Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 5716:1993 do Ban kỹ thuật Thực phẩm phối hợp với Bộ môn Hoá sinh Viện Công nghệ sau thu hoạch thuộc Bộ Nông nghiệp và Công nghiệp thực phẩm biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn - Đo lường - Chất lượng đề nghị và được Bộ Khoa học - Công nghệ và Môi trường ban hành theo Quyết định số 212/QĐ ngày 12 tháng 5 năm 1993.
TIÊU CHUẨN VIỆT NAM TCVN 5716:1993 GẠO PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG AMYLOZA Rice Method of determination for amylose content TCVN 5716-1993 xây dựng sở ISO 6647-1987 TCVN 5716-1993 Ban kỹ thuật Thực phẩm phối hợp với Bộ mơn Hố sinh Viện Cơng nghệ sau thu hoạch thuộc Bộ Nông nghiệp Công nghiệp thực phẩm biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn - Đo lường - Chất lượng đề nghị Bộ Khoa học - Công nghệ Môi trường ban hành theo Quyết định số 212/QĐ ngày 12 tháng năm 1993 Định nghĩa 1.1 Amyloza thành phần polysaccarit tinh bột, cao phân tử có cấu trúc mạch thẳng 1.2 Amylopectin thành phần polysaccarit bột, cao phân tử có cấu trúc mạch nhánh Lấy mẫu Lấy mẫu theo TCVN 5451 - 1991 Nội dung phương pháp Nghiền nhỏ gạo thành bột mịn để phá vỡ hoàn toàn hạt tinh bột Sau loại mỡ khỏi bột, hoá hồ dung dịch natri hydroxyt Điều chỉnh pH dung dịch mẫu từ 4,5 < 4,8 hệ đệm axetat, thêm dung dịch iốt đo độ hấp thụ phức màu tạo thành bước sóng 620nm phổ kế Hàm lượng amyloza mẫu xác định dựa vào đồ thị chuẩn, đồ thị xây dựng sở sử dụng hỗn hợp amyloza amylopectin để loại trừ ảnh hưởng amylopectin đến màu phức amyloza-iốt dịch mẫu thử Hoá chất Tất thuốc thử sử dụng khơng có dẫn khác phải dùng loại tinh khiết phân tích (TK, PT), nước cất nước có độ tương đương 4.1 Metanol, dung dịch 85% 4.2 Etanol, dung dịch 95% 4.3 Natri hydroxyt, dung dịch mol/l 4.4 Natri hydroxyt, dung dịch 0,09 mol/l 4.5 Axít axetic, dung dịch mol/l 4.6 Dung dịch Iốt Cân 2,000g kali iodua - nồng độ I2 0,2% - (chính xác đến 5mg) cốc cân có nắp kín Thêm nước cất vừa đủ để tạo thành dung dịch bão hồ, thêm tiếp 0,2g iốt (cân xác đến 1mg) Khi lượng iốt tan hết, chuyển toàn sang bình định mức 100ml thêm nước cất đến vạch mức, lắc Dung dịch chuẩn bị sử dụng ngày bảo quản lọ nâu, tránh ánh sáng 4.7 Amyloza khoai tây không chứa amylopectin, dung dịch huyền phù chuẩn 1g/l 4.7.1 Từ amyloza khoai tây tiến hành loại mỡ dung dịch metanol 85% hay etanol 95% với thời gian 16 thiết bị chiết Soxhlet thiết bị chiết Goldfisch Việc loại mỡ tiến hành nhiệt độ phòng 24 (thường để qua đêm) Chú thích: Amyloza khoai tây phải tinh khiết kiểm tra phương pháp chuẩn độ hay đo cường độ điện Tuy nhiên có vài loại sản xuất để bán không tinh khiết, sử dụng loại cho kết có độ sai khác lớn so với hàm lượng amyloza mẫu gạo Amyloza tinh khiết phải liên kết từ 19% đến 20% khối lượng với iốt 4.7.2 Rải amyloza loại mỡ lên khay để ngày nhiệt độ phòng để loại cồn dư để độ ẩm đạt đến độ ẩm cân Tiến hành tương tự với mẫu amylopectin mẫu thử Như vậy, mẫu amyloza, amylopectin mẫu thử đặt điều kiện bên ngồi nên khơng phải hiệu chỉnh độ ẩm kết thu dạng chất khô gạo xát 4.7.3 Cân 100 ± 5mg amyloza loại mỡ cho vào bình định mức 100ml Cẩn thận thêm 1ml etanol95% để rửa trơi phần amyloza bám thành bình làm ướt mẫu Thêm từ từ 9,0 ml dung dịch natri hydroxyt mol/l để nhiệt độ phòng từ 15 đến 24 giờ, khơng cần lắc Đưa thể tích đến vạch mức nước cất lắc mạnh 1ml dung dịch huyền phù chuẩn chứa 1mg amyloza 4.8 Amylopectin, dung dịch huyền phù chuẩn 1g/l Chuẩn bị gạo nếp xát từ loại nếp có hàm lượng tinh bột biết chứa 99% amylopectin Ngâm gạo nếp xát vào nước nghiền thiết bị nghiền ướt thành khối mịn Loại bỏ protein cách ngâm chiết với dung dịch natri hydroxyt 3g/l (theo tỷ lệ thể tích dung dịch NaOH bột : 1) thời gian 24 giờ, khuấy dung dịch Rửa nước cất đến hết natri hydroxyt Sau tiến hành loại mỡ dung dịch metanol 85% hay etanol 95% với thời gian 