Thời gian lưu trữ tối đa của khối tiểu cầu là 5 ngày rất ngắn so với các chế phẩm từ máu khác. Vì vậy mục tiêu thử nghiệm kéo dài thời gian lưu trữ tiểu cầu là xu hướng các nhà nghiên cứu trong lĩnh vực truyền máu đang hướng đến, đề tài của này cũng không nằm ngoài mục tiêu đó.
Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Số 5 * 2013 Nghiên cứu Y học ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG TÚI TIỂU CẦU ĐIỀU CHẾ TỪ MÁU TỒN PHẦN TRONG 6 NGÀY LƯU TRỮ Huỳnh Thị Hồng Trúc*, Nguyễn Phương Thảo*, Trần Hồng Đạt*, Đào Ngọc Tuyền*, Mai Thanh Truyền*, Trương Thị Kim Dung* TĨM TẮT Thời gian lưu trữ tối đa của khối tiểu cầu là 5 ngày rất ngắn so với các chế phẩm từ máu khác. Vì vậy mục tiêu thử nghiệm kéo dài thời gian lưu trữ tiểu cầu là xu hướng các nhà nghiên cứu trong lĩnh vực truyền máu đang hướng đến, đề tài của chúng tơi cũng khơng nằm ngồi mục tiêu đó. Mục tiêu: Đánh giá khối tiểu cầu điều chế từ máu toàn phần được lưu trữ trong 6 ngày. Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: 100 đơn vị tiểu cầu được điều chế từ máu toàn phần bằng phương pháp Buffy‐coat tại bệnh viện Truyền máu‐Huyết học; phương pháp tiến cứu in vitro tại 0, 3, 5, 6 ngày lưu trữ. Kết quả và kết luận: Số lượng tiểu cầu ở ngày lưu trữ thứ 6 giảm 3,6% so với ngày thứ 5; số lượng bạch cầu và hồng cầu xu hướng giảm trong giới hạn tiêu chuẩn; giá trị pH trong giới hạn tiêu chuẩn 6,4‐7,4 có 02 túi bất thường có liên quan đến sự nhiễm khuẩn; ngày thứ 6 xuất hiện 01 mẫu dương tính nâng tỷ lệ cấy máu dương tính trong lơ thí nghiệm là 2% cao hơn các nghiên cứu khác. Vậy thời gian lưu trữ của tiểu cầu buffycoat 5 ngày là tốt nhất phù hợp với các tiêu chuẩn trong và ngồi nước. Từ khóa: tiểu cầu buffy‐coat, thời gian lưu trữ tiểu cầu. ABSTRACT THE QUALITY OF BUFFYCOAT PLATELETS AFTER STORAGE FOR 6 DAYS Huynh Thi Hoang Truc, Nguyen Phuong Thao, Tran Hoang Dat, Dao Ngoc Tuyen, Mai Thanh Truyen, Truong Thi Kim Dung * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 17 ‐ No 5 ‐ 2013: 75 ‐ 80 The platelet stored for 5 days, is very short compared to the other blood products. So test objectives prolong platelet storage trend researchers in the field of blood transfusion are targeting, our theme isn’t exception to that goal. Objective: The quality of Buffycoat platelets after storage for 6 days. Study design and methods: 100 units Buffycoat platelets at Blood Transfusion – Hematology Hospital, prospective study of in vitro buffycoat platelets function after storage at 0, 3, 5, 6 day. Result and conclusion: The number of platelets after storage 6th day down 3.6% over the first 5 days, the number of leukocytes and erythrocytes decreased in the standard limit; pH value of 6.4 to 7.4 standard limit, there are 2 units abnormalities pH value related to the infection, the 6th day of the 01 positive