Nghiên cứu nhiễm giun tròn đường tiêu hóa, bệnh giun lươn (strongyloidosis) trên lợn tại tỉnh bắc giang và biện pháp phòng trị tt

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NCS NGUYỄN THỊ HƯƠNG GIANG Tên đề tài: NGHIÊN CỨU NHIỄM GIUN TRỊN ĐƯỜNG TIÊU HĨA, BỆNH GIUN LƯƠN (Strongyloidosis) TRÊN LỢN TẠI TỈNH BẮC GIANG VÀ BIỆN PHÁP PHÒNG TRỊ Ngành: Ký sinh trùng Vi sinh vật học Thú y Mã số: 9.64.01.04 LUẬN ÁN TIẾN SĨ THÚ Y Thái Nguyên - 2020 Luận án hoàn thành tại: TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN Người hướng dẫn khoa học: GS.TS Nguyễn Thị Kim Lan TS Nguyễn Văn Quang Người phản biện 1: Người phản biện Người phản biện 3: Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án cấp trường Họp tại: TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN Vào hồi ……., ngày …… Tháng …… năm 2020 Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Quốc gia - Trung tâm học liệu Đại Thái Nguyên - Thư viện trường Đại học Nông Lâm - Đại học Thái Ngun DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CÓ LIÊN QUAN ĐẾN ĐỀ TÀI Nguyễn Thị Hương Giang, Nguyễn Thị Kim Lan, (2019), “Một số đặc điểm dịch tễ bệnh giun tròn đường tiêu hóa lợn ni tỉnh Bắc Giang”, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Đại học Thái Nguyên Tập 202, số 9, tr 241 - 246 2.Nguyễn Thị Hương Giang, Nguyễn Thị Kim Lan, (2019), “Một số đặc điểm dịch tễ bệnh giun lươn lợn tỉnh Bắc Giang”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú y, Tập XXVI, số 6, tr 64 - 71 Nguyễn Thị Hương Giang, Nguyễn Thị Kim Lan, Nguyễn Thị Huế, Phạm Diệu Thùy (2019), “Tình hình nhiễm giun tròn đường tiêu hóa lợn số địa phương tỉnh Bắc Giang”, Kỷ yếu hội nghị khoa học Chăn ni - Thú y Tồn quốc, tr 63 - 67 Nguyễn Thị Hương Giang, Trần Đức Hoàn, Nguyễn Thị Thu Huyền, Nguyễn Thị Kim Lan, Phạm Ngọc Doanh (2017) “Morphological and molecularcharacterisation of Strongyloides ransomi (Nematoda: Strongyloididae) collected from domestic swine in Bac Giang province, VietNam”, Tạp chí cơng nghệ sinh học, Tập 39, số 3, tr 270 - 275 MỞ ĐẦU 1.1 Tính cấp thiết đề tài Bắc Giang tỉnh có nghề chăn ni lợn phát triển Trong nhiều năm vừa qua, nghề chăn ni lợn góp phần quan trọng việc xóa đói giảm nghèo làm giàu cho bà nông dân tỉnh Theo thống kê Chi cục chăn nuôi thú y tỉnh Bắc Giang, năm 2017 tỉnh có 1.043.749 con, năm 2018 có 1.105.291 Cùng với việc tăng nhanh số đầu lợn, người chăn nuôi lợn áp dụng tiến khoa học kỹ thuật vào thực tế sản xuất, đưa lại lợi ích kinh tế rõ rệt cho người chăn nuôi Tuy nhiên, chăn nuôi lợn tỉnh Bắc Giang gặp khơng khó khăn, có vấn đề dịch bệnh Ngồi bệnh truyền nhiễm thường gặp, bệnh giun tròn đường tiêu hóa lợn lưu hành phổ biến Mặc dù bệnh giun tròn khơng gây chết hàng loạt lợn bệnh truyền nhiễm, bệnh giun tròn thường diễn thể mạn tính, làm