Mục đích nghiên cứu của luận án nhằm tạo được các dòng dưa hấu tứ bội, tam bội. Xác định môi trường thích hợp nhân nhanh các dòng dưa hấu tứ bội, tam bội. Đánh giá sinh trưởng, năng suất và chất lượng trái của các dòng dưa hấu tam bội tạo ra trong điều kiện ngoài đồng.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ Chuyên ngành: Khoa học trồng Mã ngành: 62 62 01 10 TRẦN THANH TRUYỀN NGHIÊN CỨU CHỌN TẠO VÀ BIỆN PHÁP NÂNG CAO NĂNG SUẤT, PHẨM CHẤT DÕNG DƢA HẤU (Citrullus vulgaris L.) TAM BỘI IN VITRO Cần Thơ, 2019 CÔNG TRÌNH ĐƢỢC HỒN THÀNH TẠI TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ Người hướng dẫn chính: PGS.TS Lâm Ngọc Phương Luận án bảo vệ trước hội đồng chấm luận án tiến sĩ cấp trường Họp tại: Hội trường …….; Khoa……………… …… ……………………; Trường Đại học Cần Thơ Vào lúc … … ngày … tháng … năm … Phản biện 1: ……………………………………………… Phản biện 2: ……………………………………………… Có thể tìm hiểu luận án thư viện: Trung tâm Học liệu, Trường Đại học Cần Thơ Thư viện Quốc gia Việt Nam DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ Trần Thanh Truyền, Lâm Ngọc Phương Ngô Phương Ngọc 2014 Hiệu Benzyl adenin (BA), Indole butyric acid (IBA) than hoạt tính tạo chồi rễ dưa hấu tam bội (Citrullus vulgaris Schrad.) in vitro Tạp chí Khoa học trường Đại học Cần Thơ, pp: 168-172 Trần Thanh Truyền Lâm Ngọc Phương 2017 Kết trồng thử nghiệm dòng dưa hấu tam bội (3x) Đồng Bằng Sông Cửu Long Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển Nơng thơn chun đề Giống trồng, vật nuôi, tập 1, pp: 108-114 CHƢƠNG 1: GIỚI THIỆU Dưa hấu (Citrullus vulgaris L.) loại trồng phổ biến giới Việt Nam có truyền thống trồng dưa hấu từ thời vua Hùng Vương thứ 18; đến nay, việc sản xuất dưa hấu ngày phát triển, đứng thứ xuất (FAOStat, 2012) Dưa hấu ăn ngon, ngày hè nóng bức; nhiên có điều bất tiện dùng dưa hấu nhị bội chứa nhiều hạt (Donald and Maynard, 1992) Do đó, giống dưa hấu không hạt (3X-tam bội) nhiều người ưa chuộng, khơng phải bỏ hạt ăn, đồng thời dưa có chất lượng tốt ngon Người tiêu dùng vui lòng mua thưởng thức loại dưa không hạt dù giá tiền cao so với dưa hấu thơng thường nhị bội có hạt (Marr and Gast, 1991; Maynard et al., 2002) Dưa hấu tam bội tạo thành phương pháp lai tạo thể tự tứ bội với nhị bội (Andrus et al., 1971; Kihara, 1951; Guo et al., 2011) Trong đó, dưa hấu tứ bội tạo thành công cách xử lý nhị bội với colchicine hay oryzalin, nơi vườn ươm hay môi trường in vitro (Kihara, 1951; Raza et al., 2003; Noh et al., 2012; Lâm Ngọc Phương Nguyễn Kim Hằng, 2010) Tuy nhiên, dưa hấu tứ bội hạt (giảm 10 lần so với hạt nhị bội), tỷ lệ nảy mầm hạt thấp, muốn trì dòng tứ bội đắt tiền (Trần Khắc Thi et al., 2008) Theo Compton and Gray (1992); Compton et al (1993), ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mơ tạo dòng tứ bội tam bội phương pháp làm giảm thời gian nhân dòng (1-2 năm) thuận lợi cho việc bảo quản dòng dưa hấu thay cho phương pháp truyền thống Ở đồng sông Cửu Long, sản xuất dưa hấu khơng hạt ngày tăng chi phí sản xuất cao chủ yếu sử dụng giống nhập nội, giá thành hạt giống cao hạt khó tồn trữ dễ sức nảy mầm (Marr and Gast, 1991) Công tác chọn tạo giống dưa hấu không hạt có xuất xứ Việt Nam cấp thiết Vì thế, đề tài “Nghiên cứu chọn tạo biện pháp nâng cao suất, phẩm chất dòng dƣa hấu (Citrullus vulgaris L.) tam bội in vitro” thực 1.1 Mục tiêu luận án Mục tiêu chính: tạo dưa hấu tam bội Mục tiêu cụ thể: i) Tạo dòng dưa hấu tứ bội, tam bội ii) Xác định mơi trường thích hợp nhân nhanh dòng dưa hấu tứ bội, tam bội iii) Đánh giá sinh trưởng, suất chất lượng trái dòng dưa hấu tam bội tạo điều kiện đồng 1.2 Ý nghĩa luận án: i) Tạo dòng dưa hấu tam bội có nguồn gốc từ Việt Nam ii) Ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô, tế bào để rút ngắn thời gian chọn tạo, nhân dòng giúp giảm giá thành giống tứ bội tam bội iii) Xác định môi trường thích hợp để nhân giống dòng dưa hấu tứ bội tam bội iv) Khảo sát đánh giá khả sinh trưởng, phẩm chất trái dòng dưa hấu tam bội tạo thành cấy mơ trồng ngồi đồng v) Đánh giá bước đầu liều lượng phân đạm mật độ trồng dòng dưa hấu tam bội tạo thành trồng đồng 1.3 Điểm luận án: i) Tạo tứ bội phương pháp nuôi cấy mô xử lý đa bội hóa; trồng đồng ii) Lai tạo thành cơng hạt tam bội từ hoa tứ bội với phấn hoa nhị bội iii) Tìm mơi trường ni cấy in vitro thích hợp cho việc nhân chồi, tạo rễ dòng dưa hấu tứ bội, tam bội, nhân nhanh giống; góp phần giảm bớt chi phí đầu tư ban đầu sản xuất dưa hấu không hạt iv) Khảo sát đánh giá khả sinh trưởng, phẩm chất trái dòng dưa hấu tam bội tạo thành cấy mơ trồng ngồi đồng Cần Thơ Hậu Giang v) Bước đầu đánh giá liều lượng phân đạm mật độ trồng phù hợp cho sinh trưởng phát triển, suất phẩm chất trái dòng tam bội lai cấy mơ trồng ngồi đồng CHƢƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Cơ sở khoa học tạo thể đa bội colchicine oryzalin Colchicine có cơng thức hóa học C22H25O6N chiết xuất từ Colchicum autumnale L mọc nhiều bờ biển Địa Trung Hải Bột colchicine tinh khiết có màu trắng ngà, dễ hòa tan nước, cồn, cloroform Colchicine có tính bền vững cao, dung dịch bảo quản lâu khử trùng nồi hấp, nhiên dễ phân giải ngồi ánh sáng nên cần bảo quản tối Colchicine chất độc có tác dụng làm tê liệt nên cần thận trọng làm việc với (Trần Thượng Tuấn, 1992) Oryzalin có cơng thức hóa học C12H18N4O6S loại thuốc cỏ Dinitroaniline, tinh thể rắn màu vàng cam với điểm nóng chảy 141-142˚C, trọng lượng phân tử 346,35; hòa tan nước mức 2,5 ppm điều kiện nhiệt độ 25˚C Dễ dàng hòa tan dung môi hữu acetone, ethanol, methanol acetonitrile, tan benzen xylene, khơng hòa tan hexane