Từ dịch chiết cao chloroform thân cây mật gấu được thu hái tại Buôn Mê Thuột, Đắk Lắk, Lâm Đồng, Việt Nam, chúng tôi đã ly trích và xác định cấu trúc 3 hợp chất: 5-hydroxymethyl-2- furfuraldehyde (1); 2,3-dimethoxyphenol (2); 2-methylpyridin-3-ol (3). Cấu trúc hóa học của các hợp chất được xác định bằng các phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân một chiều và hai chiều kết hợp so sánh với các tài liệu tham khảo. Các hợp chất này lần đầu tiên được tìm thấy trong thân cây Mahonia nepalensis DC. mọc ở Việt Nam.
Tạp chí Khoa học Đại học Đồng Tháp, Tập 9, Số 3, 2020, 27-31 MỘT SỐ HỢP CHẤT CÔ LẬP TỪ CAO CHLOROFORM CỦA THÂN CÂY MẬT GẤU MAHONIA NEPALENSIS DC Hồ Thị Kiêm Ngân1, Dương Trần Thiện Toàn1, Nguyễn Thị Lan Hương2, Nguyễn Thị Hồng Hạnh3* Nguyễn Hữu Duy Khang2 Học viên cao học, Trường Đại học Sài Gòn Trường Đại học Sài Gòn Trường Đại học Đồng Tháp *Tác giả liên hệ: nthhanh@dthu.edu.vn Lịch sử báo Ngày nhận: 03/02/2020; Ngày nhận chỉnh sửa: 12/5/2020; Ngày duyệt đăng: 15/5/2020 Tóm tắt Từ dịch chiết cao chloroform thân mật gấu thu hái Buôn Mê Thuột, Đắk Lắk, Lâm Đồng, Việt Nam, chúng tơi ly trích xác định cấu trúc hợp chất: 5-hydroxymethyl-2furfuraldehyde (1); 2,3-dimethoxyphenol (2); 2-methylpyridin-3-ol (3) Cấu trúc hóa học hợp chất xác định phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiều hai chiều kết hợp so sánh với tài liệu tham khảo Các hợp chất lần tìm thấy thân Mahonia nepalensis DC mọc Việt Nam Từ khóa: Cây mật gấu, dị vòng, họ Berberidaceae, Mahonia nepalensis DC COMPOUNDS ISOLATED FROM THE CHLOROFORM EXTRACT OF MAHONIA NEPALENSIS DC TRUNK Ho Thi Kiem Ngan1, Dưong Tran Thien Toan1, Nguyen Thi Lan Huong2, Nguyen Thi Hong Hanh3*, and Nguyen Huu Duy Khang2 Post - graduate student, Sai Gon University Sai Gon University Dong Thap University *Corresponding author: nthhanh@dthu.edu.vn Article history Received: 03/02/2020; Received in revised form: 12/5/2020; Accepted: 15/5/2020 Abstract From the chloroform extract of Mahonia nepalensis DC trunk, collected in BanMeThuot, DakLak, VietNam, three compounds were isolated, namely 5-hydroxymethyl-2-furfuraldehyde (1), 2,3-dimethoxyphenol (2), and 2-methylpyridin-3-ol (3) The chemical structures of these compounds were determined by 1D, and 2D-NMR spectra in comparison with the related literature These compounds were found for the first time in Mahonia nepalensis DC growing in Vietnam Keywords: Mahonia nepalensis DC., hererocylic, Berberidaceae 27 Chuyên san Khoa học Tự nhiên Đặt vấn đề Cây Mật gấu có tên khoa học Mahonia nepalensis DC., họ Hoàng liên gai (Berberidaceae) Một số địa phương gọi Hoàng bá gai, Thích hồng liên, Tồng phềnh (Nguyen Thi Mai cs