Đang tải... (xem toàn văn)
Dịch chiết metanol của hạt na xiêm thu hái ở Đồng Tháp đã được phân lập bằng phương pháp sắc kí cột và cho 3 hợp chất gồm: (1) N-(triacontanoyl) tryptamin, (2) axit ent-kaur-16-en-19-oic và (3) beta-sitosterol.
TẠP CHÍ ĐẠI HỌC SÀI GÒN Số 20 - Tháng 4/2014 THÀNH PHẦN HOÁ HỌC TỪ HẠT NA XIÊM (ANNONA MURICATA L.) Ở ĐỒNG THÁP BÙI THỊ MINH NGUYỆT (*) TÓM TẮT Dịch chiết metanol hạt na xiêm thu hái Đồng Tháp phân lập phương pháp sắc kí cột cho hợp chất gồm: (1) N-(triacontanoyl) tryptamin, (2) axit ent-kaur-16-en-19-oic (3) -sitosterol Cấu trúc hợp chất xác định phương pháp phổ (UV, IR, MS, 1H-, 13C-NMR, DEPT, HMBC, HSQC) so sánh với tài liệu tham khảo Trong ba hợp chất thu được, hợp chất hợp chất phát lần tự nhiên Từ khoá: dịch chiết metanol, na xiêm, N-(triacontanoyl) tryptamin, axit ent-kaur-16en-19-oic ABSTRACT The methanol extracted from Annona muricata seeds in Dong Thap was separated into three compounds: (1) N-(triacontanoyl) tryptamine, (2) ent-kaur-16-en-19-oic acid, (3)-sitosterol, by column chromatography These compounds were identified by spectroscopic methods (UV, IR, MS, 1H-, 13C-NMR, DEPT, HMBC, HSQC) and compared to references Among three separated compounds, N-(triacontanoyl) tryptamin is the new compound found for the first time in nature Keywords: methanol extract, Annona muricata, N-(triacontanoyl) tryptamine, entkaur-16-en-19-oic acid Khảo sát thành phần hoá học từ na xiêm phát có chứa hợp chất sau: acetogenin (hơn 50 hợp chất) [3], flavonoit [4], alkaloit [5], cyclopeptit [6] Những năm gần nhiều nhà khoa học tập trung nghiên cứu acetogenin họ Na (Annonaceae), hợp chất có nhiều hoạt tính quan trọng chống ung thư, sốt rét, kháng khuẩn chống suy giảm miễn d ch [7,8] Lá dùng làm gia v , có tính trấn an nhẹ, hạt độc tế bào [9], d ch nước nghiền từ hạt tr chí rận [10] Ngày nay, hoạt tính dược lí từ na xiêm biết đến như: độc tế bào, chữa sốt rét, bệnh da, chống virut, chống ung thư yếu tố gây đột biến gen, chữa lành vết thương, kháng khuẩn [11] MỞ ĐẦU* Chi Na (Annona) chi lớn họ Na (Annonaceae), có khoảng 125 lồi phân bố nhiều rừng mưa nhiệt đới thuộc vùng châu Mỹ, châu Phi… Ở nước ta, số loài thuộc chi Na (Annona) có lồi lồi trồng [1] Na xiêm (hay gọi Mãng cầu xiêm) thuộc chi Na, có tên khoa học Annona muricata, loại ăn trồng khắp vùng nhiệt đới giới, na xiêm xem loại trái nhiệt đới quan trọng góp phần đáng kể việc tăng trưởng kinh tế đất nước [2] (*) ThS.NCS, Trường Đại học Đồng Tháp 128 Tuy nhiên, nước ta, kết nghiên cứu thành phần hóa học từ chưa công bố nhiều Do vậy, việc nghiên cứu thành phần hóa học na xiêm cần thiết, góp phần cho cơng tác điều tra nguồn tài nguyên thiên nhiên phong