samples increased the rate of positive blood cultures in the experimental groups was 2% higher than other studies. So the storage time of the buffycoat platelet 5 days is best suited to the domestic and international standards. Keys: Buffycoat Platelet, Platelet storage time. ĐẶT VẤN ĐỀ Tiểu cầu giữ vai trò rất quan trọng trong * Bệnh viện Truyền máu Huyết học Tác giả liên lạc: CN. Mai Thanh Truyền 76 q trình cầm máu và chống chảy máu do đó tiểu cầu được sử dụng rộng rãi trong điều trị nội, ngoại, sản khoa… Khối tiểu cầu được sản ĐT: 0918923636 Email: maithanhtruyen@gmail.com Chuyên Đề Truyền Máu Huyết Học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Số 5 * 2013 xuất bằng phương pháp tách tiểu cầu từ máu toàn phần hoặc gạn tách bằng máy chiết tách tự động từ người cho. Ngày nay, khoa học phát triển, kỹ thuật hiện đại cũng như việc sử dụng hóa chất trong điều trị ung thư có hiệu quả đặc biệt là ung thư máu, trong điều trị nội, ngoại, sản khoa… đã góp phần tăng nhu cầu sử dụng khối tiểu cầu. Nghiên cứu Y học Xác định số lượng bạch cầu và pH của sản phẩm tiểu cầu dự trữ. Tỷ lệ cấy máu ở ngày thứ 6 dự trữ tiểu cầu. ĐỐI TƯỢNG ‐ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu Đối tượng Các đơn vị tiểu cầu được điều chế từ máu Khối tiểu cầu điều chế từ máu toàn phần hiện nay được dùng rất phổ biến nhất. Sản phẩm được điều chế bằng 2 phương pháp: Buffycoat và huyết tương giàu tiểu cầu, bảo quản trong túi nhựa có chức năng trao đổi khí, để trên máy lắc ở nhiệt độ 20‐ 24 độ C, hạn sử dụng 5 ngày(2). tồn phần bằng phương pháp buffycoat tại bệnh Theo một số tài liệu và nghiên cứu trên thế giới nếu đảm bảo nhiệt độ lưu trữ ổn định, q trình điều chế khối tiểu cầu trong hệ thống kín thì có thể kéo dài thêm thời gian lưu trữ tiểu cầu thường quy từ 5 đến 7 ngày(11). vi khuẩn, kháng thể bất thường đều âm tính. Để cung cấp kịp thời khối tiểu cầu cho các bệnh viện trong thành phố là một u cầu cấp thiết trong cơng tác truyền máu, chúng tơi mong muốn có thể kéo dài thời gian bảo quản khối tiểu cầu điều chế từ máu tồn phần thêm 1 ngày (lưu trữ 6 ngày) so với hiện nay tại Việt Nam (5 ngày)(2) nhằm tăng thêm năng suất điều chế, đảm bảo kịp thời, chủ động và hiệu quả quan trọng là đảm bảo an tồn truyền máu. Chúng tơi tiến hành tìm hiểu và thực hiện đề tài: “Đánh giá chất lượng túi tiểu cầu điều chế từ máu toàn phần trong 6 ngày lưu trữ”. Máy xét nghiệm huyết đồ Micros 60. viện Truyền máu‐Huyết học. Tiêu chuẩn chọn mẫu Các đơn vị tiểu cầu đạt tiêu chuẩn kiểm tra chất lượng ban đầu. Các đơn vị tiểu cầu có kết quả sàng lọc virus, Cỡ mẫu: 100 đơn vị. Phương tiện và kỹ thuật nghiên cứu Cân điện tử. Máy hàn dây. Máy cấy máu tự động Bactec 9050. pH kế. Máy lắc lưu trữ tiểu cầu. Địa điểm nghiên cứu Nghiên cứu được thực hiện tại bệnh viện Truyền máu – Huyết học. Phương pháp nghiên cứu Tiến cứu tại các