Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 8169-3:2009 qui định phương pháp đo phổ UV để xác định các mức dư lượng thấp của các chất diệt nấm dithiocacbamat và thiuram disulfua theo xanthogenat. Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết.
TIÊU CHUẨN VIỆT NAM TCVN 8169-3 : 2009 THỰC PHẨM KHÔNG CHỨA CHẤT BÉO – XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG DITHIOCACBAMAT VÀ THIURAM DISULFUA – PHẦN 3: PHƯƠNG PHÁP ĐO PHỔ UV XANTHOGENAT Non-fatty foods – Determination of dithiocarbamate and thiuram disulfide residues – Part 3: UV spectormetric xanthogenate method Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn qui định phương pháp đo phổ UV để xác định mức dư lượng thấp chất diệt nấm dithiocacbamat thiuram disulfua theo xanthogenat Các chất diệt nấm dithiocacbamat thiuram disulfua giải phóng cacbon disulfua điều kiện qui định (ví dụ: mancozeb, maneb, propineb, thiram, zineb) Tiêu chuẩn áp dụng để xác định hợp chất nói có loại thực phẩm có nguồn gốc từ thực vật mức dư lượng thấp thiết lập Phương pháp dùng để định lượng tồn nhóm dư lượng mà không nhận biết hợp chất riêng lẻ Nhìn chung giới hạn dư lượng tối đa (MRL) biểu thị theo cacbon disulfua Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm cơng bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn khơng ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) TCVN 8169-1:2009 (EN 12396-1:1998), Thực phẩm không chứa chất béo – Xác định dư lượng dithiocacbamat thiuram disulfua – Phần 1: Phương pháp đo phổ TCVN 8169-2:2009 (EN 12396-2:1998), Thực phẩm không chứa chất béo – Xác định dư lượng dithiocacbamat thiuram disulfua – Phần 2: Phương sắc ký khí ISO 1750, Pesticides and other agrochemicals – Common names (Thuốc Bảo vệ thực vật hóa chất nơng nghiệp khác – Tên thơng dụng) EN 12393-1:1998, Non-fatty foods – Multiresidues methods for the gas chromatographic determination of pesticides residues – Part 1: General considerations (Thực phẩm không chứa chất béo – Phương pháp đa dư lượng xác định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật sắc ký khí – Phần 1: Yêu cầu chung) Nguyên tắc Mẫu làm nóng với axit clohydric thiếc (II) clorua bình kín khí để giải phóng cacbon disulfua khỏi dithiocacbamat và/hoặc thiuram disulfua có mẫu Cacbon disulfua tách tinh chưng cất thu vào dung dịch kali hydroxit metanol Trong điều kiện này, cacbon disulfua tạo thành kali xanthogenat Độ hấp thụ sản phẩm phản ứng tạo thành đo phổ bước sóng 302 nm có hiệu chỉnh bước sóng 272 nm 332 nm Phần khối lượng dithiocacbamat và/hoặc thiuram disulfua tính biểu thị theo miligam cacbon disulfua kilogam sản phẩm Xem [1], [2] [3] thông tin thêm phương pháp Thuốc thử 4.1 Yêu cầu chung Chỉ sử dụng thuốc thử loại tinh khiết phân tích thích hợp cho phân tích dư lượng thuốc bảo vệ thực vật, nước cất nước loại khoáng, trừ có qui định khác Ghi nhãn tất hộp đựng chất chẩn thuốc bảo vệ thực vật với tên gọi độ tinh khiết Đối với tên gọi đầy đủ cấu trúc hóa chất, xem ISO 1750 Chú ý không để vật