NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG CỦA α

VI N HÀN δÂε KHOA H C VÀ CỌNG NGH VI T NAM VI NăSINHăTHỄIăVẨăTẨIăNGUYểNăSINHăV T ***** NGUY NăV ăANH NGHIểNăC U NHăH NG C A MANGOSTIN T V QU M NGăC T Garcinia mangostana L LểNăVIăKHU N Streptococcus mutansTRểNăBIOFILMăVẨă NH H NG NG D NG ChuyênăngƠnh:ăSinhăh c th c nghi m Mƣăs : 60420114 LU NăV NăTH CăS ăKHOAăH C SINH H C Ng ih S ng d n khoa h c: TS NGUY N TH MAIăPH T H c li u ĐHTN NG HẨăN I - 2015 S T H c li u ĐHTN L IC M N - Trong qua trinh th c hiên luân v n khoa hoc , đa nhân đ c r t nhi u s gíp đ , kh́ch l v̀ đ ng viên c a Th y, Cô giáo, b n đ ng nghi p, b n bè v̀ nh ng ng i thân gia đình Qua đây, tơi xin đ c g i l i cam n sâu s c c a đên nh ng ca nhân v̀ tâp thê đa hêt lòng giup đ đê tơi có th hòn th̀nh b n luân v n Tr Ph c hêt , xin bay to lòng bi t n sâu s c t i TS Nguyên Thi Mai ng, phòng Sinh hóa Th c v t , Viên Cơng nghê sinh hoc , Viên H̀n lâm Khoa h c v̀ Công ngh Viêt Nam đa tân tinh h ng dân suôt qua trinh hoc tâp va th c hiên nghiên c u Tôi xin chân cam n cac can bơ nghiên c u c a phong Sinh hóa th c vât, Viên Công nghê sinh hoc , Viên H̀n lâm Khoa h c v̀ Công ngh Viêt Nam , ban lãnh đ o Vi n Công ngh sinh h cđa nhiêt tinh giup đ va tao điêu kiên thuân l i đê hoan b n luân v n ǹy Cuôi cung , xin cam n gia đinh thân yêu , b n bè , ng nghi p - nh ng ng i đa luôn i thân v̀ đ ng bên tôi, đông viên , kh́ch l v̀ l̀ ch d a v ng ch c cho suôt qua trinh hoc tâp va nghiên c u H̀ N i, 18tháng 12 n m 2015 H c viên Nguy năV ăAnh S T H c li u ĐHTN CỄCăTHU T NG VI T T T EPS exopolysaccharide GTF glucosyltransferase HPLC high performance liquid chromatography NMR nuclear magnetic resonance NSM n PTS sugar-phosphotransferase system TLC thin layer chromatography TSA tryptic soy agar S c súc mi ng T H c li u ĐHTN M CL C M ă Ch U ngă1.ăT NGăQUANăTẨIăLI U 1.1.ăB nhăsơuăr ngăvƠăviăkhu năStreptococus mutans 1.1.1 B nh h c sâu r ng 1.1.1.1 Nguyên nhân gây sâu r ng 1.1.1.2 M ng bám r ng (dental plaque) 1.1.1.̀ C ch gây sâu r ng 1.1.1.́ Vi khu n Streptococcus mutans 1.1.β Tình hình b nh sâu r ng th gi i Vi t Nam 1.1.γ Các bi n pháp ng n ng a sâu r ng 10 1.1.̀.1 S d ng ch t kháng khu n 10 1.1.̀.2 S d ng ch t thay th đ ng 12 1.1.̀.̀ Li u pháp thay th (replacement therapy) 12 1.1.3.4 Vacxin 13 1.1.3.5 Kiêm soat s hinh biofilm 13 1.2.ăM tăs ăc ăch ăthíchănghiăacidăc aăviăkhu năxoangămi ng 15 1.β.1 B m proton F-ATPase 16 1.β.β S thay đ i c a màng t bào vi khu n thích nghi acid 17 1.β.γ S sinh ch t ki m 18 1.2.3.1 Urease 18 1.2.̀.2 H th ng arginin deiminase (ADS) 19 1.3.ăGi iăthi uăv ăcơyăm ngăc t 20 1.γ.1 c m sinh h c 20 1.3.2 Các ch t xathone m ng c t 20 S T H c li u ĐHTN 1.γ.γ Sinh t ng h p ch t xanthone 21 1.γ.4 Tác d ng sinh h c c a ch t xanthone m ng c t 23 1.̀.́.1 Ho t t́nh kháng khu n 23 1.̀.́.2 Ho t t́nh kháng n m 23 1.̀.́.̀ Tác d ng ch ng oxi hóa 23 1.