16 thiết bị chiết Soxhlet nhiệt độ phòng 24 Đổ amylopectin loại protein mỡ lên khay, để ngày nhiệt độ phòng để loại alcol dư để độ ẩm đạt đến độ cân Việc chuẩn bị dung dịch chuẩn amylopectin tiến hành tương tự 4.7.3 ml dung dịch huyền phù chuẩn chứa 1mg amylopectin Máy móc - dụng cụ 5.1 Cân phân tích 5.2 Thiết bị nghiền ướt dùng cho phòng thí nghiệm có khả nghiền gạo xát ngâm nước thành khối mịn, sấy khơ lọt qua rây có kích thước lỗ 250 m 5.3 Thiết bị nghiền nhỏ có khả nghiền gạo xát sống thành bột qua rây có kích thước lỗ 250 m 5.4 Rây có kích thước lỗ sàng 250 m 5.5 Máy quang phổ có khả đo độ hấp thụ bước sóng 620 nm 5.6 Thiết bị chiết Soxhlet 5.7 Máy đo pH 5.8 Nồi cách thuỷ 5.9 Bình định mức 100ml 5.10 Pipet 1, 2, 5, 10 20 ml Tiến hành thử 6.1 Chuẩn bị mẫu thử Với thiết bị nghiền nhỏ (5.3) tiến hành nghiền 20 hạt gạo xát thành bột mịn qua rây có kích thước lỗ sàng 250 m Loại mỡ khỏi bột metanol hay etanol 95% với thời gian 16 thiết bị Soxhlet Sau đổ thành lớp mỏng đĩa hay mặt kính đồng hồ để yên ngày để loại bỏ alcol dư cân độ ẩm 6.2 Chuẩn bị dung dịch mẫu thử Cân 100 ± 5mg mẫu thử chuẩn bị (6.1) bình định mức 100ml Thêm cẩn thận 1ml etanol 95% để rửa trơi phần mẫu bám thành bình làm ướt mẫu Thêm từ từ 9,0 ml dung dịch natri hydroxyt mol/l cho mẫu không bị vón cục Để n nhiệt độ phòng từ 15 đến 24 Có thể đun cách thuỷ 100oC thời gian 10 phút sơi, sau làm nguội đến nhiệt độ phòng Đưa thể tích đến vạch mức nước cất lắc mạnh 6.3 Mẫu trắng Tiến hành mẫu trắng với lượng thuốc thử theo bước mẫu thử sử dụng 5,0 ml dung dịch natri hydroxyt 0,09 mol/l thay cho dung dịch mẫu thử 6.4 Xây dựng đồ thị chuẩn 6.4.1 Chuẩn bị thang dung dịch chuẩn Trộn thể tích dung dịch huyền phù chuẩn amyloza (4.7), amylopectin (4.8) natri hydroxyt 0,09 mol/l theo số hiệu ghi bảng Amyloza gạo xát (m/m) % chất khô Thành phần hỗn hợp (ml) Amyloza (4.7) Amylopectin (4.8) NaOH 0,03 mol/l 0 18 10 16 20 14 25 13 30 12 Các giá trị bảng tính sở hàm lượng bột trung bình tính theo phần trăm khối lượng chất khơ gạo xát Để phân tích hàng ngày dùng mẫu bột gạo xát loại mỡ có hàm lượng amyloza biết thay cho dung dịch huyền phù amyloza amylopectin 6.4.2 Hiện màu Dùng pipet lấy 5,0 ml dung dịch chuẩn cho vào bình định mức 100ml có sẵn 50 ml nước cất Thêm 1,0 ml axit axetic mol/l lắc Nếu cần kiểm tra lại pH dung dịch, giá trị pH cần đạt từ 4,5 - 4,8 từ điều chỉnh lượng axít axetic thêm vào cho thích hợp Sau thêm 2,0 ml dung dịch iốt (4.6) thêm nước đến vạch mức, lắc giữ yên 20 phút 6.4.3 Đo mật độ quang Đo mật độ quang dung dịch máy quang phổ bước sóng 620 nm với dung dịch đối chứng mẫu trắng (6.3) 6.4.4 Vẽ đồ thị chuẩn Vẽ đồ thị chuẩn dựa vào giá trị mật độ quang thu hàm lượng amyloza tương ứng theo phần trăm khối lượng gạo tính theo chất khô 6.5 Xác định mẫu thử 6.5.1 Hiện màu Dùng pipet lấy 5,0 ml dung dịch mẫu thử (6.2) cho vào bình định mức 100ml có sẵn 50 ml nước cất tiếp tục bước 6.4.2 việc thêm axit axetic 6.5.2 Đo mật độ quang Đo mật độ quang máy quang phổ bước sóng 620 nm với dung dịch đối chứng mẫu trắng (6.3) Tính tốn kết Hàm lượng amyloza biểu thị phần trăm khối lượng gạo xát theo chất khô xác định dựa vào mật độ quang đo mẫu thử (6.5.2) đồ thị chuẩn (6.4.4) Kết cuối trị số trung bình cộng hai phép xác định song song ... 0,09 mol/l thay cho dung dịch mẫu thử 6.4 Xây dựng đồ thị chuẩn 6.4.1 Chuẩn bị thang dung dịch chuẩn Trộn thể tích dung dịch huyền phù chuẩn amyloza (4.7), amylopectin (4.8) natri hydroxyt 0,09... độ phòng để loại alcol dư để độ ẩm đạt đến độ cân Việc chuẩn bị dung dịch chuẩn amylopectin tiến hành tương tự 4.7.3 ml dung dịch huyền phù chuẩn chứa 1mg amylopectin Máy móc - dụng cụ 5.1 Cân... tích đến vạch mức nước cất lắc mạnh 1ml dung dịch huyền phù chuẩn chứa 1mg amyloza 4.8 Amylopectin, dung dịch huyền phù chuẩn 1g/l Chuẩn bị gạo nếp xát từ loại nếp có hàm lượng tinh bột biết