Oryzalin dùng để kích thích đa bội hóa nhiều loại trồng (Morejohn et al., 1987) Theo EPA (Environmental Protection Agency) (1994) oryzalin có hoạt động ức chế phân bào loài trồng đăng ký Mỹ năm 1974 Tác động oryzalin đến phân bào giống colchicine tức chúng tác động lên liên kết disulphite prôtêin phân tử ribôse acid ribônuclêic Trong q trình phân bào, hóa chất làm thoi vơ sắc ngừng hoạt động chúng hình thành phức hợp vi ống - hóa chất, ngăn cản phân chia tế bào tâm động phân chia muộn hơn, tái nhiễm sắc thể hình thành cromatit diễn bình thường Ở kỳ nguyên phân, nhiễm sắc thể không phân bố mặt phẳng xích đạo thoi vơ sắc, nhiễm sắc thể rút ngắn lại dày lên Sự phân ly nhiễm sắc thể hai cực đối diện giai đoạn hậu kỳ không xảy ra, tế bào không phân chia, số lượng nhiễm sắc thể tăng gấp đơi Kích thước tế bào lớn tế bào thường Khi ngưng tác động hóa chất tế bào lại có khả phân chia bình thường tạo nên tế bào tứ bội (Trần Thượng Tuấn, 1992; Dolezel et al., 2004) Tuy nhiên, hoạt động gắn kết với vi ống oryzalin chặt chẽ so với colchicine Những trồng xử lý oryzalin nồng độ micromolar (µM) cho kết tương đương với trồng xử lý colchicine nồng độ milimolar (mM) (Dolezel et al., 2004) Mặt khác oryzalin chủ yếu xâm nhập thông qua bề mặt vết cắt vào qua lớp tế bào biểu bì qua lớp cutin bề mặt tế bào (Allum et al., 2007) 2.2 Phƣơng pháp xác định đa bội Hình thái đặc điểm sinh trưởng, phát triển: hình thái tiêu chí hữu ích cho việc xác định dòng tứ bội nguồn trước tuyển chọn chúng bên Lá dưa hấu tứ bội lớn, dày xanh đậm so với lưỡng bội (Kihara, 1951) Bên cạnh đó, tỷ lệ chiều dài/chiều rộng tứ bội (1,00±0,02 1,02±0,02) thấp nhị bội (1,28±0,02 1,30±0,02) hai giống dưa hấu Giza Giza 21 điều kiện in vivo (Nasr et al., 2004), diện tích tứ bội lại lớn nhị bội tất giống quan sát Ngồi hình dạng kích thước dưa hấu tứ bội TPS có hoa lớn hơn, trọng lượng trái lớn, trung bình kg có khoảng 70 hạt/quả, thịt màu đỏ đậm, cứng tỷ lệ đường khoảng 12,5% (Karchi et al., 1981) Thêm vào đó, độ dày vỏ số hạt lép/trái tứ bội cao nhị bội (Ahmad et al., 2013), tốc độ tăng trưởng lúc đầu chậm thời gian hoa muộn so với nhị bội (Pradeepkumar, 2011) Mật số khí khẩu/đơn vị diện tích chiều dài khí khẩu: khác biệt mật số khí tiêu chuẩn để phân biệt thể lưỡng bội (2n) thể tứ bội (4n) tế bào thực vật, để xác định dạng đa bội (Hamill et al., 1992) Kích thước tế bào khí dưa hấu Sugar Baby tứ bội (được xác định phương pháp phân tích hàm lượng ADN nhân) lớn so với nhị bội (Thayyil et al., 2016) Phương pháp nhanh chóng, khơng tốn kém, khơng đòi hỏi thiết bị tinh vi có tỷ lệ xác cao (một số trường hợp lên đến 90%; Cohen and Yao, 1996) Tuy nhiên, phương pháp gián tiếp để đánh giá mức độ đa bội Nếu trồng trạng thái tạp bội phương pháp khơng đáng tin cậy cần kết hợp thêm phương pháp khác (Chen et al., 2006) Đếm số lượng nhiễm sắc thể phương pháp trực tiếp xác để xác định mức độ đa bội sàn lọc sớm sơ gây thời gian Bên cạnh đó, việc đếm nhiễm sắc thể tốn nhiều thời gian, cơng sức khó thực loại trồng có số lượng nhiễm sắc thể lớn kích thước tế bào nhỏ Đặc biệt, dưa hấu phương pháp lại khó thực kích thước nhiễm sắc thể nhỏ (Jaskani and Khan, 2000) Phân tích flow cytometry (dòng chảy tế bào) máy đo đa bội thể (Partec Ploidy Analyser): phương pháp phân tích dòng chảy tế bào có nhiều thuận lợi so với phương pháp đếm nhiễm sắc thể (Leus, 2005; Loureiro et al., 2005): thuận tiện công tác chuẩn bị mẫu nhanh chóng cần lượng mẫu nhỏ Qui trình phân tích đơn giản, thực nhiều mẫu thời gian Có thể lấy nhiều loại mơ khác để phân tích như: lá, rễ, thân, cánh hoa, hạt, trái,… mà không cần xác định giai đoạn phân chia tế bào Chi phí phân tích mẫu phương pháp chấp nhận Chỉ cần chi phí lúc ban đầu cho máy phân tích, vật liệu, hóa chất liên quan giá thành thấp Hiện giới, phương pháp phân tích dòng chảy tế bào công cụ quan trọng việc đánh giá mức bội thể mẫu giống tạo nhiều nghiên cứu sử dụng phương pháp (Faten et al., 2012; Jaskani et al., 2005) Tuy nhiên, phương pháp đòi hỏi phải mua thiết bị đắt tiền đặc điểm nhiễm sắc thể quan sát 2.3 Dƣa hấu tam bội (không hạt) Dưa hấu tam bội lần sản xuất Kihara Nishiyama vào năm 1939 cách sử dụng colchicine tạo thể 4x cho lai với hạt phấn nhị bội Hiện nay, đa số dưa hấu không hạt sản xuất theo phương pháp xem phương pháp hữu hiệu (Guo et al., 2011; Wang et al., 2013) Để dưa hấu không hạt sinh trưởng đạt kích thước bình thường, thịt khơng có tượng rỗng ruột hình trái tim thiết phải có q trình thụ phấn giả (Mark Arena, 2012; Johnson, 2014) Chính thế, trồng dưa tam bội thiết phải trồng xen thêm 25% đến 33% dưa nhị bội để đảm bảo trình thụ phấn thành công, nhằm tăng tỷ lệ đậu trái (Olson et al, 2012; Fiachino and Walters, 2003) Kỹ thuật lai tạo dòng dưa hấu tam bội gồm bước: (1) chọn lọc dòng nhị bội, (2) sản xuất tứ bội, (3) phát triển dòng tứ bội nhị bội thuần, (4) lai tạo hạt lai tam bội (cây mẹ tứ bội x phấn hoa nhị bội) trồng tạo trái tam bội (thụ phấn bổ khuyết hạt phấn nhị bội) (Wehner, 2008) 2.4 Vai trò vi nhân giống trồng Vi nhân giống công cụ đắc lực để nhân đa số thân thảo (cây dược liệu, ăn quả, lương thực, cảnh…), làm giảm giá thành lai F1, đặc biệt lai tam bội dưa hấu không hạt, mang lại hiệu kinh tế cao so với việc sử dụng phương pháp truyền thống khác, góp phần bảo vệ an ninh lương thực chống biến đổi khí hậu tồn cầu Do phương pháp khắc phục hạn chế việc sản xuất hạt giống hàng năm như: suất hạt kém, giá thành cao, hạt nẩy mầm kém, yếu (Nguyễn Bảo Toàn, 2005; Lâm Ngọc Phương, 2012) 2.5 Ảnh hƣởng mật độ trồng lƣợng phân đạm đến suất, phẩm chất trái