Nghiên cứu được thực hiện nhằm xác định độc tính bán trường diễn của cao xoa Bách xà đường bôi ngoài da trên thỏ. Thỏ được bôi da cao xoa Bách xà với liều 0,75g/kg/lần, 2 lần/ngày và 1,5 g/kg/lần, 2 lần/ ngày. Kết quả sau 4 tuần nghiên cứu, cao xoa Bách xà không ảnh hưởng đến thể trạng, chức năng tạo máu của thỏ; không làm thay đổi kết quả đánh giá chức năng gan, thận; không gây tổn thương về hình thái khi quan sát đại thể và vi thể các cơ quan gan, thận và cấu trúc vùng da được bôi thuốc của thỏ.
TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN CỦA CAO XOA BÁCH XÀ TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM Đinh Thị Lam1, Nguyễn Trần Thị Giáng Hương2, Đỗ Thị Phương2, Phạm Thị Vân Anh2, Mai Phương Thanh2 Bệnh viện Đống Đa; 2Trường Đại học Y Hà Nội Nghiên cứu thực nhằm xác định độc tính bán trường diễn cao xoa Bách xà đường bôi ngồi da thỏ Thỏ bơi da cao xoa Bách xà với liều 0,75g/kg/lần, lần/ngày 1,5 g/kg/lần, lần/ ngày Kết sau tuần nghiên cứu, cao xoa Bách xà không ảnh hưởng đến thể trạng, chức tạo máu thỏ; không làm thay đổi kết đánh giá chức gan, thận; không gây tổn thương hình thái quan sát đại thể vi thể quan gan, thận cấu trúc vùng da bơi thuốc thỏ Từ khóa: Bách xà, độc tính, động vật thực nghiệm I ĐẶT VẤN ĐỀ Viêm khớp dạng thấp bệnh tự miễn dịch âm với Bí, tức bế tắc lại khơng thơng Tý vừa đặc trưng q trình viêm mạn tính dùng để diễn tả biểu bệnh khớp Bệnh diễn biến mạn tính suốt đời với đợt cấp tính [1; 2] Bệnh để lại hậu tình trạng đau, tê, mỏi, nặng, sưng, nhức, nặng nề với 90% bệnh nhân tiến triển nặng chức vận động vòng 20 năm để diễn tả tình trạng bệnh sinh bế tắc [3] Mục đích điều trị nhằm kiểm sốt q trình miễn dịch q trình viêm khớp, phòng ngừa rắn hổ mang dược liệu quý, kinh phá hủy khớp, bảo tồn chức khớp, giảm chứng đau nhức xương có hiệu tốt [6] Đã thiểu tối đa triệu chứng Các thuốc steroid hay non – steroid không đẩy lui bệnh hồn có nghiên cứu sơ chứng minh tác dụng toàn, tổn thương khớp tiếp tục phát triển, gây tàn phế nhiều tác dụng không mong thực nghiệm lâm sàng [7; 8; 9] muốn [2; 4] Các thuốc chống thấp khớp làm với số tinh dầu camphor, bạc hà, quế thay đổi tình trạng bệnh (Disease Modifying Anti-Rheumatic Drugs: DMARDs), thuốc điều methyl salicylat dùng chỗ buốt da thịt, khớp xương, vừa dùng không thông kinh lạc, khí huyết [5] Nọc nghiệm dân gian sử dụng điều trị chống viêm, giảm đau nọc rắn hổ mang Cao xoa Bách Xà phối hợp nọc rắn hổ mang Để xác định tính an tồn cao xoa Bách trị sinh học (Biological Therapy) có hiệu cao, tác dụng nhanh, nhiên giá thành cao, xà, nghiên cứu tiến hành nhằm: xác nhiều tác dụng không mong muốn nghiêm trọng [4] Theo y học cổ truyền, viêm khớp Bách xà đường bơi ngồi da thỏ dạng thấp thuộc phạm vi chứng Tý, Tý đồng Địa liên hệ: Mai Phương Thanh, Bộ môn Dược lý, Trường Đại học Y Hà Nội Email: mpt.n.pharma@gmail.com Ngày nhận: 05/11/2015 Ngày chấp thuận: 26/02/2016 32 định độc tính bán trường diễn cao xoa II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP Đối tượng Cao xoa Bách xà: Công ty Nam Dược sản xuất đạt tiêu chuẩn sở tiêu chuẩn nọc rắn TCNCYH 99 (1) - 2016 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Thành phần: Methyl salicylat, camphor, Thỏ bôi tá dược cao xoa Bách tinh dầu bạc hà, menthol, tinh dầu quế, nọc rắn hổ mang khô 1ml cao Bách xà tương ứng xà liên tục tuần Đánh giá trước bôi thuốc (T0), sau tuần (T2), sau tuần (T4): 1gram tình trạng chung, thể trọng, chức tạo máu, mức độ hủy hoại tế bào gan, chức Hóa chất, dụng cụ phục vụ nghiên cứu Gạc, gạc băng, kính lúp, nước cất hóa chất làm giải phẫu bệnh Kit định lượng: ALT, AST, bilirubin toàn phần, albumin, cholesterol toàn phần, creatinin máy Screen master hãng Hospitex Diagnostics (Italy) Dung dịch xét nghiệm máu ABX Minidil LMG hãng ABX - Diagnostics, định lượng máy Vet abcTM Animal Blood Counter Động vật thực nghiệm Thỏ chủng Newzealand White, lông trắng, trọng lượng 1,8 - 2,5 kg Trung tâm chăn nuôi Dê Thỏ Sơn Tây cung cấp Súc vật ni phòng thí nghiệm - ngày trước nghiên cứu thức ăn chuẩn dành riêng (do Công ty liên doanh Guyomarc’h-VCN sản xuất) Phương pháp Thực theo hướng dẫn OECD Tổ chức Y tế Thế giới [6; 11] Thỏ chia làm lô, lô 10 con, nhốt riêng chuồng - Lô chứng: bôi tá dược 1,5g/kg/lần, lần/ ngày - Lô trị 1: bôi cao xoa Bách Xà liều 0,75g/ kg/lần 10% diện tích da, lần/ngày - Lô trị 2: bôi cao xoa Bách Xà liều 1,5g/kg/ lần 20% diện tích da, lần/ngày (gấp lần lô trị 1) TCNCYH 99 (1) - 2016 thận vi thể gan, thận cấu trúc da bôi thuốc thử Xử lý số liệu Các số liệu nghiên cứu xử lý thống kê theo phương pháp t - test Student, biểu diễn dạng: ± SD, khác biệt có ý nghĩa p < 0,05 III KẾT QUẢ Tình trạng chung Trong thời gian thí nghiệm, thỏ lơ hoạt động bình thường, nhanh nhẹn, mắt sáng, lơng mượt, ăn uống tốt, phân khô Trọng lượng thỏ tăng khơng có khác biệt lơ chứng lô bôi cao xoa Bách xà Đánh giá chức tạo máu Kết bảng cho thấy: sau tuần tuần bôi cao xoa Bách xà, số lượng hồng cầu lô trị khơng có khác biệt có ý nghĩa so với lô chứng so sánh thời điểm trước sau bôi thuốc thử, (p > 0,05) Kết biểu đồ cho thấy: sau tuần tuần bôi cao xoa Bách xà, hàm lượng hemoglobin hematocrit lô trị khơng có khác biệt có ý nghĩa so với lô chứng so sánh thời điểm trước sau bôi thuốc thử, p > 0,05 33 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Bảng Ảnh hưởng cao xoa Bách xà đến số lượng hồng cầu máu thỏ Số lượng hồng cầu ( T/l ) Thời gian p (t - test Student) Lô chứng Lô trị Lô trị Trước bôi thuốc 5,59 ± 0,30 5,68 ± 0,68 5,51 ± 0,26 > 0,05 Sau tuần bôi thuốc 5,16 ± 0,62 5,56 ± 0,48 5,48 ± 0,27 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 5,93 ± 1,00 6,21 ± 0,48 5,85 ± 0,31 > 0,05 > 0,05 > 0,05 p (trước - sau) Sau tuần bôi thuốc 14 13 12 11 10 Hematocrit (%) Hemoglobin (g/dL) p (trước - sau) Trước bôi Sau tuần Sau tuần thuốc bôi thuốc bôi thuốc Chứng Lô trị Lô trị > 0,05 50 40 30 20 10 Trước bôi Sau tuần Sau tuần thuốc bôi thuốc bôi thuốc Chứng Lô trị Lô trị Biểu đồ Ảnh hưởng cao xoa Bách xà Biểu