LỜI CAM ĐOAN
LỜI CẢM ƠN
MỤC LỤC
DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ CÁI VIẾT TẮT
DANH SÁCH BẢNG
DANH SÁCH HÌNH
DANH SÁCH SƠ ĐỒ
MỞ ĐẦU
1. Lí do chọn đề tài
2. Đối tượng nghiên cứu
3. Nhiệm vụ nghiên cứu
4. Phương pháp nghiên cứu
5. Những đóng góp mới của luận án
6. Cấu trúc của luận án
Chương 1
TỔNG QUAN
1.1. Nấm lớn
1.2. Thành phần dinh dưỡng của nấm
1.2.1. Hàm lượng chất khô
Bảng 1.1. Hàm lượng chất khô của một số loài nấm (%)
1.2.2. Protein và acid amin
Bảng 1.2. Thành phần acid amin thiết yếu trong một số loài nấm (mg/kg chất khô).
Bảng 1.3. Thành phần acid amin không thiết yếu trong một số loài nấm (mg /kg chất khô)
1.2.3. Carbohydrate
1.2.4. Lipid
1.2.5. Vitamin
1.2.6. Khoáng chất
Bảng 1.4. Hàm lượng nguyên tố thiết yếu trong một số loài nấm (mg /kg chất khô)
1.3. Chi Daldinia
1.3.1. Đặc điểm chung về hình thái
1.3.2. Thành phần hóa học
1.4. Nấm than (Daldinia concentrica)
1.4.1. Đặc điểm hình thái và phân bố
Hình 1.1. Nấm Daldinia concentrica
1.4.2. Thành phần hóa học và hoạt tính sinh học
1.5. Chi linh chi (Ganoderma)
1.5.1. Đặc điểm hình thái
1.5.2. Thành phần hóa học và hoạt tính sinh học
1.6. Nấm cổ linh chi (Ganoderma applanatum)
1.6.1. Đặc điểm hình thái và phân bố
Hình 1.2. Bề mặt dưới của thể quả Ganoderma applanatum
1.6.2. Thành phần hóa học
1.6.3. Hoạt tính sinh học
Chương 2
PHƯƠNG PHÁP VÀ THỰC NGHIỆM
2.1. Đối tượng và phương pháp nghiên cứu
2.1.1. Thu mẫu
2.1.2. Các phương pháp xử lý mẫu và chiết
2.1.3. Các phương pháp phân tích, phân tách hỗn hợp và phân lập các hợp chất
2.1.4. Phương pháp khảo sát cấu trúc các hợp chất
2.2. Hoá chất, dụng cụ và thiết bị
2.2.1. Hoá chất
2.2.2. Dụng cụ và thiết bị
2.3. Nghiên cứu thành phần các chất dinh dưỡng có trong các loài nấm lớn vùng Bắc Trung Bộ.
2.3.1. Xác định thành phần khoáng và các nguyên tố vi lượng.
2.3.1.1. Xử lý mẫu phân tích.
2.3.1.2. Điều kiện đo để định lượng khoáng và các nguyên tố vi lượng
Chúng tôi lựa chọn các điều kiện và thông số máy đo ICP-MS Agilent 7500 để xác định Ge được trình bày trong bảng 2.2. Selen được xác định bằng phương pháp AAS sử dụng kỹ thuật nguyên tử hóa bằng hơi hiđrua (HG-AAS). Na, K, Ca, Mg, Fe, Cu, Zn đượ...
Bảng 2.2. Các điều kiện và thông số máy tối ưu để định lượng Ge Na, K, Ca, Mg.
Bảng 2.3. Các điều kiện và thông số máy tối ưu để định lượng Se Fe, Cu, Zn.
2.3.2. Xác định hàm lượng acid amin
Sơ đồ 2.1. Quy trình xử lý mẫu phân tích acid amin
2.3.3. Xác định hàm lượng các vitamin A và E
2.3.3.1. Chuẩn bị và xử lí mẫu phân tích vitamin A và vitamin E
Quy trình xử lý mẫu xác định vitamin A và vitamin E được thực hiện theo AOAC.