liệu chất dẻo cao su làm nhiễm bẩn nước, dung môi, muối vô v.v… Chỉ sử dụng dụng cụ thủy tinh để bảo quản vận chuyển nước thuốc thử 4.2 Cacbon disulfua, khơng màu, có nồng độ khối lượng 99 % Nếu bảo quản âm 20 oC bền từ năm đến năm 4.3 Metanol 4.4 Axit clohydric, đậm đặc, 4.5 Axit sulfuric, đậm đặc, 20 (HCl) = 1,16 g/ml 20 (H2SO4) = 1,84 g/ml 4.6 Dung dịch natri hydroxit, (NaOH) = 100 g/l1) 4.7 Dung dịch kali hydroxit metanol I, (KOH) = 28 g/l metanol (4.3) 4.8 Dung dịch kali hydroxit metanol II, (KOH) = 56 g/l metanol (4.3) 4.9 Dung dịch thiếc(II) clorua, (SnCl2.2H2O) = 40 g/100 ml axit clohydric đậm đặc (4.4) 4.10 Dung dịch thiếc (II) clorua-axit clohydric, (SnCl2.2H2O) = 3,3 g/100 ml Trộn 20 ml dung dịch thiếc (II) clorua (4.9) với 20 ml axit clohydric đậm đặc (4.4) thêm cẩn thận 200 ml nước 4.11 Dung dịch gốc cacbon disulfua Cân bình định mức 50 ml có cổ thủy tinh mài đậy nắp có chứa 40 ml metanol (4.3), xác đến 10 mg Dùng pipet thêm khoảng ml cacbon disulfua (4.2) (tương đương khoảng 1,25 g), đậy bình cân lại xác đến 10 mg để thu khối lượng xác cacbon disulfua Pha loãng đến vạch metanol trộn kỹ Chuẩn bị dung dịch cho đường chuẩn 4.12 Dung dịch chuẩn cacbon disulfua Pha loãng ml dung dịch gốc cacbon disulfua (4.11) với metanol (4.3) đến 25 ml đựng bình định mức Pha lỗng ml dung dịch đến 100 ml metanol bình định mức ml dung dịch chuẩn tương đương khoảng 10 g cacbon disulfua Chuẩn bị dung dịch cho đường chuẩn Thiết bị dụng cụ 5.1 Yêu cầu chung Sử dụng dụng cụ thủy tinh rửa kỹ Xem 5.1 EN 12393-1:1998 việc làm dụng cụ thủy tinh Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm thơng thường, cụ thể sau: 5.2 Thiết bị phân hủy chưng cất, gồm có bình hình trụ hình cầu có ba cổ, đáy tròn dung tích l l đáy tròn có ba cổ nối, phễu nhỏ giọt, ống dẫn khí, sinh hàn Liebig lắp ngược, bốn ống hấp thụ, hai ống cuối gắn với ống xoắn Widmer, nối khớp nối hình cầu, ống thứ gắn với sinh hàn Liebig (Xem Hình 1) 1) nồng độ khối lượng CHÚ DẪN Bộ sinh hàn Liebig Bình hình trụ hình cầu đáy tròn Phễu nhỏ giọt Ống hấp thụ Ống dẫn khí Ống xoắn Widmer Hình – Thiết bị phân hủy chưng cất 5.3 Máy đo tốc độ dòng 5.4 Vỏ gia nhiệt, dùng điện 450 W đèn đốt khí gắn với phễu Babo giá đỡ phễu 5.5 Máy đo phổ, thích hợp cho phép đo bước sóng 270 nm đến 350 nm, có cuvet thạch anh cm Tốt sử dụng máy đo phổ hai chùm tia 5.6 Máy bơm chân không thấp, gắn với ống hấp thụ cuối nguồn nitơ áp suất, gắn với ống dẫn khí Lấy mẫu Chuẩn bị mẫu phòng thử nghiệm theo phương pháp lấy mẫu khuyến cáo để thu mẫu đại diện sản phẩm cần phân tích CHÚ THÍCH Các qui trình lấy mẫu để kiểm soát dư lượng thuốc bảo vệ thực vật rau, nêu EEC Directive 79/700/EEC [4] Chuẩn bị mẫu thử 7.1 Mẫu thử Nếu mẫu gửi đến phòng thử nghiệm dạng đơng lạnh phải bảo quản âm 20 oC trước phân tích Nếu có thể, mẫu tươi cần phân tích sau phòng thử nghiệm nhận mẫu Khơng phân tích mẫu thấy bị hỏng Chỉ lấy phần mẫu phòng thử nghiệm có giới hạn dư lượng tối đa để phân tích Khơng lấy thêm phần khác thực vật Ghi lại phần thực vật lấy