̀.́.́ Tác d ng ch ng viêm (anti-inflamation) 24 1.̀.́.5 Ho t t́nh ch ng ung th 24 Ch ngă2ă:ăNGUYểNăLI UăVẨăPH NGăPHỄP 25 2.1 Ch ng vi sinh v tăvƠăcácăđi u ki nănuôiăc y 26 2.2.ăNguyênăli uăth căv t 26 2.3.ăHóaăch t vƠăthi tăb 26 2.4 Ph ngăphápănghiênăc u 27 2.4.1 Các ph ng pháp nghiên c u t bào 27 2.́.1.1 Chu n b d ch t b̀o 27 2.́.1.2 o m c đ sinh acid c a t b̀o (pH drop) 27 2.4.2 Các ph ng pháp xác đ nh ho t đô enzyme 28 2.́.2.1 Chu n b t b̀o th m 28 2.́.2.2 Xác đ nh ho t đ enzyme phosphoryl hóa đ ng (PTS) 28 2.́.2.̀ Xác đ nh ho t đ enzyme F – ATPase 29 2.́.2.́ Xác đ nh ho t đ β.4.γ Các ph enzyme glucosyltransferase (GTF) 29 ng pháp nghiên c u v biofilm 30 2.́.̀.1 T o biofilm 30 2.4.3.2 Xác đinh phân biofilm 31 2.́.̀.̀ Quan sát c u tŕc biofilm d i ḱnh hi n vi hu nh quang quét lase 31 2.5 anhăgiaăs ătichăluyăcuaă -mangostinătrênăbiofilm 32 2.6 Tinh s ch ho t ch tăkhoángăkhu n S mutans t v qu m ngăc t 32 β.6.1 Tách h p ch t polyphenol b ng ph ng pháp s c ký l p m ng (TLC) 32 S T H c li u ĐHTN 2.6.2 Phân tích c u trúc hoa h c b ng c ng h ng t h t nhân (NεR) 33 2.7 X lỦăs li u 33 Ch ngă3.ăK T QU VẨăTH O LU N 34 3.1 Nghiênăc uăquyătrìnhăchi t xu tă -mangostin t v qu m ngăc t 34 γ.1.1 Tách chi t phân đo n có ch a -mangostin t v qu m ng c t 34 γ.1.β Tinh s ch -mangostin t v qu m ng c t 36 3.1.2.1 L a chon dung môi thich h p đê chay côt s c ky silica gel 36 ̀.1.2.2 Tinh s ch -mangostin c t s c ký silica gel s d ng h dung môi n-hexane: acetone (3:1) 37 3.2 ánhăgiáătácăd ngăkhángăkhu n c aă -mangostinălênăS mutans trênă biofilm 44 3.2.1 -mangostin c ch s sinh acid c a vi khu n S mutans biofilm… 44 3.2.1.1 c ch s gi m pH c a môi tr ng 44 3.2.1.2 -mangostin c ch ho t t́nh enzyme liên quan đ n trình sinh v̀ ch ng ch u acid F-ATPase va PTS 45 3.2.2 anh gia tác d ng c chê s hinh biofilm cua vi khuân S mutans 48 3.2.2.1 -mangostin c ch s sinht ng h p EPS ngo i b̀o 48 3.2.2.2 -mangostin l̀m thay đ i c u tŕc biofilm c a S mutans 49 3.2.2.3 -mangostin c ch ho t t́nh enzyme GTF liên quan đ n s hình th̀nh biofilm cua vi khuân S mutans 51 3.3 Kh n ngăgi t vi khu nătrênăbiofilmăc aă -mangostin 52 3.4 Kh n ngătíchăl yăc aă -mangostinătrênăbiofilm 53 3.4.1 B c đâu đánh giá tac dung ch ng sâu r ng c a dung d ch n c súc mi ng có ch a -mangostin 54 3.4.1.1 Kh n ng c ch s sinh acid 54 3.4.1.2 Kh n ng c ch s hinh biofilm (m ng bám r ng) 55 Ch ngă4.ăK T LU NăVẨă NGH 57 TẨIăLI U THAM KH O 58 S T H c li u ĐHTN PH L C 67 S T H c li u ĐHTN DANH M CăCỄCăB NG S D NG TRONG LU NăV N Trang B ng Cơng th c hóa h c m t s xanthone có v qu m ng c t 21 B ngă2 s ch c a ch phâm -mangostin so v i chât chuân 40 B ng s ng sót c a S mutans biofilm đ c x ly v i -mangostin53 B ngă4 Kh n ng tích l y cua -mangostin biofilm cua vi khuân S mutans53 B ng Kh n ng c ch s sinh a cid c a S mutans biofilm c a dung d ch n c súc mi ng 55 B ng nh h ng cua NSε ch a -mangostin lên s tich luy sinh khôi biofilm cua vi khuân S mutans56 S T H c li u ĐHTN DANH M CăCỄCăHỊNHăS D NG TRONG LU NăV N Trang Hìnhă1.1.C u trúc c a r ng Hìnhă1.2 Ba giai đo n hình thành m ng bám r ng Hìnhă1.3 Vi khu n Streptococcus mutans Hìnhă1.4.