1 NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH CẤP VÀ TÁC DỤNG CẦM MÁU CỦA TAM THẤT NAM TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM STUDY ON ACUTE TOXICITY AND HEMOSTATIC EFFECT OF MALE VENTRICLE IN EXPERIMENTAL ANIMAL Hoàng Thị Hà Phương (1), Nguyễn Quỳnh Hương (2), Đào Thanh Hoa (3) Trường đại học Y Dược – Đại học Thái Nguyên TÓM TẮT Mục tiêu: Tam thất bắc(tên latinh) nghiên cứu có nhiều tác dụng cầm máu lâm sàng cịn tam thất nam(tên latinh) chưa có nhiều nghiên cứu chúng tơi tiến hành nghiên cứu Tam thất nam với mục tiêu: Xác định độc tính cấp tam thất nam thực nghiệm đánh giá tác dụng cầm máu tam thất nam Phương pháp: Chuột nhắt trắng chia thành lô, cho lô chuột uống thuốc thử liều tăng dần từ liều cao không gây chết chuột đến liều thấp gây chết tồn chuột thí nghiệm, xác định liều chết 50% (LD50) theo tỷ lệ chuột chết vòng 72 đầu; Chia chuột thành lô, cho chuột uống nước muối sinh lý thuốc ngày Đến ngày thứ 5, sau lô uống thuốc giờ, lấy máu hốc mắt chuột để xác định thông số: số lượng tiểu cầu, thời gian prothrombin (PT), thời gian hoạt hóa phần phức hợp thromboplastin (aPTT), nồng độ fibrinogen Kết quả: Tam thất nam không gây độc cho chuột, có tác dụng cầm máu chuột Từ khóa: Tam thất nam, độc tính cấp, cầm máu ABSTRACT Goal: It has been proved that Panax notoginseng has many clinical and hemostatic effects However, Stahlianthus thorelli Gagnep still has not much research about it That’s reason why we decided to conduct a research into Stahlianthus thorelli Gagnep with these aim goal: To determine the acute toxicity of Stahlianthus thorelli Gagnep and to evaluate hemostatic effect of Stahlianthus thorelli Gagnep Method: The white mouses are divided into groups Give each group of mouses a dose of reagent from the highest, which doesn’t kill any mouses, to the lowest, which kills all the mouses At the end, we determine 50% death dose (LD50) according to the death rate within the first 72 hours Divide the mouses into groups, give them saline or medicine for days On the 5th day, hour after giving the mouses medicine, take the blood from the mouses’ eye socket to determine the paramenters: platelet count, prothrombin time (PT), activation time of partial thromboplastin complex (aPTT), fibrinogen concentration Result: Stahlianthus thorelli Gagnep is not toxic to mouse, in addition has a hemostatic effect on the mouses Key words: Stahlianthus thorelli Gagnep, acute toxicity, hemostatic effect ĐẶT VẤN ĐỀ Chảy máu hay gọi xuất huyết thường gặp sống hàng ngày, tình trạng máu bao gồm đủ thành phần huyết tương thành phần hữu hình khỏi hệ thống tuần hoàn Khi bị chảy máu, với nhiều mức độ khác cần phải nhanh chóng tìm cách làm ngưng chảy máu, để hạn chế máu nhiều gây chống nặng nguy hiểm đến tính mạng Trong điều trị cầm máu lâm sàng cịn có thảo mộc dân gian có tác dụng cầm máu hiệu cỏ mực, mộc nhĩ, hoa hịe, tía tơ,… đặc biệt Tam thất nam Theo số nghiên cứu, tam thất nam chứa nhiều chất có đặc tính sinh học cao, có tác dụng làm giảm đau nhức xương khớp hỗ trợ điều trị bệnh phong thấp Bên cạnh đó, dược liệu cịn có cơng dụng cầm máu, giúp điều hịa băng huyết chữa tiêu sưng.Thành phần hố học gồm: Acid oleanolic, Saponin triterpen, Prolin, Histidin, Lysin, Cystein [2] thân rễ Tam thất gừng chứa 0,11% tinh dầu Tinh dầu loài chứa thành phần camphen, 2- β pinen, α pinen… Ngồi tinh dầu cịn chứa flavonoid, coumarin, polysaccharid [1], [4] Trong sách Trung dược học có kết tương tự Hiện Tam thất nam chưa nghiên cứu phổ biến nhiều giới lại có nhiều cơng dụng y học, mà nghiên cứu độc tính cấp tác dụng cầm máu Tam thất nam cần thiết ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Nguyên