Sơ đồ 2.2. Quy trình xử lý mẫu định hàm lượng vitamin A và E
2.4. Xác định hàm lượng ergosterol và ergosterol peroxide
2.4.1. Chất chuẩn
2.4.2. Chiết các sterol
2.4.3. Phân tích bằng sắc ký (HPLC)
2.4.3.1 . Tiến hành phân tích ergosterol
2.4.3.2. Tiến hành phân tích ergosterol peroxide
2.5. Nghiên cứu các hợp chất từ loài nấm than (D. concentrica)
2.5.1. Chiết xuất, phân lập, xác định cấu trúc các hợp chất phân lập được
2.5.2. Các dữ liệu vật lý
2.5.2.1. Hợp chất DCM1
Sơ đồ 2.3. Phân lập các hợp chất từ nấm than (D. concentrica)
2.5.2.2. Hợp chất DCM 2
2.5.2.3. Hợp chất DCM 3
2.5.2.4. Hợp chất DCM4
2.5.2.5. Hợp chất DCM5
2.5.2.6. Hợp chất DCM6
2.5.2.7. Hợp chất DCM7
2.5.2.8. Hợp chất Ergosterol DCM8
2.5.2.9. Hợp chất Ergosterol peroxide DCM9
2.6. Nghiên cứu các hợp chất từ nấm cổ linh chi (Ganoderma applanatum)
2.6.1. Chiết xuất và phân lập các hợp chất
2.6.2. Các dữ kiện vật lý và phổ
2.6.2.1. Ergosterol (GAM1)
2.6.2.2 Ergosterol peroxide (GAM2)
2.6.2.3 Ergosta-7,22-dien-3β-ol (GAM3)
2.6.2.4. Lanosta-7,9(11),24-triene-3,26-diol (GAM4)
2.6.2.5. Acid 3β-hydroxy-5α-lanosta-7,9,24(E)-trien-26-oic (GAM5)
Sơ đồ 2.4. Phân lập các hợp chất từ quả thể nấm linh chi (G. applanatum)
2.7. Phương pháp thử hoạt tính
2.7.1. Gây độc tế bào
2.7.2. Kháng viêm
2.7.2.1. Vật liệu
2.7.2.2. Phương pháp nuôi cấy tế bào in vitro
2.7.2.3. Phương pháp xác định khả năng ức chế sản sinh NO của tế bào macrophage RAW 274.7
2.7.2.4. Phép thử sinh học xác định khả năng gây độc tế bào bằng MTT
Chương 3
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. Kết quả xác định hàm lượng các chất dinh dưỡng của một số loài nấm
3.1.1. Thành phần khoáng và các nguyên tố vi lượng
Bảng 3.1. Phương trình đường chuẩn,
Bảng 3.2. Kết quả xác định hàm lượng Ge, Na, K, Ca, Mg trong 08 mẫu nấm lớn
Bảng 3.3. Kết quả xác định Se, Fe, Cu, Zn trong trong 08 mẫu nấm lớn
3.1.2. Hàm lượng các acid amin trong các mẫu nấm
3.1.2.1. Xây dựng đường chuẩn
Bảng 3.4. Sự phụ thuộc của diện tích peak sắc ký vào nồng độ (pmol/) của acid amin
Hình 3.1. Đường chuẩn định lượng Asp
3.1.2.2. Kết quả hàm lượng các acid amin thủy phân trong các mẫu nấm
Bảng 3.5. Hàm lượng acid amin thủy phân trong nấm nghiên cứu (μg/g)
Bảng 3.6. Hiệu suất thu hồi của acid amin trong nấm cổ linh chi (G. applanatum)
3.1.3. Hàm lượng các vitamin trong các mẫu nấm
3.1.3.1. Vitamin A
Bảng 3.7. Diện tích peak của vitamin A tương ứng với từng nồng độ chuẩn
Hình 3.18. Đường chuẩn định lượng vitamin A
Bảng 3.8. Kết quả phân tích hàm lượng vitamin A trong nấm
Kết quả bảng 3.8 cho thấy hàm lượng vitamin A của 08 mẫu nghiên cứu dao động từ 0,285 – 1,208 μg /g. Hiệu suất thu hồi của phương pháp được thực hiện với mẫu nấm Mush 01 thêm chuẩn là 98,71%. Kết quả hiệu suất thu hồi cao phản ánh độ đúng cao của ...