dƣa hấu Mật độ trồng dưa hấu khác vùng miền loại giống, khoảng cách ngắn tức mật độ trồng tăng làm tăng suất dưa hấu không hạt so với mật độ thấp (Motsenbocker and Arancibia, 2002; Walters, 2009; Strang et al., 2005) Phân bón có ý nghĩa việc tăng suất phẩm chất dưa Việc cung cấp đầy đủ đạm làm hoạt động quang hợp cao, sinh trưởng mạnh cho màu xanh đậm Khi tăng nồng độ đạm làm tăng suất trái, độ Brix hàm lượng lycopene dưa hấu Nhưng tăng lượng đạm cao dưa phát triển thân mạnh, xum xuê ảnh hưởng đến độ cứng trở nên mọng nước, chống chịu sâu bệnh yếu, khó đậu trái, trái chín chậm, tích nhiều nước, vị lạt khơng giữ lâu sau thu hoạch Thiếu đạm tăng trưởng kém, lóng ngắn, nhỏ trái nhỏ (Phạm Hồng Cúc, 2007) CHƢƠNG 3: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP Phương pháp thí nghiệm gồm giai đoạn (Hình 3.1) với giai đoạn có thí nghiệm cụ thể sau: 3.1 Cảm ứng tạo thành dƣa hấu tứ bội in vitro colchicine oryzalin dòng dƣa hấu nhị bội 3.1.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hƣởng thời gian xử lý colchicine lên sinh trƣởng dòng dƣa hấu nhị bội TPS TPT in vitro Vật liệu: hạt dưa hấu dòng nhị bội gồm TPS, TPT Trong đó: dòng TPS có nguồn gốc từ giống Sugar Baby với dạng trái tròn hay oval, vỏ xanh đen, ruột đỏ Dòng TPT có nguồn gốc lai tạo từ giống Thành Long với dạng trái oval, vỏ xanh có sọc xanh đậm, ruột đỏ Các dòng phòng thí nghiệm mơn Sinh lý-Sinh hóa cung cấp Hạt dưa hấu dòng nhị bội khử trùng nuôi cấy môi trường MS in vitro Bố trí thí nghiệm: thí nghiệm bố trí theo thể thức nhân tố kiểu hồn toàn ngẫu nhiên gồm mức độ thời gian xử lý colchicine (4, 6, ngày) đối chứng (không xử lý) với lần lặp, lần lặp keo, keo 10 mẫu chồi đỉnh in vitro Các tiêu theo dõi: số lượng khí khẩu/mm2, tỷ lệ có kiểu hình đa bội, tỷ lệ tứ bội kiểm tra phân tích dòng chảy tế bào 3.1.2 Thí nghiệm 2: Ảnh hƣởng thời gian xử lý oryzalin lên sinh trƣởng dòng dƣa hấu nhị bội in vitro Vật liệu: hạt dưa hấu dòng nhị bội gồm TPS, TPB, TPT, TPX Trong đó:dòng TPS dòng TPT thí nghiệm Dòng TPB có nguồn gốc từ giống Bảo Long với dạng trái oval, vỏ màu xanh đen có sọc, ruột đỏ Dòng TPX có nguồn gốc lai tạo từ giống Xuân Lan với dạng trái oval, vỏ màu xanh nhạt có sọc xanh đậm, ruột vàng Các dòng phòng thí nghiệm mơn Sinh lý-Sinh hóa cung cấp Hạt dưa hấu dòng nhị bội khử trùng nuôi cấy mơi trường MS in vitro Bố trí thí nghiệm: thí nghiệm bố trí theo thể thức thừa số nhân tố kiểu hồn tồn ngẫu nhiên gồm dòng dưa hấu nhị bội TPS, TPB, TPT, TPX mức thời gian xử lý oryzalin (48 54 giờ) đối chứng (không xử lý) với lần lặp, lần lặp keo, keo 10 mẫu chồi đỉnh Chỉ tiêu theo dõi: tương tự thí nghiệm 3.2 Thí nghiệm 3: Đánh giá khả tạo chồi sinh trƣởng hai dòng tứ bội TPT TPS mơi trƣờng có bổ sung BA Vật liệu: chồi đơn cấy mơ dòng dưa hấu tứ bội TPT TPS chọn lọc phương pháp phân tích dòng chảy tế bào, ni cấy môi trường MS tuần trước làm vật liệu thí nghiệm Chọn chồi có chiều cao, số tương đối đồng nghiệm thức Bố trí thí nghiệm: thí nghiệm bố trí theo thể thức thừa số nhân tố kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên với nghiệm thức gồm dòng dưa hấu tứ bội TPT, TPS mức nồng độ BA (0; 0,5; mg/L) với lần lặp lại, lần lặp lại keo, keo cấy mẫu Các tiêu theo dõi: số chồi/mẫu, chiều cao chồi, số lá/mẫu gia tăng 3.3 Thí nghiệm 4: Đánh giá khả tạo chồi sinh trƣởng hai dòng tứ bội TPB TPX mơi trƣờng có bổ sung BA Vật liệu: chồi đơn dưa hấu hai dòng tứ bội TPB TPX cấy mơ (tương tự thí nghiệm 3) CHƢƠNG 4: KẾT QUẢ THẢO LUẬN 4.1 Cảm ứng tạo thành dƣa hấu tứ bội in vitro colchicine oryzalin dòng dƣa hấu nhị bội 4.1.1 Mật số khí chồi dƣa hấu đa bội: mật số khí trung bình dưa hấu nhị bội cao có hình thái đa bội dòng dưa hấu Cụ thể: dòng TPS có số khí trung bình nhị bội 233,7±24,4 khí khẩu/mm2, dòng TPB 333,3±24,3 khí khẩu/mm2; dòng TPT 273,3±17,8 khí khẩu/mm2; dòng TPX 324,2±25,7 khí khẩu/mm2; số khí trung bình có hình thái đa bội thấp hơn: dòng TPS 139,5±19,1 khí khẩu/mm 2, dòng TPB 187,6±27,5 khí khẩu/mm2, dòng TPT 184,4±27,6 khí khẩu/mm2, dòng TPX 208±27,2 khí khẩu/mm2 Kết cho thấy có hình thái đa bội có mật số khí chiều dài khí dài nhị bội Kết phù hợp với nghiên cứu Lâm Ngọc Phương Nguyễn Kim Hằng (2010), Nguyễn Văn Hiển (2000) ghi nhận mật số khí dưa hấu TPS nhị bội cao so với đa bội, kích thước khí lại ngắn 4.1.2 Tỷ lệ (%) dƣa hấu TPS TPT có hình thái đa bội sau xử lý colchicine: tỷ lệ đa bội xác định dựa vào kiểu hình đa bội (thân to, to có màu xanh đậm) kết hợp với việc đếm mật số khí để xác định đa bội Kết cho thấy tỷ lệ cao nghiệm thức xử lý colchicine nghiệm thức khơng xử lý colchicine không xảy tượng đa bội Cụ thể: dòng TPS, tỷ lệ đa bội đạt cao nghiệm thức xử lý colchicine ngày (32%) tỷ lệ giảm dần tăng thời gian xử lý colchicine Trong đó, nghiệm thức ngày đạt 18% ngày đạt 12% Đối với dòng TPT, tỷ lệ đa bội đạt cao nghiệm thức xử lý colchicine ngày (25%), nghiệm thức xử lý colchicine ngày đạt tỷ lệ đa bội thấp (19%) nghiệm thức ngày cho tỷ lệ thấp (12%) 4.1.3 Tỷ lệ (%) dƣa hấu TPS, TPB, TPT TPX có hình thái đa bội xử lý oryzalin: tỷ lệ đa bội sau xử lý với oryzalin xác định dựa vào kiểu hình đa bội (thân to, to có màu xanh đậm) kết hợp với mật số khí thấp so với chồi đối chứng Kết cho thấy tỷ lệ cao nghiệm thức có xử lý oryzalin tỷ lệ tăng tăng thời gian xử lý so với nghiệm thức không xử lý (0% đa bội), khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% Cụ thể: dòng TPS, mức 48 đạt 20,7% tỷ lệ có hình thái đa bội 54 đạt 29,1% Tương tự, dòng TPB, đạt 12,9% mức 48 xử lý 16,7% mức 54 Dòng TPT, mức 48 đạt 12,5% mức 54 đạt 19,3% Dòng TPX, 48 