Nội dung bài viết với mục tiêu: Ứng dụng kỹ thuật multiplex ligation‐dependent probe amplification (MLPA) chẩn đoán đột biến mất đoạn gen alpha globin. Nghiên cứu tiến hành trên 36 bệnh nhân được chẩn đoán alpha thalassemia dựa vào triệu chứng lâm sàng và cận lâm sàng, 30 người bình thường được dùng để chuẩn kỹ thuật và làm mẫu đối chứng.
Trang 1ĐỘT BIẾN MẤT ĐOẠN GEN ALPHA GLOBIN GÂY BỆNH ALPHA THALASSEMIA
Lê Trần Hoàng Phúc*, Đỗ Thị Thanh Thủy**, Hoàng Anh Vũ**, Nguyễn Thị Băng Sương**
TÓM TẮT
Mở đầu: Bệnh thiếu máu α thalassemia là một căn bệnh thiếu máu tan máu do di truyền khá phổ biến.
Nguyên nhân gây bệnh là do đột biến gen α globin, đột biến gen gây giảm hoặc mất tổng hợp chuỗi α globin.
Việc phát hiện sớm đột biến gen gây bệnh có ý nghĩa rất lớn đối với điều trị cũng như giúp chẩn đoán trước sinh
và tư vấn di truyền.
Mục tiêu: Ứng dụng kỹ thuật Multiplex Ligation‐dependent Probe Amplification (MLPA) chẩn đoán đột
biến mất đoạn gen alpha globin.
Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: 36 bệnh nhân được chẩn đoán alpha thalassemia dựa vào triệu
chứng lâm sàng và cận lâm sàng, 30 người bình thường được dùng để chuẩn kỹ thuật và làm mẫu đối chứng. DNA của tất cả các mẫu được phân tích bằng kỹ thuật MLPA và điện di mao quản trên máy Berman Coulter.
Kết quả: Trong số 36 mẫu bệnh nhân tham gia nghiên cứu có 24 mẫu bị đột biến mất đoạn (chiếm tỷ lệ
66,67%) và 12 mẫu không mang gen đột biến (chiếm 33,33%).
Kết luận: Nghiên cứu ứng dụng thành công kỹ thuật MLPA phát hiện đột biến mất đoạn gen alpha globin
gây bệnh alpha thalassemia, giúp ích cho việc chẩn đoán bệnh, phát hiện các đột biến trên vùng gen α globin, là
cơ sở vững chắc cho chẩn đoán trước sinh bệnh alpha thalassemia.
Từ khóa: bệnh alpha thalassemia, MLPA, đột biến mất đoạn, gen α globin.
ABSTRACT
APPLICATION OF MLPA (Multiplex Ligation‐dependent Probe Amplification) IN DIAGNOSTIC ALPHA‐
GLOBIN GENES DELETION MUTATION CAUSING ALPHA THALASSEMIA
Le Tran Hoang Phuc, Do Thi Thanh Thuy, Hoang Anh Vu, Nguyen Thi Bang Suong
* Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 17 ‐ Supplement of No 4 ‐ 2013: 29 ‐ 35
Introduction: Alpha thalassemia is a blood disorder that reduces the production of hemoglobin. Alpha thalassemia typically results from deletions involving the α globulin genes and decreased alpha‐globin
production.
Objectives: Multiplex ligation‐dependent probe amplification (MLPA) has been used to detect deletions and
mutations of the α‐globin gene for diagnosis of α‐thalassemia
Patients and Methods: Blood samples were collected from 36 thalassemia A patients. 30 samples of people
without thalassemia were used as control the experiments. MLPA assay were performed using SALSA MLPA
P140 HBA probe mix (MRC ‐ Holland) Kit.
Results: We report 24 (66.67%) deletion mutants and 12 (33.33%) cases without deletions on α‐globin
gene.
Conclusion: MLPA were applied successfully in identification of deletion mutants on α‐globin genes and in
* Khoa sinh‐ Đại học Sư phạm TP. Hồ Chí Minh
** Trung tâm Y sinh học Phân tử‐ Đại học Y Dược TP.HCM
Tác giả liên lạc: TS.BS. Nguyễn Thị Băng Sương, ĐT: 0914007038, Email: suongnguyenmd@gmail.com.