3.1.3.2. Vitamin E
Bảng 3.9. Diện tích peak của vitamin E tương ứng với từng nồng độ chuẩn
Hình 3.19. Đường chuẩn định lượng vitamin E
Bảng 3.10. Kết quả phân tích hàm lượng vitamin E trong nấm
Kết quả bảng 3.10 cho thấy hàm lượng vitamin E của 08 mẫu nghiên cứu dao động từ 14,881 – 70,565 μg /g. Hiệu suất thu hồi của phương pháp được thực hiện với mẫu nấm Mush 01 thêm chuẩn là 97,85%. Kết quả hiệu suất thu hồi cao phản ánh độ đúng cao ...
3.2. Hàm lượng ergosterol và ergosterol peroxide
3.2.1. Xây dựng đường chuẩn của ergosterol và ergosterol peroxide
Bảng 3.11. Diện tích peak của ergosterol và ergosterol peroxide ứng với từng nồng độ chuẩn
Hình 3.20. Đường chuẩn định lượng ergosterol
Hình 3.21. Đường chuẩn định lượng ergosterol peroxide
3.2.2. Kết quả phân tích
3.3. Nấm than (D. concentrica)
3.3.1. Kết quả phân lập hợp chất.
Bảng 3.13. Các hợp chất được tách ra từ nấm than (D. concentrica)
3.3.2. Xác định cấu trúc
3.3.2.1. Hợp chất DCM1
Hình 3.22. Hợp chất DCM1
Bảng 3.14. Dữ liệu phổ 1H, 13C-NMR và DEPT của hợp chất DCM1
Hình 3.23. Phổ UV- Vis của hợp chất của hợp chất DCM1
Hình 3.24. Phổ IR của hợp chất của hợp chất DCM1
Hình 3.25. Phổ khối lượng của hợp chất DCM1
Hình 3.26. Phổ 1H-NMR của hợp chất DCM1
Hình 3.27. Phổ 1H-NMR của hợp chất DCM1
Hình 3.28. Phổ 13C-NMR của hợp chất DCM1
Hình 3.29. Phổ 13C-NMR của hợp chất DCM1
Hình 3.30. Phổ DEPT của hợp chất DCM1
Hình 3.31. Phổ DEPT của hợp chất DCM1
Hình 3.32. Phổ DEPT của hợp chất DCM1
Hình 3.33. Phổ HSQC của hợp chất DCM1
Hình 3.34. Phổ HSQC của hợp chất DCM1
Hình 3.35. Phổ HSQC của hợp chất DCM1
Hình 3.36. Phổ HMBC của hợp chất DCM1
Hình 3.37. Phổ HMBC của hợp chất DCM1
Hình 3.38. Phổ HMBC của hợp chất DCM1
Hình 3.39. Phổ HMBC của hợp chất DCM1
3.3.2.2 Hợp chất DCM2
Hình 3.40. Phổ 1H-NMR của hợp chất DCM2
Hình 3.41. Phổ 13C-NMR của hợp chất DCM2
Hình 3.42. Phổ DEPT của hợp chất DCM2
Hình 3.43. Phổ HMBC của hợp chất DCM2
Bảng 3.15. Dữ liệu phổ NMR của hợp chất DCM2
3.3.2.3 Hợp chất DCM3
Hình 3.44. Phổ 1H-NMR của hợp chất DCM3
Hình 3.45. Phổ 13C - NMR của hợp chất DCM3
Hình 3.46. Phổ DEPT của hợp chất DCM3
Hình 3.47. Phổ HMBC của hợp chất DCM3
Hình 3.48. Phổ HSQC của hợp chất DCM3
3.3.2.4 Hợp chất DCM4 (8-Methyleugenitol )
