Đang tải... (xem toàn văn)
Bài viết Xây dựng tiêu chuẩn kỹ thuật kiểm nghiệm mỹ phẩm chứa thành phần làm trắng da - acid kojic với mục tiêu nghiên cứu nhằm định tính và định lượng kojic dipalmitat bằng phương pháp HPLC trong nguyên liệu kojic dipalmitat và trong các mỹ phẩm.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN KỸ THUẬT KIỂM NGHIỆM MỸ PHẨM CHỨA THÀNH PHẦN LÀM TRẮNG DA – ACID KOJIC Nguyễn Thị Phương Thùy*, Vĩnh Định* TÓM TẮT Mục tiêu: Định tính định lượng kojic dipalmitat phương pháp HPLC nguyên liệu kojic dipalmitat mỹ phẩm Phương pháp: Sắc ký (SK lớp mỏng SK lỏng hiệu cao) Kết quả: định tính SKLM với hệ dung môi benzen – ethylacetate (9:1) cho kết tách Kojic dipalmitat khỏi chất khác có mỹ phẩm Định lượng SK lỏng hiệu cao (SKLHNC) với cột RP-C8, 250 x 4,6 mm (5 μm), pha động: MeOH – THF (85:15), thể tích bơm mẫu 10 μl, phát PDA 250 nm, tốc độ dòng: ml/phút Qui trình định lượng thẩm định với yếu tố như: tính thích hợp hệ thống, tính đặc hiệu, độ xác (RSD = 0,9%), độ (đạt tỉ lệ phục hồi lý thuyết 97 – 103%) Tiêu chuẩn kỹ thuật kiểm nghiệm cho mỹ phẩm chứa kojic dipalmitat dự thảo để ứng dụng Kết luận: Dự thảo tiêu chuẩn kỹ thuật kiểm nghiệm cho hai mỹ phẩm chứa kojic dipalmitat áp dụng để đăng ký sản phẩm Từ khóa: acid kojic, kojic dipalmitat ABSTRACTS DEVELOPMENT IN-HOUSE SPECIFICATIONS FOR SKIN-WHITENING COSMETIC PRODUCTS CONTAINING KOJIC ACID Nguyen Thi Phuong Thuy, Vinh Dinh * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 15 - Supplement of No - 2011: 463 - 468 Objectives: To qualify and quantity kojic dipalmitate in materials and in preparatives by HPLC Methods: Development and validation of HPLC are used Results: In qualification with solvent system benzen – ethylacetate (9:1) causes good resolution for separation of kojic dipalmitate from the other compounds in cosmetics In quantitaion by HPLC, the following condition has been apllied: column RP-C8, 250 x 4.6 mm (5 μm), mobile phase MeOH – THF (85:15), injection volume 10 μl, PDA at 250 nm, flow rate ml/min This procedure has been validated with the following factors: the system suitability, specificity, precision (RSD = 0.9%), accuracy (theory recovery ratio 97 – 103%) The specifications of cosmetics contained kojic dipalmitate has been applied Conclusions: the specifications of two cosmetics contained kojic dipalmitate has been applied to register the products Keywords: kojic acid, kojic dipalmitate ĐẶT VẤN ĐỀ Mỹ phẩm trước hết phải an tồn cho người sử dụng Chính vậy, trước lưu hành thị trường, mỹ phẩm phải xét duyệt tiêu chuẩn nghiêm ngặt(4) Bản tiêu chuẩn mỹ phẩm theo tiêu chuẩn Việt Nam hay tiêu chuẩn sở mà nhà sản xuất quy định sở để Cục Quản Lý Dược dựa vào xét duyệt mỹ phẩm có đủ tiêu chuẩn để lưu hành thị *Khoa Dược, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: PGS TS Vĩnh Định Chuyên Đề Dược Khoa ĐT: 0903639586; Email: npvdinh@yahoo.com 463 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 trường hay khơng Vì vậy, việc xây dựng tiêu chuẩn cho sản phẩm cần thiết Trong tiêu chuẩn mỹ phẩm làm trắng da, tiêu chuẩn định lượng hàm lượng thành phần có tác dụng mỹ phẩm làm trắng da cần thiết nhằm tránh mỹ phẩm