lợn còi cọc, chậm lớn, giảm sức đề kháng dễ mắc bệnh khác Phan Địch Lân cs (2005), Phạm Sỹ Lăng cs (2011) cho biết: bệnh giun tròn đường tiêu hóa gây bệnh phổ biến nguyên nhân làm lợn còi cọc, giảm tăng trọng 15 - 20%, đồng thời dễ mắc bệnh truyền nhiễm rotavirus, phó thương hàn dẫn đến hội chứng tiêu chảy trở nên trầm trọng Kaufmann J (1996), Rösel K (2017) cho biết, Strongyloides ransomi (S ransomi) lồi giun tròn nhỏ, gây bệnh nặng cho lợn 10 - 14 ngày tuổi, làm giảm khả tiêu hóa hấp thu thức ăn gây tiêu chảy, mệt mỏi, gầy sút Khi nhiễm nặng lợn dễ chết Mặc dù chăn nuôi lợn tỉnh Bắc Giang phát triển chưa có cơng trình nghiên cứu thực trạng nhiễm giun tròn bệnh giun lươn lợn, chưa có biện pháp phòng trị bệnh hiệu Từ yêu cầu cấp thiết thực tế chăn ni phòng chống dịch bệnh cho lợn, thực đề tài: “Nghiên cứu nhiễm giun tròn đường tiêu hóa, bệnh giun lươn (Strongyloidosis) lợn tỉnh Bắc Giang biện pháp phòng trị" 2 Mục tiêu đề tài Xác định tỷ lệ cường độ nhiễm lồi giun tròn đường tiêu hóa lợn; nghiên cứu số đặc điểm dịch tễ, đặc điểm bệnh lý, lâm sàng biện pháp phòng, trị bệnh giun lươn (Strongloidosis) lợn tỉnh Bắc Giang Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 3.1 Ý nghĩa khoa học Đề tài cung cấp thơng tin khoa học thực trạng nhiễm giun tròn đường tiêu hóa lợn tỉnh Bắc Giang; đặc điểm dịch tễ, đặc điểm bệnh lý lâm sàng bệnh giun lươn, từ có sở khoa học xây dựng quy trình phòng, trị bệnh giun lươn cho lợn có hiệu cao 3.2 Ý nghĩa thực tiễn Kết đề tài sở để khuyến cáo người chăn nuôi lợn áp dụng biện pháp phòng, trị bệnh giun tròn nói chung, bệnh giun lươn nói riêng nhằm hạn chế tỷ lệ nhiễm giun tròn lợn, hạn chế thiệt hại giun lươn gây ra, góp phần phát triển chăn ni lợn bền vững tỉnh Bắc Giang Những đóng góp đề tài - Đề tài cơng trình nghiên cứu có hệ thống thực trạng nhiễm giun tròn đường tiêu hóa lợn tỉnh Bắc Giang; đặc điểm dịch tễ, bệnh lý, lâm sàng bệnh giun lươn gây lợn - Xây dựng quy trình phòng, trị bệnh giun lươn cho lợn có hiệu quả, khuyến cáo áp dụng rộng rãi trang trại nông hộ địa bàn tỉnh Bắc Giang tỉnh lân cận Cấu trúc luận án Luận án gồm 129 trang (không kể danh mục tài liệu tham khảo): mở đầu 03 trang; tổng quan tài liệu 31 trang; đối tượng, vật liệu, nội dung phương pháp nghiên cứu 22 trang; kết nghiên cứu thảo luận 72 trang; kết luận đề nghị 02 trang Trong luận án có 36 bảng, 13 biểu đồ đồ thị, 120 ảnh màu thể kết đề tài NCS tham khảo 151 tài liệu (trong có 68 tài liệu xuất năm gần đây) Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU Nguyễn Thị Lê cs (1996) nhận xét, giun tròn ký sinh lợn phân bố khắp nơi giới Đặc biệt, vùng nhiệt đới cận nhiệt đới có khí hậu nóng ẩm điều kiện thuận lợi cho trứng ấu trùng giun tròn phát triển ngoại cảnh, làm cho bệnh giun tròn đường tiêu hóa lợn xảy quanh