xử lý đạt 15,1% 54 đạt 21,4% 4.1.4 Xác định dƣa hấu tứ bội phân tích dòng chảy tế bào Xử lý với oryzalin: sau kiểm tra phương pháp dòng chảy tế bào mẫu nghiệm thức khơng xử lý oryzalin đem phân tích có đỉnh 1C 62,78-nội dung ADN trung bình tế bào tổng số phân tích Ở nghiệm thức 54 cho tứ bội chiếm 4% với đỉnh 1C 121,67 (nội dung ADN tăng gấp đôi so với nhị bội) đa bội tạp chiếm 7% tổng số 74 đa bội phân tích Ở nghiệm thức xử lý oryzalin 48 không cho tứ bội mà toàn bội tạp chiếm 12% tổng số 59 đa bội phân tích Xử lý với colchicine: kết phân tích cho thấy nghiệm thức không xử lý colchicine mẫu nhị bội Ở nghiệm thức có xử lý colchicine 10 ngày hoàn toàn khơng có tứ bội tạp bội (tương ứng với 114 mẫu 83 mẫu phân tích) Ở nghiệm thức có xử lý colchicine ngày tạo tứ bội đạt 9% tổng 44 đem phân tích Tóm lại, việc đa bội hóa chồi đỉnh dưa hấu nhị bội với colchicine oryzalin tạo tứ bội bội tạp Kết phân tích nhận thấy tỷ lệ tứ bội tăng tăng thời gian xử lý loại hóa chất Trong đó, với thời gian xử lý ngắn loại hóa chất khơng tạo tứ bội nào, với colchicine ngày tạo 9% tứ bội với oryzalin 54 tạo 4% tứ bội, xác định phương pháp dòng chảy tế bào Kết tương tự nghiên cứu Nasr et al (2004), thời gian ngày cho hiệu tạo tứ bội cao với colchicine nồng độ 2000 2500 µM/L oryzalin nồng độ 100 µM/L, nồng độ với ngày không tạo tứ bội Tuy nhiên tỷ lệ thấp so với số nghiên cứu, tương tự nghiên cứu Koh (2002), hiệu tứ bội đạt 3,3%-5,5% xử lý chồi dưa hấu với oryzalin (5-60 μM) 4.2 Đánh giá khả tạo chồi sinh trƣởng hai dòng tứ bội TPT TPS mơi trƣờng có bổ sung BA 4.2.1 Số chồi gia tăng: tuần sau cấy (TSKC), Bảng 4.1 cho thấy dòng dưa hấu tứ bội cho số chồi gia tăng khác biệt thống kê mức ý nghĩa 5%, dòng TPS đạt 3,1 chồi dòng TPT đạt 2,1 chồi Nồng độ BA có ảnh hưởng đến số chồi gia tăng, khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% Trong đó, mơi trường có bổ sung BA 0,5 mg/L mg/L cho số chồi gia tăng (3,3-3,6 chồi) cao so với môi trường không bổ sung BA cho số chồi thấp 1,0 chồi Sự tương tác dòng dưa hấu tứ bội nồng độ BA cho số chồi gia tăng dao động từ 0,7 đến 4,3 chồi không khác biệt thống kê Bảng 4.1: Số chồi gia tăng (chồi) dòng dưa hấu tứ bội mơi trường ni cấy có bổ sung BA (mg/L) với nồng độ khác TSKC Nồng độ BA (mg/L) Dòng dưa hấu tứ bội (A) Trung bình (A) 0,5 TPT 0,7 2,4 3,3 2,1b TPS 1,4 4,3 3,9 3,1a b a a Trung bình (BA) 1,0 3,3 3,6 FA * FBA ** FA xBA ns CV (%) 36,9 Ghi chú: Các số có chữ theo sau giống cột hàng cột hàng khơng khác biệt thống kê qua phép thử Duncan; ns: không khác biệt thống kê, *: khác biệt thống kê mức ý nghĩa 5%, **: khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% 4.2.2 Chiều cao chồi gia tăng: TSKC chiều cao chồi gia tăng hai dòng dưa hấu tứ bội khác biệt thống kê mức ý nghĩa 5%, dòng TPT 1,25 cm dòng TPS 0,27 cm Mơi trường có hay khơng có bổ sung BA cho chiều cao chồi gia tăng không khác biệt thống kê, dao động từ 0,34 cm đến 1,17 cm Tương tự, khơng có tương tác nồng độ BA dòng dưa hấu tứ bội lên chiều cao chồi, dao động từ 0,23 cm đến 2,12 cm Tóm lại, mơi trường có bổ sung nồng độ BA 0,5 mg/L mg/L cho hệ số nhân chồi cao hơn, chiều cao số gia tăng không khác biệt so với mơi trường khơng có bổ sung BA Kết 11 tương tự nghiên cứu Nguyễn Thị Phương Thảo et al (2010) Okumus et al (2011) 4.3 Đánh giá khả tạo chồi sinh trƣởng hai dòng tứ bội TPB TPX mơi trƣờng có bổ sung BA 4.3.1 Số chồi gia tăng: TSKC nồng độ BA có ảnh hưởng đến số chồi gia tăng, mơi trường có bổ sung nồng độ BA 1,0 mg/L đạt 2,2 chồi cao so với mơi trường có bổ sung BA 0,5 mg/L đạt 1,4 chồi, khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% Tuy nhiên, dòng dưa hấu tứ bội khác cho số chồi gia tăng không khác biệt thống kê (1,8 chồi) Tương tự, tương tác dòng dưa hấu tứ bội nồng độ BA lên số chồi gia tăng 4.3.2 Chiều cao chồi gia tăng: TSKC môi trường có bổ sung BA 0,5 mg/L cho chiều cao chồi gia tăng 0,16 cm 0,27 cm không khác biệt thống kê Tương tự, dòng dưa hấu tứ bội khác cho chiều cao chồi không khác biệt thống kê Sự tương tác dòng dưa hấu tứ bội nồng độ BA không ảnh hưởng đến chiều cao chồi gia tăng Như vậy, mơi trường có bổ sung BA 0,5 1,0 mg/L cho hiệu tạo chồi dòng dưa hấu tứ bội TPB TPX Bên cạnh đó, tương tác nồng độ BA dòng dưa hấu tứ bội cho hệ số nhân chồi không khác biệt thống kê Từ kết cho thấy với mơi trường MS có bổ sung BA mg/L thích hợp nhân chồi dòng tứ bội điều kiện in vitro 4.4 Đánh giá khả tạo rễ, sinh trƣởng dòng tứ bội TPT mơi trƣờng có bổ sung IBA NAA 4.4.1 Số rễ: Bảng 4.2 cho thấy, TSKC mơi trường có bổ sung IBA mg/L cho số rễ cao (6,3 rễ) khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% so với mơi trường khơng có bổ sung IBA (1,9 rễ) Tuy nhiên, môi trường không bổ sung NAA lại cho số rễ cao (6,5 rễ) khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% so với mơi trường có bổ sung NAA (0,2-0,5 mg/L) cho số rễ thấp (2,4-3,6 rễ) Sự tương tác loại auxin IBA NAA có ảnh hưởng đến hình thành rễ, nghiệm thức IBA mg/L khơng kết hợp NAA cho số rễ cao (12,8 rễ), khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% so với nghiệm thức lại (nghiệm thức đối chứng cho số rễ thấp nhất-0,2 rễ) Bảng 4.2: Số rễ/mẫu chồi dưa hấu tứ bội TPT môi trường có bổ sung IBA NAA với nồng độ khác TSKC Nồng độ NAA (mg/L) Nồng độ IBA Trung bình (IBA) (mg/L) 0,2 0,5 c bc b 0,2 2,0 3,7 1,9b a b b 12,8 2,8 3,5 6,3a a b b Trung bình (NAA) 6,5 2,4 3,6 FIBA ** FNAA ** FIBA x NAA ** CV (%) 33,2 Ghi chú: Các số có chữ theo sau giống cột hàng cột hàng khơng khác biệt thống kê qua phép thử Duncan; **: khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% 4.4.2 Chiều dài rễ: TSKC, mơi trường có bổ sung IBA mg/L cho chiều dài rễ cao (3,55 cm), khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% so với môi trường không bổ sung IBA (1,35 cm) Tuy nhiên, với môi trường không bổ sung NAA cho 12 chiều dài rễ cao (3,05 cm), khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% so với mơi trường có bổ sung NAA (0,2-0,5 mg/L) cho chiều dài rễ đạt 2,02-2,28 cm Sự tương tác loại auxin IBA NAA có ảnh hưởng đến chiều dài rễ, khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% Trong đó, nghiệm thức IBA mg/L không kết hợp NAA cho chiều dài rễ cao (5,78 cm), khác biệt thống kê so với nghiệm thức lại, nghiệm thức đối chứng cho chiều dài rễ thấp (0,33 cm) Tóm lại, hai yếu tố IBA NAA có ảnh hưởng đến sinh trưởng, phát triển rễ chồi dưa hấu tứ bội TPT Trong đó, mơi trường có bổ sung IBA 1mg/L cho hiệu tạo rễ chiều dài rễ cao 4.5 Đánh giá khả tạo rễ, sinh trƣởng dòng tứ bội TPS mơi trƣờng có bổ sung IBA NAA 4.5.1 Số rễ: TSKC, mơi trường có bổ sung IBA mg/L cho số rễ cao (8,1 rễ) khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% so với môi trường đối chứng (4,5 rễ) Nồng độ NAA có ảnh hưởng đến số rễ chồi dưa hấu tứ bội TPS, mơi trường có bổ sung NAA 0,5 mg/L cho số rễ cao (7,2 rễ) khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% so với đối chứng (4,8 rễ), không khác biệt với mơi trường có bổ sung NAA 0,2 mg/L (6,8 rễ) Sự tương tác nồng độ IBA NAA có ảnh hưởng đến số rễ, khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% Trong đó, nghiệm thức IBA mg/L không bổ sung NAA cho số rễ cao (9,0 rễ), khác biệt thống kê so với nghiệm thức đối chứng cho số rễ thấp (0,5 rễ) nghiệm thức có bổ sung NAA 0,2 mg/L khơng kết hợp IBA (6,3 rễ), không khác biệt so với nghiệm thức lại 4.5.2 Chiều dài rễ: TSKC mơi trường có bổ sung IBA 1mg/L cho chiều dài rễ cao (3,03 cm), khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% so với môi trường khơng có bổ sung IBA (1,73 cm) Mơi trường khơng bổ sung có bổ sung NAA (0,2-0,5 mg/L) cho chiều rễ không khác biệt thống kê, dao động từ 2,27 cm đến 2,51 cm Có tương tác hai loại auxin IBA NAA lên chiều dài rễ, nghiệm thức IBA 1mg/L không kết hợp NAA cho chiều dài rễ cao (4,31 cm), khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% so với tất nghiệm thức lại, nghiệm thức đối chứng cho chiều dài rễ thấp (0,43 cm) Nhìn chung, dòng dưa hấu tứ bội TPS với mơi trường có bổ sung IBA 1mg/L cho hiệu tạo rễ cao (số rễ, chiều dài rễ) đồng thời khả sinh trưởng chồi cân đối (chiều cao chồi, số lá) Tóm lại, mơi trường MS có bổ sung IBA mg/L cho hiệu tạo rễ cao so với mơi trường khơng có bổ sung IBA cao mơi trường có bổ sung NAA (0,2-0,5 mg/L) Kết tương tự nghiên cứu Khalekuzzaman et al (2012) nhận thấy, môi trường IBA mg/L cho hiệu tạo rễ (100%) số rễ (12 rễ) với chiều dài rễ (7,0 cm) cao dưa hấu Elite F1 Tương tự, theo Okumus et al (2011) mơi trường có bổ sung IBA mg/L cho hiệu tạo rễ cao giống dưa hấu khác quan sát 4.6 Đánh giá khả tạo rễ, sinh trƣởng bốn dòng tứ bội mơi trƣờng có bổ sung IBA 4.6.1 Số rễ: TSKC với dòng dưa hấu khác cho số rễ khác nhau, dòng TPT cho số rễ cao (5,0 rễ), khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% so với dòng lại (2,0-2,3 rễ) 13 4.6.2 Chiều dài rễ: dòng dưa hấu khác cho chiều dài rễ khác TSKC, dòng TPT cho chiều dài rễ cao (1,38 cm), khác biệt thống kê mức ý nghĩa 5% so với dòng lại (0,38-0,48 cm) Tóm lại, mơi trường MS có bổ sung IBA mg/L cho hiệu tạo rễ dòng dưa hấu tứ bội Tuy nhiên hiệu tạo rễ khác dòng tứ bội, xếp thứ tự hiệu tạo rễ dòng tứ bội sau TPT > TPX > TPS > TPB 4.7 Đánh giá, chọn lọc dòng tứ bội cấy mơ lai tạo hạt tam bội đồng 4.7.1 Chiều dài dây, số lá: thời điểm 21 ngày sau ngắt đọt (NSNĐ), dòng TPB cho chiều dài dây thấp (129,32 cm), khác biệt thống kê mức ý nghĩa 5% so với dòng TPT (208,02 cm) dòng TPS (205,5 cm) khơng khác biệt so với dòng TPX (179,91 cm) Có gia tăng mạnh số dòng dưa hấu tứ bội cấy mơ Cụ thể, dòng TPX 33,1 lá, dòng TPS 34,2 lá, dòng TPT 33,1 lá, dòng TPB 30,0 lá, chúng không khác biệt thống kê Dựa kết thống kê thời điểm sinh trưởng xếp hạng thứ tự khả sinh trưởng dòng dưa hấu tứ bội sau: TPS > TPT > TPX > TPB 4.7.2 Số trái lai thành công: với phương pháp lai tạo tay, sau tuyển chọn để trái thu hoạch cho thấy, dòng dưa hấu tứ bội cấy mơ tạo hạt tam bội Tuy nhiên số trái lai thành cơng thấp khác dòng: dòng TPX đạt 35 cây, dòng TPS đạt 23 cây, dòng TPT đạt 21 cây, dòng TPB đạt 15 tổng số 40 lai/mỗi dòng 4.7.3 Khối lƣợng trái suất: khối lượng trái dòng dưa hấu tứ bội cấy mơ dao động từ 1,27 kg đến 1,44 kg chúng không khác biệt thống kê Năng suất dòng dưa hấu tứ bội dao động từ 22,29 tấn/ha đến 26,53 tấn/ha chúng không khác biệt thống kê 4.7.4 Phẩm chất trái: Bảng 4.3 cho thấy, có khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% dòng tứ bội cấy mơ độ Brix Dòng TPX cho độ Brix cao (9,3%), khác biệt thống kê so với ba dòng lại, dòng TPS dòng TPB cho độ Brix thấp (8,2%) Tương tự, có khác biệt thống kê mức ý nghĩa 5% dòng tứ bội cấy mơ độ dày vỏ Trong đó, dòng TPB cho độ dày vỏ cao (0,86 cm) khác biệt so với dòng TPT cho độ dày vỏ thấp (0,73 cm), lại khơng khác biệt so với dòng TPS (0,85 cm) dòng TPX (0,81 cm) 4.7.5 Số hạt tam bội/trái: hạt tam bội hạt có phần đầu vỏ hạt phình to khơng nhọn hạt nhị bội tứ bội, đơi lại có phần dơi vỏ hạt (Hình 4.1) Đây đặc điểm phân biệt hạt tam bội với hạt nhị bội tứ bội Kết Bảng 4.3 cho thấy, số hạt tam bội/trái dòng tứ bội khác biệt thống mức ý nghĩa 1%, dòng TPT cho số hạt cao (57,5 hạt), khác biệt