liệu đối tượng nghiên cứu Nguyên liệu nghiên cứu Tam thất nam ( Stahlianthus thorelli Gagnep, họ Gừng Zingiberaceae ) Bộ môn Y học Cổ truyền - Trường Đại học Y Dược Thái Nguyên cung cấp Tác dụng: tán ứ tiêu thũng, hoạt huyết huyết, hành khí thống Bộ phận dùng: Rễ củ tam thất từ năm trở lên Bào chế: Tam thất rễ củ tươi rửa phơi khơ sau xay thành bột Đối tượng nghiên cứu Chuột nhắt trắng chủng Swiss, giống, trọng lượng 20 – 25g khỏe mạnh Động vật nghiên cứu Học viện Quân y cung cấp Sau mua ni phịng thí nghiệm môn Dược lý ngày trước tiến hành thí nghiệm Được cho ăn thức ăn tiêu chuẩn Viện vệ sinh dịch tễ trung ương cung cấp, uống nước tự d o Thuốc, máy móc dụng cụ nghiên cứu Máy xét nghiệm đông máu tự động Sysmex CA – 600 series Phương pháp nghiên cứu Mơ hình nghiên cứu độc tính cấp tam thất nam - Đánh giá độc tính cấp, xác định LD50 (nếu có) - Xác định LD50 theo phương pháp Litchfield – Wilcoxon: Chuột nhắt trắng trọng lượng 20 - 22 gam chia thành lô, lô 10 Cho lô chuột uống thuốc thử liều tăng dần từ liều cao không gây chết chuột đến liều thấp gây chết tồn chuột thí nghiệm, thể tích cho uống định 0,2 ml/10g thể trọng cho lần uống, uống lần/24 giờ, cách Chuột nhịn ăn 12 trước uống thuốc, sau uống thuốc lần 2, chuột cho ăn trở lại, nước uống đầy đủ Theo dõi chuột liên tục vòng đầu, số chuột chết 72 tình trạng chung chuột ngày sau uống thuốc (ăn uống, hoạt động, tiết v.v ) Nếu chuột chết, mổ chuột để đánh giá đại thể tổn thương quan Xác định liều chết 50% (LD50) theo tỷ lệ chuột chết vòng 72 đầu Chỉ tiêu theo dõi: - Tình trạng chung chuột - Số chuột chết vòng 72 Chỉ tiêu đánh giá: - Xác định LD50 (nếu có chuột chết), quan bị ngộ độc - Nhận xét biểu bất thường chuột có Nghiên cứu tác dụng Tam thất nam tới số lượng tiểu cầu số đông máu Chuột nhắt trắng chủng Swiss (22 – 25g) Mỗi lô 10 - Lô (chứng): uống nước muối sinh lý - Lô (thuốc thử liều thấp): mẫu thử liều thấp với thể tích 0,2ml/10g chuột - Lơ (thuốc thử liều cao): mẫu thử liều cao với thể tích 0,2ml/10g chuột Cho chuột uống nước muối sinh lý thuốc ngày Đến ngày thứ 5, sau lô uống thuốc giờ, lấy máu hốc mắt chuột để xác định thông số: số lượng tiểu cầu, thời gian prothrombin (PT), thời gian hoạt hóa phần phức hợp thromboplastin (aPTT), nồng độ fibrinogen Xử lý số liệu Số liệu nhập xử lý phương pháp thuật toán thống kê y sinh học phần mềm Excel 2010 Số liệu biểu diễn dạng X ± SD Kiểm định giá trị t-test Student test trước-sau (Avant – Apres) Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,05 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Độc tính cấp tam thất nam Bảng 1: Kết mơ hình nghiên cứu độc tính cấp tam thất nam Số chuột chết Tỷ lệ chuột Lô n Liều dùng 72 chết (%) 10 0 10 14g/kg x lần 0 10 16g/kg x lần 0 10 18g/kg x lần 0 10 20g/kg x lần 20 Qua kết bảng nhận thấy: Lô làm chứng không cho uống thuốc, lô liều thấp 14g/kg, lô 16g/kg, lô 18g/kg lô liều cao 20g/kg, theo dõi chuột 72 đầu sau uống thuốc kết có chết lô 5, mổ kiểm tra quan dấu hiệu bất thường, khơng xuất huyết, khơng phù nghĩ nhiều nguyên nhân chết nhiệt độ phòng, tác động môi trường Số chuột sống lô ăn uống bình thường, chạy linh hoạt Tam thất nam không gây độc chuột nhắt trắng Tác dụng Tam thất nam tới số lượng tiểu cầu số đông máu Bảng 2: Tác dụng tam thất nam tới thời gian chảy máu Thời gian máu chảy ( giây) Lô ( X ± SD ) Lô chứng (1) 178,4 ± 32,6 Liều thấp (2) 138,7 ± 43,3 P2-1 0,05 ) Bảng 3: Tác dụng tam thất nam tới số đông máu Các số đông máu Tiểu cầu PT aPTT Fibrinogen Lô ( X ± SD) ( X ± SD ) ( X ± SD) ( X ± SD) 818,96 ± Lô chứng (1) 8,15 ± 1,31 3,16 ± 0,68 3,15 ± 0,57 122,79 891,92 ± Liều thấp (2) 8,98 ± 1,48 3,35 ± 0,82 3,46 ± 0,79 