Đại cương về cây thuốc phiện và các alkaloid trong thuốc phiện (tiêu biểu là morphine)

Đại cương về cây thuốc phiện và các alkaloid trong thuốc phiện (tiêu biểu là morphine). Đây là phần tìm hiểu của mình qua các bài báo và sách về cây thuốc phiện, cùng với các alkaloid chứa trong nó, tiêu biểu là morphine: cấu tạo, cấu trúc tác động, cơ chế tác động, liều dùng,...

I Tổng quan Việc sử dụng có lẽ kỉ thứ 13 trước Công Nguyên Các tài liệu cổ Dioscorides, Celsus, Galen, Theophrastus,… cung cấp nhiều thông tin thuốc phiện, morphine, cách gieo trồng, thu hoạch cách sử dụng chúng loại thuốc Việc sử dụng thuốc phiện thời xa xưa Một tượng nhỏ cao 775 mm (Hình 1) nữ thần Minoan (thế kỷ 13 trước Công nguyên) với bàn tay nâng cao cung cấp cho chứng cổ xưa thuốc phiện thuốc phiện Bức tượng biết đến với tên “Minoan- nữ thần thuốc phiện” mang đầu ba ghim di động giống đầu anh túc gây ngủ (Kerényi 1976: 24; Sakellarakis, 1987: 91) Hiện tượng trưng bày bảo tàng Herakleion Các nhà khảo cổ Hy Lạp kết luận rằng: - Các rãnh dọc viên nang có màu đậm hơn, liên quan đến việc chiết xuất nước ép - Nữ thần Minoan dường nhắm mắt ngủ - Các nếp gấp má tạo hiệu ứng mỉm cười vơ hồn việc chia đơi mơi có lẽ bắt chước tác dụng thuốc (Kritikos Papadaki 1967: 25-26) Ngồi cịn có nhiều tài liệu tham khảo anh túc văn học cổ đại, cổ (thế kỷ thứ trước Cơng ngun), có lẽ từ Hesiod (Theog 125: 212) Homer (Iliad Books & 14) Hippocrates (460-377 355 trước Công nguyên) thường đề cập đến anh túc sử dụng chế phẩm thuốc đặc biệt ví dụ thuốc miên ma túy (Kapoor 1995: 13) Herakleides of Pontus (Fr Hist Gr 2.215, Fragment 9.3) đề cập đến việc sử dụng để trợ tử Aristotle (384-322 trước Cơng ngun) xem loại thuốc miên (Sneader 2005: 90) Hơn 8000 năm trước, người Somai Tây Á sử dụng biết khoái cảm thoải mái mà thuốc phiện mang lại dùng Thế kỉ thứ 1, Rioskelires miêu tả kỹ thuốc phiện sách “Dược điển luận” mình, nhiên thời kì người ta trọng đến khoái cảm, tác dụng chữa bệnh mà thuốc phiện mang lại chưa ý tới mặt trái nó, tác dụng gây nghiện khó chữa Trong kỷ XIX, hoạt động bn lậu thuốc phiện tới Trung Quốc xuất phát từ Ấn Độ, đặc biệt hoạt động người Anh, thuốc phiện hay nha phiến nguyên nhân gây chiến tranh thuốc phiện hay gọi chiến tranh nha phiến, lần năm 1839 - năm 1842, lần năm 1856 - năm 1860 gây hậu chiến đế quốc Anh chiếm giữ Hồng Kông, nhiều quyền lợi phí bồi thường từ thỏa ước mà người Trung Quốc gọi "sự sỉ nhục kỷ" Buôn bán thuốc phiện trở thành nghề thu lời lớn nhà nghiên cứu lịch sử thuộc Đại học Harvard, ông John K Fairbank đánh giá "tội ác kéo dài mang tính hệ thống quốc tế thời đại." Được xem dược liệu quý, dùng cho giảm đau tốt loại dược liệu Đông lẫn Tây y hậu mà đem lại lạm dụng mức thảm họa cho xã hội đất nước, ảnh hưởng nghiêm trọng đến sức khỏe đạo đức người Hiện nước ta nhiều nước giới cấm trồng =>Cây thuốc phiện từ lâu loại trồng, loại thuốc, loại bùa phép, loại … quan trọng có ảnh hưởng lớn đến đời sống người Phương pháp chiết dùng - Đầu tiên, người ta đập viên nang với ép chất thơng qua máy ép, đập vào cối, sau viên ngậm thời trang; gọi meconium, coi hiệu nước ép nguyên chất latex; Pliny đồng ý phân su yếu nhiều so với thuốc phiện (HN 6.20.76.202) - Thứ hai, để tự chiết mủ, người xưa rạch vào viên nang dao (một quy trình cịn sử dụng thời đại) ý không cắt sâu, họ thu thập nước mắt chảy từ hến vỏ (myax) Dioscorides khuyến cáo thời gian ngày sương bốc để lấy nước mắt.8 Ông cảnh báo người ta nên đứng lại cắt viên nang để mủ khơng bị dính vào quần áo Sau thời gian ngắn, viên nang tạo giọt nước mắt khác cho sưu tập viên thuốc khác tìm thấy vào ngày hôm sau; Nước trái giã nhỏ cối làm thành viên ngậm, phơi khô để bảo quản nấu chảy lại để sử dụng.9 Phương pháp tương tự sử dụng để tạo viên ngậm từ phân su, trường hợp này, viên thuốc phiện giã nát đun sôi nước đến nửa khối lượng ban đầu, sau đun sơi lại với mật ong “hơi ẩm ngưng tụ” Đặc điểm thực vật 2.1 Phân loài phân bố: Cây Thuốc phiện thuộc Bộ Mao lương (Ranunculales), Họ Thuốc phiện (Papaveraceae) Chia làm phân họ (Papaveroideae Fumarioideae) với 44 chi 760 lồi Thuốc phiện trồng nhiều nước khí hậu ôn đới nhiệt đới Ấn Độ, Trung Quốc, Thổ Nhĩ Kì, Nam Tư, Nga, Myanma, Lào,… Ở nước ta trước thuốc phiện trồng Sơn La, Lai Châu, Lào Cai, Hà Giang, Cao Bằng, Lạng Sơn, Hịa Bình, Nghệ An,…với thứ Papaver