thời điểm lưu trữ tiểu cầu 0, Mục tiêu nghiên cứu 3, 5, 6 ngày. Mục tiêu tổng qt Phân tích kết quả Đánh giá khối tiểu cầu điều chế từ máu tồn Số liệu sau khi thu nhận sẽ được phân tích phần được dự trữ trong 6 ngày. thống kê bằng phần mềm thống kê của chương Mục tiêu cụ thể trình Excel. Các kết quả sẽ được trình bày dưới Xác định số lượng tiểu cầu được dự trữ trong 6 ngày. Chuyên Đề Truyền Máu Huyết Học dạng bảng và biểu đồ. 77 Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Số 5 * 2013 Nghiên cứu Y học Bảng 2. Kết quả cấy máu Khối tiểu cầu từ MTP Ngày lưu trữ Không đạt Kiểm tra ngày 0 Ngày Ngày Ngày Ngày Sau ngày lưu trữ Loại bỏ Đạt Lưu trữ 20‐240C, lắc Kiểm tra ngày 3, 5, 6: SLTC, SLBC, pH Phân tích kết quả Sơ đồ 1. Sơ đồ nghiên cứu KẾT QUẢ Chúng tơi thực hiện nghiên cứu in vitro trên 100 đơn vị tiểu cầu điều chế theo phương pháp Buffycoat tại bệnh viện Truyền máu Huyết học với kết quả: Bảng 1. Chất lượng túi tiểu cầu sau 6 ngày lưu trữ SLTC (x109/túi) SLBC (x109/túi) SLHC (x109/túi) pH Ngày Ngày Ngày Ngày P* (n=100) (n=100) (n=100) (n=100) 54,3 50,8 47,1 45,5 >0,05 ±6,7 ±5,9 ±6,3 ±5,6 0,14 ±0,016 0,05 ±0,034 7,10 ±0,07 0,14 ±0,03 0,04 ±0,010 7,30 ±0,03 0,11 ±0,018 0,02 ±0,019 7,22 ±0,05 0,13 ±0,021 0,02 ±0,024 7,19 ±0,07 >0,05 >0,05 >0,05 Giá trị trung bình±SD; P* so sánh với tiêu chuẩn chất lượng khối tiểu cầu điều chế từ máu toán phần theo phương pháp buffycoat tại bệnh viện Truyền máu Huyết học. Kết cấy máu (n=100) Âm tính Dương tính 100 100 99 98 98 Sau 6 ngày lưu trữ, số lượng tiểu cầu ngày thứ 0 là 54,3±6,7x109/túi giảm còn 47,1±6,3 x109/túi ngày thứ 5 và ngày thứ 6 còn 45,5±5,6x109/túi tương ứng giảm 16,21%, có ý nghĩa thống kê (p0,05) vì số lượng tiểu cầu khơng giảm nhiều. So sánh giữa ngày thứ 0 và ngày thứ 6 ta thấy số lượng tiểu cầu cũng có ý nghĩa thống kê (p0,05). Nhưng theo khuyến cáo của các chun gia, tiểu cầu sử dụng tốt nhất trong 5 ngày trở lại vì có liên quan đến khả năng phục hồi của tiểu cầu trong hệ thống tuần hoàn của người bệnh. Tiểu cầu càng lưu trữ lâu khả năng phục hồi kém, kèm theo các chất nội sinh do tiểu cầu vỡ, bạch cầu, hồng cầu tạo nên gây nên các biến chứng trong truyền máu(4). Số lượng bạch cầu từ 0,14±0,016 x109/túi ở ngày 0 khơng có thay đổi ở ngày thứ 3, giảm ở ngày thứ 5 và tăng ngày thứ 6 (0,13±0,021 x109/túi). Số lượng hồng sau 6 ngày lưu trữ có xu hướng giảm đều từ 0,05±0,034x109/túi xuống còn 0,02±0,024x109/túi. Trong 6 ngày lưu trữ, pH của mẫu được duy trì trên 6,4 và thay đổi tăng ở ngày thứ 3 sau đó giảm ở các ngày lưu trữ còn lại (biểu đồ 3). Kết quả cấy máu (Hiếu khí và kỵ khí trên máy BACTEC 9050): Có 01 mẫu dương tính ngày thứ 5 và 01 mẫu dương tính ngày thứ 6. Tổng cộng có 02/100 mẫu dương tính với kết quả cấy máu. Đồ thị 1. Số lượng tiểu cầu lưu trữ 78 Chuyên Đề Truyền Máu Huyết Học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Số 