năm Theo Phạm Sỹ Lăng cs (2011), Gomathi M cs (2016), lợn nhiễm giun lươn qua đường tiêu hóa qua da, lợn nhiễm S ransomi từ sớm qua sữa đầu, thấy giun trưởng thành từ lúc lợn ngày tuổi Lợn nhiễm giun lươn bị tiêu chảy, phân lỏng có máu ruột xuất huyết, thiếu máu, gầy yếu chết đột ngột Ngoài ra, ấu trùng xâm nhập vào phế nang gây viêm phổi, lợn sốt 40 - 41,5 oC, ho nhiều, thở khó Để phòng bệnh giun lươn cho lợn đạt hiệu cao, Nguyễn Thị Kim Lan (2011) cho biết: cần phải thực biện pháp phòng tổng hợp bao gồm: vệ sinh chuồng trại, dụng cụ chăn nuôi sẽ; phân lợn rác thải phải thu gom hàng ngày ủ kỹ nơi quy định; thường xuyên thực việc tiêu độc; khơng ni chung lợn nhiều lứa tuổi; có chế độ dinh dưỡng hợp lý cho lợn Theo Bùi Thị Tho cs (2015), Nguyễn Tài Năng cs (2016), có nhiều loại thuốc có tác dụng tẩy giun tròn tốt, gồm thuốc thuộc nhóm avermectin, benzimidazole, imidazothiazole Chương ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng, thời gian địa điểm nghiên cứu 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu - Lợn nuôi địa phương tỉnh Bắc Giang - Các lồi giun tròn ký sinh đường tiêu hóa lợn - Lợn mắc bệnh giun lươn (do giun tròn Strongyloides spp gây ra) 2.1.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu * Thời gian nghiên cứu: từ năm 2016 đến 2019 * Địa điểm nghiên cứu - Đề tài triển khai huyện tỉnh Bắc Giang gồm: Việt Yên, Hiệp Hòa, Lạng Giang, Yên Dũng Sơn Động - Địa điểm xét nghiệm mẫu: phòng thí nghiệm Khoa Chăn nuôi thú y - Trường Đại học Nông Lâm Bắc Giang; bệnh viện Đa khoa Trung tâm Y tế dự phòng tỉnh Bắc Giang; viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật; viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương 2.2 Vật liệu nghiên cứu * Động vật thí nghiệm: lợn nuôi huyện tỉnh Bắc Giang * Các loại mẫu nghiên cứu: mẫu phân tươi lợn lứa tuổi; mẫu cặn chuồng, mẫu nước thải chuồng nuôi, mẫu đất bề mặt vườn trồng thức ăn cho lợn; mẫu giun tròn thu nhận từ lợn mắc bệnh; mẫu máu lợn mắc bệnh giun lươn lợn khỏe; mẫu phần ruột non, tim, phổi, gan, thận lợn mắc bệnh giun lươn * Dụng cụ, thiết bị hóa chất Kính hiển vi quang học, kính hiển vi olympus CX 221, kính hiển vi điện tử quét; dụng cụ xét nghiệm phân; dụng cụ lấy máu; máy phân tích máu Erma PCE - 210 TC - Matrix; máy cắt tế bào Microtom; máy giải trình tự gen tự động ABI Prism 3130 Genetic Analyser; máy ly tâm, micropipete, máy điện di, máy soi gel, máy PCR, kít DNeasy Tissue Kit (QIAgen) Bộ hóa chất làm tiêu bệnh phẩm vi thể, dung dịch nước muối bão hòa; dung dịch Barbagallo; dung dịch rút nước thể giun tròn; hóa chất QIAquick PCR purification kit Thuốc sát trùng: P.V.D iodin 10%; Chloramin B; Good Farm L Thuốc tẩy giun lươn cho lợn: fenbendazole, ivermectin thiabendazole 2.3 Nội dung nghiên cứu 2.3.1 Nghiên cứu tỷ lệ cường độ nhiễm