chất lượng tạo tin tưởng cho người sử dụng Trong hợp chất có tác dụng làm trắng da, kojic dipalmitate hợp chất ý gần Với ưu điểm độ ổn định cao với nhiệt độ, pH, oxy hóa, bền màu theo thời gian có tác dụng tốt việc làm trắng da, hai chất ngày quan tâm sử dụng ngày phổ biến mỹ phẩm làm trắng da(1) Đề tài thực nhằm nâng cao chất lượng mỹ phẩm chứa chất làm trắng da kojic dipalmitat ĐỐI TƯỢNG – PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU * Mỹ phẩm làm trắng da chữa nám Xuân Thịnh (sản xuất thử): - Mỹ phẩm A: mỹ phẩm làm trắng da Xuân Thịnh, dạng hỗn dịch Mỹ phẩm A có chứa kojic dipalmitate 1% (số lơ XT1-010510) KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Định lượng kojic dipalmitat mỹ phẩm phương pháp SKLHNC Dung dịch kojic dipalmitate chuẩn Cân xác khoảng 0,01 g kojic dipalmitate chuẩn, hòa tan điền đầy bình định mức 50 ml THF Hút xác 10 ml dung dịch cho vào bình định mức 50 ml Thêm pha động đến vạch, lắc Lọc qua màng lọc 0,45 μm Dung dịch thu chứa 40 μg/ml kojic dipalmitate(3) Dung dịch thử Cân xác khoảng g mỹ phẩm A, hòa tan điền đầy bình định mức 50 ml THF Lọc dung dịch trên, bỏ 10 ml dịch lọc đầu Hút xác 10 ml dung dịch cho vào bình định mức 50 ml Thêm pha động đến vạch, lắc Lọc qua màng lọc 0,45 μm Điều kiện sắc ký Hệ thống HPLC Alliance Waters 2695; Đầu dò PDA Waters 2996; Cột C8, 250 x 4,6 mm; μm; Pha động: MeOH – THF (85:15); Thể tích bơm mẫu: 10 μl; Bước sóng phát hiện: 250 nm; Tốc độ dòng: ml/phút; Nhiệt độ cột: nhiệt độ phòng Tính hàm lượng kojic dipalmitat mỹ phẩm theo công thức: - Mỹ phẩm B: mỹ phẩm chứa nám Xuân Thịnh, dạng nhũ tương Mỹ phẩm B có chứa kojic dipalmitate 1% acid azelaic 0.2% (số lô XT2-010710) * Kojic dipalmitate nhà sản xuất Green Leaf, Thái Lan, hàm lượng 99,23%, độ ẩm 0.11% (không ghi số lô) * Đối tượng nghiên cứu: Mỹ phẩm làm trắng da Erin nhà sản xuất Phương Nghĩa Mỹ phẩm làm trắng da X-way Trung Quốc * Tiến hành xây dựng tiêu theo qui định Phụ lục thuốc mỡ - kem DĐVN IV 464 P (%): lượng kojic dipalmitate 100 g mỹ phẩm; SC:: diện tích đỉnh mẫu chuẩn; ST: diện tích đỉnh mẫu thử; mC: lượng cân mẫu chuẩn; mT: lượng cân mẫu thử; AC: hàm lượng chất chuẩn, Ac = 99,23% Tính thích hợp hệ thống Bảng Khảo sát tính thích hợp hệ thống mẫu chuẩn (6 lần tiêm mẫu) TB SD RSD% tR 5.67 0.01 S 423052.084 1495.185 0.15 0.353 k’ RS T N 2.24 1.73 1.14 11673 0.01 0.004 0.01 116 0.35 0.24 0.83 Chuyên Đề Dược Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học Tính đặc hiệu Hình Sắc ký đồ phổ UV mẫu mỹ phẩm A mẫu A thêm chuẩn Độ xác Bảng Kết độ lặp lại hàm lượng kojic dipalmitate mỹ phẩm A Độ Bảng Kết độ hàm lượng kojic dipalmitat mỹ phẩm A Diện tích Hàm lượng KDP Xử lý kết đỉnh (%) 402760.17 0.94 Số lần thực nghiệm 397210.62 0.93 n=6 396809.04 0.93 n = 6; P = 0,95 397938.98 0.93 Ỉ t = 2,57 396458.50 0.93 e = ± (2,57.0,01) / 396646.18 0.93 e = ± 0,01% TB 397970.58 0.93 Khoảng tin cậy: SD 2404.51 0.01 μ = 0,93% ± 0,01% RSD% 0.60 0.59 Nồng Lượng KDP Lượng KDP độ chuẩn thêm chuẩn tìm (mcg/ml vào (mg) thấy (mg) ) 3,9692 4,098595 32 3,9692 3,944416 3,9692 4,073824 4,9615 4,763454 40 4,9615 5,193256 4,9615 5,015469 5,9538 5,937108 48 5,9538 6,005102 5,9538 5,820562 n Chuyên Đề Dược