thống kê so với dòng lại (34,3 - 40,0 hạt) Tóm lại, dòng tứ bội cấy mô trồng Hậu Giang cho thấy có khác biệt khả sinh trưởng (chiều dài dây, số lá) nên suất trái không khác biệt, nhiên phẩm chất trái (độ Brix, độ dày vỏ) lại khác biệt thống kê Kết hợp tiêu sinh trưởng, suất phẩm chất trái xếp thứ tự dòng tứ bội cấy mơ từ cao đến thấp sau: TPX>TPT >TPB>TPS dòng lai tạo thành công cho hạt tam bội 14 Bảng 4.3: Độ Brix (%), độ dày vỏ (cm) số hạt tam bội/trái dòng dưa hấu tứ bội cấy mơ trồng Hậu Giang Dòng tứ bội Độ Brix (%) Độ dày vỏ (cm) Số hạt tam bội/trái TPX 9,3a 0,81a 37,3b TPS 8,2c 0,85a 34,3b TPT 8,9b 0,73b 57,5a TPB 8,2c 0,86a 40,0b Mức ý nghĩa ** * ** CV (%) 1,32 3,89 14,72 Ghi chú: Các số có chữ theo sau giống cột khơng khác biệt thống kê qua phép thử LSD; *: khác biệt thống kê mức ý nghĩa 5%, **: khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% TPX TPS TPB TPT Hình 4.1: Hạt tam bội bốn dòng dưa hấu tứ bội 4.8 Đánh giá khả tạo chồi sinh trƣởng dòng tam bội cấy mơ mơi trƣờng có bổ sung BA 4.8.1 Số chồi gia tăng: TSKC, số chồi gia tăng dòng tam bội có khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% Trong đó, dòng TriP1 cho số chồi cao (3,3 chồi) khác biệt thống kê so với dòng TriP2 TriP4, khơng khác biệt so với dòng TriP3 Nồng độ BA có ảnh hưởng đến số chồi gia tăng, khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1%, mơi trường có bổ sung BA 0,5 mg/L cho số chồi gia tăng cao (3,9 chồi) khác biệt so với mơi trường có bổ sung BA mg/L (3,7 chồi) mơi trường khơng có bổ sung BA cho hệ số nhân chồi thấp (0,8 chồi), không khác biệt so với mơi trường có bổ sung BA mg/L (3,8 chồi) Có tương tác dòng dưa hấu tam bội với nồng độ BA lên số chồi gia tăng, khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% Nghiệm thức dòng TriP3 ni cấy mơi trường có bổ sung BA mg/L dòng TriP4 ni cấy mơi trường có bổ sung BA 0,5 mg/L cho số chồi gia tăng cao (4,7 chồi), khác biệt thống kê so với nghiệm thức lại, nghiệm thức khơng có bổ sung BA dòng tam bội cho số chồi gia tăng thấp (0,7-1,0 chồi) 4.8.2 Chiều cao chồi gia tăng: TSKC chiều cao chồi gia tăng dòng dưa hấu tam bội có khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% Dòng TriP2 cho chiều cao gia tăng cao (1,26 cm), khác biệt thống kê so với dòng lại Nồng độ BA có ảnh hưởng đến chiều cao gia tăng, mơi trường khơng có bổ sung BA cho chiều cao gia tăng cao (1,36 cm), khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% so với môi trường có bổ sung BA (0,5; 1; mg/L) Sự tương tác nồng độ BA 15 dòng dưa hấu tam bội cho chiều cao gia tăng khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% Nghiệm thức dòng TriP2 nuôi cấy môi trường không bổ sung BA cho chiều cao chồi gia tăng cao 2,71 cm có giảm chiều cao chồi nghiệm thức có bổ sung BA (0,5-2 mg/L) dòng dưa hấu tam bội Tóm lại, mơi trường có bổ sung chất điều hòa sinh trưởng BA (0,5-2 mg/L) cho hiệu nhân chồi cao gấp 3-4 lần so với môi trường không bổ sung BA dòng dưa hấu tam bội, đặc biệt mơi trường MS có bổ sung BA mg/L cho hiệu nhân chồi cao Bên cạnh đó, sinh trưởng khác dòng tam bội khác nhau, dòng TriP1 TriP2 cho số chồi tương đối số chiều cao chồi cân đối so với dòng lại 4.9 Đánh giá khả tạo chồi, sinh trƣởng dòng dƣa hấu tam bội TriP1 mơi trƣờng có bổ sung BA than hoạt tính 4.9.1 Số chồi gia tăng: TSKC, nồng độ BA mơi trường ni cấy có ảnh hưởng đến số chồi gia tăng dưa hấu tam bội Cụ thể: nồng độ BA mg/L cho 2,9 chồi, khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% so với đối chứng nồng độ BA 0,5 mg/L (1,4-2,6 chồi) không khác biệt so với môi trường có bổ sung BA 1,0 mg/L (2,8 chồi) Than hoạt tính ảnh hưởng đến hệ số nhân chồi Mơi trường khơng bổ sung than trung bình đạt 2,6 chồi, khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% so với mơi trường có bổ sung than trung bình đạt 2,3 chồi Có tương tác nồng độ BA than hoạt tính đến số chồi gia tăng mức ý nghĩa 1% Cụ thể: nghiệm thức BA mg/L - không than cho số chồi cao (3,3 chồi) khác biệt thống kê so với nghiệm thức lại khơng khác biệt so với nghiệm thức BA 1,0 mg/L - khơng than (3,0 chồi) Ngồi ra, nghiệm thức đối chứng không bổ sung than không bổ sung BA cho số chồi thấp (1,2 chồi) Như vậy, nhìn chung mơi trường có bổ sung than cho hệ số nhân chồi giảm Điều than hoạt tính có khả hấp thu hợp chất ức chế, đồng thời hấp thu hợp chất hữu cơ, chất điều hòa sinh trưởng môi trường nuôi cấy (George,1993) Trong vi nhân giống dưa hấu tứ bội nhị bội, môi trường MS bổ sung BA nồng độ mg/L có hiệu cao cho việc hình thành chồi (Kapiel et al., 2004) Tuy nhiên, số chồi đạt thấp so với nhiều báo cáo nhân chồi dưa hấu (Compton et al., 1992) (5-11 chồi); Lâm Ngọc Phương Nguyễn Bảo Vệ (2006) (6-8 chồi) Mặc dù, nghiệm thức mg BA/L cho số chồi nhiều nhất, đa số chồi chồi búp Việc sử dụng BA nồng độ cao để nhân chồi nhà khoa học khuyến cáo rối loạn hình thái quan, tạo nhiều cành, chồi tụ hợp, hình thành dạng cuống thay đổi thường ảnh hưởng liều lượng cao hóa chất thêm vào mơi trường Trong thí nghiệm dưa hấu tam bội nồng độ BA mg/L xuất chồi bất thường (Lâm Ngọc Phương Nguyễn Bảo Vệ, 2006) 4.9.2 Chiều cao chồi gia tăng: TSKC cho thấy than hoạt tính khơng ảnh hưởng đến chiều cao chồi dưa hấu tam bội TriP1 Tuy nhiên, nồng độ BA có ảnh hưởng đến chiều cao chồi khác biệt mức 1% Cụ thể: nghiệm thức đối chứng cho chiều cao gia tăng nhiều (1,4 cm) khác biệt thống kê 1% so với môi trường có bổ sung nồng độ BA (0,5-2 mg/L), mơi trường có nồng độ BA mg/L cho chiều cao gia tăng thấp (0,94 cm) Điều có nghĩa tăng nồng độ BA chiều cao giảm Kết ghi nhận trước