Trang 2Keywords: alpha thalassemia, MLPA, deletion, α‐globin genes.
ĐẶT VẤN ĐỀ
Bệnh thiếu máu alpha thalassemia là một
căn bệnh thiếu máu tan máu do di truyền khá
phổ biến, đây là rối loạn di truyền đơn gen
thường gặp nhất, bệnh di truyền theo quy luật
alen lặn trên nhiễm sắc thể thường. Thalassemia
được phát hiện ở 60 nước, tỷ lệ mắc bệnh cao
nhất ở vùng Địa Trung Hải, vùng Bắc và Tây
Phi, Trung Đông, Nam Á và Đông Nam Á. Mỗi
năm, trên thế giới có khoảng 100.000 em bé sinh
ra mắc bệnh. Các nhà khoa học tiên đoán
thalassemia sẽ trở thành bệnh lý toàn cầu(18).
Nguyên nhân gây bệnh là do đột biến gen α
globin, đột biến gen gây giảm hoặc mất tổng
hợp chuỗi α globin, trong khi đó quá trình tổng
hợp chuỗi beta globin vẫn diễn ra bình thường.
Ở người bình thường 2 loại chuỗi α globin và
beta globin cặp đôi với nhau theo tỷ lệ 1:1, như
vậy bệnh nhân alpha thalassemia sẽ có sự mất
cân bằng giữa các chuỗi globin. Loại chuỗi beta
globin trở nên dư thừa vì không được cặp đôi, sẽ
tích tụ trong tế bào hồng cầu và gây phá hủy
hồng cầu(17) Bệnh nhân cần phải được truyền
máu thường xuyên, có thể gây ra các biến chứng
khác như: lá lách to, sỏi mật, tăng nguy cơ
nhiễm trùng, vàng da,… Đặc biệt thai nhi mắc
Hemoglobin Bart (alpha thalassemia thể nặng)
thì phù nhau thai, gan lách to, thai chết lưu
trong tử cung hoặc chết sớm sau sinh. Vì vậy,
việc phát hiện đột biến gen gây bệnh có ý nghĩa
rất lớn đối với điều trị cũng như giúp chẩn đoán
trước sinh và tư vấn di truyền.
Gen α globin nằm trên cánh ngắn NST 16,
mỗi nhiễm sắc thể mang 2 gen α globin. Như
vậy chuỗi α globin được tổng hợp từ 4 gen trên
nhiễm sắc thể 16. Đột biến gây bệnh α
thalassemia chủ yếu là đột biến mất đoạn, đột
biến có thể ảnh hưởng đến 1, 2, 3 hoặc cả 4 gen α
globin và gây nên kiểu hình nặng dần tương
ứng với số gen α globin bị đột biến(15). Nếu đột
biến gây mất một phần hoặc toàn bộ một gen α
thì sẽ gây dạng α+ thalassemia. Nếu đột biến mất
cả 2 gen trên cùng allele thì sẽ gây dạng α0 thalassemia(3). Ở Việt Nam đột biến mất đoạn gây bệnh alpha thalassemia thường gặp là dạng
‐‐SEA (Đông Nam Á), dạng ‐α4.2 và dạng ‐α3.7. Phát hiện đột biến gen gây bệnh có ý nghĩa rất lớn đối với điều trị cũng như giúp chẩn đoán trước sinh và tư vấn di truyền. Các kỹ thuật sinh học phân tử thường được sử dụng để xác định đột biến ở bệnh nhân thalassemia là kỹ thuật PCR đơn mồi, PCR đa mồi,… Gần đây, kỹ thuật MLPA (Multiplex Ligation‐dependent Probe Amplification) ra đời và được áp dụng rộng rãi trong chẩn đoán mất đoạn và lặp đoạn gen nói chung hay bệnh alpha thalassemia nói riêng. Kỹ thuật MLPA có ưu điểm là dễ thực hiện, cho kết quả nhanh và có độ chính xác cao(1). Kỹ thuật này còn giúp chẩn đoán được kiểu gen dị hợp
tử. Vì vậy mà chúng tôi thực hiện đề tài này với
mục tiêu: Ứng dụng kỹ thuật MLPA giúp chẩn đoán đột biến mất đoạn gen alpha globin gây bệnh alpha thalassemia.