somniferum var album Papaver somniferum var nigrum Hiện Chính Phủ cấm trồng thuốc phiện Các nơi vận động đồng bào dân tộc trồng công nghiệp thuốc khác thay 2.2 Mô tả cây: Cây thảo, sống hàng năm, cao 0,7- 1,5 m, phân nhánh, thân mọc thẳng Lá mọc cách, phía có cuống ngắn, phía khơng cuống, mọc ơm vào thân, mép có cưa Lá hình trứng dài 6-50 cm, rộng 3,5- 30 cm, đầu nhọn, phía cuống trịn hình tim Gân rõ mặt Hoa to đơn độc mọc đầu thân đầu cành Có cuống dài 1214cm, đài hoa gồm đài màu xanh sớm rụng hoa nở, đài dài 1,5 - cm Tràng 4cánh, dài 57 cm màu trắng hay tím hồng Nhị nhiều, bao quanh bầu có ngăn gồm 15- 20 nỗn dính liền thành hình cầu Quả nang hình cầu hình trứng dài 47 cm, đường kính 3-6 cm, đỉnh có núm, có cuống phình chỗ nối, Quả chín có màu vàng xám Hạt nhỏ nhiều (25000- 30000 hạt/quả), giống hình thận, dài 0,5 – mm, mặt có vân hình mạng, màu xám hay vàng nhạt xám đen Toàn thân chỗ bấm có nhựa mủ màu trắng, để lâu chuyển thành nâu đen 2.3 Trồng trọt thu hái: Thuốc phiện mọc tốt vùng khí hậu mát Cây chịu khí hậu lạnh (từ 5-10 oC) nóng Nhưng tuần sinh trưởng thời tiết phải mát ẩm, sau khí hậu nóng khơ phát triển tốt, nước ta phù hợp với khí hậu vùng núi có độ cao 800 – 2000 m Ở nước có mùa đông giá lạnh người ta thường gieo hạt vào mùa xuân, có nơi gieo hạt vào cuối mùa thu cho tuyết rơi xuống bảo vệ hạt qua mùa đông thu hoạch vào cuối tháng đầu tháng Ở nước ta thường gieo vào cuối tháng 10 đầu tháng 11, thu hoạch vào cuối tháng đầu tháng Hiện người ta tiến hành nhiều biện pháp tạo đột biến để đạt mục đích trồng trọt khác nhau: ví dụ trồng thuốc phiện cho hàm lượng lớn morphine, cho hàm lượng codein,… 2.4 Thành phần hóa học: - Lá: Chỉ có vết alcaloid (0,02 - 0,04%) - Quả: Tỷ lệ alcaloid thay đổi tuỳ theo nịi - Trong khơ thường có 0,20 - 0,30% alcaloiđ tồn phần, đường chọn giống người ta nâng hàm lượng morphin lên tới 0.80% - Ở khô lấy nhựa hàm lượng alcaloid morphin cịn lại - Hạt: Khơng có alcaloid, chứa 15% gỉucid, 20% protein, 40 - 45% dầu Dầu béo gồm glycerid acid béo không no (acid oleic 30%, lioleic 60%, linolenic 5%) => dùng hạt để chiết xuất dầu ăn, dầu béo,… - Nhựa thuốc phiện: hoạt chất nhựa thuốc phiện alcaloid (20 - 30%) dạng muối (meconat, lactat ,) Tới phân lập dược khoảng 40 alcaloid Căn vào cấu tạo hố học người ta xếp vào nhiều nhóm Đa số alkaloid dùng làm thuốc trị bệnh có hoạt tính cao Đặc biệt từ anh túc, ta chiết nhiều alkaloid có giá trị Trong số này, có nhiều alkaloid đáng ý: - Đầu tiên morphine, người ta thường nói vui đẹp lại thường kèm theo nguy hiểm Morphine vậy, có rất nhiều cơng dụng loại thuốc gây nghiện mạnh, cần thận trọng dùng Cũng mà nhiều nước giới liệt kê vào loại thuốc giảm đau opioid cấm trồng, trồng phục vụ mục đích đặc biệt sản xuất thuốc chữa bệnh theo quy định nghiêm ngặt - Cùng nhóm morphinan cịn có codeine loại thuốc ho, thuốc giảm đau dùng nhiều giới Codein gây nghiện so với morphine Nó nằm danh sách thuốc thiết yếu WHO, gồm thuốc hiệu an toàn cho hệ thống y tế - Papaverine dùng để điều trị co thắt nội tạng co thắt mạch máu - Noscapine thuốc ho Phần tiếp theo, nhóm xin giới thiệu thuốc phiện, tập trung chủ yếu vào loại alkaloid morphine chất có nhiều tác dụng sử dụng phổ biến, bên cạnh nhóm đề cập qua đến codeine- loại alkaloid dùng để trị ho phổ biến Và điều kiện sử dụng cách, morphine codeine loại thuốc quan trọng Morphine chiết vào năm 1805 coi hợp chất có tính base tách từ thực vật Do tính gây nghiện morphine nên việc ứng dụng bị hạn chế, morphine sản xuất giới 90% dùng để bán tổng hợp thành codein, thuốc chữa ho đặc hiệu Cho đến nước ta chưa sản xuất codein nên năm phải bỏ đô la để nhập codein II Chiết xuất, tổng hợp sản xuất morphine Phương pháp chiết dung môi hữu môi trường kiềm, chiết nước acid, chưng cất lôi nước Cũng giống loại alkaloid khác, morphine chiết phương pháp thông thường chiết dung môi hữu môi trường kiềm, chiết nước acid Cả phương pháp học thí nghiệm sở kỹ thuật hóa dược Phương pháp dựa vào tính tan khác dạng base dạng muối alkaloid dung mơi, người ta loại phần tạp chất khỏi dịch chiết trước định tính, định lượng hay phân lập alkaloid tinh khiết Việc chuyển đổi qa lại dạng muối dạng base nhằm mục đích này, tương tự kết tinh lại Tuy nhiên phương pháp lại kiểu dùng để kiểm nghiệm, định tính, định lượng chính, tức chiết lượng alkaloid nhỏ để