Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 6461:2008 giới thiệu nội dung về phụ gia thực phẩm - Clorophyl. Tiêu chuẩn này áp dụng cho clorophyl được sử dụng làm chất tạo màu trong chế biến thực phẩm.
TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 6461:2008 Phụ gia thực phẩm - Clorophyl Food additive - Chlorophylls 1) Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn áp dụng cho clorophyl sử dụng làm chất tạo màu chế biến thực phẩm Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm cơng bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn không ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi JECFA - Combined compendium of food additive specircation, Volume Analytical methods, test procedures and laboratory solutions used by and referenced in the food additive specifications (JECFA - Tuyển tập yêu cầu kỹ thuật phụ gia thực phẩm, Tập Các phương pháp phân tích, qui trình thử nghiệm dung dịch phòng thử nghiệm sử dụng viện dẫn yêu cầu kỹ thuật phụ gia thực phầm) Mô tả 3.1 Clorophyl sản phẩm thu cách chiết dung môi từ cỏ, cỏ linh lăng, tầm ma nguyên liệu thực vật khác; q trình tách dung mơi sau, chất kết hợp với ma giê có mặt tự nhiên tách hồn tồn phần khỏi clorophyl để thu phaeophytin tương ứng; chất màu phaeophytin ma giê clorophyl; sản phẩm chiết từ phần dung môi tách ra, chứa chất màu khác carotenoid dầu, chất béo sáp có nguyên liệu ban đầu Chlorophylls có tên gọi khác là: magiê clorophyl, ma giê phaeophytin Cl xanh 3; C.l (1975) No 75810, INS No 140 Chỉ sử dụng dung môi sau để chiết: axeton, diclometan, metanol, etanol, propan-2-ol hexan 3.2 Tên hố học Các chất màu bao gồm: Phytyl (132R, 17S, 18S)-3-(8-etyl-132-metoxycabonyl-2,7,12,18-tetrametlyl-13’oxo-3-vinyl-131-132-17,18-tetrahydroxyclopenta[at]-prophylrin-17-yl) propionat (phaeophytin a) dạng phức magiê (clorophyl a) Phytyl (13 2R, 17S, 18S)-3(8-etyl-7-formyl-132-metoxycacbonyl-2, 12, 18-trimetyl-13’-oxo-3-vinyl-13 1-13217,18-0tetrahydro-xyclopenta [at]-prophylrin-17-yl) propionat (phaeophytin b) dạng phức magiê (clorophyl b) 3.3 Sô C.A.S: Phaeophytin a, phức magiê: 479-61-8; Paeophytin b, phức magiê: 519-62-0 3.4 Cơng thức hố học: - Phaeophytin a, phức magiê (clorophyl a): C 55H72MgN4O5; - Phaeophytin a: C55H74N4O5; - Phaeophytin b, phức magiê (clorophyl b): C 55H70MgN4O6 - Phaeophytin b: C55H72N4O6 3.5 Công thức cấu tạo Trong X CH3 dãy “a”; X CHO dãy “b” Loại Mg khỏi Clorophyl để thu phaeophytin tương ứng 3.6 Khối lượng phân tử - Phaeophytin a, phức magie (clorophyl a): 893.51; - Phaeophytin a: 871,22; - Phaeophytin b, phức magiê (clorophyl b): 907,49; - Phaeophytin b: 885,20 3.7 Tổng hàm lượng phaeophytin phức magiê phaeophytin: Không nhỏ 10 % 3.8 Trạng thái: Chất rắn dạng sáp có dải màu từ xanh liu đến xanh sẫm tuỳ thuộc vào hàm lượng ma giê kết hợp Đặc tính 4.1 Cách nhận biết 4.1.1 Tính tan (xem tập 4): Không tan nước, tan etanol, dietyl ete, cloankan, hydrocacbon dầu không bay 4.1.2 Sắc ký lớp mỏng Sử dụng dung dịch mẫu cloroform (tỉ lệ : 20) để lạo dải có chiều dài cm sắc ký lớp mỏng silic dioxit 60 Sau