Phần mẫu chuẩn bị mẫu phân tích Nếu mẫu khơng thể phân tích ngay, bảo quản từ oC đến oC không ngày trước phân tích Việc giảm lượng mẫu phân tích thực theo cách cho thu phần đại diện (ví dụ: chia bốn chọn phần đối diện chéo) Khi mẫu đơn vị nhỏ (ví dụ: nhỏ, rau, ngũ cốc) mẫu phân tích cần trộn kỹ trước cân lấy phần mẫu thử Khi mẫu thử đơn vị lớn, lấy phần hình nêm (ví dụ: rau to) phần cắt ngang (ví dụ: dưa chuột) bao gồm phần vỏ CHÚ THÍCH Dư lượng dithiocacbamat thiuram disulfua, có mặt bề mặt phần thực vật không ngấm vào trong, phân hủy nhanh mẫu cắt miếng nhỏ Do đó, cần ý để tránh làm phân hủy chúng Nếu mẫu phải bảo quản nhiều ngày, chúng phải làm đơng lạnh sâu âm 20oC Để đảm bảo sau rã đơng lấy mẫu đại diện, cần chuẩn bị phần sản phẩm cho phần đủ cho lần phân tích 7.2 Phần mẫu thử Cân phần mẫu thử 200 g, xác đến % Sau cân phần mẫu thử, loại bỏ phần gây nhiễu cho qui trình phân tích Trong trường hợp loại có hạt cứng, hạt phải loại bỏ sau cân Khối lượng phần mẫu thử ban đầu (cả hạt) dùng để tính phần khối lượng dư lượng Không cắt phần mẫu thử giảm cỡ nhỏ mẫu lọt qua cổ bình phản ứng, dư lượng dithiocacbamat thiuram disulfua bị giảm phần mẫu thử bị cắt nhỏ Phân tích phần mẫu thử sau cắt nhỏ Cách tiến hành 8.1 Khía cạnh an toàn CẢNH BẢO Các Dithiocacbamat, thiuram disulfua cacbon disulfua gây độc đường phơi nhiễm khác nhau, đặc biệt dạng đậm đặc Khi làm việc với dithiocacbamat, thiuram disulfua cacbon disulfua cần lưu ý thơng tin an tồn nhà sản xuất Hơi số dung môi độc Một vài loại dung môi dễ dàng hấp thụ qua da Sử dụng tủ hút khói để loại bỏ dung mơi chúng dạng tự 8.2 Chuẩn bị mẫu trắng Chuẩn bị thuốc thử trắng mẫu chất trắng Cần thực phép thử thu hồi bổ sung mức thích hợp với giới hạn dư lượng tối đa phải cho kết thỏa mãn Độ hấp thụ mẫu thuốc thử trắng đo bước sóng 302 nm so với dung dịch kali hydroxit metanol l (4.7) phải gần zero CHÚ THÍCH Những người phân tích cần hiểu biết đầy đủ phương pháp trước bắt đầu phân tích CHÚ THÍCH Một số loại rau (ví dụ: thuộc họ Cải) có chứa hợp chất tự nhiên có giải phóng cacbon disulfua điều kiện tiêu chuẩn Do đó, phép phân tích loại rau cho kết dương tính giả 8.3 Chuẩn bị đường chuẩn Cho vào mười sáu bình định mức 10 ml bình ml dung dịch kali hydroxit II metanol (4.8) Sau đó, dùng pipet chia độ buret thêm vào hai cặp bình tương ứng 0,1ml; 0,2ml; 0,4ml; 0,8ml; 1,2ml; 1,6ml; 2ml 4ml dung dịch chuẩn cacbon disulfua (4.12) (tương đương với g, g, g, g, 12 g, 16 g, 20 g 40 g CS2) Pha loãng metanol đến vạch, trộn kỹ để yên 16 hỗn hợp 45 Tiến hành đo phổ 8.4.3 Dựng đường chuẩn giá trị độ hấp thụ trục tung (trục y) lượng cacbon disulfua hỗn hợp trục hoành (trục x) Đường chuẩn phải tuyến tính dải g đến 40 g cacbon disulfua Nếu không thỏa mãn yêu cầu trên, chuẩn bị đường chuẩn sử dụng dãy hỗn hợp phản ứng Cách khác, tiến hành phân tích hồi qui giá trị dựng đường hồi qui đường chuẩn 8.4 Đo mẫu 8.4.1 Chuẩn bị thiết bị Cho 20 ml dung dịch natri hydroxit (4.6) vào ống hấp thụ thứ thiết bị phân hủy chưng cất (xem Hình 1) 