giun tròn đường tiêu hóa lợn tỉnh Bắc Giang - Điều tra thực trạng cơng tác phòng chống bệnh giun tròn đường tiêu hóa cho lợn Bắc Giang - Xác định loài phân bố lồi giun tròn ký sinh đường tiêu hóa lợn Bắc Giang - Mổ khám lợn để xác định: + Tỷ lệ cường độ nhiễm lồi giun tròn đường tiêu hóa lợn địa phương + Tỷ lệ cường độ nhiễm lồi giun tròn đường tiêu hóa lợn - Xét nghiệm phân để xác định: + Tỷ lệ nhiễm giun tròn đường tiêu hóa lợn địa phương + Tỷ lệ cường độ nhiễm lồi giun tròn đường tiêu hóa lợn qua xét nghiệm phân + Tỷ lệ nhiễm giun tròn đường tiêu hóa theo tuổi lợn, theo phương thức chăn nuôi theo mùa vụ 2.3.2 Nghiên cứu bệnh giun lươn lợn (Swine Strongyloidosis) * Định danh loài giun lươn gây bệnh lợn - Kết mổ khám phát thu thập giun lươn lợn Bắc Giang - Kết định danh lồi giun lươn kỹ thuật hình thái học kỹ thuật sinh học phân tử * Nghiên cứu nhiễm giun lươn qua xét nghiệm phân - Tỷ lệ cường độ nhiễm giun lươn địa phương - Tỷ lệ cường độ nhiễm giun lươn theo tuổi lợn, theo mùa vụ, theo phương thức chăn nuôi * Nghiên cứu ô nhiễm trứng ấu trùng giun lươn ngoại cảnh * Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý lâm sàng bệnh giun lươn lợn gây nhiễm lợn nhiễm bệnh tự nhiên * Nghiên cứu đề xuất biện pháp phòng trị bệnh giun lươn cho lợn - Thử nghiệm xác định thuốc tẩy giun lươn có hiệu lực cao an tồn - Nghiên cứu biện pháp phòng bệnh giun lươn cho lợn - Đề xuất quy trình phòng trị bệnh giun lươn cho lợn 2.4 Phương pháp nghiên cứu 2.4.1 Nghiên cứu tỷ lệ cường độ nhiễm giun tròn đường tiêu hóa lợn Bắc Giang 2.4.1.1 Thực trạng cơng tác phòng chống bệnh giun tròn đường tiêu hóa cho lợn tỉnh Bắc Giang: thực phương pháp trực tiếp quan sát, vấn hộ chăn nuôi lợn ghi phiếu điều tra 2.4.1.2 Phương pháp nghiên cứu tỷ lệ cường độ nhiễm giun tròn đường tiêu hóa lợn - Sử dụng phương pháp dịch tễ học mô tả cắt ngang (Nguyễn Như Thanh cs., 2001) - Dung lượng mẫu tối thiểu tính phần mềm dịch tễ Win episcope 2.0 - Lấy mẫu theo phương pháp lấy mẫu chùm nhiều bậc - Mổ khám lợn theo phương pháp mổ khám khơng tồn diện quan tiêu hóa Skrjabin K I (1928), thu thập mẫu giun tròn ký sinh đường tiêu hóa lợn - Thực cố định tiêu giun tròn theo phương pháp De Grisse A T (1969) Định danh lồi theo khóa định loại Phan Việt cs (1977), De Ley P Blaxter M (2004) - Tìm trứng giun tròn lợn theo phương pháp phù Fulleborn Cường độ nhiễm giun tròn qua xét nghiệm phân xác định phương pháp đếm số trứng có gam phân buồng đếm Mc Master (Theo Hansen J Perry P., 1994) 2.4.2 Phương pháp nghiên cứu bệnh giun lươn lợn 2.4.2.1 Phương pháp định danh loài kỹ thuật hình thái học Cố định tiêu giun lươn theo phương pháp De Grisse A T (1969), quan sát hình thái giun lươn kính hiển vi quang học, kết hợp kẻ vẽ để định danh loài theo khóa định loại Phan Việt cs (1977), De