tiến hành bước kiểm nghiệm, định tính, định lượng, đánh giá chất lượng Phù hợp để thực quy mô phịng thí nghiệm Để sản xuất thực tế cần phương pháp, quy trình khác cho hiệu suất, suất cao Tương tự nicotin, morphine chiết phương pháp chưng cất nước Chưng cất định nghĩa là: “Sự tách rời cấu phần hỗn hợp nhiều chất lỏng dựa khác biệt áp suất chúng” Trong trường hợp đơn giản, chưng cất hỗn hợp gồm chất lỏng khơng hịa tan vào nhau, áp suất tổng cộng tổng hai áp suất riêng phần Do đó, nhiệt độ sơi hỗn hợp tương ứng với áp suất tổng cộng xác định, không tùy thuộc vào thành phần bách phân hỗn hợp, miễn lúc hai pha lỏng tồn Nếu vẽ đường cong áp suất chất theo nhiệt độ, vẽ đường cong áp suất tổng cộng, ứng với áp suất, ta dễ dàng suy nhiệt độ sôi tương ứng hỗn hợp nhận thấy nhiệt độ sôi hỗn hợp luôn thấp nhiệt độ sôi hợp chất Ở áp suất khí 760 mmHg ,ta có morphine có nhiệt độ sơi 254oC, khơng tan nước=> ta có hỗn hợp lỏng sôi 100oC không tan lẫn vào nhau, ta tiến hành chưng cất lôi nước Hỗn hợp lôi đi, sản phẩm thu tách thành pha, ta cần chiết bỏ pha nước thu pha morphine Chiết xuất morphin từ nhựa thuốc phiện: Câu hỏi chung chiết morphine chiết lẫn alkaloid khác Tất nhiên rồi, nhiên ta hiểu thành phần thuốc, dược phẩm ln có tiêu định, tức hàm lượng khoảng đó, khơng thể hồn tồn tinh khiết 100%, nên việc lẫn alkaloid khác khơng vấn đề, ngưỡng cho phép Thứ hai, độ phân cực, tính chất alkaloid có điểm khác biệt nhỏ, cho phép ta loại bỏ từ từ tạp chất khỏi morphine, ta dùng kết tinh lại để thu sản phẩm gần tinh khiết Thứ ba, người ta dùng đến kỹ thuật bán tổng hợp, sinh tổng hợp để sản xuất morphine Thứ tư, nhờ khoa học, ta can thiệp vào anh túc để điều khiển hàm lượng chất nó, muốn sản xuất nhiều morphine ta có phương pháp canh tác, ni trồng, chăm sóc khác, muốn sản xuất nhiều codein ta lại có phương pháp khác a) Pp Thiboumery: Theo phương pháp Thiboumery: Chiết nhựa thuốc phiện nước nóng rót dịch chiết vào sữa vơi nóng, calci morphinat tan nước vơi thừa, cịn tạp chất tủa xuống Lọc, đun sơi dịch lọc thêm amoni clorid có morphin base tủa xuống Rửa tủa nước, hoà tan acid HC1 có morphin hydroclorid, sau cho kết tinh lại nhiều lần thu morphin hydroclorid tinh khiết b) Phương pháp chiết morphine từ vỏ thuốc phiện chín chưa rạch nhựa: Trước đây, Việt Nam phải nhập lượng lớn thuốc từ nước ngồi, có morphine codein, theo thống kê, trước mở cửa 1986, năm ta phải nhập khoảng morphine codein Do đó, đặt yêu cầu sản xuất nước (có thể chất lượng khơng q cao) Chính vậy, dựa theo nghiên cứu Liên Xô, Hungary, năm 1994, Nghiên cứu chiết xuất Morphin từ thuốc phiện (papaver somniferum L) Việt Nam bán tổng hợp thành Codein, 1994 Theo phương pháp này, việc chiết alcaloid, người ta thu hoạch hạt thuốc phiện để ép dầu ăn làm thuốc, mặt hàng quan trọng công nghiệp dược phẩm thực phẩm Mặt khác chiết alkaloid từ vỏ thuốc phiện góp phần hạn chế việc lưu hành thuốc phiện thị trường Phương pháp tránh việc chích, rạch nhựa thuốc phiện=> giảm sức lao động việc sản xuất mà hạn chế vận chuyển, mua bán thuốc phiện thị trường c) Chiết từ khơ chưa chích nhựa (phương pháp Kabay) Theo phương pháp Kabay: Lấy thuốc phiện khơ có đoạn cuống 10 – 12 cm xay nhỏ Chiết bột dược liệu nước nóng, dịch chiết thành cao đặc, chiết lại cồn, cất thu hồi dung môi tủa morphin amoni sulfat mơi trường kiềm có benzen Lấy riêng tủa morphin Có số alcaloid khác codein, narcotin thebain hoà tan benzen Tách lớp benzen làm kết tủa để lấy riêng codein, narcotin thebain cách tạo muối thích hợp https://books.google.com.vn/books? id=QReYAQos2goC&pg=PA345&lpg=PA345&dq=extract+method+kabay&source=b l&ots=nAsVWdyh6H&sig=ACfU3U1SeckY6RITsOomKHgBDk0N0ag2SA&hl=vi& sa=X&ved=2ahUKEwjz_ZaToYDqAhUOyosBHYAFAXMQ6AEwAnoECAsQAQ#v =onepage&q=extract%20method%20kabay&f=false d) Dùng nhựa trao đổi ion Dùng nhựa trao đổi ion âm (anionic) Sắc ký trao đổi ion trình sắc ký phân tách ion phân tử phân cực dựa lực chúng với trao đổi ion Một q trình chiết tách tách morphin khỏi chất đặc thân thuốc phiện thuốc phiện cách sử dụng nhựa trao đổi cation bao gồm bước chiết nước dung dịch nước rượu, lọc, hấp phụ cột nhựa trao đổi cation, rửa nước, rửa giải, cô đặc , điều chỉnh pH = 8,5-9,5, kết tinh, lọc sấy khô Trong điều kiện trung tính axit, morphin tồn dạng cation, tiếp xúc với nhựa trao đổi ion cation, dung dịch