đồ Ảnh hưởng cao xoa Bách xà đến hemoglobin đến hematocrit Bảng Ảnh hưởng cao xoa Bách xà đến số lượng bạch cầu máu thỏ Thời gian Số lượng bạch cầu (G/l) p (t - test Student) Lô chứng Lô trị Lô trị Trước bôi thuốc 6,28 ± 0,46 6,72 ± 4,03 7,06 ± 2,06 > 0,05 Sau tuần bôi thuốc 6,53 ± 1,09 6,29 ± 1,09 6,75 ± 2,03 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 6,80 ± 1,28 7,42 ± 1,46 7,99 ± 1,97 > 0,05 > 0,05 > 0,05 p (trước - sau) Sau tuần bôi thuốc p (trước - sau) > 0,05 Sau tuần tuần bôi cao xoa Bách xà, số lượng bạch cầu lơ trị khơng có khác biệt có ý nghĩa so với lơ chứng (bơi tá dược) so sánh thời điểm trước sau bôi thuốc thử, p > 0,05 34 TCNCYH 99 (1) - 2016 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Bảng Ảnh hưởng cao xoa Bách xà đến số lượng tiểu cầu máu thỏ Số lượng tiểu cầu (G/l) Thời gian p (t - test Student) Lô chứng Lô trị Lô trị Trước bôi thuốc 318,70 ± 118,07 334,20 ± 122,80 386,40 ± 67,52 > 0,05 Sau tuần 407,30 ± 70,74 438,70 ± 90,00 442,20 ± 81,92 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 377,11 ± 116,27 329,30 ± 70,32 344,10 ± 58,70 > 0,05 > 0,05 > 0,05 p (trước - sau) Sau tuần p (trước - sau) > 0,05 Sau tuần tuần bôi cao xoa Bách xà, số lượng tiểu cầu lô trị khơng có khác biệt có ý nghĩa so với lô chứng (bôi tá dược) so sánh thời điểm trước sau bôi thuốc thử, p > 0,05 50 40 30 20 10 Trước bôi Sau tuần Sau tuần thuốc bôi thuốc bôi thuốc Chứng Lô trị Lô trị Hoạt độ ALT (UI/L) Hoạt độ AST (UI/L) Đánh giá mức độ hủy hoại tế bào gan 80 60 40 20 Trước bôi Sau tuần Sau tuần thuốc bôi thuốc bôi thuốc Chứng Lô trị Lô trị Biểu đồ Ảnh hưởng cao xoa Biểu đồ Ảnh hưởng cao xoa Bách xà đến hoạt độ AST Bách xà đến hoạt độ ALT Kết biểu đồ cho thấy: sau tuần bôi cao xoa Bách xà, hoạt độ AST, ALT máu chuột lô trị khơng có khác biệt có ý nghĩa so với lô chứng so sánh hai thời điểm trước sau bôi thuốc thử, p > 0,05 Đánh giá chức thận Sau tuần tuần bôi cao xoa Bách xà, lô trị (bôi cao xoa Bách xà liều 0,75g/kg/lần, lần/ngày) lô trị (bôi cao xoa Bách xà liều 1,5g/kg/lần, lần/ngày), nồng độ creatinin máu thỏ khơng có thay đổi khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lô chứng thời điểm trước nghiên cứu, p > 0,05 (biểu đồ 5) TCNCYH 99 (1) - 2016 35 Nồng độ (mg/dL) TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC 1.07 1.05 1.03 1.01 Trước bôi Sau tuần Sau tuần thuốc Chứng Lô trị Lô trị Biểu đồ Ảnh hưởng cao xoa Bách Xà đến nồng độ creatinin Hình ảnh giải phẫu vi thể - Giải phẫu vi thể gan (HE x 400) - Giải phẫu vi thể thận (HE x 400) - Giải phẫu vi thể cấu trúc da vùng bôi thuốc tá dược (HE x 400) 36 TCNCYH 99 (1) - 2016 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC IV BÀN LUẬN Theo Tổ chức Y tế Thế giới, tình trạng chung, trọng lượng thể số huyết học xét nghiệm bắt buộc đánh giá độc tính thuốc thử Máu tổ chức quan trọng máu liên quan mật thiết với phận, quan thể [12] Về mặt bệnh lý, máu chịu ảnh hưởng tất tổ chức đồng thời bị ảnh hưởng phản ánh tình trạng riêng quan tạo máu