ĐỐI TƯỢNG ‐PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu
‐ Nhóm nghiên cứu: 36 bệnh nhân được chẩn đoán alpha thalassemia dựa vào triệu chứng lâm sàng và cận lâm sàng.
‐ Nhóm chứng: 30 người bình thường. Được dùng để chuẩn kỹ thuật và làm mẫu đối chứng để tiến hành kỹ thuật MLPA cùng với mẫu bệnh nhân.
Phương pháp nghiên cứu
Kỹ thuật tách chiết DNA từ mẫu máu ngoại vi
Máu tươi được chống đông bằng EDTA, được tách trong vòng 24 giờ. Quy trình tách chiết DNA từ 200μl máu ngoại vi được tiến hành theo QiAgen Kit. Đo nồng độ và độ tinh sạch của ADN, những mẫu có giá trị tỷ lệ về mật
độ quang đo ở bước sóng 260/280 đạt ≥ 1,8 mới được sử dụng để tiến hành phản ứng MLPA.
Phản ứng MLPA
Trang 3Sử dụng Kit SALSA MLPA P140 HBA
probemix (MRC ‐ Holland) chứa các probe lai
đặc hiệu với các vùng trên gen alpha globin,
ngoài ra còn có 9 đoạn nội chuẩn giúp kiểm
chuẩn phản ứng PCR. Quy trình phản ứng
MLPA như sau: Phản ứng lai: 40 ng genomic
ADN (hòa trong 2,5 μl) được biến tính và lai với
1,5 μl hỗn hợp probe cùng với 1,5 μl buffer
MLPA. Sau đó lai ở 60°C trong vòng 16 giờ (qua
đêm). Phản ứng nối: Cho enzym ligase vào và ủ
ở 54°C trong 15 phút. Sau đó tăng nhiệt độ lên
98°C trong 5 phút để phá hủy enzym ligase và
tiến hành thực hiện quy trình nhiệt của phản
ứng PCR để khuếch đại các probe. Phản ứng
PCR: Tăng nhiệt độ lên 60oC trước khi đi vào
chu trình nhiệt. Thành phần phản ứng PCR gồm
primer, polymerase, buffer, dNTP, nước. Chu kỳ
nhiệt: 90°C trong 20 giây, 65°C trong 30 giây,
72°C trong 60 giây, lặp lại 35 chu kỳ. Sau đó kéo
dài kết thúc ở 72oC trong 20 phút. Cuối cùng,
nhiệt độ được hạ xuống còn 4oC. Điện di mao
quản và phân tích kết quả: Tiến hành điện di mao quản trên máy Beckman Coulter. Sử dụng phần mềm GeneMarker v1.92 (Softgenetics, State College, PA) để phân tích kết quả và xác định đột biến mất đoạn gen alpha globin. Chiều cao đỉnh các probe phản ánh nồng độ của chúng (hay nồng độ đoạn gen tương ứng gắn với probe) trong sản phẩm PCR. Từ đó chiều cao probe của mẫu bệnh nhân được so sánh với mẫu đối chứng (người bình thường) để phát hiện đột biến mất đoạn gen α globin. Phân tích việc khảo sát các probe khuếch đại gen α globin: trường hợp bệnh nhân không bị đột biến mất đoạn gen
α globin thì tỷ lệ chiều cao đỉnh probe tương ứng của bệnh nhân/mẫu đối chứng xấp xỉ bằng
1. Nếu chiều cao đỉnh probe của bệnh nhân/mẫu đối chứng giảm còn khoảng 0,75 thì bệnh nhân
bị đột biến mất 1 gen α globin, nếu giảm còn khoảng 0,5 thì bệnh nhân bị đột biến mất 2 gen
α globin, nếu giảm còn 0,25 thì bệnh nhân bị đột biến mất 3 gen α globin.
KẾT QUẢ
Kết quả của bệnh nhân HBA10
Hình 1. Kết quả phân tích gen alpha thalassemia bệnh nhân HBA10. Màu nhạt (bên trái): mẫu đối chứng. Màu đậm (bên
phải): mẫu bệnh nhân HBA10.