đó, có mặt chất điều hòa sinh trưởng chiều cao chồi dưa hấu bị hạn chế 16 (George, 1993) Nhìn chung, nồng độ BA mg/L thích hợp để nhân chồi dưa hấu tam bội TriP1 Thời điểm này, BA ngoại sinh có tác dụng lên việc tạo chồi, kích thích chồi bên nên mẫu cấy dần xuất chồi nhỏ sau phát triển Tuy nhiên, việc kích thích chồi BA khơng nhiều giai đoạn trẻ hóa nên mơi trường không bổ sung BA cho chiều cao số nhiều Tóm lại, với thí nghiệm nhận thấy mơi trường có bổ sung BA cho hiệu nhân chồi cao, tăng từ 2-4 lần so với môi trường không bổ sung BA Theo Vũ Văn Vụ et al (2007) Lê Duy Thành (2000) ghi nhận bên cạnh chất cung cấp dinh dưỡng cho môi trường nuôi cấy, việc bổ sung nhiều chất điều hòa sinh trưởng cần thiết để kích thích sinh trưởng, phát triển phân hóa quan, cung cấp sức sống tốt cho mô, tác dụng lên q trình tổng hợp prơtêin làm tăng cường hoạt tính số enzyme Tuy nhiên dẫn đến tượng sinh trưởng bất thường, nhỏ, cong queo, diệp lục tố…(Debergh and Maene, 1981) để giảm bớt tượng phải giảm hàm lượng cytokinin môi trường cấy kết hợp với nhóm auxin (Compton and Gray, 1993) Chính thế, mơi trường MS bổ sung nồng độ BA 1,0 mg/L thích hợp cho việc nhân chồi dưa hấu tam bội với số chồi khỏe, không bị thủy tinh thể, chiều cao chồi tương đối thấp cytokinine chủ yếu tập trung vào việc phân chia tế bào mô phân sinh chồi bên kéo dãn tế bào hiệu nhân chồi khác dòng dưa hấu tam bội khác 4.10 Đánh giá khả tạo rễ, sinh trƣởng dòng dƣa hấu tam bội in vitro mơi trƣờng có bổ sung IBA 4.10.1 Số rễ: TSKC cho thấy, có hình thành rễ dòng dưa hấu tam bội ni cấy mơi trường MS có bổ sung IBA 2mg/L số rễ dòng có khác biệt thống kê mức ý nghĩa 5% Dòng TriP2 cho số rễ gia tăng cao (2,9 rễ) khác biệt thống kê so với dòng lại 4.10.2 Chiều dài rễ: TSKC cho thấy, chiều dài rễ dòng dưa hấu tam bội cấy mô khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% Trong đó, dòng TriP2 cho chiều dài rễ cao 2,68 cm khác biệt so với dòng lại 4.10.3 Chiều cao chồi gia tăng: có khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% sau tuần nuôi cấy chiều cao chồi gia tăng dòng dưa hấu tam bội Trong đó, dòng TriP2 cho chiều cao chồi gia tăng cao (1,59 cm) khác biệt so với dòng tam bội lại Tóm lại, ni cấy dòng dưa hấu tam bội điều kiện in vitro mơi trường MS có bổ sung nồng độ IBA mg/L cho hiệu rễ Tuy nhiên hiệu rễ (số lượng, chiều dài) thấp hiệu khác dòng tam bội khác nhau, dòng TriP2 cho số rễ, chiều dài rễ cao với chiều cao chồi số cân đối 4.11 Đánh giá khả tạo rễ, sinh trƣởng dƣa hấu tam bội TriP1 mơi trƣờng có bổ sung IBA than hoạt tính 4.11.1 Số rễ: Bảng 4.4 cho thấy TSKC, có khác biệt thống kê số rễ nồng độ IBA khác mơi trường có hay khơng có bổ sung than hoạt tính Trong đó, nồng độ IBA từ 0,5 đến mg/L cho số rễ cao khác biệt có ý nghĩa 5% so với hai nồng độ lại Số rễ mơi trường có than (2 g/L) cao (6,4 rễ) so với môi trường không than (3,2 rễ), khác biệt thống kê mức 5% Có tương tác nồng độ IBA than hoạt tính khác biệt thống kê mức ý nghĩa 5% Trong đó, nghiệm thức IBA 0,5 mg/L có bổ sung than g/L cho số rễ cao 17 (lần lượt 7,2 7,5 rễ) khác biệt thống kê với tất nghiệm thức không than nghiệm thức IBA 0,2 mg/L có than, khơng khác biệt với nghiệm thức khơng có IBA có bổ sung IBA mg/L với bổ sung than hoạt tính g/L Bảng 4.4: Số rễ dưa hấu tam bội TriP1 mơi trường có IBA than hoạt tính khác TSKC Hàm lượng than (g/L) (A) Nồng độ IBA (mg/L) Trung bình (B) (B) e abc 1,6 6,0 3,8b e bcd 0,2 1,9 5,2 3,5b 0,5 4,5cd 7,2a 5,8a cd a 1,0 4,3 7,5 5,9a 2,0 3,8d 6,3ab 5,1a b a Trung bình (A) 3,2 6,4 F(IBA) * F(than) * F(IBA × than) * CV (%) 27,57 Ghi chú: Các số có chữ theo sau giống cột hàng cột hàng khơng khác biệt thống kê qua phép thử Duncan; *: khác biệt thống kê mức ý nghĩa 5% 4.11.2 Chiều dài rễ: có khác biệt rõ rệt chiều dài rễ TSKC mơi trường có than (6,61 cm) không than (2,08 cm); nồng độ IBA cao (0,5; 1; mg/L) IBA thấp Kết phù hợp với nhiều kết rễ in vitro Có tương tác nồng độ IBA than hoạt tính lên chiều dài rễ, khác biệt thống kê mức ý nghĩa 5% Trong đó, nghiệm thức có bổ sung than g/L cho số rễ cao so với môi trường không bổ sung than tất nồng độ IBA, mơi trường đối chứng cho chiều dài rễ thấp Như vậy, tiêu rễ có khác biệt rõ rệt nghiệm thức có than khơng than, nghiệm thức có nồng độ IBA cao IBA thấp khác biệt có ý nghĩa thống kê Do đó, mơi trường có than dù nồng độ IBA số rễ chiều dài rễ khác biệt so với khơng có than Tương tự, mơi trường có IBA cao (0,5; 1; mg/L) cho số rễ, chiều dài rễ khác biệt ý nghĩa so với nồng độ IBA thấp cho dù có than hay khơng 4.11.3 Chiều cao chồi: TSKC cho thấy, chiều cao chồi mơi trường có than cao (4,53 cm) so với không than (3,35 cm), không khác biệt thống kê mức ý nghĩa 5% Nồng độ IBA từ đến mg/L cho chiều cao chồi gia tăng khơng khác biệt thống kê Có tương tác nồng độ IBA than hoạt tính lên chiều cao chồi, khác biệt thống kê mức ý nghĩa 5% Trong đó, nghiệm thức có bổ sung than tất nồng độ IBA nghiệm thức không than với IBA 0,2-1,0 mg/L cho chiều cao chồi cao nghiệm thức đối chứng thấp (2,6 cm) Tóm lại, qua thí nghiệm cho thấy mơi trường có bổ sung IBA có thêm than hoạt tính 2,0 g/L làm tăng hiệu rễ dưa hấu tam bội so với môi trường không bổ sung IBA Số rễ chiều dài rễ tăng tăng nồng độ IBA từ 0,2 đến 1,0 mg/L lại có xu giảm tăng đến 2,0 mg/L, sử dụng IBA mg/L để so sánh hiệu rễ dòng dưa hấu tam bội lại cho số rễ thấp Do đó, mơi trường có bổ sung IBA 0,5 mg/L kết hợp với than hoạt tính 2,0 g/L mơi trường kích thích rễ thích hợp cho dưa hấu tam bội điều kiện in vitro 18 Kết hợp thí nghiệm tạo chồi tạo rễ nhận thấy, dòng tam bội