Nếu thuốc có ảnh hưởng đến quan tạo máu trước hết thành phần máu bị thay đổi, đặc biệt thường làm giảm số lượng bạch cầu [13] Các số thỏ hai lô trị thay đổi khơng có ý nghĩa so với trước dùng thuốc so với lô chứng thời điểm Như cao xoa Bách xà độc tính lên tình trạng chung quan tạo máu Trong thể, gan quan đảm nhận nhiều chức quan trọng Khi đưa thuốc vào thể gây độc với gan, làm ảnh hưởng đến chức gan Vì vậy, đánh giá độc tính thuốc nghiên cứu ảnh hưởng thuốc chức gan cần thiết [14] Để đánh giá mức độ tổn thương tế bào gan, thường định lượng nồng độ enzym có nguồn gốc gan có huyết Sự tăng nồng độ enzym thường gắn liền với độc tính thuốc hủy hoại tế bào gan Sau tuần bôi da cao xoa Bách xà, lô trị lô trị hoạt độ sau dùng thuốc, thường dùng xét nghiệm định lượng creatinin máu Creatinin thành phần đạm máu ổn định nhất, không phụ thuộc vào chế độ ăn thay đổi sinh lý mà phụ thuộc vào khả đào thải thận Khi cầu thận bị tổn thương, nồng độ creatinin máu tăng sớm ure Creatinin máu tiêu tin cậy quan trọng ure máu, nên dùng để đánh giá theo dõi chức thận Nồng độ creatinin máu thỏ sau dùng cao xoa Bách xà khơng có thay đổi khác biệt với lô chứng so sánh hai thời điểm trước sau uống thuốc thử Giải phẫu đại thể vi thể gan thận số bắt buộc đánh giá độc tính bán trường diễn theo hướng dẫn WHO Hơn xét nghiệm vi thể tiêu chuẩn vàng để đánh giá tổn thương quan chịu trách nhiệm chuyển hóa thải trừ thuốc Khi dùng đường bôi da cần phải làm thêm xét nghiệm vi thể da Trên tất thỏ nghiên cứu, không quan sát thấy có thay đổi bệnh lý mặt đại thể quan Hình ảnh vi thể gan, thận khơng có khác biệt lơ chứng lơ nghiên cứu Hình ảnh vi thể da không gây nhiều biến đổi so với chứng V KẾT LUẬN Mẫu thuốc thử cao xoa Bách xà không gây độc tính bán trường diễn thỏ cho thỏ bơi liều 0,75g/kg/lần, lần/ngày diện tích bơi 10% diện tích da liều cao gấp lần ALT, AST nằm giới han bình thường 1,5g/kg/lần, lần/ngày 20% diện tích da tuần liên tục bôi thuốc Thận quan tiết thể Nhu Tất số theo dõi tình trạng chung, cân nặng, chức tạo máu, chức mô thận dễ bị tổn thương chất nội sinh ngoại sinh [12; 14] Vì vậy, đưa thuốc vào thể thuốc gây độc, làm tổn thương thận, từ ảnh hưởng đến chức thận Đánh giá chức thận TCNCYH 99 (1) - 2016 gan, chức thận mô bệnh học gan, thận nằm giới hạn bình thường, khơng có khác biệt rõ rệt so với lơ chứng (bơi tá dược) 37 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Lời cảm ơn Nhóm tác giả xin trân trọng cảm ơn PGS TS Lê Đình Roanh hỗ trợ đọc nhận định kết giải phẫu bệnh vi thể nghiên cứu TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Thị Ngọc Lan (2010) Bệnh học xương khớp nội khoa Nhà xuất Giáo dục, – 35 Long DL, Kasper DL, Fauci AS et al (2012) Chapter 321: Rheumatoid Arthritis Harrison’s Principles of Internal Medicine 18th edition The McGraw - Hill Companies, Inc Bucley CD (1997) Science, medicin, and the future: treatment of rheumatoid arthritis BMJ, 315, 236 - 238 Singh JA (2012) Update of 2008 American College of Rheumatology