Nhận xét: tỷ lệ chiều cao đỉnh probe của bệnh
nhân/mẫu đối chứng ở các probe có số thứ tự 20,
21 có giá trị gần bằng 1. Trong khi đó tỷ lệ các probe có số thứ tự 1, 2, 3, 5, 12, 14, 18, 24, 25 có
Trang 4số mong đợi về các dạng đột biến SALSA MLPA
promix P140‐B4 HBA đưa ra và chứng tỏ mẫu
HBA10 có đột biến gây bệnh thalassemia dạng ‐‐
SEA/αα.
Kết quả của bệnh nhân HBA30
Hình 2. Kết quả phân tích gen alpha thalassemia bệnh nhân HBA30. Màu nhạt (bên trái): mẫu đối chứng. Màu đậm (bên
phải): mẫu bệnh nhân HBA30.
Nhận xét: Tỷ lệ chiều cao đỉnh probe của
bệnh nhân/mẫu đối chứng ở các probe có số thứ
tự 11, 17, 18, 20, 21 có giá trị gần bằng 1. Trong
khi đó tỷ lệ probe có số thứ tự 12, 14 có giá trị
xấp xỉ 0,5 và tỷ lệ probe có số thứ tự 24 có giá trị
xấp xỉ 0,75 Các chỉ số này phù hợp với chỉ số mong đợi về các dạng đột biến SALSA MLPA promix P140‐B4 HBA đưa ra và chứng tỏ mẫu HBA30 có đột biến gây bệnh thalassemia dạng
dị hợp ‐α4.2/αα
Kết quả của bệnh nhân HBA34
Hình 3. Kết quả phân tích gen alpha thalassemia bệnh nhân HBA34. Màu nhạt (bên trái): mẫu đối chứng. Màu đậm (bên
phải): mẫu bệnh nhân HBA34.
Nhận xét: Tỷ lệ chiều cao đỉnh probe của
bệnh nhân/mẫu đối chứng ở các probe có số thứ
tự 20, 21 có giá trị gần bằng 1. Trong khi đó tỷ lệ các probe có số thứ tự 1, 2, 3, 5, 12, 14, 18, 24, 25
Trang 5chỉ số mong đợi về các dạng đột biến SALSA
MLPA promix P140‐B4 HBA đưa ra và chứng tỏ
mẫu HBA10 có đột biến gây bệnh thalassemia
dạng ‐‐ SEA/αα.
Tỷ lệ đột biến mất đoạn ở bệnh nhân alpha
thalassemia
Bảng 1: Tỷ lệ đột biến mất đoạn ở bệnh nhân alpha
thalassemia
Không đột biến mất đoạn 12 33.33
Bị đột biến mất đoạn 24 66.67
Bảng 2: Sự phân bố vị trí bị mất đoạn của gen alpha
thalassemia
Đột biến Số lượng bệnh
nhân
Tỷ lệ %
Tổng số 24 100
Nhận xét: Trong số 36 mẫu bệnh nhân tham
gia nghiên cứu có 24 mẫu bị đột biến mất đoạn
(chiếm tỷ lệ 66,67%) và 12 mẫu không mang gen
đột biến (chiếm 33,33%).
Trong số 24 mẫu bị đột biến mất đoạn có 13
mẫu mất đoạn SEA (chiếm 54,17%), 8 mẫu mất
đoạn – α3.7 (chiếm 33,33%) và 3 mẫu mất đoạn –
α4.2 (chiếm 12,50%).
BÀN LUẬN
Phát hiện sớm bệnh thalassemia có thể giúp
điều trị sớm, tránh các biến chứng của bệnh và
nguy cơ tử vong. Đột biến gây bệnh alpha
thalassemia thường gặp là đột biến mất đoạn
gen alpha globin nên các kĩ thuật sinh học phân
tử thường được sử dụng để xác định đột biến ở
bệnh nhân thalassemia là multiplex PCR,
HPLC…(2,9). Gần đây, kỹ thuật MLPA ra đời và
được áp dụng rộng rãi trong chẩn đoán mất
đoạn gen gây bệnh alpha thalassemia với nhiều
ưu điểm là dễ thực hiện, cho kết quả nhanh và
có độ chính xác cao(1).