5 * 2013 So sánh với tiểu chuẩn chất lượng nội bộ đánh giá khối tiểu cầu buffycoat của bệnh viện Truyền máu Huyết học thì phù hợp và khơng có ý nghĩa thống kê (p>0,05). Biểu đồ 2. Số lượng tiểu cầu sau 6 ngày lưu trữ Biểu đồ 3. Giá trị pH tiểu cầu sau 6 ngày lưu trữ BÀN LUẬN Với chế phẩm tiểu cầu, theo quy định trong và ngồi nước thời gian lưu trữ tối đa cho phép là 5 ngày. Tuy nhiên có một số nghiên cứu của các tác giả trên thế giới, tiểu cầu buffycoat có thể lưu trữ 7 ngày, tiểu cầu chiết tách từ máy lưu trữ 8, 9 ngày hoặc hơn(6,,3,11), nhưng vấn đề họ quan tâm là kết quả của sự nhiễm khuẩn trong suốt quá trình lưu trữ. Qua đề tài này, chúng tôi thử nghiệm kéo dài thời gian lưu trữ tiểu cầu buffycoat thêm 1 ngày, tức là 6 ngày lưu trữ ở nhiệt độ 20 – 240C. lắc liên tục. Các thông số ảnh hưởng đến chất lượng chúng tôi quan tâm: số lượng tiểu cầu, số lượng bạch cầu, số lượng hồng cầu, giá trị pH, đặc biệt là kết quả cấy máu: Tiểu cầu buffycoat sau 6 ngày lưu trữ có số lượng tiểu cầu không thay đổi nhiều so với 5 ngày lưu trữ (thay đổi 3,6%), bảng kết quả in vitro cho thấy sự giảm dần trong thời gian lưu trữ nhưng 95% đơn vị đạt tiêu chuẩn nội bộ của bệnh viện Truyền máu Huyết học (≥45,5 x109 tiểu cầu/túi), điều này tương tự với kết quả Chuyên Đề Truyền Máu Huyết Học Nghiên cứu Y học nghiên cứu của tác giả R. Cardigan, L. M. Williamson (2003); H. Schrezenmeier, E. Seifried1 (2010). Theo Sherrill J. Slichter và công sự (2006) sau 8 ngày lưu trữ tiểu cầu có khả năng phục hồi sau khi truyền vào cơ thể người bệnh là 53±20% so với tiểu cầu sau 5 ngày lưu trữ 66±16%, kết quả in vitro của chúng tơi là tương đồng. Đề tài của chúng tơi chưa có điều kiện thử nghiệm trên in vivo. Cho thấy với điều kiện lưu trữ đúng quy định thì khả năng tồn tại của tiểu cầu sau 6 ngày là khả thi. Số lượng bạch cầu và hồng cầu nằm trong tiêu chuẩn cho phép và có xu hướng thay đổi tương tự như các nghiên cứu khác. Bạch cầu, hồng cầu ảnh hưởng rất nhiều đến khả năng tồn tại và chất lượng của túi tiểu cầu vì các cytokin (IL‐1, IL‐8, IL‐6, TNF‐), số lượng bạch cầu càng nhiều thì mức độ các cytokin tạo ra càng tăng. Các cytokin có thể gây một số phản ứng di truyền máu như sốt khơng do tan máu, dị ứng, sốc kết quả in vitro của đề tài là phù hợp với các nghiên cứu khác sau hơn 5 ngày lưu trữ. Giá trị pH từ lâu được công nhận là yếu tố quan trọng trong lưu trữ tiểu cầu. Giá trị pH theo thời gian lưu trữ thể hiện sự biến đổi sinh hóa, hóa lý hoặc thể hiện hiện tượng nhiễm khuẩn, ảnh hưởng đến chất lượng túi tiểu cầu in vitro. Giá trị pH thấp hay cao trong thời gian lưu trữ có liên quan đến mức độ phục hồi và sự sống sót của tiểu cầu khi truyền cho người bệnh cũng như q trình nhiễm khuẩn của chế phẩm tiểu cầu. Kết quả của chúng tôi cho thấy pH trong 6 ngày lưu trữ nằm trong giới hạn tiêu chuẩn (pH=6,4 – 7,4), tuy giá trị pH trung bình trong giới hạn tiêu chuẩn nhưng có 2 túi có giá trị pH thay đổi bất thường tương ứng với kết quả cấy máu 2 túi trên dương tính. Điều này cho thấy có sự thay đổi pH do nhiễm khuẩn. Biểu đồ 3 so sánh giá trị pH tại các thời điểm nghiên cứu, phần lớn các mẫu trong nghiên cứu này nằm trong giới hạn tiêu chuẩn. Nhìn chung, lưu trữ tiểu cầu có thể chấp nhận khi pH 6,4‐7,4, pH có sự tăng ở thời điểm 3 ngày là do sự giảm của khí CO2 Sherrill J. Slichter và cộng sự (2006). 79 Nghiên cứu Y học Kết quả cấy máu thể hiện ở bảng 2. Nhìn chung trong 100 mẫu thí nghiệm có 01 mẫu dương tính ngày thứ 5, 01 mẫu dương tính sau 6 ngày lưu trữ, vậy tỷ lệ chung của lơ thí nghiệm sau 5 và 6 ngày lưu trữ là 1% và 2%, tương đồng với các nghiên cứu khác (khoảng 1‐2% khối tiểu cầu bị nhiễm khuẩn, Dự án hỗ trợ kỹ thuật ‐ Viện Huyết học Truyền máu TW, 2008). Kết quả trên phản ánh nguy cơ nhiễm khuẩn của chế phẩm tiểu cầu trong suốt quá trình điều chế và lưu trữ, nhất là tiểu cầu điều chế từ máu toàn phần có nguy cơ nhiễm khuẩn cao hơn so với tiểu cầu chiết tách bằng máy. Có 2 nguyên nhân gây nhiễm khuẩn cho tiểu cầu là nhiễm trong quá trình lấy máu, vận chuyển, điều chế và bảo quản; nhiễm từ người hiến máu. Vi khuẩn gây nhiễm tiểu cầu gồm vi khuẩn Gram (+) lẫn vi khuẩn Gram (‐) như: Staphylococcus epidermidis, Streptococcus group G, Staphylococcus aureus; Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Serratia marcescens…(10). Qua kết quả nghiên cứu có giới hạn trong đề tài này, về số lượng tiểu cầu, hồng cầu, bạch cầu và giá trị pH khơng có sự khác biệt giữa ngày thứ 6 và ngày 5 lưu trữ, nhưng kết quả cấy máu cao hơn các kết quả nghiên cứu khác và có 01 túi dương tính tại ngày thứ 6. KẾT LUẬN Cho đến nay, có rất nhiều nghiên cứu kéo dài thời gian lưu trữ tiểu cầu, góp phần đảm bảo cung cấp đủ cho người bệnh, giảm chi phí tăng hiệu quả điều trị, nhưng chỉ dừng lại ở mức độ in vitro và một vài thí nghiệm in vivo tham khảo. Cùng xu hướng đó, do điều kiện hạn chế, đề tài chỉ dừng lại khảo sát một số thơng số cơ bản và ở mức độ in vitro. Số lượng tiểu cầu ở ngày lưu trữ thứ 6 giảm 3,6% so với ngày thứ 5; số lượng bạch cầu và hồng cầu xu hướng giảm trong giới hạn tiêu chuẩn; giá trị pH trong giới hạn tiêu chuẩn 6,4‐ 7,4 có 2 túi bất thường có liên quan đến sự nhiễm khuẩn; ngày thứ 6 xuất hiện 01 mẫu dương tính nâng tỷ lệ cấy máu dương tính trong 80 Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Số 5 * 2013 lơ thí nghiệm là 2% sau 6 ngày lưu trữ cao hơn các nghiên cứu khác. Trong truyền máu tiểu cầu đóng vai trò quan trọng trên 2 mặt: Góp phần điều trị có hiệu quả các trạng thái xuất huyết do giảm tiểu cầu; tiểu cầu có thể gây các hậu quả xấu, thậm chí có thể gây biến chứng nghiêm trọng, cho nên phải thận trọng khi sử dụng tiểu cầu. Để có kết quả chính xác