Hình 3.49. Phổ 1H-NMR của hợp chất DCM4
Hình 3.50. Phổ 13C-NMR của hợp chất DCM4
Hình 3.51. Phổ DEPT của hợp chất DCM4
Bảng 3.16. Dữ liệu phổ 13C- NMR của hợp chất DCM4
Hình 3.52. Phổ HMBC của hợp chất DCM4
Hình 3.53. Phổ HSQC của hợp chất DCM4
3.3.2.5 Hợp chất DCM5 (Eugenitol)
Hình 3.54. Phổ 1H-NMR của hợp chất DCM5
Hình 3.55. Phổ 13C-NMR của hợp chất DCM5
Hình 3.56. Phổ DEPT của hợp chất DCM5
Hình 3.57. Phổ HMBC của hợp chất DCM5
Hình 3.58 . Phổ HSQC của hợp chất DCM5
3.3.2.6 Hợp chất DCM6 (uracil )
Hình 3.59. Phổ 1H-NMR của hợp chất DCM6
3.3.2.7 Hợp chất DCM7 (D-mannitol )
Hình 3.60. Phổ 1H-NMR của hợp chất DCM7
Hình 3.61. Phổ 13C-NMR của hợp chất DCM7
Hình 3.62. Phổ DEPT của hợp chất DCM7
3.3.2.8 Hợp chất DCM8 (ergosterol)
Bảng 3.17. Dữ liệu phổ NMR của hợp chất DCM8 (ergosterol)
3.3.2.9 Hợp chất DCM9 (Ergosterol peroxide )
Bảng 3.18. Dữ liệu phổ NMR của hợp chất DCM9
3.3.3. Kết quả thử hoạt tính sinh học
Trên cơ sở các hợp chất thu được từ nấm Mush 02 (Daldinia concentrica) chúng tôi đã tiến hành thử hoạt tính đối với 5 hợp chất (DCM1, DCM2, DCM3, DCM4, DCM5) với các dòng tế bào ung thư khác nhau. Kết quả thể hiện trong bảng 3.19.
Bảng 3.19. Kết quả thử nghiệm hoạt tính gây độc tế bào ung thư
Bảng 3.20. Kết quả thử nghiệm hoạt tính ức chế nitric oxide (NOs INHIBITION)
DCM1, DCM2 gây chết tế bào ở nồng độ thử chất cao nên giá trị IC50 được xem là không xác định (NA).
3.4. Nấm linh chi (Ganoderma applanatum (Pers.) Pat. )
3.4.1. Phân lập một số hợp chất
Bảng 3.21. Các hợp chất được tách ra từ nấm linh chi (G. applanatum)
3.4.2. Xác định cấu trúc
3.4.2.1. Hợp chất GAM1 (ergosterol)
3.4.2.2. Hợp chất GAM2 (5α,8α-epidioxy-22E-ergosta-6,22-dien-3β-ol )
3.4.2.3 . Hợp chất GAM3 (Ergosta-7,22-dien-3β-ol)
3.4.2.4. Hợp chất GAM4 (Lanosta-7,9(11),24-triene-3,26-diol )
Bảng 3.22. Dữ liệu phổ NMR của hợp chất GAM4
3.4.2.5. Hợp chất GAM5 (Acid 3β-hydroxy-5α-lanosta-7,9,24(E)-trien-26-oic )
Bảng 3.23. Dữ liệu phổ 13C-NMR và DEPT của hợp chất GAM5
CÁC HỢP CHẤT PHÂN LẬP ĐƯỢC TỪ QUẢ THỂ NẤM THAN
KẾT LUẬN
- Hàm lượng vitamin E dao động từ 14,881-70,565 μg/g với hiệu suất thu hồi 97,85%.
DANH MỤC CÔNG TRÌNH LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Tiếng Việt
Tiếng Anh
PHỤ LỤC