sấy, chuẩn bị sắc ký hỗn hợp 50 % hexan, 45 % cloroform % etanol (thông thường thuốc thử cloroform bổ sung % etanol để làm chất ổn định, % etanol hỗn hợp dung môi bổ sung với mục đích này), dung mơi lên tới 15 cm so với điểm ban đầu Để cho dung mơi bay hơi, sau kiểm tra mắt thường điểm phân tách nhận dạng hợp chất liên quan thông qua giá trị Rf màu chúng Giá trị R f gần màu điểm sau: - Phaeophytin a: 0,77, xám/nâu; - Phaeophytin b: 0,75, vàng/nâu: - Chlorophyl a: 0,50, xanh lơ/xanh cây; - Chlorophyl b: 0,63, vàng/xanh Ngồi ra, điểm quan sát thấy -caroten Rf 0,81 xantophyl Rf 0,47 0.23 4.2 Độ tinh khiết 4.2.1 Dung môi dư (xem tập 4) - Hàm lượng axeton, metanol, etanol, propan-2-ol, hexan: Không lớn 50 mg/kg, riêng lẻ kết hợp - Diclometan: Không lớn 10 mg/kg Xác định sắc ký khí theo phương pháp chưng cất lơi (Determination of residual solvents - Xác định dung môi du) phương pháp phân tích khoảng trống (Limit test for solvent residues - Phép thử giới hạn dung môi dư) 4.2.2 Asen (xem tập 4): Không lớn mg/kg (Phương pháp ll) 4.2.3 Chì (xem tập 4) Không lớn mg/kg Xác định phương pháp hấp phụ nguyên tử phù hợp với mức qui định Việc chọn cỡ mẫu phương pháp chuẩn bị mẫu theo ngun tắc phương pháp mơ tả lnstrumental methods (Phương pháp phân tích dụng cụ), xem tập Phương pháp thử Cân xác khoảng 100 mg mẫu hòa tan dietyl ete, định mức đến 100 ml Pha loãng ml dung dịch đến 25 ml dietyl ete Nồng độ mẫu cần tránh tạo độ hấp thụ bước sóng 660,4 nm nằm ngồi dải làm việc phép đo hấp thụ, ví dụ khơng vượt q 0,7 Đo độ hấp thụ dung dịch cuvet cm với mẫu trắng dietyl ete bước sóng 660,4 nm, 642,0 nm, 667,2 nm 654,4 nm (đây bước sóng tương ứng mà clorophyl a, clorophyl b, phaeophytin a, phaeophytin b hấp thụ cực đại dietyl ete) Ngoài ra, đo thêm bước sóng 649,8 nm 628.2 nm Bổ sung tinh thể axit oxalic vào dung dịch pha lỗng lại, sau hòa tan khuấy đều, đo lại độ hấp thụ bước sóng Chênh lệch độ hấp thụ bước sóng tương ứng, trước sau thêm axit oxalic A Tính nồng độ hợp chất theo micromol lít công thức sau đây: Clorophyl a = 17,7 x A 660.4 nm + 7,15 x A 642,0 nm ; Clorophyl b = 19,4 x A 642.0nm - 2,92 x A 660.4nm; Phaeophytin a : - 4,89 x A x A 654.4 nm - Clorophyl b 649.8 nm Phaeophytin b = - 71,0 x A 654.4nm - Clorophyl b + 0,0549 x A 628.2 nm + 18,7 x A 649.8nm + 2,51 x A 828.2nm - 13,5 x A 667.2 nm 667.2nm + 0,0575 + 84,3 x A Chuyển đổi giá trị micromol lit phần trăm công thức sau: Micromol x 0,9835 x 12,5 x 100 % clorophyl a = -khối lượng mẫu (mg) micromol x 0,9075 x 12,5 x 100 % clorophyl b = khối lượng mẫu (mg) micromol x 0,8712 x 12,5 x 100 % phephytin a = khối lượng mẫu (mg) micromol x 0,8852 x 12,5 x 100 % phaephytin b = khối lượng mẫu (mg) ... mẫu cloroform (tỉ lệ : 20) để lạo dải có chiều dài cm sắc ký lớp mỏng silic dioxit 60 Sau sấy, chuẩn bị sắc ký hỗn hợp 50 % hexan, 45 % cloroform % etanol (thông thường thuốc thử cloroform bổ... mg/kg Xác định phương pháp hấp phụ nguyên tử phù hợp với mức qui định Việc chọn cỡ mẫu phương pháp chuẩn bị mẫu theo nguyên tắc phương pháp mô tả lnstrumental methods (Phương pháp phân tích dụng