Ley P Blaxter M (2004) Đồng thời, quan sát hình thái siêu cấu trúc giun lươn Strongyloides spp theo phương pháp Sato H cs (2008) 2.4.2.2 Phương pháp định danh giun lươn kỹ thuật phân tử - Sử dụng kỹ thuật PCR để thẩm định mẫu giun lươn thu thập huyện nghiên cứu thuộc tỉnh Bắc Giang So sánh trình tự thu với trình tự ngân hàng gen chương trình MEGA (Tamura K cs., 2013), phân tích vẽ phả hệ phát sinh chủng loại theo phương pháp Maximum Likelihood (ML) với mơ hình thích hợp Độ tin cậy nhóm đánh giá giá trị bootstrap với 1000 mẫu lặp 2.4.2.3 Phương pháp nghiên cứu ô nhiễm trứng ấu trùng giun lươn ngoại cảnh * Phương pháp xác định ô nhiễm trứng ấu trùng giun lươn ngoại cảnh Xét nghiệm mẫu đất tìm trứng giun lươn kỹ thuật Romanenko N A (1968) Xác định ấu trùng giun lươn mẫu đất phương pháp phân ly ấu trùng Baerman * Phương pháp xác định thời gian phát triển tồn trứng ấu trùng giun lươn phân lợn phòng thí nghiệm Bố trí đợt thí nghiệm vào mùa: Xuân, Hè, Thu Đông Lấy phân lợn bị nhiễm giun lươn nặng Mỗi đợt gồm 15 chậu nhựa đường kính 20 cm, dán nhãn ghi ngày, tháng bắt đầu thí nghiệm, để mẫu điều kiện nhiệt độ ẩm độ khơng khí bình thường Ngày lấy mẫu lần để xét nghiệm phương pháp phù fulleborn phương pháp phân ly ấu trùng Bearman xác định thời gian trứng giun lươn nở ấu trùng Sau ngày lấy khoảng - gam phân xét nghiệm phương pháp phân ly ấu trùng Bearman để xác định thời gian ấu trùng phát triển thành ấu trùng có sức gây bệnh Xác định ấu trùng gây nhiễm cách, quan sát hình thái ấu trùng kính hiển vi quang học, nhận biết ấu trùng có khả gây nhiễm dựa vào hình thái mơ tả Viney M E Lok J B (2015) 2.4.2.4 Phương pháp gây nhiễm cho lợn để nghiên cứu bệnh giun lươn Bố trí đợt gây nhiễm cho lợn lai (♂ Yorkshire x ♀ Móng Cái) - tháng tuổi khỏe mạnh, đợt gây nhiễm để nghiên cứu đặc điểm bệnh lý chủ yếu bệnh; đợt gây nhiễm để thử nghiệm thuốc tẩy giun lươn cụ thể: Đợt gây nhiễm cho 15 lợn chia thành lô: Lô I gây nhiễm qua đường tiêu hóa; lơ gây nhiễm qua da; lô đối 11 trường hợp nhiễm giun tròn khác mà khơng có giun lươn, chiếm 0,91% cường độ nhiễm - 125 giun/ lợn 3.1.3.3 Tỷ lệ nhiễm giun tròn đường tiêu hóa lợn số địa phương thuộc tỉnh Bắc Giang (qua xét nghiệm phân) Bảng 3.5 Tỷ lệ nhiễm giun tròn đường tiêu hóa lợn số địa phương thuộc tỉnh Bắc Giang (qua xét nghiệm phân) Địa phương (Huyện) Số lợn kiểm tra (con) Số lợn nhiễm (con) Việt Yên Hiệp Hòa Lạng Giang n Dũng Sơn Động Tính chung 980 985 983 978 994 4.920 604 580 478 555 709 2.926 Tỷ lệ (%) 61,63ab 58,88ab 48,63b 56,75ab 71,33a 59,47 * Ghi chú: Theo hàng dọc, tỷ lệ nhiễm mang chữ khác khác có ý nghĩa thống kê (P< 0,05) Kết bảng 3.5 cho thấy: lợn nuôi huyện tỉnh Bắc Giang nhiễm giun tròn, tỷ lệ nhiễm biến động 48,63% - 71,33% Lợn nuôi huyện Sơn Động nhiễm giun tròn đường tiêu hóa nhiều (71,33%); huyện Việt Yên, Hiệp Hòa Yên Dũng tỷ lệ nhiễm 61,63%, 58,88% 56,75%; lợn nuôi huyện Lạng Giang nhiễm thấp (48,63%) 3.1.3.4 Tỷ lệ cường độ nhiễm lồi giun tròn đường tiêu hóa lợn (qua xét nghiệm phân) Kết bảng 3.6 cho thấy, tỷ lệ nhiễm chung 59,47% Trong lồi giun tròn phát hiện, lồi S ransomi nhiễm cao (25,71%), tỷ lệ nhiễm loài A suum T suis thấp (6,87% 7,13%), nhiễm thấp loài O dentatum (3,78%) Số lợn nhiễm hỗn hợp giun lươn giun tròn khác 15,04%, có 0,93% số lợn nhiễm hỗn hợp lồi giun tròn mà khơng có giun lươn Tỷ lệ nhiễm lồi S ransomi lợn so với lồi giun tròn khác có khác rõ rệt (với P< 0,05) Lợn nhiễm bốn lồi giun tròn đường tiêu hóa với cường độ nhiễm nhẹ trung bình chiếm ưu (49,69% 29,63%) 3.1.3.5 Biến động nhiễm giun tròn đường tiêu hóa theo tuổi lợn (qua xét nghiệm phân) 12 Kết bảng 3.7 cho thấy: lợn lứa nhiễm giun tròn đường tiêu hóa Lợn tháng tuổi nhiễm giun tròn cao (78,84%), tiếp đến lợn - tháng tuổi (69,71%), lợn - tháng tuổi có tỷ lệ nhiễm 55,82%, tỷ lệ nhiễm thấp lợn tháng tuổi (27,23%) Như vậy, tỷ lệ nhiễm giun tròn đường tiêu hóa lợn giảm dần theo lứa tuổi lợn 3.1.3.6 Tỷ lệ nhiễm giun tròn đường tiêu hóa lợn theo phương thức chăn nuôi Kết bảng 3.8 cho thấy, lợn nuôi phương thức chăn nuôi truyền thống có tỷ lệ nhiễm cao (85,59%); tiếp đến lợn nuôi phương thức bán công nghiệp (72,35%); lợn nuôi phương thức chăn nuôi công nghiệp nhiễm thấp (28,64%) (P< 0,05) Kết cho thấy, phương thức chăn ni có ảnh hưởng rõ rệt đến tỷ lệ nhiễm giun tròn đường tiêu hóa lợn 3.1.3.7 Tỷ lệ nhiễm giun tròn đường tiêu hóa lợn theo mùa năm Kết bảng 3.9 cho thấy, bốn mùa lợn nhiễm giun tròn đường tiêu hóa, tỷ lệ nhiễm biến động 40,70% - 73,80% Trong đó, lợn ni mùa Hè có tỷ lệ nhiễm giun tròn cao (73,80%), mùa Thu mùa Xuân tỷ lệ nhiễm 65,66% 56,82%, mùa Đơng lợn nhiễm giun tròn đường tiêu hóa thấp (40,70%) Sự khác tỷ lệ nhiễm giun tròn mùa Hè mùa Thu rõ rệt (P< 0,05) 3.2 Nghiên cứu bệnh giun lươn lợn (Swine Strongyloidosis) 3.2.1 Kết định danh loài giun lươn ký sinh lợn 3.2.1.1 Kết mổ khám phát thu thập giun lươn lợn Bắc Giang Bảng 3.10 Kết mổ khám phát thu thập giun lươn lợn Bắc Giang Cường độ Số lợn mổ Số lợn Tỷ lệ nhiễm Địa phương khám nhiễm giun nhiễm (huyện) (min - max (con) lươn (con) (%) giun/lợn) Việt Yên Hiệp Hòa Lạng Giang Yên Dũng Sơn Động 264 269 261 258 273 110 102 54 87 137 41,67a 37,92 - 1.002 ab - 905 b - 467 - 863 11 - 1.026 20,69 33,72ab 50,18a 13 Tính chung 1.325 490 36,98 - 1.026 * Ghi chú: Theo hàng dọc, tỷ lệ nhiễm mang chữ khác khác có ý nghĩa thống kê (P< 0,05) Kết bảng 3.10 cho thấy, tổng số 1.325 lợn mổ khám có 490 lợn nhiễm giun lươn, chiếm 36,98%, cường độ nhiễm chung - 1.026 giun/ lợn Tỷ lệ cường độ nhiễm giun lươn huyện có khác nhau: lợn ni huyện Sơn Động có tỷ lệ cường độ nhiễm cao (50,18% 11 - 1.026 