Recommendation for the use of Disease Modifying Antirheumatic Drugs and Biologic Agents in the treatment of Rheumatoid Athristis Arthristis Care & Research, 64(5), 625 - 639 Nguyễn Nhược Kim (2013) Phân thể lâm sàng, biện chứng luận trị điều trị chứng tý Y học cổ truyền Tạp chí Đơng Y, 473, 23 - 25 Đỗ Tất Lợi (2004) Rắn Những thuốc vị thuốc Việt Nam Nhà xuất Y học, 988 - 995 Gomes A., Bhattacharya S., Chakraborty M et al (2010) Anti-arthritic activity of Indian monocellate cobra (Naja kaouthia) venom on adjuvant induced arthritis Toxicon, 55(2-3), 670 - 673 Ghosh S, Saha K, Dasgupta SC, Gomes A (2015) In vitro and In vivo Anti-Arthritic and Anti-Inflammatory Activity of Bungarus Fasciatus Venom J Toxins, 2(1), Gomes A et al (2011) Ethno biological usage of zoo products in rheumatoid arthritis Indian Journal of Experimental Biology, 49, 565 - 573 10 Saliner AG, Patlewicz G, Worth AP (2007) Review of Literature-Based Models for Skin and Eye Irritation and Corrosion European Communities 11 Organisation for Economic Cooperation and Development (2002) Guideline for testing of chemicals: Acute Demal Irritation/Corrotion, OECD 404 12 World Health Organization (2000) Working group on the safety and efficacy of herbal medicine Report of regional office for the western pacific of the World Health Organization 13 Nguyễn Thế Khánh, Phạm Tử Dương (2001) Xét nghiệm sử dụng lâm sàng Nhà xuất Y học 14 Vũ Đình Vinh (2001) Hướng dẫn sử dụng xét nghiệm sinh hoá Nhà xuất Y học, 115 - 287 Summary EVALUATION OF SUBCHRONIC TOXIC OF BACH XA EXTRACT IN ANIMALS The Bach Xa extract was used to evaluate the rabbit’s liver and kidney function as well as the rabbit’s liver and kidney structure Bach Xa extract was used in rabbits at a dose of 0.75 g/kg, twice daily and dose of 1.5g/kg, twice daily continuously for weeks, stop the medication for weeks: Back Xa extract has no effect on the general signs, growth, hematological examinations; 38 TCNCYH 99 (1) - 2016 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC there was no change in the results of tests evaluating liver function and kidney function There is no change in the rabbit’s liver and kidney structure observed in the macro-overview of the bodies The micro structure of the rabbit’s liver and kidney was no different compared to the focus group Keywords: Bach xa, toxicity, animals TCNCYH 99 (1) - 2016 39 ... bôi thuốc Chứng Lô trị Lô trị Biểu đồ Ảnh hưởng cao xoa Bách xà Biểu đồ Ảnh hưởng cao xoa Bách xà đến hemoglobin đến hematocrit Bảng Ảnh hưởng cao xoa Bách xà đến số lượng bạch cầu máu thỏ Thời... Chứng Lô trị Lô trị Biểu đồ Ảnh hưởng cao xoa Biểu đồ Ảnh hưởng cao xoa Bách xà đến hoạt độ AST Bách xà đến hoạt độ ALT Kết biểu đồ cho thấy: sau tuần bôi cao xoa Bách xà, hoạt độ AST, ALT máu chuột... thử, p > 0,05 Đánh giá chức thận Sau tuần tuần bôi cao xoa Bách xà, lô trị (bôi cao xoa Bách xà liều 0,75g/kg/lần, lần/ngày) lô trị (bôi cao xoa Bách xà liều 1,5g/kg/lần, lần/ngày), nồng độ creatinin