cs., 2009) Cây Mật gấu mọc hoang, thường gặp số tỉnh vùng núi cao mát Cao Bằng, Hà Giang, Lai Châu, Lào Cai, Lâm Đồng Theo kinh nghiệm dân gian, Mật gấu có cơng dụng chữa số bệnh Cụ thể, Mật gấu thường dùng chữa ho lao, sốt cơn, khạc máu, lưng gối yếu mỏi, chóng mặt ù tai, ngủ, chữa viêm ruột, tiêu chảy, kiết lị, viêm da dị ứng, viêm gan, viêm nha chu (Weicheng Hu cs., 2016) Rễ có tác dụng làm chất giãn cơ, chất chống oxy hóa chất chống nấm (Tian-Jye Hsieh cs., 2004) Thân có tác dụng kháng viêm, kháng khuẩn, chống nấm, điều trị bệnh da bệnh chàm, vảy nến (Nguyen Thi Mai cs., 2009) Trên giới có nghiên cứu lồi Mật gấu, cụ thể Awantika Singh cs (2017) phát UPLC-MS hợp chất từ rễ Mật gấu, bao gồm: reticuline, oblongine, magnoflorine, isoboldine, isocorydine, glaucine, demethyleneberberine, jatrorrhizine, palmatine, berberine, thalifendine, berberrubine, 8-oxojatrorrhizine, 8-oxoberberine Ở Việt Nam, nhóm nghiên cứu Đồn Thị Kim Đào (2016) xác định thành phần hóa học thân số chất sau: campesterol, tetradecanoic acid, pentadecanoic acid, hexandecanoic acid, heptadecanoic acid, octadecanoic acid, cis-13octadecenoic acid, (9Z,12Z)-octadecadienoic acid-thành phần chủ yếu acid Điều cho thấy, Mật gấu hay thân Mật gấu nguồn dược liệu quý, có tiềm cần tiến hành nghiên cứu Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu 2.1 Nguyên liệu Thân Mật gấu Mahonia nepalensis DC., họ Hoàng liên gai (Berberidaceae) thu hái thành phố Ban Mê Thuột, tỉnh Đắk Lắk, Việt Nam 28 vào tháng 12 năm 2016 Sau thu hái, thân rửa sạch, phơi khô xay nhuyễn thành bột 2.2 Hóa chất thiết bị Silica gel sắc ký cột cỡ hạt 0,040 – 0,063 mm mỏng silicagel 60–F254 hãng Merck, Đức Các dung môi công nghiệp hãng Chemsol (Việt Nam) chưng cất trước sử dụng gồm: n-hexane (H), petroleum ether (PE), chloroform (C), ethyl acetate (EA), methanol (MeOH), acetone (Ac), isopropanol (IPA) Phổ H-NMR (500 MHz) 13C-NMR (125 MHz), kết hợp với kỹ thuật phổ hai chiều HMBC… đo máy cộng hưởng từ hạt nhân BRUKER AC 500 MHz Phịng Thí nghiệm phân tích trung tâm, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh Đèn UV bước sóng 254-365 nm 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Chuẩn bị mẫu phân tích Bột thân Mật gấu (9 kg) chia làm nhiều phần trích nóng với MeOH Mỗi phần trích khoảng 200 g bột 1,5 l MeOH, trích lần lần Tồn dịch trích sau quay thu hồi dung môi áp suất thấp thu cao MeOH thơ (850 g) Cao MeOH thơ hịa tan với 500 ml methanol sóng siêu âm, sau trích lỏnglỏng với đơn dung mơi có độ phân cực tăng dn thu cao tương ứng sau: n-hexane (73 g), chloroform (412 g), ethyl acetate (70 g), acetone (100 g) methanol (45 g) Tiến hành khảo sát cao chloroform (412 g) với hệ dung môi