ăQu m ng c t (Garcinia mangostana L.) 20 Hìnhă1.5.ăQuá trình hình thành xanthone th c v t 22 Hìnhă2.1 εô hinh tao biofilm S mutans bê m t đia hydroxyapatite 31 Hìnhă3.1.ăS c ký đ phân đo n chi t v qu m ng c t ethanol n-hexane s d ng ph ng pháp s c ký l p m ng 36 Hìnhă3.2.ăS c ký đ phân đo n n-hexane s d ng ph 37 ng pháp s c ký l p m ng Hìnhă3.3 S c ký c t silica gel phân đo n chi t n-hexane c a v qu m ng c t v i h dung môi r a chi t n-hexane: acetone theo t l (3:1) 38 Hìnhă3.4.A.ăS c ký đ -mangostin tinh sach t v qu m ng c t v i h dung môi Hexane: acetone (γ:1 v/v) 38 Hìnhă3.4.B.ăS c ký đ -mangostin tinh sach t v qu m ng c t v i h dung môi TEAF (5:γ:1:1 v/v) 38 Hìnhă3.5.ăPh HPLC c a ch t tinh s ch (A) so v i chât chuân (B) sau qua c t s c ký silica gel đo máy δC-MSD-Trap-SL 39 Hìnhă3.6.ăPh Proton (A) 13C (B) c a ch t -mangostin đo máy NεR Bruker, Avance 500 42 Hìnhă3.7.ăC u trúc hóa h c c a -mangostin (C24H26O6) 43 Hìnhă3.8.ăS đ qui trình tinh s ch -mangostin t v qu m ng c t 43 S T H c li u ĐHTN Lu n v n Th c s Khoa h c β9β06 ́ γ61β,628 150 M -mangostin 3.4.1 B Nguy n V Anh 4,5γ6 ́ 0,01 căđơuăđánhăgiáătacădungăch ngăsơuăr ngăc a dung d chăn căsúcă mi ngăcóăch a -mangostin D a nh ng kêt qua nghiên c u thu đ chê tao n c ,chúng ti n hành th nghi m c suc miêng co ch a -mangostin nông đô 150 M kêt h p môt sô chât hoat đông bê m t khac , g m methol,tinh d u b c hà, NaF nh m đanh giá kh n ng ng d ng c a ch t làm n (Hình 3.14) Tác d ng c a dung d ch n c súc mi ng phòng ch ng sâu r ng c súc mi ng đ hình biofilm so sánh v i tác d ng c a n c đanh gia mô c súc mi ng δisterin th ng m i v ch tiêu : i) Kh n ng c ch s sinh acid ; ii) kh n ng c ch s hình thành biofilm c a S mutans Hìnhă 3.14 Chêăphơmăn căsucămiêngăch aă -mangostinăt ăvoăquaăm ngă c t 3.4.1.1 Kh n ng c ch s sinh acid Kh n ng c ch s sinh a cid c a vi khu n S mutans đ viêc xac đinh kha n ng c chê s giam pH mơi tr biofilm đa đ trình bày c x ly v i cac dung dich c đanh gia thông qua ng cua cac tê bao S mutans n c suc miêng (NSM) Kêt qua b ng cho thây dung dich NSε tao đ c c chê ro rêt s sinh a cid c a vi khu n S mutans biofilm Giá tr pH cu i thu đ c v i NSε 54 Lu n v n Th c s Khoa h c Nguy n V Anh ch a -mangostin va δisterin lân l t la 5,31 5,60, mâu đôi ch ng (không x ly NSε ) 3,99 Nh vây, kh n ng c ch s sinh a cid c a S mutans g n t ng đ ng v i tác d ng c a dung d ch NSε th ng m i Listerin B ngă5.Kh ăn ngă căch ăs ăsinhăa cidc aăS mutans trênăbiofilmăcuaăcacă dungădichăn Mơuănghiênăc u căsucămiêng Giáătr ăpHămôiătr ng (sau 240 phút) i ch ng 3,99 NSM 5,31 Listerin 5,60 3.4.1.2 