morphin kết hợp với nhựa với tương tác tĩnh điện trao đổi ion xảy ra, cần tách morphin với tạp chất dung dịch , sử dụng morphin điều kiện kiềm tạo thành đặc tính anion morphin rửa giải dung dịch kiềm Nhà phát minh sử dụng nước rượu (cồn thấp chứa 1-6 carbon) dung dịch hỗn hợp cồn-nước khuấy trộn để chiết xuất nguyên liệu thô mà CPS thuốc phiện, v.v có chứa morphine, xem xét lý chi phí dung môi chiết tối ưu nước Giảm nhiệt độ nhiệt độ phịng đến nhiệt độ hồi lưu, nhiệt độ tối ưu 50 ～ 60oC Trích xuất sau lọc, cặn chiết lại dung môi ～ lần, trộn chiết dịch lọc Sau nhựa trao đổi ion cation tiến hành xử lý sơ bộ, chuyển thành dạng amoni, loại natri Hydrogen Chiết xuất đề cập ngược lại (tốt đảo ngược) có chứa morphine lên cột nhựa trao đổi ion, sau có lên dung dịch mẫu, tiếp cận không màu với nước khử ion vào dung dịch, sử dụng dung dịch nước kiềm dung dịch nước để thực rửa sau đó, tốt để thực rửa dung dịch ammoniac ～ 2N morphin, làm bay đến kích thước nhỏ, chuyển pH8,5 ～ 9,5 tốt pH9,1 ,, rửa lọc, thành phẩm khô morphine có qua q trình kết tinh đủ Hàm lượng morphin thu qua phương pháp nói 80 93%, suất chiết 85 ～ 95%.Morphin thu được sử dụng trực tiếp tổng hợp codein, thực với chăm sóc thêm theo phương pháp biết https://patents.google.com/patent/CN1597039A/en e) Sinh tổng hợp morphine http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S012000112008000200009 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3877807/ Các enzyme sinh tổng hợp alkaloids phân lập từ khu vực thành phần phần tử sàng liền kề gần với laticifers (52, 65) ghi nhãn miễn dịch huỳnh quang cách sử dụng kháng thể làm lực; ba enzyme chủ yếu liên quan đến, (S) -N-methylcoclaurine 3-hydroxylase (CYP80B1), enzyme cầu berberine (BBE), codeinone reductase (COR), tham gia vào trình sinh tổng hợp morphin kháng khuẩn liên quan L-tyrosine tiền chất axit amin tiền chất cho alcaloid thuốc phiện Khử oxy hóa L-tyrosine sau khử decarboxyl hóa tạo hydroxyphenylacetaldehyd, hóa chất cần thiết cho trình sinh học alcaloid Ngoài ra, Ltyrosine decarboxylation cung cấp tyranine sau oxy hóa thành dopamine Phản ứng hóa học để tổng hợp alcaloid bắt đầu ngưng tụ dopamine 4-hydroxyphenylacetaldehyd (66) enzyme norcoclaurine synthase sản xuất (S) -norcoclaurine, norcoclaurine 6-O-methyltransferase (6) chuyển đổi (S) - norcoclaurine thành (S) -N-methylcoclaurinewhich chuyển đổi thành (S) -coclaurine methyl hóa trước (S) -cocularine đóng vai trị bước ngoặt để sản xuất benzyl isoquinoline alkaloid papaverine, phthalideisoquinoline alkaloid noscapine, morphinans morphin, codeine thebaine Enzyme NADHdepunt codeinone reductase (COR) chuyển đổi (-) - codeinone thành (-) - codein bước áp chót sinh tổng hợp morphin III Định tính Sử dụng thuốc thử chung Trong kiểm định dược liệu chứa alkaloid, tiêu kiểm định chung cho moik dược liệu, người ta phải tiến hành định tính định lượng alkaloid dược liệu Có thể định tính alkaloid trực tiếp mơ thực vật hay dịch chiết dược liệu Để định tính alkaloid vi phẫu thực vật, người ta quan sát tủa alkaloid với thuốc thử Bouchardat kính hiển vi Đơi định tính trực tiếp alkaloid mặt cắt dược liệu thước thử đặc hiệu Để định tính alkaloid dịch chiết dược liệu, thuốc thử chung, thuốc thử tạo màu sắc ký lớp mỏng phương pháp thường dung Có nhiều phương pháp định lượng alkaloid dược liệu phương pháp cân, phương pháp thể tích, phương pháp quang phổ Tùy trường hợp mà lựa chọn phương pháp thích hợp Cũng kết hợp phương pháp phân tách (thường phương pháp sắc ký) với việc định lượng (thường phương pháp quang phổ) để định lượng riêng hay vài alkaloid hỗn hợp alkaloid toàn phần Để phát alkaloid liệu phản ứng hóa học, thơng thường người ta chiết alkaloid khỏi quan thực vật phương pháp chiết thích hợp dùng thuốc thử để phát đánh giá sơ có mặt chúng dược liệu Tùy theo phản ứng mà sử dụng dịch chiết thích hợp Các phản ứng với thuốc thử chung thường thực với muối alkaloid môi trường nước acid Các thuốc thử chung cho với alkaloid tủa vô định hình có màu sắc khơng đặc trưng thay đổi tùy theo thuốc thử Với số thuốc thử, tủa tan lại lượng thuốc thử thừa Trong điều kiện quy định lượng dược liệu, lượng dung môi, chiết thuốc thử sử dụng dựa vào mức độ tạo tủa, lượng thuốc thử sử dụng để đánh giá sơ hàm lượng alkaloid nguyên liệu Các thuốc thử thường dùng