Khoa Tỷ lệ Tỷ lệ phục phục hồi trung hồi (%) bình (%) 103.26 99.38 102.64 96.01 104.67 101.09 99.72 100.86 97.76 101.76 100.59 99.45 465 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học Khoảng tuyến tính Bảng Tương quan nồng độ diện tích đỉnh kojic dipalmitat Nồng độ (μg/ml) 100 90 80 60 40 30 20 16 10 Diện tích đỉnh 1025118.26 936565.12 817075.99 617064.43 420106.12 300916.22 211341.31 168947.45 110759.25 tách lớp điều kiện thường, không chảy lỏng nhiệt độ 37 0C phải bắt dính da bơi Kem có màu cam đồng có mùi thơm dễ chịu, đặc trưng, khơng có mùi lạ Độ ổn định 40 ± 0C 24 Thử với hộp kem Khơng có hộp kem hộp tách lớp, biến màu hay có mùi lạ Độ đồng khối lượng ± 15% so với khối lượng nhãn Độ đồng Trên đơn vị đóng gói, đơn vị không thấy tiểu phân Không có phần tử có φ > 75 μm Giới hạn acid – kiềm Dung dịch kem 1% có pH khoảng ± Giới hạn kim loại nặng Hàm lượng Pb ≤ ppm (2 mg/kg) Định tính kojic dipalmitat Hình Đồ thị biểu diễn tương quan tuyến tính kojic dipalmitat Phải có phản ứng đặc trưng kojic dipalmitat Quy trình định lượng kojic dipalmitat mỹ phẩm A phương pháp SKLHNC đạt yêu cầu tính đặc hiệu, độ đúng, độ xác quy trình kiểm nghiệm Định lượng Kết luận: Dự thảo tiêu chuẩn kỹ thuật kiểm nghiệm cho mỹ phẩm chứa kojic dipalmitat áp dụng để đăng ký sản phẩm sau Yêu cầu kỹ thuật Công thức pha chế cho hộp 10 g kem Kojic dipalmitat: 100 mg Tá dược: vừa đủ 10 g Nguyên, phụ liệu Kojic dipalmitat: đạt tiêu chuẩn dược dụng Tá dược: đạt tiêu chuẩn dược dụng Chất lượng thành phẩm Cảm quan Dạng kem mịn, đồng nhất, khơng có tạp chất lạ, không biến màu, không cứng lại hay 466 Hàm lượng kojic dipalmitat phải nằm khoảng 90 – 110% hàm lượng ghi nhãn Phương pháp thử Hình thức Trải g chế phẩm lên mặt kính đồng hồ Cần tiến hành nơi có đủ ánh sáng, tránh ánh sáng trực tiếp, khơng có màu sắc khác gần khơng có mùi lạ Quan sát mắt thường Kem phải đạt yêu cầu nêu Độ ổn định 40 ± 0C 24 Đặt đứng hộp kem nguyên hộp giấy tủ sấy 40 ± 0C 24 Sau 24 giờ, lấy hộp kem ra, quan sát mắt thường, phải đạt yêu cầu nêu Độ đồng khối lượng Thử theo DĐVN IV (phụ lục 11.3) Chuyên Đề Dược Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Độ đồng Lấy 0,02 – 0,03 g chế phẩm để lam, dùng lam khác ép mạnh tạo hình tròn đường kính khoảng cm Quan sát mắt thường Trên đơn vị đóng gói, đơn vị khơng thấy tiểu phân Nếu có tiểu phân phải làm lần đơn vị đóng gói khác Khơng có > tiêu có tiểu phân nhìn thấy Sau đó, soi lam kính hiển vi chun dụng có trắc vi thị kính Khơng có phần tử có φ > 75 μm Giới hạn acid – kiềm Cân 0,5 g chế phẩm cho vào bercher + 50ml H2O đun sơi ấm khoảng 500C Để nguội đến lạnh cho lớp dầu mỡ đông đặc, lọc loại bỏ lớp dầu mỡ, lấy phần nước Lấy dịch H2O thử pH sơ với giấy quỳ Chuẩn điện cực với dung dịch đệm mà pH thử sơ nằm khoảng Lấy dịch nước đo pH Giới hạn kim loại nặng Cân xác khoảng 10 g chế phẩm cho vào chén nung, thêm ml H2SO4 đậm đặc, đun đến cạn bếp điện Đốt cẩn thận bếp điện nhiệt độ thấp đến mẫu thử hóa than hồn tồn Để nguội, thêm ml HNO3 đậm đặc giọt H2SO4 đậm đặc, tiếp tục đốt tới khơng khói trắng bốc Nung 700 0C tới mẫu hoàn toàn bị đốt cháy thành tro (khoảng giờ) Để nguội, lấy chén nung ra, khuấy kỹ cắn lần bếp cách