháng thuốc Kết phân tích tỷ lệ P falciparum mang gen Pfmdr1 đột biến đa kháng cho thấy: - Đột biến 86Y gen Pfmdr1 ảnh hưởng đến tính kháng P.falciparum với mefloquin, artemisinin khơng phát thấy - Đột biến 184F gen Pfmdr1 ảnh hưởng đến tính kháng P.falciparum với mefloquin, artemisinin 6/40 (15,0%) - Đáp ứng in vitro P.falciparum với mefloquin IC50 = 153,71 - 943,16 nM, với artesunat IC50 = 23,62 ± 12,54 nM IV KẾT LUẬN Thành phần lồi ký sinh trùng sốt rét Phân tích 100 mẫu có KSTSR (+) điểm nghiên cứu cho thấy có lồi KSTSR gây bệnh người, P falciparum chiếm 60,0%; P.vivax chiếm 35,0%; P malariae chiếm 3,0%; P ovale chiếm 2,0% Tỷ lệ nhiễm đơn P falciparum chiếm 50,0%; nhiễm đơn P vivax chiếm 20,0%; nhiễm đơn P Malariae chiếm 8,0%; nhiễm phối hợp loài 19,0%; nhiễm phối hợp loài 3,0% Đặc điểm ký sinh trùng sốt rét mang gen đột biến kháng thuốc số đột biến gen kháng * Đặc điểm P.falciparum mang gen đột biến kháng chloroquin Tỷ lệ P.falciparum mang gen Pfcrt đột biến kháng chloroquin 46,74% Đặc điểm đột biến gen kháng chi phối đáp ứng in vitro với chloroquin IC50 = 51,18 – 233,37 nM, mức độ kháng có xu hướng giảm dần từ 1/2014 (IC50 = 266,85 ± 87,63nM) đến 12/2014 (IC50 = 213,33 ± 78,78 nM) * Đặc điểm P.falciparum mang gen đột biến kháng antifolat Tỷ lệ P.falciparum mang gen Pfdhfr đột biến kháng pyrimethamin 85,33% Đặc điểm đột biến gen kháng chi phối đáp ứng in vitro với pyrimethamin IC50 = 72,12 – 1768,25 nM, mức độ kháng có xu hướng giảm dần từ 1/2014 (IC50 =1965,71 ± 1539,64nM) đến 12/2014 (IC50 = 1625,00 ± 1170,15nM) P.falciparum nhạy cycloguanil tỷ lệ cao 77,0% đáp ứng in vitro IC50 = 18,22 -128,22nM SỐ 37 - Tháng 3+4/2017 Website: yhoccongdong.vn 127 VIỆN S EC KHỎ ỘNG G ỒN Đ ỨC NGHIÊN CỨU KHOA HỌC * Đặc điểm P.falciparum mang gen đột biến đa kháng thuốc Tỷ lệ P.falciparum mang gen Pfmdr1 đột biến 184F (ảnh hưởng đến tính kháng P.falciparum với mefloquin artemisinin) 15,0% Đáp ứng in vitro P.falciparum với mefloquin nồng độ thấp IC50 = 153,71 - 943,16 nM với artesunat IC50 = 23,62 ±12,54nM TÀI LIỆU THAM KHẢO: 1 Bùi Đức Chính, Wim Van Bortel cs (2008), Đánh giá ảnh hưởng tẩm hóa chất diệt trùng tới quần thể An.epiroticus kháng hóa chất miền Tây Nam Bộ Tạp chí Phịng chống bệnh sốt rét bệnh ký sinh trùng số 6, năm 2008, Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng Trung ương Đồn Hạnh Nhân, Nơng Thị Tiến cs (2007), “Một số yếu tố xã hội học liên quan đến lan truyền sốt rét dai dẳng huyện Đăkrông Hướng Hóa, tỉnh Quảng Trị” Tạp chí Phịng chống bệnh sốt rét bệnh ký sinh trùng số 4, năm 2007 Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng Trung ương Lê Xuân Hợi cộng (2008), “Đã đánh giá thực trạng công tác giám sát vector biện pháp phòng chống vector sốt rét khu vực Nam Bộ - Lâm Đồng từ năm 2002 - 2008” Tạp chí Phịng chống bệnh sốt rét bệnh ký sinh trùng số 6, năm 2008, Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng Trung ương Phạm Văn Tường (2001), “Lồng ghép chăm sóc sức khỏe ban đầu phòng chống sốt rét huyện đảo Phú Quốc, tỉnh Kiên Giang”, Tạp chí Y học Việt Nam 128 SỐ 37- Tháng 3+4/2017 Website: yhoccongdong.vn ... 3,0% Đặc điểm ký sinh trùng sốt rét mang gen đột biến kháng thuốc số đột biến gen kháng * Đặc điểm P.falciparum mang gen đột biến kháng chloroquin Tỷ lệ P.falciparum mang gen Pfcrt đột biến kháng. .. nhằm mục tiêu: Mơ tả đặc đặc điểm thành phần lồi gen kháng thuốc ký sinh trùng sốt rét khu vực Tây Nguyên, năm 2016 II ĐỐI TƯỢNG, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng, địa điểm, thời gian nghiên... phịng chống vector sốt rét khu vực Nam Bộ - Lâm Đồng từ năm 2002 - 2008” Tạp chí Phịng chống bệnh sốt rét bệnh ký sinh trùng số 6, năm 2008, Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng Trung ương