122,56 P2-1 Liều cao (3) P3-1 >0,05 904,61 ± 117,63 >0,05 >0,05 >0,05 >0,05 9,21± 1,17 3,52 ± 0,71 3,69 ± 0,71 >0,05 >0,05 >0,05 P3-2 >0,05 >0,05 >0,05 >0,05 Kết bảng cho thấy số: Số lượng tiểu cầu, PT, aPTT, Fibrinogen lô uống tam thất nam liều thấp lớn so với lô chứng, lô uống tam thất nam liều cao lớn so với lô chứng lô uống tam thất nam liều thấp cho thấy tam thất nam có giá trị điều trị chống đông máu, số đơng máu khơng có khác biệt lơ uống tam thất nam liều thấp liều cao so với lô chứng ( p > 0,05 ), số đông máu hai lô uống tam thất nam liều thấp liều cao khơng có khác biệt (p > 0,05) thời điểm nghiên cứu BÀN LUẬN Tam thất nam gọi Cẩm địa la, thiền liền tròn, ngải máu, tam thất gừng, khương tam thất ngải năm ông, tên khoa học Stahlianthus thorelii Gagnep Từ xa xưa cha ông ta biết dùng thảo mộc, cỏ thiên nhiên để làm thuốc, điều trị số bệnh thông thường Ngày với khoa học đại nhà khoa học có hội thiết bị tốt việc nghiên cứu, chế tạo phương thuốc từ cỏ đặc biệt Với tam thất nam có tác dụng: tán ứ tiêu thũng, hoạt huyết huyết, hành khí thống Chủ trị: nôn máu, kinh nguyệt nhiều [2] Trong dân gian dùng chữa đau nhức xương, đau nhức xương, kinh nguyệt nhiều, chảy máu cam, đau bụng hành kinh ăn uống tiêu, nôn mửa, trùng độc rắn độc cắn [1], [3] Nghiên cứu độc tính cấp tác dụng cầm máu tam thất nam thực để cung cấp chứng thực nghiệm làm sở cho việc sử dụng rộng rãi thuốc sử dụng tam thất nam điều trị cầm máu đông y Hiện lâm sàng điều trị cầm máu chủ yếu thuốc tây y, so sánh sử dụng thuốc đơng y có ưu nhược điểm so với thuốc tây so sánh với tam thất bắc Kết nghiên cứu cho thấy thuốc tam thất nam không gây độc có tác dụng cầm máu nhanh, điều chỉnh rối loạn đơng máu, có tác dụng làm giảm tình trạng máu nhiều, rút ngắn thời gian cầm máu Với kết nghiên cứu này, thấy Tam thất nam tác dụng diều trị cầm máu thực nghiệm Tam thất nam có nhiều tác dụng khác giảm đau, chống viêm,… giới nước chưa có nhiều nghiên cứu tác dụng tam thất nam Năm 2007 có đề tài nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học Tam thất gừng miền núi Nghệ An trường Đại học Dược Hà Nội [4] Bên cạnh tam thất bắc loại thuốc dụng rộng rãi ngồi nước tam thất nam có nhiều tác dụng điều trị tương tự lâm sàng với giá thành rẻ dễ mua Tuy nhiên, để có thêm chứng tác dụng cần thực thêm nhiều thí nghiệm nghiên cứu sâu để thuốc sử dụng rộng rãi KẾT LUẬN Tam thất nam không gây độc có tác dụng cầm máu động vật thực nghiệm: làm tăng q trình đơng máu giảm thời gian chảy máu TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ môn thực vật (2005), Thực vật học, Trường đại học Dược Hà Nội Đỗ Tất Lợi (2019) Những thuốc vị thuốc Việt Nam Nhà xuất Y học 377; 957; 914 Viện Dược liệu (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, NXB Khoa học kỹ thuật, tập II, tr 365-370, 775-888 Ngô Thị Xuân Quỳnh (2007), Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học Tam thất gừng miền núi Nghệ An, Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ Đại học – Trường Đại học Dược Hà Nội Cipil H S., Kosar A., et al (2009), "In vivo hemostatic effect of the medicinal plant extract Ankaferd Blood Stopper in rats pretreated with warfarin", Clin Appl Thromb Hemost, 15(3), pp 270-6 Vogel Hans Gerhard (2007), Drug Discovery and Evaluation: Pharmacological Assays, Springer, pp 36-439, 751-771 ... hemostatic effect ĐẶT VẤN ĐỀ Chảy máu hay gọi xuất huyết thường gặp sống hàng ngày, tình trạng máu bao gồm đủ thành phần huyết tương thành phần hữu hình khỏi hệ thống tuần hồn Khi bị chảy máu, với... thời gian chảy máu Thời gian máu chảy ( giây) Lô ( X ± SD ) Lô chứng (1) 178,4 ± 32,6 Liều thấp (2) 138,7 ± 43,3 P2-1 0,05 904,61 ± 117,63 >0,05