Kh n ng c ch s hinh biofilm (m ng bám r ng) Nh m tim hiêu kha n ng h n ch s t o m ng bám r ng cua dung dich NSε ch a -mangostint o đ c mơ hình biofilm nhân t hành x lý biofilm c a khôi cac biofilm thu đ o, ti n S mutans v i cac dung dich NSε , sau đo đo sinh c sau ngày nuôi c y Kêt qua thu đ thây sinh khôi biofi lm trung binh cua cac mâu đ c bang cho c x ly v i NSε ch a mangostin va NSε δisterin giam t i h n 50% so v i đôi ch ng Tr ng l sinh khôi khô cua môi biofilm lân l ng t la 7,1 8,5 mg/biofilm so v i đôi ch ng 19,5 mg/biofilm NSε ch a -mangostin d hình thành sinh kh i biofim rõ r t h n δisterin mangostin chê tao đ - ng nh co tac dung c chê s Nh vây , NSε ch a - c co tiêm n ng c chê s hinh mang bam r ng 55 Lu n v n Th c s Khoa h c B ng nh h Nguy n V Anh ngăcuaă NSM ch a -mangostinălênăs ătichăluyăsinhăkhôiă biofilmăcuaăviăkhuơnă S mutans.S li u sau d u ± ch giá tr đ l ch chu n SD v i n= Biofilm đ c hình th̀nh lam ḱnh th y tinh (3 x 12 cm) M u x lỦ Tr ngăl ngăkhôăbiofilm (mg/biofilm) i ch ng 19,5  2,80 NSM -mangostin 7,1  1,10 NSM Listerin 8,5  0,81 56 Lu n v n Th c s Khoa h c Ch Nguy n V Anh ngă4.ăK T LU NăVẨă NGH ã đ a đ c qui trình tinh s ch -mangostin đ n gian t c t (Garcinia mangostanaL.) gôm b v qu m ng c chinh la : i) chiêt phân đoan v i n - hexane va ii) s c ký c t silica gel v i dung môi n-hexane : accetone theo ti lê 3:1) Ch t thu đ c có s ch t ng đ ng v i chât chuân đat >83% -mangostin n ng đ 150 ε c chê qua trinh sinh acid va sinh tông h p polysaccharide ngoai bao cua S mutans biofilm -mangostin n ng đ 150 ε c chê hoat đô enzyme liên quan tr c ti p đ n trình sinh ch u acid c a vi khu n S mutans màng t bào làF-ATPase phospho transferase system (PTS) v i t l c ch đ t >70% 50% theo th t , enzyme liên quan đ n trình sinh t ng h p biofilm GTFB (>83% c ch ) GTFC (>72% c ch ) -mangostin co kha n ng tich luy biofilm v i hàm l ng đ t 4,5 µg/biofilm B c đâu đa chê tao va ch ng minh đ cn mangostin co tac dung khang vi khuân sâu r ng c suc miêng co ch a - S mutans mô hinh biofilm nhân tao NGH C i ti n công th c đ nâng cao h n n a hi u qu c a NSε ch a - mangostin anh gia đô an toan cua san phâm 57 Lu n v n Th c s Khoa h c Nguy n V Anh TẨIăLI U THAM KH O TƠiăli u ti ng Vi t Tr ngăV năChơu,ăTr n H ngăQuang,ă kháng khu n c a ch t phenolic t Ng căLiên, (β004), c tính m t s loài th c v t thu c chi Garcini str., Nh ng v n đ nghiên c u c b n khoa h c s s ng, đ nh h c h c, tr 50-5γ, Nhà xu t b n khoa h c k thu t Hà ng Y, D N i Tr nhă ìnhăH i, (2004), Giáo trình d phòng sâu r ng, Nhà xu t Y h c Tr nhă ìnhăH i, (2004), Giáo trình s d ng flour ch m sóc r ng mi ng, Nhà xu t Y h c V năHòa,ăL iăV năHòa,ăLêăH ng,ăB ch V ng H i, (2003), V hàm l ng canxi, phospho magie hàm r ng l n bình th r ng sâu –D ng i tr ng thành, Thông báo khoa h c tr ng ng ih cY c, tr 63-65 Tr nă V nă Tr ng, Tr nhă ìnhă H i, Spencer