thủy, lần với ml dung dịch acid hydrocloric N (TT) 15 phút lần cuối với ml nước cất Gạn dung dịch vào cốc có mỏ, bốc bếp cách thủy đến khoảng ml Thêm giọt dung dịch phenolphtalein (CT), cho giọt amoniac đậm đặc (TT) đến có màu hồng Làm nguội, thêm acid acetic băng (TT) đến màu dung dịch, thêm 0.5 ml Lọc cần pha loãng dung dịch với nước cất vừa đủ 20 ml, dùng dung dịch tiến hành thử theo phương pháp 1, PL 9.4.8, DĐVN IV Chuyên Đề Dược Khoa Nghiên cứu Y học Định tính kojic dipalmitat Dung dịch chuẩn: Cân xác khoảng 0,01 g kojic dipalmitate chuẩn, hòa tan điền đầy bình định mức 20 ml THF Dung dịch thử:cân xác khoảng g mỹ phẩm, hòa tan điền đầy bình định mức 20 ml THF Lượng chấm: khoảng μl Dung môi khai triển: CHCl3 – CH3OH – CH3COOH (99:1:1 giọt) Phát hiện: soi UV 254 nm Trên sắc ký đồ, mẫu thử phải có vết có màu sắc, hình dạng Rf với mẫu chuẩn Định lượng Trộn hộp kem cối chày Lấy hỗn hợp để chuẩn bị dung dịch thử Chuẩn bị mẫu Dung dịch kojic dipalmitate chuẩn: cân xác khoảng 0,01 g kojic dipalmitate chuẩn, hòa tan điền đầy bình định mức 50 ml THF Hút xác 10 ml dung dịch cho vào bình định mức 50 ml Thêm pha động đến vạch, lắc Lọc qua màng lọc 0,45 μm Dung dịch thu chứa 40 μg/ml kojic dipalmitate ml Dung dịch thử: Cân xác khoảng g mỹ phẩm A, hòa tan điền đầy bình định mức 50 ml THF Lọc dung dịch trên, bỏ 10 ml dịch lọc đầu Hút xác 10 ml dung dịch cho vào bình định mức 50 ml Thêm pha động đến vạch, lắc Lọc qua màng lọc 0,45 μm Định lượng kojic dipalmitat phương pháp HPLC: cột C8, 250 x 4,6 mm; μm; pha động: MeOH – THF (85:15); thể tích bơm mẫu: 10 μl; bước sóng phát hiện: 250 nm; tốc độ dòng: ml/phút Tính hàm lượng kojic dipalmitat mỹ phẩm theo công thức: 467 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 P (%): lượng kojic dipalmitate 100 g mỹ phẩm; SC:: diện tích đỉnh mẫu chuẩn; ST: diện tích đỉnh mẫu thử; mC: lượng cân mẫu chuẩn; mT: lượng cân mẫu thử; AC: hàm lượng chất chuẩn Đóng gói – Ghi nhãn – Bảo quản Đóng gói: hộp nhựa chứa kem, bao bì cấp hộp giấy Nhãn: rõ ràng, qui cách TÀI LIỆU THAM KHẢO Beélik A and Purves CB (1955), “Some new reactions and derivatives of kojic acid”, Canadian Journal of Chemistry, volume 33, 1361-1373 Bộ Y Tế (2009), Dược Điển Việt Nam IV, Nhà xuất Y Học, Hà Nội, PL1.12, PL 5, PL 9.4, PL 11.3 Công ty RUEI GUANG RD, Bản tiêu chuẩn nguyên liệu kojic dipalmitat, Đài Bắc, Đài Loan Hiệp định Hệ Thống Hòa Hợp ASEAN Quản lý mỹ phẩm (Agreement on ASEAN Harmonnized Cosmetic Regulatory Scheme) Bảo quản: Nơi khô mát 468 Chuyên Đề Dược Khoa ... việc xây dựng tiêu chuẩn cho sản phẩm cần thiết Trong tiêu chuẩn mỹ phẩm làm trắng da, tiêu chuẩn định lượng hàm lượng thành phần có tác dụng mỹ phẩm làm trắng da cần thiết nhằm tránh mỹ phẩm. .. ngày phổ biến mỹ phẩm làm trắng da( 1) Đề tài thực nhằm nâng cao chất lượng mỹ phẩm chứa chất làm trắng da kojic dipalmitat ĐỐI TƯỢNG – PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU * Mỹ phẩm làm trắng da chữa nám Xuân... xuất thử): - Mỹ phẩm A: mỹ phẩm làm trắng da Xuân Thịnh, dạng hỗn dịch Mỹ phẩm A có chứa kojic dipalmitate 1% (số lô XT 1-0 10510) KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Định lượng kojic dipalmitat mỹ phẩm phương