phú Việt Nam Trong báo này, chúng tơi trình bày kết nghiên cứu cấu trúc số hợp chất phân lập từ loài THỜI GIAN, ĐỊA ĐIỂM VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Thiết bị Sắc kí lớp mỏng sử dụng loại tráng sẵn silicagel 60F245 (Merck), màu đèn UV iot Chất hấp phụ silicagel 230-400 (Merck) sử dụng sắc kí cột Điểm chảy xác đ nh kính hiển vi Boetius Phổ tử ngoại UV ghi máy Aglilent UV-VIS Phổ hồng ngoại IR ghi máy Bruker 270-30, dạng viên nén KBr Phổ khối lượng va chạm electron EI-MS đo máy MS-Engine5989-HP Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-, 13 C-NMR, DEPT, HMBC, HSQC COSY đo máy Bruker Avance-500 NMR (Viện Hóa học –Viện Khoa học Cơng nghệ Việt Nam) 2.2 Nguyên liệu thực vật Mẫu hạt Na xiêm (Annona muricata L.) thu hái Đồng Tháp vào tháng 8/2009 TS Trần Huy Thái (Viện Sinh thái Tài nguyên Sinh vật-Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam) xác đ nh tên khoa học mẫu lưu giữ Khoa Sinh học - Trường Đại học Vinh 2.3 Phương hợp chất pháp phân 60g cao Sau đó, chiết với etyl axetat n-butanol, cất thu hồi dung môi thu 26g 15g cao tương ứng Cao etyl axetat phân tách cột silicagel với hệ dung môi rửa giải: CHCl3:CH3OH (40:1, 30:1, 20:1, 10:1, 6:1, 4:1, 2:1) thu phân đoạn Phân đoạn sắc kí lại kết tinh lại nhiều lần thu chất (2175 mg) Phân đoạn sắc kí lại kết tinh lại nhiều lần thu chất (167 mg) (202 mg) tương ứng Hợp chất 1: Chất rắn màu trắng, đ.n.c 125-1260C; IRmaxKBrcm-1: 3391 1631cm-1 EI-MS: m/z [M]+: 594 (6), 435 (100); 1H-NMR (500 MHz, CDCl3) (ppm) 13C-NMR (125 MHz, CDCl3) (ppm): xem bảng Hợp chất 2: Tinh thể hình lập phương không màu, đ.n.c 162-1630C; UV maxMeOH nm: 212; IRmaxKBrcm-1: 2937,9; 1690,6; 1487,3 Phổ EI-MS: m/z [M]+ 302 Phổ 1HNMR (500 MHz, CDCl3) (ppm): 4,80 (1H, br s, H-17b) 4,73 (1H, br s, H17a), 2,63 (1H, br s, H-13), 1,24 (3H, s, H18), 0,95 (3H, s, H-20) Phổ 13C-NMR (125 MHz, CDCl3) (ppm): xem bảng Hợp chất 3: Tinh thể hình kim, đ.n.c 135-136oC; IR maxKBr cm-1: 3400, 3025, 1410, 1250, 690 820; EI-MS m/z: [M]+ 414 Phổ 1H-NMR (500MHz, CDCl3) (ppm): 5,31 (1H, dd, J= 5,0; 2,0 Hz, H-6), 3,51 (1H, m, H-3), 1,01 (3H, s, H-19), 0,92 (3H, d, J=6,2Hz, H-21), 0,84 (3H, d, J=6,6 Hz, H-29), 0,83 (3H, d, J = 6,5 Hz , H-26), 0,81 (3H, d, J = 6,6 Hz, H-27), 0,68 (3H, s, H-18) Phổ 13C-NMR (125MHz, CDCl3) (ppm): 140,8 (C-5), 121,7 (C-6), 71,8 (C3), 56,8 (C-14), 56,1 (C-17), 50,2 (C-9), 45,9 (C-24), 42,3 (C-4, C-13), 39,8 (C-12), 37,3 (C-1), 36,5 (C-10), 36,2 (C- 20), 33,9 (C-22); 31,9 (C-7); 31,7 (C-8); 29,7 (C-2); lập Lấy 1,0 kg hạt Na xiêm (sau sấy 40 C), xay nhỏ chiết với metanol nhiệt độ phòng thời gian tuần D ch chiết cất thu hồi dung môi, thu 129 (1H, br s, H-2), với proton nhóm