Bouchardat, Valse-Mayer, Dragendorff, Bertrand, Hager acid tannic Lấy ống nghiệm nhỏ, cho vào ống ml dịch chiết nước acid Cho riêng rẽ vào ống nghiệm giọt thuốc thử Bouchardat, ValseMayer, Dragendorff, Bertrand Hager Lắc điều, quan sát nhận định kết Nếu cần cho thêm 1-2 giọt thuốc thử Nhận định kết quả:  Dung dịch  Dung dịch đục mờ không lắng xuống  Dung dịch đục, có tủa lắng xuống sau vài phút  Có tủa lắng xuống Dung dịch đục them giọt thuốc thử thứ  Có tủa nhiều Phản ứng với FeCl3 Tạo thành phức đỏ Thuốc thử sulfoformol Phức đỏ sẫm Thuốc thử Huseman Đo phổ hấp thụ tử ngoại Đo phổ hấp phụ tử ngoại bước sóng từ 250nm- 350nm Dung dịch cho cực đại 285nm A (1%, 1cm) 285 khoảng 37-43 Sắc ký lớp mỏng Cân 0,5 g silica gel G cho vào nghiệm nhỏ, thêm vào khoảng 1,2 ml nước cất, dùng ngón tay bịt chặt đầu ống lắc mạnh vài lần theo chiều dọc ống nghiệm Đổ nhẹ nhàng từ từ hỗn dịch silica gel lên phiến kính kích thước x 12 cm Nghiêng nhẹ thủy tinh để hỗn dịch trải lên mặt phiến kính Để tráng lên khay kim loại, đặt vào chỗ phẳng nước (khi lớp silica gel trở nên trắng đục, khơng cịn lống nước) Sấy hoạt hóa mỏng 110 ºC Làm nguội bảo quản mỏng hoạt hóa bình hút ẩm Với mỏng tráng sẵn, dùng bàn cách kéo cắt thành nhữung miếng có kích thước thích hợp (3x6,6 cm 2,5 x 10 cm, không cần sấy hoạt hóa) Chuẩn bị dung mơi bình sắc ký Bình sắc ký rửa sấy nhẹ đến khơ Lót lịng bình giấy lọc Nhỏ lên miếng giấy lọc 3-4 giọt NH4OH đđ rót dung mơi sắc ký vào bình (lớp dung mơi cao khoảng 0,5 cm ) Đậy nắm kính (nếu cần, thoa Vaseline miệng bình), đặt nơi phẳng, để yên 30p trước triển khai Các hệ dung môi sử dụng: S1= bên – aceton (4:1) hay S2= CHCL3- MeOH- NH4OH ( 50:9:1) Đưa mẫu lên mỏng, triển khia phát Dùng mao quản chấm lên sắc ký vết, từ trái sang phải dung dịch alkaloid base toàn phần chloroform (V) Bình vơi, (S) Tâm sen (B) Bách hộ Các vết chấm phải nhỏ, gọn (nên chấm thành vạch mm x3 mm), thẳng hàng cách nhau, vết cách vết ≥ 0.5 cm; cách mép bên ≥ 0,5 cm cách mép khoảng 1,5 cm Tùy theo nồng độ dịch thử mà chấm với số lần thích hợp,sao cho sau triển khai phun thuốc thử vết không mờ, khó phát khơng q đậm, làm vết to, chồng lấp lên Đặt mỏng vào bình sắc ký, đậy kín nắp để n (các lớp chấm phải nằm cao lớp dung môi) Khi dung mơi chạy cịn cách mép khoảng 0,5 cm, lấy mỏng ra, dùng bút chì đánh dấu mức dung môi, để khô tự nhiên hay sấy nhẹ cho hết dung môi Phát vết sắc đồ cách: - Soi đèn UV 254 365 nm Phun (hoặc nhúng nhanh) thuốc thử Dragendorff (trong tủ hút) Lau silica gel rơi vãi bàn thí nghiệm khan ướt, khơng thổi bột silica gel! Silica gel gây chứng bụi phổi hít phải Vẽ sắc đồ phát UV 254 thuốc thử Dragendorff Ghi nhận lại màu vết UV 365 sau phun thuốc thử Dragendorff Tính Rf vết lên màu với thuốc thử Dragendorff Ghi nhận xét IV Định lượng V Dược lực - Chiết alkaloid có tác dụng giảm đau - Hạt dùng dược phẩm ẩm thực có chứa loại dầu khác nhau, dùng làm dầu ăn, dầu salad - Cây thuốc phiện có hoa đẹp, nhiều màu sắc, trồng để trang trí - Morphine lần Friedrich Sertürner phân lập khoảng thời gian từ năm 1803 đến 1805.[4] Điều thường cho cô lập hoạt chất từ thực vật [5] Merck Group bắt đầu tiếp thị vào năm 1827 [4] Morphine sử dụng rộng rãi sau phát minh ống tiêm da vào năm 1853 – 1855.[4][6] Sertürner ban đầu đặt tên chất morphium theo tên vị thần giấc mơ Hy Lạp, Morpheus, chất có xu hướng gây ngủ - 70% dùng để tổng hợp loại thuốc khác codein, heroin,… Morphine loại thuốc cấm schedule II Hoa Kỳ (gồm chất gây nghiện dội dùng điều trị bệnh, morphin, methadon, secobarbital…) , ln nằm nhóm thuốc gây nghiện mạnh nước Cấu trúc tác động 1.1 Các nhóm chức Nó có nhóm chức năng: - nhóm amine bậc - nhóm -OH gắn C3 C6 - nhóm ether - liên kết đôi C7-C8 - n-methyl chủ yếu chịu trách nhiệm tác dụng giảm đau Tác động - Nhóm OH- phenol C3: Cần thiết để liên kết với thụ thể m k; tìm thấy tất chất chủ vận m mạnh; Nếu thay đổi nhóm làm giảm tác dụng - Thêm -OH C14 giúp tăng khả vượt qua hàng rào máu não, giảm tác dụng giảm ho - Liên kết đôi C7-C8: bỏ liên kết đôi giúp tăng hoạt động - Nhóm -OH C6: Nếu bỏ -OH tăng độ tan béo; oxy hóa thành gốc ketone thu hydromorphone hydrocodone làm tăng tác động; có liên quan đến việc giải phóng histamine - N-methyl: nhóm nitơ có tác dụng hoạt động dược lý opioid chất đối kháng ma túy tạo cách sử dụng cấu trúc oxymorphone với nhóm sửa đổi nitơ nitơ chủ yếu bậc ba với thay methyl morphin kích thước nhóm nitơ cho thấy tiềm hoạt động chủ vận chất đối kháng a) tăng kích thước từ methyl đến c3 c5 dẫn đến hoạt động đối kháng b) thay lớn khôi phục hoạt động chủ vận dạng mạnh 1.2 Quy tắc morphine Quy tắc morphin Nó phát triển để khái quát hóa mối quan hệ hoạt động cấu trúc opioid khác nhau, để opioid hoạt động, phải có đặc điểm sau cấu trúc nguyên tử nitơ bậc ba carbon bậc bốn, tách từ nitơ bậc ba cầu gồm hai ngun tử cacbon tập tin đính kèm nhóm phenyl Receptor tác động morphine - Các loại receptor:  - Phân bố nhiều vị trí: + CNS: sừng sau tủy sống, đồi thị, chất xám quanh cầu não, não giữa, vùng chi phối hành vi + Ngoại biên: tủy thượng thận, tuyến ngoại tiết dày, đám rối thần kinh tạng - Tác dụng phức tạp: ức chế, kích thích Trong não, receptor chủ yếu nằm hệ viền (não cảm xúc) Receptor tập trung vùng đồi đồi thị, nhân Chất xám quanh não có lực cao với opiat, tiêm thẳng morphine vào vùng gây giảm đau rõ rệt Ở trục thần kinh vùng dẫn truyền tập hợp cảm giác đau có nhiều receptor Receptor cịn tập trung mơ thần kinh chi phối ruột (đám rối Auerbach), hồi tràng, điều cắt nghĩa tác dụng kinh điển opiat hệ tiêu hóa Receptor opiat có nhiều loại (muy-μ, delta-δ, kappa-κ, sigma-σ), receptor μ định tác dụng trung ương opiat, receptor δ định tác dụng ngoại vi morphine Receptor morphine receptor dẫn xuất morphine opiat tổng hợp khác Cấu tạo receptor morphine Receptor gồm có:  Một diện phẳng kỵ nước gắn với nhân thơm morphine liên kết Van der – Waals, phối hợp với vị trí gắn chức phenol  Một vị trí anion liên kết ion với chức amin cấu trúc piperidin morphine Một khoang dành cho nhân phenanthren phân tử morphine  Cơ chế tác động Morphin có tác dụng chọn lọc với tế bào thần kinh trung ương, đặc biệt vỏ não Một số trung tâm bị ức chế (trung tâm đau, trung tâm hô hấp, trung tâm ho), có trung tâm lại bị kích thích gây co đồng tử, nôn, chậm nhịp tim 3.1 Tác dụng thần kinh trung ương (CNS): a) Tác dụng giảm đau: Morphin thuốc giảm đau mạnh làm tăng ngưỡng nhận cảm giác đau, thuốc làm giảm đáp ứng phản xạ với đau Tác dụng giảm đau morphin thuốc kích thích receptor muy kappa Morphin ức chế tất điểm chốt đường dẫn truyền cảm giác đau hệ thần kinh trung ương tuỷ sống, hành tuỷ, đồi thị vỏ não Như vậy, vị trí tác dụng morphin opioid chủ yếu nằm hệ thần kinh trung ương Khi dùng morphin, trung tâm vỏ não hoạt động bình thường, cảm giác đau mất, chứng tỏ tác dụng giả đau morphin chọn lọc Khác với thuốc ngủ, tất trung tâm vỏ não bị ức chế, bệnh nhân hết đau - Morphine hoạt động cách bắt chước peptide opioid tự nhiên, tức peptide opioid nội sinh enkephalin, endorphin dynorphin, chất chủ vận hồn tồn thụ thể CNS Các alkaloit opiates làm trung gian tác dụng dược lý chúng bốn họ thụ thể m, δ, s k, nhóm thụ thể kết hợp G-Protein Chuỗi tín hiệu opioid thể vận hành thông qua G-protein cách tác động lên số mục tiêu hệ thống enzyme, kênh ion, thụ thể trải qua thay đổi hình dạng morphine liên kết với gây trục xuất phân tử GDP gắn phân tử GTP vào G-protein G-protein kích hoạt phá vỡ thành hai, với GTP khuếch tán qua màng tác động lên phân tử mục tiêu cụ thể Chúng liên kết với adenyl cyclase ức chế hình thành AMP tuần hoàn tác động lên kênh kali làm tăng dẫn truyền K + kênh canxi làm giảm dẫn truyền Ca + dẫn đến giảm truyền kích thích đau Ngồi hoạt động thụ thể thơng qua hệ thống truyền tin thứ hai kích hoạt MAP kinase phospholipase C tạo thành inositol triphosphate diacylglycerol số nghiên cứu Hầu hết opioid gây giảm đau, hưng phấn, an thần ức chế hô hấp dẫn đến mức độ dung nạp cao tất điều sử dụng opioid nhiều lần Sự thích nghi thụ thể với phơi nhiễm opioid kéo dài dẫn đến dung nạp, mẫn cảm Tác dụng morphin GIT sử dụng cho tiêu chảy làm giảm nhu động GIT b) Gây ngủ: c) Gây sảng khối d) Trên hơ hấp e) Tác dụng vùng đồi f) Tác dụng nội tiết g) Co đồng tử h) Tác dụng gây buồn nôn gây nôn 3.2 Tác dụng ngoại biên: a) Trên tim mạch b) Trên trơn c) Trên da Giảm đau - Morphine trị đau cấp tính đau mãn tính Cùng với tác dụng giảm đau, morphin làm lo lắng, bồn chồn, căng thẳng đau gây nên người bệnh cảm thấy thản, thư giãn; người sử dụng có trạng thái lạc quan, sảng khối cảm giác đói Morphin tạo cảm giác khoái cảm, bị lạm dụng liều dẫn tới nghiện Đây mặt trái không mong muốn morphin opiat khác Đau triệu