J A., Thomson R K., (2002), “ i u tra s c kho r ng mi ng toàn qu c Vi t Nam 1999 - β000”, T p ch́ Y h c Vi t Nam, 8, tr – 10 Maiă ìnhăH ng, (1998), Sâu r ng, B̀i gi ng R ng H̀m M t, Nhà xu t b n Y h c T t L i, (2000), “Nh ng thu c v̀ v thu c Vi t Nam”, NXB Y h c Hà N i, tr.567-568 Nguy n Th MaiăPh ngăMinhăPh ng,ăPhanăTu năNgh a,ăNguy n Th Ng c Dao, ng, (2003), “ Tác d ng c a d ch chi t v qu m ng c t 58 Lu n v n Th c s Khoa h c Nguy n V Anh (Garcinia mangostana L.) lên vi khu n sâu r ng Streptococcus mutans”, H i ngh Khoa h c S s ng l n th 2, Hu , tr 983-986 Nguy n Th MaiăPh ng,ăPhanăTu năNgh a,ăă Ng căLiên,ăNguy n Th Ng c Dao, (2004), “Th̀nh ph n polyphenol v qu m ng c t (Garcinia mangostana L.) v̀ tác d ng c ch s sinh acid c a vi khu n sâu r ng Streptococcus mutans”, T p ch́ D 10 Nguy n Th Maiă Ph c h c, (44), tr 18-21 ng, (2005), “Nghiên c u nh h ng c a m t s ch t kháng khu n lên trình sinh lý v̀ hóa sinh c a vi khu n gây sâu r ng Streptococcus mutans”, Lu n án ti n s 11 NguyênăThiăMaiăPh ngăvaăMarquisăR E, (2011) Ho t tính kháng vi khu n Streptococcus xoang mi ng c a -mangostin tinh s ch t v qu m ng c t (Garcinia mangostana L.) T p ch́ D c liêu 16(5): tr.298- 303 TƠiăli u ti ng Anh 12 Abdelal, T.T., (1979), Arginine catabolism by microorganisms, Ann Rev Microbiol 8, tr 139-168 13 Almeida L.S., Murata R.M., Yatsuda R., Dos Santos M.H., Nagem T.J., Alencar S.M., Koo H., Rosalen P.L., (2008), Antimicrobial activity of Rheedia brasiliensis and 7-epiclusiannone against Streptococcus mutans Phytomedicine., 15(10), tr 886-891 14 Arikado E., Ishihara H., Ehara T., (1999), Enzyme level of enterococcal F1-F0 ATPase is regulated by pH at the step of assembly Eur J Biochem., 259, tr 262-268 15 Bearon S., Bearson B., Foster J.W., (1997), Acid stress reponses in enterobacteria FEMS Microbiol Lett., 147, tr 173-180 59 Lu n v n Th c s Khoa h c Nguy n V Anh 16 Belli W.A., Marquis R.E., (1991), Adaptation of Streptococcus mutans and Enterococcus hirae to acid stress in continuous culture Appl Environ Microbiol., 57, tr 1134-1138 17 Bender G.R., and Marquis R.E., (1995), Membrane ATPases and acid tolerance of Actinomyces viscosus and Lactobacillus casei Appl Environ Microbiol , 53, tr 2124-2128 18 Bender G.R., Sutton S.V., and Marquis R.E., (1986), Acid tolerance, proton permeabilities, and membrane ATPases of oral steptococci Infect Immum., 53, tr 331-338 19 Badria, F.A., and Zidan, O.A., ( 2004) Natural products for dental caries prevention J Med Food7(3), tr.381–384 20 Bowen WH, Koo H.,(2011)Biology of Streptococcus mutans-derived glucosyltransferases: role in extracellular matrix formation of cariogeneic biofilms Caries Res; 45, tr 69-86 21 Burne RA, Ahn SJ, Wen ZT, Zeng L, Lemos JA, Abranches J, Nascimento M.,(2009) Opportunities for disrupting cariogenic biofilms Adv Dent Res; 21(1), tr 17-20 22 Burne