Trong kết quả của kỹ thuật MLPA, mỗi một
đỉnh tín hiệu (peak) thể hiện sản phẩm của một
probe (khi một probe nào đó bắt cặp được với trình tự DNA đích, nối lại được thì mới được khuếch đại và xuất hiện tín hiệu)(16). Chiều cao của mỗi peak cho thấy sự liên quan với số lượng bản sao (copy) của trình tự DNA bổ sung với probe(12). Nếu bệnh nhân bị đột biến mất đoạn cả
4 gen α globin thì không có hiện tượng lai probe, không tạo thành đoạn dò hoàn chỉnh và probe
đó sẽ không được khuếch đại, do đó khi điện di mao quản sẽ không thấy xuất hiện đỉnh của probe. Tuy nhiên, đột biến này thường không gặp trong thực tế vì thai chết lưu trong tử cung. Nếu tỷ lệ chiều cao của probe mẫu bệnh nhân/mẫu chứng xấp xỉ là 0,75‐0,80 thì bệnh nhân mang đột biến mất đoạn tại probe đó ở 1 trong 4 gen α globin, nếu tỷ lệ này xấp xỉ bằng 0,35‐0,5 chứng tỏ bệnh nhân mất đoạn 2 gen α globin và mếu tỷ lệ là 0,25 nghĩa là bệnh nhân mất đoạn 3 trong 4 gen α globin.
Trong kết quả MLPA của bệnh nhân HBA30 thể hiện trong hình 2, tỉ lệ probe số 24 có giá trị gần bằng 0.75 mà không phải là 0.5. Lý giải điều này, theo kit SALSA MLPA promix P140‐B4 HBA mà MRC‐Holland hướng dẫn thì probe số
24 dò tìm trình tự exon 3 ở cả 2 gen HBA1, HBA2 nên tỉ lệ điển hình cho đột biến mất đoạn
‐α4.2/αα, ‐α3.7/αα là 0,75 Dựa vào bảng các dạng đột biến mất đoạn gen HBA thường gặp và tỉ lệ chiều cao đỉnh của các probe mà SALSA MLPA promix P140‐B4 HBA (MRC‐Holland) đưa ra, kết hợp với hình ảnh chiều cao các đỉnh (trong hình 1, 2, 3: màu nhạt ‐bên trái là mẫu đối chứng; màu đậm ‐bên phải là mẫu bệnh nhân), cũng như số liệu về tỉ lệ chiều cao các đỉnh trong hình ảnh MLPA của mỗi mẫu nghiên cứu, cho thấy việc xác định kết quả dạng đột biến alpha thalassemia mà bệnh nhân mắc phải hoàn toàn phù hợp với triệu chứng lâm sàng và cận lâm sàng mà họ biểu hiện. Qua kết quả thu được từ 36 mẫu nghiên cứu, chúng tôi thấy rằng đột biến mất đoạn gen alpha globin gây bệnh alpha thalassemia khá phổ biến ở Việt Nam với các dạng đột biến thường gặp là dạng ‐‐SEA (Đông Nam Á), dạng
Trang 6– α3.7 và dạng –α4.2. Trong đó, đột biến có tần
suất cao nhất la đột biến –SEA chiếm 54,17%;
tiếp theo là đột biến dạng – α3.7chiếm 33,33% và
cuối cùng là đột biến dạng –α4.2chiếm 12,5%.
Lý Thị Thanh Hà (2010) đã nghiên cứu ứng
dụng kỹ thuật Multilex PCR và C‐ARMS PCR
trong chẩn đoán trước và sau sinh bệnh alpha
thalassemia tại Bệnh Viện Nhi Trung Ương.
Trong kết quả nghiên cứu này có 58.8% đột biến
dạng –SEA(11). Theo Lin M (2013) thì ở vùng
Meizhou miền Nam Trung Quốc (7), đột biến
dạng ‐‐SEA là khoảng 46.45%, mất đoạn – α3.7
là 7%, mất đoạn –α4.2 là 5%. Tác giả Liu SC(8)
(2011) nghiên cứu về các bệnh liên quan đến
Hemoglobin tại Đài Loan, ông cho rằng dạng
đột biến thường gặp nhất của bệnh alpha
thalassemia là đột biến dạng SEA (Southeast
Asian) với tần số 87,79%, đột biến dạng – α3.7
chiếm 4,85%, đột biến dạng – α4.2 chiếm 1,41%.