giun/ lợn); lợn nuôi huyện Lạng Giang có tỷ lệ cường độ nhiễm giun lươn thấp (20,69% - 467 giun/ lợn) 3.2.1.2 Kết định danh loài giun lươn kỹ thuật hình thái học Kết 3.11 hình 3.12a, 3.12b, 3.12c 3.12d, 3.12e, 3.13, 3.14a, 3.14b, 3.14c cho thấy, giun ký sinh có hình sợi chỉ, dài trung bình 4,8 mm, rộng thể có kích thước trung bình 0,055 mm Cơ thể thu hẹp phía trước, hình nón, tù Thực quản dài 0,99 ± 0,022 mm Hậu môn cách đuôi 0,065 ± 0,002 mm Âm mơn khe ngang, có đơi mơi, nằm phần phía sau thể, cách đuôi 1,913 ± 0,024 mm Buồng trứng uốn khúc Hai buồng trứng ống mỏng, xuất phát gần lỗ sinh dục, buồng trứng hướng lên phía thể, lại hướng xuống Tử cung chứa - 10 trứng Trứng giun hình bầu dục vỏ mỏng có chứa ấu trùng, kích thước trung bình 0,051mm x 0,028 mm Quan sát hình thái giun S ransomi kính hiển vi điện tử S - 4.800 (FE - SEM, Hitachi) thấy, loài giun có đặc điểm hình thái bật sau: xoang miệng hình chng cân Xung quanh miệng, chia thành thùy đó: thùy hình lưỡi nhơ lên khỏi bề mặt xoang miệng phía gốc thùy có tuyến nhờn nhơ xoang miệng tạo nên gai thực quản, thùy bao quanh xoang miệng Âm hộ cấu tạo đôi môi; chiều rộng thể 0,032 mm, đuôi cùn đầu mút đuôi chẻ Đặc điểm cấu tạo siêu cấu trúc vùng miệng loài giun S ransomi ký sinh lợn Bắc Giang phù hợp với mô tả tác giả Sato H cs (2008) 3.2.1.3 Kết định danh loài giun lươn ký sinh lợn kỹ thuật sinh học phân tử 863 bp 14 Hình 3.15 Hình ảnh điện di sản phẩm PCR đoạn gen 18S rDNA giun lươn thạch agarose gel 1.0% Kết điện di sản phẩm PCR nhân trình tự gen 18S rDNA mẫu giun lươn thu thập huyện tỉnh Bắc Giang Hình 3.16 cho thấy, băng điện di tương ứng khoảng 863bp (hình 3.16) * Quan hệ loài giun lươn Strongyloides ransomi thu thập lợn tỉnh Bắc Giang Hình 3.16 Cây phả hệ xây dựng từ trình tự gen 18S rDNA phương pháp Maximum Likelihood Cây phả hệ xây dựng từ số liệu trình tự gen 18S rDNA phương pháp Maximum Likelihood (ML) (hình 3.16) kết cho thấy, trình tự lồi S ransomi từ Bắc Giang, Việt Nam tương đồng 100% với trình tự KU724126 giun lươn S ransomi từ Campuchia, đồng thời tất trình tự lồi S ransomi làm thành nhánh chung gần với loài S venezuelensis, với khoảng cách di truyển 0,3% Mặt khác, giải trình tự gen 18S DNA, phân tích vùng biến đổi HVR-I, chứng tỏ giun lươn ký sinh lợn tỉnh Bắc Giang thuộc loài S ransomi 3.2.2 Nghiên cứu nhiễm giun lươn lợn qua xét nghiệm phân 3.2.2.1 Tỷ lệ cường độ nhiễm giun lươn lợn số địa phương 15 Hình 3.17 Biểu đồ tỷ lệ nhiễm giun lươn lợn địa phương Kết bảng 3.13 hình 3.17 cho thấy, huyện tỉnh Bắc Giang có lợn bị nhiễm giun lươn, tỷ lệ nhiễm chung 40,75% Lợn huyện Sơn Động nhiễm giun lươn với tỷ lệ cao (52,01%), huyện Lạng Giang lợn nhiễm giun lươn tỷ lệ thấp (26,04%) Về cường độ nhiễm: lợn nhiễm giun lươn mức độ, lợn nhiễm mức độ nhẹ cao (47,58%); mức