R.A., Marquis R.E, (2001), Biofilm acid /base physiology and gene expression in oral bacteria Methods Enzymol., 337, tr 403-415 23 Burne R.A., Marquis R.E, (2000), Alkali production by oral bacteria and protection against dental caries, FEMS Microbiol Lett., 193, tr 1-6 24 Casiano-Colon A And Marquis R.E., (1988), Role of arginine deiminase system in protecing oral bacteria and an enzymatic basic for acid tolerance, Appl Environ Microbiol., 54, tr 1318-1324 60 Lu n v n Th c s Khoa h c Nguy n V Anh 25 Chang Y-Y and Cronan J.E., (1999), Membrane cyclopropane fatty acid content is a major factor in acid resistance os Escherichia coli, Mol Microbiol., 33, tr 249-249 26 Chen Y-Y., Clancy K.A., and Burne R.A., (1996), Streptococcus salivarius urease: genetic biochemical charaterization and expression in a dental plaque streptococcus, Infect, Immun., 64,tr 585-592 27 Costerton J.W., Lewandowski Z., Caldwell D.E., Korber D.R and Lappin-Scoott H.M., (1995), Microbial biofilms, Ann Rev Microbiol., 49, tr 711-745 28 Cotter P.D and Hill C., (2003), surviving the acid test: responses of gram-positive bacteria to low pH, Microbiol Mol Bio Rev., 67, tr 429453 29 Cunin R., Glansdorff N., Peirad A And slaton V., (1986), Biosynthesis and metabolism of arginin in bacteria, Microbiol Rev., 50, tr 314-352 30 Curran T.M., Lieou J and Marquis R.E., (1995), Arginine deimiase system and acid adaptation of oral streptococci, Appl Environ Microbiol., 61, tr 4494-4496 31 Curan T.M., Ma Y., Rutherford G.C and Marquis R.E., (1998), Turning on and turning off the arginine system in oral streptococci, Can J Microbiol., 44, tr 1078-1085 32 Dong Y., Chan M.Y.Y and Burne R.A., (2004) Control expression of the arginine deimiase operon os Streptococcus gordonii by CcpA and, J Bacteriol., 186 (8), tr 2511-2514 61 Lu n v n Th c s Khoa h c Nguy n V Anh 33 Ho CH, Huang YL, Chen CC, (2002) Garcininne E, a xanthone derivatives, has potent cytotoxic effect against hepatocellular carcinoma cell lines Planta Med 68(11), tr 975-979 34 Hamada S., Kontani M., Hosono H., Ono H., Tanaka, T., Ooshima T., Mitsunaga T and Abe S.,(1996), Catechin inhibits glucosyltransferase from Streptococcus mutans,FEMS Microbiol Lett., 143, tr 35-40 35 Koo H, Duarte S, Muarata RM, Scott-Anne K, Gregoire S, Warson GE, Singh AP, Vorsa N., (2010) Influence of cranberry proanthocyanidins on formation of biofilms by Streptocoocus mutans on saliva-coated apatitic surface and on dental caries development in vivo Caries Res 44(2), tr 116-126 36 Jeon JG, Klein MI, Xiao J, Gregoire S, Rosalen PL, Koo H, (2009), Influences of naturally occurring agents in combination with fluoride on gene expression and structural organization of Streptococcus mutans in biofilms,BMC Microbiol., 9, tr 228-232 37 Koo H, Xiao J, Klein MI, (2009), Extracellular polysaccharides matrix-an