metylen thuộc vòng pyrol 3,51 (2H, t, J = 7,5 Hz, H-11) 2,97 (2H, t, J = 7,5 Hz, H-10), tín hiệu proton hai nhóm metylen thuộc phần axit 2,16 (2H, t, J=7,5 Hz, H-2’) 1,58 (2H, t, J=7,0 Hz, H-3’) bên cạnh cịn có tín hiệu nhóm metyl 0,91 (3H, t, J = 7,5; 6,5 Hz,) tín hiệu dãy béo 1,28 (52H, br s) Phổ cộng hưởng 13CNMR (ppm) cho thấy tín hiệu cacbon thuộc nhóm cacbonyl amit 174,4, nhóm metylen gắn với nhóm chức amit 24,9 (C-10) 40,0 (C11), tín hiệu cacbon nhóm metyl cuối mạch 14,0, cịn có tín hiệu 28,9 – 29,3 cacbon thuộc nhóm metylen dãy béo Phổ HMBC cho thấy tương tác nguyên tử H C ghi phổ H- 13C-NMR (bảng 1) Phổ HSQC cho thấy tương tác nguyên tử H C liên kết với Với tất liệu phổ thu cho phép xác đ nh cấu trúc hợp chất N-(triacontanoyl) tryptamin Hợp chất lần phân lập từ thiên nhiên 29,2 (C-25); 28,3 (C-16); 26,1 (C-23); 24,3 (C-15); 23,1 (C-28); 21,1 (C-11); 19,8 (C19); 19,4 (C-27); 19,1 (C-26); 18,8 (C-21); 11,9 (C-18, C-29) KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN Hợp chất chất rắn màu trắng, không mùi, không tan nước, tan etanol, cloroform Nhiệt độ nóng chảy 125-1260C Phổ khối lượng va chạm electron chất (EI-MS) cho pic ion phân tử m/z [M]+ 594 ứng với cơng thức C40H70ON2 pic 435 (100) cho thấy phân tử b phân thành hai mảnh tương ứng C10H11N2 C30H59O Phổ IR cho thấy tín hiệu đặc trưng liên kết N – H indol 3391cm-1 tín hiệu đặc trưng liên kết C=O thuộc nhóm amit 1631cm-1 Kết từ phổ 1H- 13C-NMR chất dẫn xuất tryptamin [12] Cấu trúc phần tryptamin xác đ nh phổ 1H-NMR (ppm), với tín hiệu 7,57 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-4), 7,35 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-7), 7,10 (1H, ddd, J = 8,0; 7,5; 1,0 Hz, H-6), 7,02 (1H, ddd, J=8,0; 7,0; 1,0 Hz, H-5) proton thuộc vòng benzen v trí ortho, tín hiệu proton phần vịng pyrol 7,06 Bảng 1: Số liệu phổ NMR HMBC hợp chất Vị trí DEPT CH C CH CH CH CH C H (ppm) 7,06 (1H, br s) 7,57 (1H, d, J = 8,0 Hz) 7,02 (1H, ddd, J=8,0; 7,0; 1,0 Hz) 7,10 (1H, ddd, J = 8,0; 7,5; 1,0 Hz) 7,35 (1H, d, J = 8,5 Hz) 130 C (ppm) 122,1 112,1 118,0 118,3 121,0 110,9 136,8 HMBC C-3, C-9, C-8 C-3, C-6, C-8 C-7, C-9 C-4, C-8 C-5, C-9 C 127,5 10 CH2 2,97 (2H, t, J = 7,5 Hz) 24,9 11 1’ CH2 C 3,51 (2H, t, J = 7,5 Hz) 40,0 174,1 2’ CH2 36,0 3’ CH2 2,16 (2H, t, J=7,5 Hz) 1,58 (2H, t, J=7,0 Hz) Dãy CH2 CH3 C-1’, C-3’ 25,6 28,9– 29,3 13,0 1,28 (52H, br s) 0,91 (3H, t, J = 7,5; 6,5 Hz) Hợp chất tinh thể lập phương khơng màu, điểm nóng chảy 162-163oC Phổ UV cho hấp thụ cực đại 212 nm Phổ IR (cm-1) cho thấy pic hấp thụ mạnh tần số 2937 (C=C), 1690 (C=O), 1487 (C=C) Phổ khối lượng va chạm electron (EI-MS) cho pic ion phân tử m/z 302 [M]+ tương ứng với công thức