độ trung bình 28,28%, mức độ nặng 15,16% nặng 8,98% 3.2.2.2 Tỷ lệ cường độ nhiễm giun lươn theo tuổi lợn Hình 3.19 Đồ thị biến động nhiễm giun tròn theo tuổi lợn Kết bảng 3.14 đồ thị hình 3.19 cho thấy, tỷ lệ nhiễm giun lươn theo tuổi lợn biến động từ 14,99 % đến 63,02% Lợn tháng tuổi nhiễm nhiều (63,02%) đồng thời nhiễm mức độ nặng nặng cao (20,60% 13,98%); tiếp đến lợn - tháng tuổi (46,20%); tỷ lệ nhiễm giảm rõ rệt lợn - tháng tuổi (33,84%); lợn tháng tuổi nhiễm thấp (14,99%) lợn nhiễm chủ yếu mức độ nhẹ trung bình Như vậy, tỷ lệ cường độ nhiễm giun lươn giảm dần theo lứa tuổi lợn 3.2.2.3 Tỷ lệ cường độ nhiễm giun lươn lợn theo mùa năm 16 Hình 3.20 Biểu đồ tỷ lệ nhiễm giun lươn lợn theo mùa năm Kết bảng 3.15 biểu đồ hình 3.20 cho thấy: lợn nhiễm giun lươn quanh năm, song mùa Hè mùa Thu lợn nhiễm giun lươn nhiều (50,67% 47,38% số lợn xét nghiệm) nhiễm nặng; mùa Xuân lợn nhiễm 37,53%; mùa Đông lợn nhiễm 26,80%, thấp rõ rệt so với mùa Hè mùa Thu (P< 0,05), đồng thời lợn nhiễm chủ yếu mức độ nhẹ 63,75% Như vậy, lợn nhiễm giun lươn quanh năm lợn nuôi mùa Hè, mùa Thu, mùa Xuân lợn nhiễm cao mùa Đông 3.2.2.4 Tỷ lệ cường độ nhiễm giun lươn lợn theo phương thức chăn ni Hình 3.21 Biểu đồ tỷ lệ nhiễm giun lươn lợn theo phương theo phương thức chăn nuôi Kết bảng 3.16 biểu đồ hình 3.21 cho thấy: Tỷ lệ nhiễm giun lươn cao lợn nuôi theo phương thức truyền thống, tận dụng thức ăn (61,55%); lợn nuôi theo phương thức bán công nghiệp nhiễm 47,63%; lợn nuôi công nghiệp nhiễm 19,83% Xét cường độ nhiễm: lợn nuôi theo phương thức truyền thống nhiễm nặng 18,98% nặng 12,88% nhiều so với phương thức lại 3.2.3 Nghiên cứu nhiễm trứng ấu trùng giun lươn ngoại cảnh 17 3.2.3.1 Nghiên cứu ô nhiễm trứng ấu trùng giun lươn chuồng nuôi, hố nước thải chuồng nuôi, mẫu đất vườn trồng thức ăn cho lợn Kết bảng 3.17 cho thấy, có 36,65% số mẫu cặn chuồng, 23,44% số mẫu nước thải chuồng nuôi 12,19% số mẫu đất bãi trồng thức ăn cho lợn phát trứng ấu trùng giun lươn Tỷ lệ ô nhiễm khác rõ rệt địa điểm lấy mẫu (P< 0,05) Mặt khác, tìm thấy trứng ấu trùng giun lươn mẫu thu thập hộ chăn ni có lợn nhiễm giun lươn 3.2.3.2 Thời gian trứng giun lươn nở phát triển thành ấu trùng có sức gây bệnh phân lợn mơi trường nhiệt độ phòng thí nghiệm Bảng 3.18 Thời gian trứng giun nở phát triển thành ấu trùng có sức gây bệnh phân lợn mơi trường nhiệt độ phòng thí nghiệm Mùa Xuân Hè Thu Đông Số mẫu theo dõi (mẫu) 15 15 15 15 Số trứng/ vi trường ( ±mx) 47,13 ± 1,31 57,29 ± 0,93 54,04 ± 1,05 41,24 ± 1,34 Thời gian trứng nở thành ấu trùng ±mx) (giờ) 13,73b ± 0,43 5,53c ± 0,23 6,27c ± 0,26 16,40a ± 0,27 ( Thời gian phát triển thành ấu trùng có sức gây bệnh ( ± m x ) (ngày) 3,40b ± 0,16 2,56c ± 0,10 2,80c ± 0,07 4,40a ± 0,22 * Ghi chú: Theo hàng dọc, số mang chữ khác khác có ý nghĩa thống kê (P