often forgotten virulence factor in oral biofilm research, Int J Oral Sci., 1(4), tr 229-234 38 Loesche W.J., (1986), Role of Streptococcus mutans in human dental decay, Microbiol Rev., 50, tr 353-380 39 Ma Y., Rutherford G.C., Curran T.M., Reimiller J.S., Marquis R.E., (1999), Menbrane locus and pH sensitivity of paraben inhibition of alkali production by oral streptococci, Oral Microbiol Immunol., 14, tr 244249 62 Lu n v n Th c s Khoa h c Nguy n V Anh 40 Mahabusarakam W., Proudfoot J., Taylor W., Croft K., (2000), "Inhibition of lipoprotein oxidation by prenylated xanthones derived from mangostin", Free Rad Res., 33(5), tr 643-659 41 Makimura M, Hirasawa M, Kobayashi K, Indo J, Sakanaka S, Taguchi T, Otake S, ( 1993), Inhibitory effect of tea catechins on collagenease activity,J Periodontol., 64(7), tr 630-636 42 Matsumoto K., Akao Y., Kobayashi E., Ohguchi K., Ito T., Tanaka T., Iinuma M., Nozawa Y., (2003), "Induction of apoptosis by xanthones from mangosteen in human leukemia cell lines", J Nat Prod., 66(8), tr.l124-1127 43 Marsh P., Martin M.V., (2000), Oral microbiology, 4lh edition, Reed Educational and Professional Publishing Ltd USA 44 Murata RM, Branco-de-Almeida LS, Franco EM, Yatsuda R, dos Santos MH, de Alencar SM, Koo H, Rosalen PL, (2010), Inhibition of Streptococcus mutans biofilm accumulation and development of dental caries in vivo by 7-epiclusianone and fluoride,Biofouling, 26(7), tr 865872 45 Nakatani K., Yamakuni T., Kondo N., Arakawa T., Oosawa K., Shimura S., Inoue H., Ohizumi Y., (2004), "Gamma-mangostin inhibits inhibitor-kappaB kinase activity and decreases lipopolysaccharideinduced cyclooxygenase-2 gene expression in C6 rat glioma cells", Mol Pharmacol., 66(3), tr.667-747 46 Nguyen P.T.M and Marquis R.E.,(2011) Antimicrobial actions of alpha-mangostin against oral Streptococci, Can J Microbiol., 57(3), tr 217-25 63 Lu n v n Th c s Khoa h c Nguy n V Anh 47 Peres V., Nagem T.J and Oliveira F.F., (2000), Tetraoxygenated naturally occurring xanthones, Phytochem., 55(7), tr 28-33 48 Quivey R.G., Faustoferri R.C., Monahan K and Marquis R.E., (2000), Shifts in membrane fatty acid profiles associated with acid adaptation of Streptococcus mutans, FEMS Microbiol Lett., 189, tr 8992 49 Quivey R.G., Kuhnert W.L and Hahn K., (2000), Adaptation of oral streptococci to low pH, Adv Microbiol Physiol., 42, tr 239-274 50 Quivey R.G., Kuhnert W.L and Hahn K., (2001), Genetics of acid adaptation of oral streptococci, Crit Rev Oral Biol Med., 12, tr 301314 51 Rogers A.H., Zilm P.S., Gully N.J and Pfenning A.L., (1988), Response of a Streptococcus sanguis strain to arginine-containing peptides Infect Iniinun., 56, tr 687-692 52 Sato A., Fujiwara H., Oku H., Ishiguro K., Ohizumi Y., (2004), Alphamangostin induces Ca(2+)-ATPase-dependent apoptosis via mitochondrial pathway in PC 12 cells J