phân tử C20H30O2 Phổ 1H-NMR hợp chất cho thấy tín hiệu hai proton liên lết C=C C-2, C-3, C-9, C-11 C-3, C-1’, 4,80 (1H, br s, H-17b) 4,73 (1H, br s, H-17a), tín hiệu proton H-13 nhóm metin 2,63 (1H, br s, H-13), 1,24 (3H, s, H-18), 0,95 (3H, s, H-20) proton hai nhóm metyl v trí H-18 H-20 Phổ cộng hưởng từ 13C-NMR cho thấy tín hiệu 20 cacbon, có tín hiệu cacboxylic 184,7 ppm, tín hiệu liên kết đôi C-16 C-17 155,8 103,0 ppm Giá tr cụ thể ghi bảng Bảng 2: Số liệu phổ 13C-NMR hợp chất C DEPT (ppm) * (ppm) [11] CH2 40,7 41,1 CH2 19,1 19,5 CH2 37,8 38,2 C 43,9 44,3 CH 57,1 57,5 CH2 21,8 22,2 CH2 41,3 41,7 C 44,2 44,6 CH 55,2 55,5 131 10 C 39,7 40,7 11 CH2 18,4 18,8 12 CH2 33,1 33,5 13 CH 43,8 44,1 14 CH2 39,7 40,1 15 CH2 49,0 49,4 16 C 155,8 156,3 17 CH2 103,0 103,4 18 CH3 29,0 29,4 19 C 184,9 184,7 20 CH3 15,6 16,0 Từ số liệu phổ UV, IR, EI-MS, 1H, C-NMR, HMBC, HSQC so sánh với tài liệu [13], hợp chất gán cho axit ent-kaur-16-en-19-oic Hợp chất tinh thể hình kim khơng màu, nóng chảy 135-136oC Phổ EI-MS cho mảnh ion [M]+ 414, ứng với công thức C29H50O Phổ hồng ngoại IR hợp chất có bước sóng đặc trưng liên kết 3400 (O-H) , 1410 (C=C) cm-1 Phổ 1H-NMR hợp chất cho thấy tín hiệu nhóm metyl 1,02 (3H, s, H19), 0,94 (6H, d, J=6,2Hz, H-26, H-27), 0,84 (3H, t, J=6,6 Hz, H-29), 0,86 (3H, d, J = 6,5 Hz , H-21), 0,68 (3H, s, H-18) Phổ 13 C-NMR kết hợp với kĩ thuật DEPT cho biết hợp chất có 29 tín hiệu 29 nguyên tử cacbon bao gồm nhóm CH, 12 nhóm CH2, nhóm CH3 cacbon bậc Từ phổ 1H-NMR 13C-NMR với kĩ thuật HMBC, HSQC hợp chất cho thấy tín hiệu tương tác nguyên tử H sau: H 3,51 ppm tín hiệu proton gắn C-3 (C 71,8); tín hiệu H 5,31 ppm nguyên tử hiđro gắn nguyên tử C-6 (C 121,7) nối đôi C=C Các số liệu phổ EI-MS NMR phù hợp với -sitosterol [14] 13 H 10 N N 2 ' 20 26 O H 17 21 18 14 10 18 (1) N-(Triacontanoyl)tryptamin 16 28 13 11 [] 3' 11 29 12 ' H COOH 19 (2) Axit ent-kaur-16en-19-oic 132 13 17 19 15 HO 14 10 24 25 26 16 27 23 12 11 H 22 20 15 (3) -sitosterol KẾT LUẬN Từ d ch chiết metanol hạt Na xiêm thu hái Đồng Tháp, sử dụng phương pháp sắc kí phân lập hợp chất phương pháp phổ UV, IR, MS, 1H-, 13C-NMR, DEPT, HMBC, HSQC xác đ nh cấu trúc hóa học hợp chất bao gồm N-(triacontanoyl) tryptamine (1), axit ent-kaur-16-en-19-oic (2) β-sitosterol (3) Trong đó, N(triacontanoyl) tryptamin hợp chất TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Tiến Bân (2000), Họ Na (Annonaceae), Thực vật chí Việt Nam, Flora of Vietnam, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Cheong K W., Tan C P., Mirhosseini H., Chin S T., Man Y B C., Hamid N S A., Osman A., Basri M., (2011), Optimization of equilibrium headspace analysis of volatile flavor compounds