20 ml axit sulfuric (4.5) vào bình thứ hai Cho ml dung dịch kali hydroxit metanol l (4.7) vào ống hấp thụ thứ ba thứ tư gắn với ống xoắn Widmer Các bình phải làm nguội nước đá tránh làm thất metanol CHÚ THÍCH Ống hấp thụ thứ tư có chứa dung dịch kali hydroxit metanol gắn vào để kiểm tra việc hấp thụ hoàn tồn cacbon disulfua giải phóng Mở dòng nước cho qua sinh hàn hồi lưu chỉnh dòng nitơ bơm chân không thấp (5.6) khoảng 150 ml khơng khí nitơ qua ống hấp thụ phút 8.4.2 Phân hủy chưng cất Cho 200 g phần mẫu thử (400 g thức ăn cho trẻ nhỏ) vào bình ba cổ Đóng thiết bị Cẩn thận khơng làm thất cacbon disulfua khỏi thiết bị Sau thêm 240 ml dung dịch thiếc (II) clorua-axit clohydric (4.10) qua phễu nhỏ giọt Nếu lượng chất lỏng không đủ để làm ngập mẫu trồng (ví dụ: rau diếp), thêm dung dịch thiếc (II) clorua-axit clohydric Sau đun sơi dung dịch Để thực nhanh, đặc biệt mẫu cần phân tích trạng thái đơng lạnh cần đun sôi dung dịch thiếc (II) clorua-axit clohydric trước cho vào bình cầu Cẩn thận chuyển dung dịch sôi Tiếp tục đun sôi với tổng thời gian khoảng 30 Sau tháo ống hấp thụ có chứa dung dịch kali hydroxit ngắt dòng khí 8.4.3 Đo phổ Chuyển hết lượng chứa từ ống hấp thụ thứ ba thứ tư sang bình định mức 10 ml, tráng ống hấp thụ dung dịch kali hydroxit metanol I (4.7) cho vào bình định mức Pha lỗng dung dịch kali hydroxit metanol I (4.7) đến vạch, trộn để yên 15 Đo độ hấp thụ dung dịch mẫu thử thu từ ống hấp thụ thứ ba bước sóng 272 nm, 302 nm 332 nm cuvet cm máy đo phổ so với dung dịch kali hydroxit metanol Từ độ hấp thụ đo ba bước sóng trên, tính độ hấp thụ hiệu chỉnh A corr công thức (1): Acorr = A302 - ( A272 A332 ) (1) Trong đó: A302 độ hấp thụ đo bước sóng 302 nm; A272 độ hấp thụ đo bước sóng 272 nm; A332 độ hấp thụ đo bước sóng 332 nm Nếu độ hấp thụ hiệu chỉnh cao 0,8 đơn vị pha lỗng dung dịch dung dịch thu từ ống hấp thụ thứ tư với tỷ lệ 1:1, để yên đo lại độ hấp thụ Nếu độ hấp thụ hiệu chỉnh thu cao 1,5 đến đơn vị lặp lại qui trình phân hủy chưng cất sử dụng phần mẫu thử nhỏ Để kiểm tra giá trị độ hấp thụ đo được, cần dựng đường hấp thụ dung dịch mẫu thử ống hấp thụ thứ ba, ống thứ ba ống thứ tư bước sóng 270 nm đến 350 nm Nếu khơng thực điều tính độ hấp thụ hiệu chỉnh zero gây độ hấp thụ cao 272 nm 332 nm, cho dù đường hấp thụ dung dịch mẫu thử cho pic 302 nm Trong trường hợp này, cần kiểm tra trình thao tác Biểu thị kết Đọc lượng cacbon disulfua có mặt mẫu thử từ đường chuẩn Tính phần dư lượng có phần thực phẩm áp dụng mức dư lượng tối đa, w, biểu thị cacbon disulfua giải phóng, tính miligam kilogam theo cơng thức (2): w mc (2) mt Trong đó: mc khối lượng cacbon disulfua giải phóng (đọc từ đường chuẩn), tính microgam ( g); mt khối lượng phần mẫu thử (trước loại bỏ phần nào, ví dụ hạt cứng), tính gam (g) Nếu kết cho thấy dư lượng đạt đến vượt giới hạn tối đa cần kiểm tra thêm hai phần mẫu thử CHÚ THÍCH Giới hạn thông thường phép xác định phụ thuộc vào khối lượng phần mẫu thử sử dụng Vì xác định xác g cacbon disulfua khối lượng phần mẫu thử 