khác 2.3.2 Phân lập chất từ cao chloroform thân mật gấu Tiến hành khảo sát thành phần hóa học cao chloroform (412 g) ly trích từ Mật gấu dựa sắc kí cột silica gel pha thường với hệ dung môi giải ly H:EA (0 – 100% EA) Tiếp tục với hệ dung môi C:MeOH có độ phân Tạp chí Khoa học Đại học Đồng Tháp, Tập 9, Số 3, 2020, 27-31 cực tăng dần (5%-100% MeOH) Kết thu phân đoạn nhỏ đánh số từ A đến K Phân đoạn D (9,76 g) tiến hành giải ly với hệ dung môi H:C (5:5) độ phân cực tăng dần đến 100%C Từ phân đoạn nhỏ thu được, khảo sát TCL, chọn phân đoạn có vết chất để tiếp tục giải ly với hệ dung môi H:EA (9:1) theo độ phân cực tăng dần đến 100%EA, theo dõi mỏng chọn phân đoạn phù hợp để tinh chế sắc kí lớp mỏng với hệ dung môi H:C:Ac (9:0,8:0,2) thu hợp chất (7 mg) (10 mg) Tương tự khảo sát phân đoạn E (3,12 g) với hệ dung mơi H:Ac với độ phân cực tăng dần Sau sử dụng sắc kí điều chế với hệ dung mơi H:C:EA với tỷ lệ (6:3:1) thu hợp chất (4,50 mg) - 5-hydroxymethyl-2-furfuraldehyde (1), dạng gel màu vàng, tan dung môi chloroform, TLC hệ dung môi PE:IPA (9:1) Rf= 0,4 1H-NMR (CDCl3, 500 MHz, δ, ppm, J/Hz): 4,69 (2H, s, H-1”), 6,5 (1H, d, J=3,5Hz, H-4), 7,2 (1H, d, J=3,5Hz, H-3), 9,55 (1H, s, H-1’) 13 C-NMR (CDCl3, 125 MHz, δ, ppm): 177,7 (C-1’); 160,8 (C-5); 152,4 (C-2); 122,9 (C-3); 110,0 (C-4); 57,6 (C-1”) - 2,3-dimethoxyphenol (2), kết tủa vơ định hình, tan dung mơi chloroform, TLC hệ dung môi PE:IPA (9:1) Rf= 0,45 1H-NMR (CDCl3, 500 MHz, δ, ppm, J/Hz): 7,73 (1H, dd, J=7,8; 1,8Hz; H-6), 7,2 (1H, t, J=8,0Hz, H-5), 7,6 (1H, dd, J=8,0; 1,7Hz, H-4), 4,09 (3H, s, H-1’), 3,9 (3H, s, H-1”) 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz, δ, ppm): 66,2; 56,2 (C-1’; C-1”), 165,0 (C-1), 152,0 (C-3), 148,0 (C-2), 125,0 (C-5), 124,0 (C-6), 117,0 (C-4) - 2-methylpyridin-3-ol (3), dạng gel màu cam, tan dung môi methanol, TLC hệ dung môi C:EA (1:1) Rf= 0,45 1H-NMR (CDCl3, 500 MHz, δ ppm, J/Hz): 7,12 (1H, dd, J=5,0; 1,9Hz; H-6), 7,06 (1H, dd, J=8,0; 5,0Hz, H-5), 7,85 (1H, dd, J=8,0; 1,9Hz, H-4); 2,40 (3H, s, H-1’) 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz, δ ppm): 154,0 (C3); 147,7 (C-2); 139,2 C-6); 123,6 (C-5), 123,3 (C-4), 18,4 (C-1’) Kết thảo luận Từ cao chiết chloroform, kỹ thuật sắc ký cột sắc ký mỏng điều chế phân lập hợp chất Cấu trúc hóa học hợp chất xác định phương pháp phổ 1D 2D-NMR, so sánh tài liệu tham khảo Hợp chất dạng gel màu vàng, tan dung môi chloroform Phổ 1H-NMR cho thấy diện tín hiệu proton olefin ghép với H-3 (δH 7,20, d, J=3,5Hz) H-4 (δH 6,50, d, J=3,5Hz) Một tín hiệu proton aldehyde -CHO (δH 9,55, s) nhóm oxymethylene [δH 4,69 (2H, s)] Phổ 13C-NMR kết hợp với phổ HSQC cho thấy hợp chất có tất tín hiệu carbon bao gồm