chứng ban đầu nhiều bệnh Trong đau có cảm giác khó chịu cố làm cách để hết đau Thật ra, cảm giác biết đau quan trọng, sở để biết bệnh trạng sức khỏe thể Đồng thời đau chế để bảo vệ thể, ví dụ đứa bé sờ vào lửa có cảm giác nóng đau, đau làm cho đứa bé có ý thức lần sau không nên sờ vào lửa hay thứ tương tự Đau có bệnh, cảm giác đau là… có bệnh Về phương diện khoa học, hiểu đau cảm giác dây thần kinh cảm giác bị kích thích độ tác nhân nhiệt, cơ, điện, chất hóa học Dưới ảnh hưởng kích thích đau, thể giải phóng nhiều chất gây đau histamin, kinin huyết tương, chất chuyển hóa acid… Khi có mặt morphin, morphin ức chế vỏ não trung khu não, làm giảm đáp ứng phản xạ giảm chất gây đau, ức chế cảm giác đau cách đặc hiệu chọn lọc Morphin làm giảm đau mà không làm xáo trộn ý thức Đây điểm quan trọng thuốc giảm đau dạng morphin giảm đau vị trí cần giảm đau (có chọn lọc) khơng phải làm cảm giác tồn (như nói cảm giác đau bệnh) Cơ chế tác dụng morphin lên hệ thần kinh trung ương giải thích thơng qua đặc tính hoạt hóa ức chế receptor (thể thụ cảm) thể Receptor điểm thụ cảm mô, tế bào có mặt nhiều quan thể, nhiều não tủy sống Riêng receptor đặc hiệu morphin tìm thấy vào năm 1973, gọi opioid receptor Có loại opioid receptor µ, k, σ δ Trong quan trọng receptor µ Khi morphin gắn vào receptor µ có tác dụng giảm đau, gây khối cảm gây nghiện Mọi tác dụng morphin hệ thần kinh có liên quan đến receptor µ Mặt trái thuốc giảm đau morphin lệ thuộc thuốc gây nghiện Khi lạm dụng morphin từ bên đưa vào thể cách thường xuyên, morphin tranh chấp với enkephalin (enkephalin chất thể, xem loại morphin nội sinh thể tiết để phục vụ cho nhu cầu thể, nên không gây hại) để kết hợp với opioid receptor Morphin ngoại sinh có mặt thêm vào thể làm thay đổi số chất điều hịa q trình thể Khi thể phải tự điều chỉnh để quen dần với có mặt chúng Một điều chỉnh làm giảm sau hồn tồn khơng tiết morphin nội sinh Khi ngừng morphin đột ngột, enkephalin nội sinh không đủ để điều tiết chất điều hòa thể, dẫn đến cân Lúc người sử dụng cần đưa thêm morphin từ bên ngồi vào để trì cân Nếu không dẫn đến vật vã dội, thể rối loạn đến mức người sử dụng khơng chịu đựng Trị khó thở VI Áp dụng Chủ yếu dùng để giảm đau: - Trong đau dội - Khi không đáp ứng với loại thuốc giảm đau khác - VD: đau sau phẫu thuật, chấn thương, thời kỳ cuối bệnh - Phối hợp gây mê VII Tác dụng phụ Gây nghiện nghiêm trọng Trước vào vấn đề, ta glia-một loại tế bào bổ trợ hệ thống thần kinh Qua 10 năm theo dõi, nhà nghiên cứu phát bị tác động, glia có tác dụng làm tăng chứng đau dây thần kinh (thường gặp chứng đau dây thần kinh vùng hơng), cách kích thích neuron não phát cảm giác đau đớn giả Morphin chặn đầu mối thần kinh, người sử dụng thấy tổn thương đỡ đau Nhưng mặt khác morphin cịn kích thích tế bào glia hoạt động, đến lượt nó, glia lại tác động lên neuron tạo cảm giác đau dây thần kinh lâu dài Có thể hình dung chuỗi tác động sau: Vết thương bị đau-dùng morphin để giảm đau, đồng thời bị thêm cảm giác đau dây thần kinh-lại dùng tiếp morphin để giảm đau lại bị đau dây thần kinh Quá trình tiếp diễn với liều lượng ngày tăng gây nghiện Điều lí giải lý thiếu ma tuý, nghiện thưởng thấy đau có kim châm da Sau phát chế, để tìm cách hạn chế tác dụng gây nghiện, nhà nghiên cứu bào chế thử tác dụng chất tên AV411 AV411 có chức khố khơng cho tế bào glia hoat động Thí nghiệm tiến hành chuột, chia thành nhóm, nhóm dùng morphin, cịn nhóm dùng morphin kết hợp với AV411 Kết cho thấy, glia khơng hoạt động có AV411, nên tác dụng giảm đau morphin nhóm thứ tăng lên đáng kể, đồng thời, sau dùng thuốc, nhóm thứ hai nhanh chóng khỏi tác dụng phụ (đau giả tạo) so với nhóm thứ Khi thí nghiệm, nhà nghiên cứu chủ ý cho chuột uống thuốc địa điểm cố định, buộc bị nghiện phải quay trở lại địa điểm dùng thuốc Sau thời gian chuột thuộc nhóm thứ có xu hướng quay trở lại địa điểm uống thuốc nhiều đáng kể, chứng tỏ chúng dễ bị nghiện bị nghiện nặng so với chuột nhóm thứ hai Papaver somniferum Linn., Cây thuốc phiện, thuốc lâu đời sử dụng toàn giới Mủ thu từ viên nang chưa chín chất tiết có chứa alcaloid có đặc tính giảm đau tuyệt vời gọi thuốc phiện Các alcaloid sinh tổng hợp mô tế bào nang phân lập kỹ thuật sắc ký khác Kỹ thuật điện di HPLC mao mạch sử dụng để định lượng loại ancaloit khác nhà máy cách sử dụng hệ thống dung môi ammonium