200 g giới hạn phép xác định nằm vào khoảng 0,01 mg/kg 10 Phép thử khẳng định Cần tiến hành phân tích khẳng định phương pháp khác, đặc biệt trường hợp kết cho thấy vượt mức giới hạn tối đa Phương pháp qui định TCVN 8169-1:2009 (EN 12396-1:1998) cho phép xác định cacbon disulfua đo phổ sử dụng dung dịch đồng (II) axetat diethanolamin thuốc nhuộm màu Phương pháp qui định TCVN 8169-2:2009 (EN 12396-2:1998) cho phép xác định nhận biết cacbon disulfua từ thời gian lưu hệ thống sắc ký khí Các kết kiểm tra sắc ký khí-sắc ký khối phổ (GC-MS) Các kết khẳng định cách ghi lại so sánh phổ hấp thụ bước sóng 270 nm đến 350 nm thu từ phần mẫu thử phổ cacbon disulfua Phương pháp xác định etylen propylen bis-dithiocacbamat không phân hủy muối natri tương ứng chúng cách tách sắc ký gel đo màu bước sóng 285 nm mơ tả [5] 11 Độ chụm 11.1 Yêu cầu chung Các chi tiết phép thử liên phòng thử nghiệm độ chụm phương pháp nêu Phụ lục A Các giá trị thu từ phép thử liên phòng thử nghiệm theo ISO 5725 [6] khơng áp dụng cho dải nồng độ chất khác với giá trị nêu Phụ lục A 11.2 Độ lặp lại Chênh lệch tuyệt đối kết hai phép thử đơn lẻ thu sử dụng phương pháp vật liệu thử giống hệt phòng thử nghiệm, người thực hiện, sử dụng thiết bị, thực khoảng thời gian ngắn, không % trường hợp vượt giới hạn lặp lại r: Rau diếp: x = 0,260 mg/kg r = 0,068 mg/kg Nước cà rốt dành cho trẻ nhỏ: x = 0,010 mg/kg r = 0,002 mg/kg Táo chuối dành cho trẻ nhỏ: x = 0,020 mg/kg r = 0,006 mg/kg Rau bina dành cho trẻ nhỏ: x = 0,033 mg/kg r = 0,007 mg/kg 11.3 Độ tái lập Chênh lệch tuyệt đối kết hai phép thử đơn lẻ thu vật liệu thử giống hệt hai phòng thử nghiệm khác thực hiện, không 5% trường hợp vượt giới hạn tái lập R: Rau diếp: x = 0,260 mg/kg R = 0,102 mg/kg Nước cà rốt dành cho trẻ nhỏ: x = 0,010 mg/kg R = 0,006 mg/kg Táo chuối dành cho trẻ nhỏ: x = 0,020 mg/kg R = 0,020 mg/kg Rau bina dành cho trẻ nhỏ: x = 0,033 mg/kg R = 0,016 mg/kg 12 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải rõ: - Mọi thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử; - Viện dẫn tiêu chuẩn này; - Kết thử nghiệm thu đơn vị tính; - Ngày lấy mẫu phương pháp lấy mẫu sử dụng (nếu biết); - Ngày phòng thử nghiệm nhận mẫu; - Ngày thử nghiệm; - Mọi chi tiết đặc biệt quan sát thử nghiệm; - Mọi chi tiết thao tác khác với quy định tiêu chuẩn điều coi tùy ý cố mà ảnh hưởng đến kết PHỤ LỤC A (Tham khảo) SỐ LIỆU VỀ ĐỘ CHỤM Các kết thu từ phép thử liên phòng thử nghiệm phân tích thống kê theo ISO 5725:1986 [5] Phép thử Arbeitsgruppe “Pesticides”, Lebensmittelchemische Gesellschaft, cục “Gesellschaft Deutscher Chemiker”, Frankfurt, Đức thực [3], [7] Bảng A.1 Mẫu Năm thực phép thử liên phòng thử nghiệm Rau diếp Nước cà rốt dành cho trẻ nhỏ Táo chuối dành cho trẻ nhỏ Rau bina dành cho trẻ nhỏ 1994 1995 1995 1995 Số lượng mẫu 1 1 Số lượng phòng thử nghiệm tham gia 12 11 13 11 Số lượng phòng thử nghiệm lại sau trừ ngoại lệ 12 10 13 11 Số lượng phòng thử nghiệm ngoại lệ 0 Số lượng kết chấp nhận 57 50 63 53 0,26 0,010 0,020 0,033 0,024