Pharmacol Sci., 95(1), tr 33- 40 53 Scheie A.A., (1989), Modes of action of currently known chemical antiplaque agents other than chlorohexidine, J Dent Res., 68, tr 1609-1616 54 Schilling K.M., Bowen W.H., (1992) Glucans synthesized in situ in experimental salivary pellicle function as specific binding sites for Streptococcus mutans, Infect Immun 60, tr 284-295 55 Stur M.G and Marquis R.E., (1992), Comparative acid tolerances and inhibitor sensitivities of isolated F-ATPases of oral lactic acid bacteria, Appl Environ Microbiol., 58, tr 2287-2291 64 Lu n v n Th c s Khoa h c 56 Venkitaraman L.K., Nguy n V Anh A.R., Vacca-Smith (1995), A.M., and Kopec Characterization of glucosyltransferase B, GtfC, and GtfD in solution and on the surface of hydroxyapatite, J Dental Res., 74, tr 1695-1701 57 Wilson M., (1996), Susceptibility of oral bacterial biofilms to antimicrobial agents, J Med Microbiol., 44, tr 79-87 58 Williams P., Ongsakul M., Proudfoot J., Croft K., Beilin L., (1995), Mangostin inhibits the oxidative modification of human low density lipoprotein, Free Rad Res., 23(2), tr 175-841 TƠiăli uăkhác 59 http://nld.com.vn/hoi-nhap/song-chung-voi-sau-rang20150322170059182.htm 60 http://news.zing.vn/Can-benh-khien-moi-nguoi-Viet-Nam-mat-hon-6chiec-rang-post546699.html DANH M CăCỄCăCỌNGăTRỊNHăCỌNGăBỌăC AăTỄCăGI 65 Lu n v n Th c s Khoa h c Nguy n V Anh - Nguyên Thi εai Ph ng ,B ch Nh Qu nh , Trân Thi Nhung , Nguyên Công Thành, Quách Th δiên , NguyênăVuăAnh, Ph m V n δi u (2015) D ch chi t sim (Rhodomyrtus tomentosa (Aliton) Hassk) c ch s sinh acid s hình thành biofilm c a vi khu n Streptcocccus mutans T p chí Y hoc Viêt Nam 433: tr 177-183 66 Lu n v n Th c s Khoa h c Nguy n V Anh PH L C Ph ProtonăvƠă13C c a ch t -mangostin 67 Lu n v n Th c s Khoa h c Pos Group Nguy n V Anh Chem.shif-1H (ppm) Chem.shif-13C (ppm) C 156.57 C 102.72 C=O 183.02 C 125.03 C 138.34 CH C-OH 156.05 C 144.67 10 C 112.12 11 CH 12 C-OH 161.43 13 C 111.35 14 C-OH 163.49 18 O-CH3 3.72, 3H, s 61.26 19 CH2 4.01, 2H, d(J=5.6 27.04 6.63, 1H, s 6.19, 1H, s 103.67 93.14 Hz) 20 CH 5.19,1H, d(J=5.6 125.04 Hz) 21 C 131.70 22 CH3 1.62, 3H, s 25.89 24 CH2 3.23, 2H, d(J=5.6 22.14 Hz) 25 CH 5.19,1H, d(J=5.6 123.81 Hz) 26 C 131.61 27 CH3 1.63, 3H, s 25.91 29 CH3 1.74, 3H, s 17.86 30 CH3 1.78, 3H, s 18.26 68 ... p trung nghiên c u n i dung sau: i Xây d ng qui trinh tach chiêt -mangostinđ n gian, đ t hi u su t cao ii Nghiên c u tác d ng c a -mangostinlên vi khu n S mutans biofilm thông qua vi c nghiên. .. uăth căv t 26 2.3.ăHóaăch t vƠăthi tăb 26 2.4 Ph ngăpháp nghiên c u 27 2.4.1 Các ph ng pháp nghiên c u t bào 27 2.́.1.1 Chu n b d ch t b̀o 27 2.́.1.2 o... n g c t th c v t đ c nghiên c u th nghi m Vi c tìm ki m s d ng nh ng ch t kháng khu n t nhiên, đ c bi t ch t có ngu n g c th c v t (phytochemicals) r t đ đ c quan tâm H ng nghiên c u c g i cu