Một nghiên cứu khác của tác giả Wu JY(20) (2004)
thì ở miền Nam Trung Quốc tần số đột biến gen
alpha globin như sau: dạng ‐‐SEA chiếm 68,9%,
– α3.7 chiếm 10,3%, đột biến dạng – α4.2 chiếm
5,52%. Theo Hung CC(4) (2007) thì ở Đông Nam
Á tỉ lệ đột biến dạng SEA chiếm tỉ lệ 45%, dạng –
α3.7 chiếm 35%, đột biến dạng – α4.2 chiếm
20%. Cùng với nhiều nghiên cứu khác như của
Pan HF (2007), Xiong F (2010)(14, 21) thì dạng đột
biến phổ biến nhất ở Đông Nam Á là –SEA theo
sau là đột biến dạng – α3.7 và –α4.2, các kết quả
của chúng tôi tương tự như nghiên cứu của các
tác giả khác về sự phổ biến của các dạng đột
biến thường gặp của alpha thalassemia.
Qua các số liệu đó, chúng tôi thấy rằng đột
biến dạng ‐‐SEA chiếm tỉ lệ rất cao ở khu vực
Đông Nam Á, tiếp theo là dạng – α3.7. Điều này
hoàn toàn phù hợp với kết quả nghiên cứu của
chúng tôi. Sự khác biệt về tần số của các dạng
đột biến này trong các nghiên cứu có thể là mặc
dù alpha thalassemia có mặt trên toàn thế giới,
nhưng sự phân bố rất khác nhau giữa các quần
thể người, giữa các dân tộc khác nhau, do sự đa
dạng di truyền giữa các cá nhân, tần số đột biến
có thể thay đổi từ sự gia tăng các cuộc hôn nhân
giữa nước này với nước khác (như giữa người Đài Loan và những người nhập cư gốc Đông Nam Á), sự khác nhau trong quá trình thu thập mẫu nghiên cứu (với nghiên cứu này, chúng tôi
đã thu mẫu từ những bệnh nhân đến khám tại bệnh viện dựa vào những triệu chứng lâm sàng, cận lâm sàng và tiến hành kiểm tra), quan trọng
là tần số đột biến thay đổi tùy thuộc vào dân số, thời gian nghiên cứu.
Trong số 36 mẫu bệnh nhân được chẩn đoán mắc bệnh α thalassemia, bằng kỹ thuật MLPA chúng tôi phát hiện được 24 bệnh nhân cò mang đột biến mất đoạn. 12 bệnh nhân còn lại không phát hiện được đột biến mất đoạn, những bệnh nhân này có thể mang đột biến điểm, và những đột biến này không được phát hiện bằng phương pháp MLPA mà phải sử dụng các phương pháp như giải trình tự gen, phương pháp RFLP, STR…
KẾT LUẬN
Nghiên cứu đã ứng dụng thành công kỹ thuật MLPA để chẩn đoán đột biến mất đoạn gen alpha globin gây bệnh alpha thalassemia. Việc xác định các kiểu đột biến gen alpha globin thường gặp ở Việt Nam giúp cho chúng ta có cái nhìn bao quát về tình hình bệnh alpha thalassemia tại nước ta, để có những dẫn chứng,
dữ liệu cho các nghiên cứu tiếp theo cũng như giúp ích cho việc dự báo, chẩn đoán, phát hiện sớm và điều trị được chính xác, hiệu quả hơn, là
cơ sở vững chắc cho chẩn đoán trước sinh bệnh alpha Thalassemia.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
B, Wang J and Liu J (2011).“Detection of α‐globin gene
chromatography and multiplex ligation‐dependent probe amplification”, Journal of clinical laboratory analysis, 25(6),
pp. 426‐431.