carbon carbonyl (δC 177,7); carbon oxymethylene (δC 57,6); carbon olefin C-3 (δC 122,9) C-4 (δC 110,0), carbon olefin mang oxygen C-2 (δC 152,4) C-5 (δC 160,8) Dữ liệu phổ HMBC cho thấy tương quan sau: proton aldehyde (δH 9,55) có tương quan với carbon C-2 (δC 152,4) C-3 (δC 122,9); proton oxymethylene (-CH2O-) (δH 4,69) cho tương quan với carbon C-4 (δC 110,0) C-5 (δC 160,8); proton olefin H-3 (δH 7,20) cho tương quan với C-2 (δC 152,4), C-4 (δC 110,0), C-5 (δC 160,8) carbon aldehyde –CHO (δC 177,7); proton olefin H-4 (δH 6,50) cho tương quan với C-2 (δC 152,4), C-3 (δC 122,9) C-5 (δC 160,8) Với đặc điểm trên, tra cứu tài liệu thấy trùng khớp với 5-hydroxymethyl-2-furfuraldehyde (Hình 1) Hợp chất tìm thấy trước Hydrangea chinensis (Ashraf Taha Khalil cs., 2003), lần phát thân Mật gấu Hình 5-hydroxymethyl-2-furfuraldehyde (1) Hợp chất kết tủa vơ định hình Phổ H-NMR hợp chất cho thấy có diện vịng benzene 1, 2, trí hốn [δH 7,73 29 Chuyên san Khoa học Tự nhiên (dd, 7,8; 1,8 Hz; H-6); δH 7,20 (t, 8,0 Hz; H-5); δH 7,16 (dd, 8,0; 1,7 Hz; H-4)], cịn có tín hiệu nhóm methoxy (δH 4,09, s) (δH 3,91, s) Phổ 13C-NMR kết hợp với phổ HSQC hợp chất cho thấy có tất tín hiệu carbon bao gồm: tín hiệu carbon vòng benzene nằm vùng từ 115,0 – 165,0 ppm tín hiệu nhóm methoxyl (δC 66.2) (δC 56.2) Dữ liệu phổ HMBC cho thấy: proton hai nhóm methoxy cho tương quan với carbon nhân thơm mang oxygen (δC 148,2) (δC 152,1), proton H-4 cho tương quan với carbon này; nhóm methoxy xác định gắn vào carbon (δC 1482, C-2) (δC 152,1, C-3) vịng benzene Cịn lại carbon có độ dịch chuyển hóa học vùng trường thấp (δC 165,0) xác định carbon nhân thơm mang nhóm hydroxyl C-1 - Từ phân tích kết hợp so sánh với tài liệu tham khảo (Maja Lambert cs., 2006), cấu trúc hợp chất đề nghị 2,3-dimethoxyphenol (Hình 2), lần phát cao chloroform thân Mật gấu Hình 2,3-dimethoxyphenol (2) Hợp chất dạng gel màu cam Phổ 1H-NMR hợp chất cho thấy có tín hiệu proton olefin [δH 7,12 (dd, J=5,0; 1,9 Hz, H-6); 7,06 (dd, J=8,0; 5,0 Hz, H-5); 7,85 (dd, J=8,0;1,9 Hz, H-4) nhóm methyl 2,40 (s) Phổ 13C-NMR hợp chất cho thấy có tín hiệu carbon bao gồm carbon olefin [C-4 (δC 123,3), C-5 (δC 123,6), C-6 (δC 139,2)], carbon olefin trí hốn [C-2 (δC 147,7), C-3 (δC 154,0)] carbon methyl (δC 18,4) - So sánh liệu phổ H 3C-NMR hợp chất với 2-methylpyridin-3-ol (Mouhamad 30 Jida Jean Ollivier, 2008) cho thấy có tương hợp Vì vậy, cấu trúc hợp chất đề nghị 2-methylpyridin-3-ol (Hình 3) Đây lần hợp chất (3) phát cao chloroform thân Mật gấu Hình 2-methylpyridin-3-ol (3) Kết luận Trong nghiên cứu này, ba hợp chất lần phân lập từ cao chloroform thân Mật gấu bao gồm 5-hydroxymethyl2-furfuraldehyde (1), 2,3-dimethoxyphenol (2), 2-methylpyridin-3-ol (3) Các hợp chất cần tiếp tục đánh giá thêm hoạt tính sinh học nhằm tìm kiếm hoạt chất sinh học quý từ nguồn thực vật Việt Nam./ Tài liệu tham khảo Đoàn Thị Kim Đào (2016), Nghiên cứu chiết tách, xác định thành phần hóa học số dịch chiết thân mật gấu Cao Bằng, Luận văn thạc sĩ khoa học, Đại học Đà Nẵng Tian-Jye Hsieh, Yi-Chen Chia, Yang-Chang Wu and Chung-Yi Chen (2004), “Chemical Constituents from the Stems of Mahonia japonica”, Journal of the Chinese Chemical Society, (51), pp 443-446 Weicheng Hu, Lei Wu, Qian Qiang, Lilian Ji, Xinfeng Wang, Haiqing Luo, Haifeng Wu, Yunyao Jiang, Gongcheng Wang, Ting Shen (2016), “The dichloromethane fraction from Mahonia bealei (Fort.) Carr leaves exerts an anti-inflammatory effect both in vitro and in vivo”, Journal of Ethnopharmacology, (188), pp.134-143 Mouhamad Jida and Jean Ollivier (2008), Tạp chí Khoa học Đại học Đồng Tháp, Tập 9, Số 3, 2020, 27-31 “Convergent and selective synthesis of pyrrolidinones, piperidinones, dihydropyridinones and pyridinols from a common intermediate – potential precursors of bioactive products”, European Journal of Organic Chemistry, pp 4041-4049 Ashraf Taha Khalil, Fang-Rong Chang, ChihChuang Liaw, Patnam Ramesh, ShyngShiou F Yuan, Yang-Chang Wu (2003), “Chemical constituents from the Hydrangea chinensis”, Archives of Pharmacal Research, (261), pp.15-20 Maja Lambert, Lars Olsen, and Jerzy W Jaroszewski (2006), “Stereoelectronic effects on 1H nuclear magnetic resonance chemical shifts in methoxybenzenes”, The Journal of Organic Chemistry, (71), pp 9449-9457 Nguyen Thi Mai, Tran Anh Tuan, Hoang Thanh Huong, Chau Van Minh, Ninh Khac Ban and Pham Van Kiem (2009), Bisbenzylisoquinoline alkaloids from Mahonia nepalensis, Journal of Chemistry, (47), pp 368-373 Awantika Singh, Vikas Bajpai, Sunil Kumar, Ajay Kumar Singh Rawat and Brijesh Kumar (2017), “Analysis of isoquinoline alkaloids from Mahonia leschenaultia and Mahonia napaulensis roots using UHPLCOrbitrap-MSn and UHPLC-QqQLIT-MS/ MS”, Journal of Pharmaceutical Analysis, (7), pp 77-86 31 ... khảo sát cao chloroform (412 g) với hệ dung môi khác 2.3.2 Phân lập chất từ cao chloroform thân mật gấu Tiến hành khảo sát thành phần hóa học cao chloroform (412 g) ly trích từ Mật gấu dựa sắc... hợp chất (3) phát cao chloroform thân Mật gấu Hình 2-methylpyridin-3-ol (3) Kết luận Trong nghiên cứu này, ba hợp chất lần phân lập từ cao chloroform thân Mật gấu bao gồm 5-hydroxymethyl2-furfuraldehyde... đề Cây Mật gấu có tên khoa học Mahonia nepalensis DC. , họ Hoàng liên gai (Berberidaceae) Một số địa phương gọi Hồng bá gai, Thích hồng liên, Tồng phềnh (Nguyen Thi Mai cs cs., 2009) Cây Mật gấu