hơn, chúng tơi kiến nghị mở rộng thí nghiệm với số lượng mẫu nhiều hơn, xét nghiệm bổ sung các chỉ tiêu khác như nồng độ glucose, lactase và khả năng phục hồi của tiểu cầu sau khi truyền cho bệnh nhân. Vậy thời gian lưu trữ của tiểu cầu Buffy‐coat 5 ngày là tốt nhất phù hợp với các tiêu chuẩn trong và ngoài nước. TÀI LIỆU THAM KHẢO 10 11 12 13 Block M, Rahring S, Kuntz Lutz D, et al (2001), Platelet concentrates derived formed buffy coat and apheresis: biochemical and functional differences, Transfus Med; page 317‐324. Bộ Y tế (2007), Quy chế truyền máu. NXB Y học. Cardigan R. and Williamson LM (2003), Review article: The quality of platelets after storage for 7 days, Transfusion Medicine 13, 173‐187. Devine DV. (2010), The Platelet Storage Lesion, Clin Lab Med 30. Đỗ Trung Phấn: Truyền máu hiện đại cập nhật và ứng dụng trong điều trị bệnh. NXB GDVN – Năm 2012. Dumont LJ. and VandenBroeke T (2003), Seven‐day storage of apheresis platelets: report of an in vitro study, Transfusion, vol. 43. European Directorate for the Quality of Medicines & HealthCare (2008): Guide to the preparation, use and quality assurance of blood componenta 14 th edition. Fijnheer R., Pietersz, D. De Korte (1990), Platelet activation during preparation of platelet concentrates: A comparison of the platelet‐rich R.N.I. plasma and the buffy coat methods, Tranfusion, page 634‐638. Jerad S. Prane K. (1997), The platelet storage lesions, Transfus Med Rev; page 130‐144. Palavecino EL, Yomtovian RA, and Jacobs MR (2006), Review: Detecting Bacterial Contamination in Platelet Products. Clin. Lab. 2006; 52: 443‐456. Slichter SJ, Bolgiano D, Jones MK, (2006), Viability and function of 8‐day‐stored apheresis platelets, Transfusion 46, page 1763‐ 1769. Trần Ngọc Quế, Bùi Thi Mai An, Nguyễn Anh Trí: Lịch sử phát triển và những vấn đề của truyền máu ngày nay, Một số chuyên đề Huyết học‐ Truyền máu, Tập IV, tr. 48‐63. Viện Huyết học Truyền máu Trung Ương: Cung cấp và sử dụng máu an toàn, năm 2005. Ngày nhận bài báo: 20 tháng 9 năm 2013 Ngày phản biện: 24 tháng 9 năm 2013 Chuyên Đề Truyền Máu Huyết Học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Số 5 * 2013 Nghiên cứu Y học Ngày bài báo được đăng: 22 tháng 10 năm 2013 Chuyên Đề Truyền Máu Huyết Học 81 ... an tồn truyền máu. Chúng tơi tiến hành tìm hiểu và thực hiện đề tài: Đánh giá chất lượng túi tiểu cầu điều chế từ máu toàn phần trong 6 ngày lưu trữ . Máy xét nghiệm huyết đồ Micros 60 . ... đến chất lượng chúng tôi quan tâm: số lượng tiểu cầu, số lượng bạch cầu, số lượng hồng cầu, giá trị pH, đặc biệt là kết quả cấy máu: Tiểu cầu buffycoat sau 6 ngày lưu trữ có số lượng ... khuẩn của chế phẩm tiểu cầu trong suốt quá trình điều chế và lưu trữ, nhất là tiểu cầu điều chế từ máu tồn phần có nguy cơ nhiễm khuẩn cao hơn so với tiểu cầu chiết tách bằng máy. Có 2 nguyên nhân