of malaysian soursop (Annona muricata): Comprehensive two-dimensional gas chromatography time-of-flight mass spectrometry (GC x GCTOFMS), Food Chemistry 125, 1481-1489 Christophe G., Alain L., Olivier L., Laurent S., Reynald H., (1999), Isolation and structure elucidation of sabadelin, an acetogenin from roots of Annona muricata Phytochemistry 52, 1403-1408 Nawwar M., Ayoub N., Husein S., Hashim A., El-Sharawy R., Wende K., Harms M., Lindequist U., (2012), A flavonol triglycoside and investigation of the antioxidant and cell stimulating activities of Annona muricata Linn, Arch Pharm Res 35(5), 761-767 Sousa O V., Vieira G D V., Pinho J J R G., Yamamoto C H., Alves M S., (2010), Antinociceptive and anti-inflammatory activities of the ethanol extract of Annona muricata L leaves in animal models, Int J Mol Sci., 11, 2067-2078 Wu L., Lu Y., Zheng Q T., Tan N H., Li C M., Zhu J., (2007), Study on the spatial structure of annomuricatin A, a cyclohexapeptide from the seeds of Annona muricata, J Mol Struct., 827(1), 145-148 Feras Q A, Liu X X and McLaughlin J L., 1999: J Nat Prod 62(3): 504-540 Technical Data Report for Graviola (Annona muricata L.) (2002): Sage Press, Inc Phạm Hoàng Hộ (1999), Cây cỏ Việt Nam, I, Nhà xuất Trẻ 10 Trần Việt Hưng (1999), Từ điển thảo mộc dược học, Nhà xuất Y học 11 Gajalakshmi S., Vijayalakshmi S., Devi Rajeswari V., (2012), Phytochemial and pharmacological properties of Annona muricata: A review, Int J Pharm Pharm Sci., Vol 4, Issue 2, 3-6 133 12 Wu Y C., Chang F R., Chen C Y., (2005), Tryptamin-derived amides and alkaloids from the seeds of Annona atemoya, J Nat Prod., 68, 406-408 13 Nguyen H D., Zhang X F., Zheng M.S., Son K H., Chang H W., Kim H P., Bae K H., Kang S S., Inhibitory constituents against cyclooxygenases from Aralia cordata Th., Arch Pharm Res 28(1) (2005) 28-33 14 Kuo H Y., Yeh M H (1997), Chemical constituents of heartwood of Bauhinia purpurea, J Chin Chem Soc 44, 379-383 * Ngày nhận bài: 7/3/2014 Biên tập xong: 20/5/2014 Duyệt đăng: 22/5/2014 134 ... hưởng từ hạt nhân 1H-, 13 C-NMR, DEPT, HMBC, HSQC COSY đo máy Bruker Avance-500 NMR (Viện Hóa học –Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam) 2.2 Nguyên liệu thực vật Mẫu hạt Na xiêm (Annona muricata L.). .. nghiên cứu thành phần hóa học từ chưa cơng bố nhiều Do vậy, việc nghiên cứu thành phần hóa học na xiêm cần thiết, góp phần cho công tác điều tra nguồn tài nguyên thiên nhiên phong phú Việt Nam Trong... thu hái Đồng Tháp vào tháng 8/2009 TS Trần Huy Thái (Viện Sinh thái Tài nguyên Sinh vật-Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam) xác đ nh tên khoa học mẫu lưu giữ Khoa Sinh học - Trường Đại học Vinh