acetate: acetonitrile, methanol: natri acetate, vv số pH định Một loạt hóa chất xác định cho thấy khả triển vọng cho nghiên cứu Thuốc phiện có đặc tính giảm đau gây hưng phấn, ảo giác an thần bị lạm dụng nhất; hút thuốc phiện sử dụng thuốc uống tiêm tĩnh mạch Morphine chất kiềm thu từ thực vật chất kiềm tự nhiên hiệu để giảm đau, hoạt động thụ thể kết hợp G-Protein (GPCR) Codeine, thebaine, papaverine, noscapine alcaloid khác có ý nghĩa mặt số lượng có tác dụng giảm đau morphin Codeine noscapine có hoạt tính chống ho Hoạt động dược lý hóa dược cịn nhiều lĩnh vực chưa có, quan tâm nghiên cứu dược lý trị liệu © 2014 Tổ chức nghiên cứu xuất iGlobal Đã đăng ký Bản quyền Giới thiệu Cây thuốc văn minh nhân loại có mối quan hệ trọn đời (1) chúng ni dưỡng giới với vơ số hóa chất có hiệu bệnh trục trặc khác thuốc hạ huyết áp thuốc giảm đau, thuốc gây mê, thuốc chống ung thư hợp chất chống ký sinh trùng, thuốc chống viêm, steroid, thuốc nhuận tràng, thuốc lợi tiểu nhiều loại khác (2) Hóa học sản phẩm tự nhiên, khoa học cổ đại, giúp phân tích phytochemical thực vật xác định tầm quan trọng dược liệu mạnh mẽ thực vật cụ thể (3) Sự thừa nhận kiến thức thực vật nhà thực vật học Theophrastus (4) Historia Plantarum, Pliny (5) lịch sử tự nhiên, vv tạo hệ thống thuốc truyền thống Trung Quốc, Ayurveda, Trung Đông, Châu Âu, Châu Phi Châu Mỹ (6, 7) Vì phần tổng hợp dựa thực hành y học ethno, nhà máy thần kinh có vị trí đáng ý việc sử dụng chúng chí cịn nghi thức hóa liên kết tơn giáo cho thấy mối quan hệ sớm với người (8- 10) việc sử dụng nấm linh thiêng (11), loại cần sa ma túy mạnh mẽ sativa (12) thuốc phiện gây ảo giác tiếng, đặt tên Thuốc y học Thần Thần Kẻ hủy diệt Nỗi đau khổ (13) Định lượng thuốc phiện thực nhiều phương pháp; Sắc ký lỏng hiệu cao HPLC (57, 58), Sắc ký khí GC (59), Sắc ký khí lỏng (60), Điện di mao quản (56, 61), Sắc ký giấy (62) Sắc ký lớp mỏng (48) điện di mao quản, sắc ký GC, HPLC sắc ký khí lỏng thứ mong muốn chúng kỹ thuật đại tẻ nhạt so với cũ Kỹ thuật điện di mao mạch loại bỏ vấn đề liên quan đến HPLC để tách ancaloit có độ phân cực gần giống morphin codein, HPLC sử dụng thường xuyên ưa chuộng so với GC Trong phương pháp HPLC, việc tách phát alcaloid thuốc phiện thực tốt cách đảo ngược HPLC pha pha tĩnh Khi phân tích thời gian phân tích 20 phút, người ta nhìn thấy xác định cụ thể morphin, codein, thebaine, papaverine noscapine alcaloid thuốc phiện Pha động sử dụng cho phương pháp 0,1% dung dịch nước heptafluorobutyricacid với 60:40 acetonitril chứa axit heptafluorobutyric 0,8% (58) Ngoài kỹ thuật điện di mao quản sử dụng unger et al tách alcaloid thuốc phiện thebaine, codeine, morphine, papaverine narcotine (noscapine), phát tia cực tím bước sóng 224nm; acetonitril-nước 1: dạng đệm chạy với amoni axetat 100mM 3.1 Sự kết hợp quang phổ khối với điện di mao quản trình cho thấy di chuyển nhanh thebaine sau codeine morphin đặc tính lipophilic thebaine nhóm methyl nhóm hydroxyl (63) Trong quan sát thấy việc thay acetonitril metanol ammonium acetate natri acetate dung dịch đệm 3: 7, 100mM natri acetate mức 3,1 pH để phân tách tối ưu đỉnh alkaloids; điện áp tối ưu cho thí nghiệm 15kV Nồng độ phần trăm theo tỷ lệ phần trăm gram theo quan sát điện di vùng mao mạch năm mẫu thuốc phiện thô Reddy cộng nằm khoảng 14,45-15,95 (morphine), 2,0- 3,5 (codein), 1,322,73 (thebaine), 0,92 -2,37 (papaverine) 3,85-5,77 (narcotine) (56) Sinh tổng hợp CODEIN Nhờ tổng hợp trimethyl-phenylamoni clorid, giúp phản ứng bán tổng hợp codein từ morphine tiến hành áp suất khí quyển, nhiệt độ phịng, phù hợp với điều kiện sản xuất nước ta nay, đáp ứng nhu cầu sản xuất codein nước Nhờ pp này, năm sx hàng chục sirocodein, đáp ứng nhu cầu chữa bệnh nhân dân  ... mà thuốc phiện mang lại chưa ý tới mặt trái nó, tác dụng gây nghiện khó chữa Trong kỷ XIX, hoạt động bn lậu thuốc phiện tới Trung Quốc xuất phát từ Ấn Độ, đặc biệt hoạt động người Anh, thuốc phiện. .. cấm trồng thuốc phiện Các nơi vận động đồng bào dân tộc trồng công nghiệp thuốc khác thay 2.2 Mô tả cây: Cây thảo, sống hàng năm, cao 0,7- 1,5 m, phân nhánh, thân mọc thẳng Lá mọc cách, phía... Nhựa thuốc phiện: hoạt chất nhựa thuốc phiện alcaloid (20 - 30%) dạng muối (meconat, lactat ,) Tới phân lập dược khoảng 40 alcaloid Căn vào cấu tạo hố học người ta xếp vào nhiều nhóm Đa số alkaloid