“Single‐tube multiplex ‐ PCR screen for common deletional determinants of α –thalassemia”, Blood, 95, pp. 360 ‐ 362.
intrauterine management, and outcomes”, Hematology, 35(1),
pp. 35 ‐ 41
assay of alpha (3.7) and alpha (4.2) deletions causing alpha
Trang 7thalassemia by denaturing high‐performance liquid
chromatography”, Clinical Biochemistry, 40 (11), pp. 817‐821
“Denaturing HPLC coupled with multiplex PCR for rapid
detection of large deletions in Duchenne muscular dystrophy
carriers”, Clinical Biochemistry, 51(7), pp. 1252‐6.
screening in the DMD gene using MLPA”, European Journal
of Human Genetics, 13, pp. 1231–1234
epidemiological characteristics and health effects on Hakka
people in the Meizhou region, Southern China”, PLoS One,
8(2), pp. 5 – 7.
lesion frequency of hemoglobin gene disorders in Taiwan”,
Hemoglobin, 35 (3), pp. 228‐236.
JB (2000), “Rapid detection of alpha‐thalassaemia deletions
and alpha‐globin gene triplication by multiplex polymerase
chain”. British journal of haematology, 108(2), pp. 295 ‐ 299.
10 Loryn NS and Graham RT (2004), “MLPA and MAPH: New
Techniques for Detection of Gene Deletions”, Human
mutation, 23, pp. 413‐419
11 Lý Thị Thanh Hà, Ngô Diễm Ngọc, Nguyễn Thị Phương Mai,
Nguyễn Thị Tân Sinh, Dương Bá Trực, Bùi Văn Viên, Nguyễn
Thanh Liêm (2010). “Ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử
trong chẩn đoán trước và sau sinh bệnh alpha thalassemia tại
Bệnh viện nhi Trung ương”. Tạp chí Nhi khoa, tập 3 ‐ số 3&4,
tr. 337 ‐ 342.
12 Marzese DM, Mampel A et al. (2008), “Detection of deletions
and duplications in the Duchenne muscular dystrophy gene
by the molecular method MLPA in the first Argentine
affected families”, Genet. Mol. Res., 7 (1), pp. 223‐233
13 Neishabury M, Azarkeivan A, Oberkanins C, Esteghamat F,
Amirizadeh N and Najmabadi H. (2008), “Molecular
mechanisms underlying thalassemia intermedia in Iran”,
Genetic Testing, 12(4), pp. 549 ‐ 556.
14 Pan HF, Long GF, Li Q, Feng YN, Lei ZY et al. (2007),
“Current status of thalassemia in minority populations in Guangxi, China”, Clin Genet, 71, pp.419–426.
15 Sankaran VG, Nathan DG (2010), “Thalassemia: an overview
of 50 years of clinical research”. Hematology/Oncology Clinics of North America Journal, 24(6), pp. 1005 ‐ 1020.
16 Schouten JP, Mc Elgunn CJ et al. (2002), Relative quantification of 40 nucleic acid sequences by multiplex ligation‐dependent probe amplification”, Nucleic acids Research, 30 (12), pp. 2‐11.
17 Suemasu CN, Kimura EM, Oliveira DM, Bezerra MA, Araújo
AS, Costa FF and Sonati MF (2011), “Characterization of alpha thalassemic genotypes by multiplex ligation‐dependent probe amplification in the Brazilian population”, Brazilian journal of medical and biological research, 44(1), pp. 16‐22.
18 Tạ Thành Văn (2011), Bệnh học phân tử, Nxb Y Học, tr. 67 ‐
80.
19 Wang X, Wang Z, Yan M, Huang S et al. (2008), “Similarity of DMD gene deletion and duplication in the Chinese patients compared to global populations”, Behavioral and Brain Functions, 4 (20), pp. 1‐9.
20 Wu JY, Liao C, Li J, Huang YN (2004), “Multiplex PCR for detecting genotypes of deletional alpha‐thalassemia”, Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi (Journal of experimental hematology), 12(4), pp. 472‐474.
21 Xiong F, Sun M, Zhang X, Cai R, Zhou Y et al. (2010),
“Molecular epidemiological survey of haemoglobinopathies
in the Guangxi Zhuang Autonomous Region of southern China”, Clin Genet, 78, pp.139–148.
Ngày nhận bài 29/08/2013.
Ngày phản biện nhận xét bài báo 04/09/2013. Ngày bài báo được đăng: 18/10/2013