khác cho khả tạo chồi rễ khác Trong đó, dòng tam bội TriP1 TriP2 cho hiệu nhân chồi tạo rễ cao so với dòng TriP3 TriP4 với chiều cao chồi số cân đối (thể sinh trưởng tốt) Chính dòng tam bội TriP1 TriP2 lựa chọn để tiếp tục khảo sát đánh giá khả sinh trưởng đồng so với giống tam bội Mặt Trời Đỏ cấy mô 4.12 Đánh giá khả sinh trƣởng, phát triển, suất phẩm chất trái dòng dƣa hấu tam bội (3x) cấy mơ ngồi đồng 4.12.1 Chiều dài dây dƣa: Bảng 4.5 cho thấy Cần Thơ, chiều dài dây dòng/giống dưa hấu tam bội cấy mơ khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 1% 21 ngày sau ngắt đọt (NSNĐ) Trong đó, dòng TriP1 cho chiều dài dây cao 242,51 cm, dòng TriĐC thấp 166,93 cm Tuy nhiên Hậu Giang, chiều dài dây dòng/giống dưa hấu tam bội cấy mô không khác biệt thống kê, dao động từ 186,6 cm đến 240,4 cm Bảng 4.5: Chiều dài dây (cm) số lá/dây dòng/giống dưa hấu tam bội cấy mơ trồng Bình Thủy, Cần Thơ Châu Thành, Hậu Giang Cần Thơ Hậu Giang Dòng/giống Chiều dài dây (cm) Số lá/dây Chiều dài dây (cm) Số lá/dây TriĐC 166,93c 46,6b 204,2 33,9 TriP1 242,51a 73,6a 186,6 27,7 TriP2 230,19b 68,4a 240,4 34,3 F ** ** ns ns CV (%) 1,14 8,17 11,83 10,31 Ghi chú: Các số có chữ theo sau giống cột khơng khác biệt thống kê qua phép thử LSD; ns: không khác biệt thống kê, **: khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% 4.12.2 Số lá/dây: Cần Thơ, số lá/dây dòng/giống dưa hấu tam bội cấy mơ khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% 21 NSNĐ Trong đó, dòng TriP1 cho số lá/dây cao 73,6 lá, khác biệt so với giống TriĐC có số lá/dây thấp 46,58 lá, lại không khác biệt so với dòng TriP2 Tuy nhiên Hậu Giang, số lá/dây dòng/giống dưa hấu tam bội cấy mơ khơng khác biệt thống kê, dao động từ 27,7 đến 34,3 (Bảng 4.5) Xét sinh trưởng dòng dưa hấu tam bội cấy mơ tạo thành so với giống đối chứng (TriĐC), xếp thứ tự sau: TriP1>TriP2 >TriĐC Cần Thơ Kết Enujeke (2013) cho thấy có khác biệt chiều dài dây số lá/dây giống dưa hấu nghiên cứu hai năm 2011-2012 Nhưng Hậu Giang, sinh trưởng dòng/giống lại khơng khác biệt 4.12.3 Khối lƣợng trái: Bảng 4.6 cho thấy Cần Thơ, dòng/giống dưa hấu khối lượng trái khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê, biến động từ 2,14 kg đến 2,20 kg Nhưng Hậu Giang, dòng TriP1 cho khối lượng trái cao 2,24 kg khác biệt hồn tồn có ý nghĩa thống kê mức 5% so với giống đối chứng (1,73 kg) dòng TriP2 (1,55 kg) 4.12.4 Năng suất: Bảng 4.6 cho thấy Cần Thơ, suất dòng/giống dưa hấu tam bội cấy mơ không khác biệt thống kê, dao động từ 31,76 đến 36,54 tấn/ha Kết tương tự ghi nhận báo cáo Joe et al (2012) so sánh giống dưa hấu không hạt Kết phù hợp với nghiên cứu Strang et al (2004) so sánh giống dưa hấu không hạt mini Kentucky nhận thấy khơng có khác biệt thống kê khối lượng trái chúng Nghiên cứu 19 Lâm Ngọc Phương Nguyễn Thanh Thịnh (2009) nhận thấy hai giống dưa không hạt V1 V2 in vitro có khối lượng trái 3,42 kg 2,85 kg, khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Tuy nhiên, Hậu Giang suất dòng/giống dưa hấu tam bội cấy mơ khác biệt thống kê mức ý nghĩa 5% Trong đó, dòng TriP1 cho suất cao 36,91 (tấn/ha) khác biệt hoàn toàn so với giống đối chứng (28,49 tấn/ha) dòng TriP2 (25,56 tấn/ha) Bảng 4.6: Khối lƣợng trái (kg) suất (tấn/ha) dòng/giống dƣa hấu tam bội cấy mơ trồng Bình Thủy, Cần Thơ Châu Thành, Hậu Giang Cần Thơ Hậu Giang Dòng/giống Khối lượng trái Năng suất Khối lượng trái Năng suất (kg) (tấn/ha) (kg) (tấn/ha) TriĐC 2,20 36,54 1,73b 28,49b a TriP1 2,17 35,48 2,24 36,91a TriP2 2,14 31,76 1,55b 25,56b F ns ns * * CV (%) 2,52 9,95 6,65 6,47 Ghi chú: Các số có chữ theo sau giống cột khơng khác biệt thống kê qua phép thử LSD; ns: không khác biệt thống kê, *: khác biệt thống kê mức ý nghĩa 5% 4.12.5 Phẩm chất trái Độ Brix: Bảng 4.7 cho thấy Cần Thơ, dòng/giống dưa hấu tam bội cấy mô cho độ Brix dao động từ 8,73% đến 9,69%, không khác biệt thống kê Tương tự, Hậu Giang độ Brix dòng dưa hấu tam bội cấy mô dao động từ 8,52% đến 9,67% không khác biệt thống kê Theo Maynard (2001) vị yếu tố chất lượng dưa hấu chúng có liên quan đến số TSS Kết tổng hợp từ nhiều nghiên cứu cho thấy độ Brix dưa hấu tam bội dao động khoảng 8,31- 13,4% (Kee and Ernest, 2005) Độ dày vỏ: Bảng 4.7 cho thấy Cần Thơ, độ dày vỏ dòng/giống dưa hấu tam bội cấy mô thay đổi từ 0,81 mm đến 0,95 mm, không khác biệt thống kê Kết tương tự trồng Hậu Giang, độ dày vỏ dòng dưa hấu tam bội cấy mơ biến động từ 0,82 mm đến 0,94 mm, không khác biệt thống kê Một số nghiên cứu cho thấy, độ dày vỏ dưa hấu giúp vỏ bị thâm có ích q trình vận chuyển thô, độ dày vỏ dưa hấu thay đổi tùy theo giống (Thomas et al., 2012) Bảng 4.7: Phẩm chất trái dòng/giống dưa hấu tam bội cấy mơ trồng Bình Thủy, Cần Thơ Châu Thành, Hậu Giang Cần Thơ Hậu Giang Dòng/Giống Độ Brix (%) Độ dày vỏ (mm) Độ Brix (%) Độ dày vỏ (mm) TriĐC 8,98 0,81 8,52 0,94 TriP1 8,73 0,96 9,67 0,82 TriP2 9,69 0,85 9,24 0,83 Mức ý nghĩa ns ns ns ns CV (%) 14,77 16,22 4,91 27,72 Ghi chú: Các số có chữ theo sau giống cột khơng khác biệt thống kê qua phép thử LSD; ns: không khác biệt thống kê 20 Từ kết cho thấy, sinh trưởng (chiều dài dây, số lá/dây, kích thước lá) Cần Thơ dòng TriP1 tốt dòng TriP2 đối chứng Hậu Giang dòng tương đương Về khối lượng suất trái, Cần Thơ dòng tương đương, Hậu Giang dòng TriP1 tốt dòng TriP2 đối chứng Về phẩm chất trái (độ Brix độ dày vỏ) dòng cho kết tương đương địa điểm khảo sát (Hình 4.2) Trong đó, dòng TriP1 với dạng trái oval, vỏ màu xanh nhạt có sọc xanh đậm, ruột vàng; dòng TriP2 với dạng trái oval, vỏ màu xanh có sọc xanh đậm, ruột đỏ Hình 4.2: Mặt cắt trái dưa dòng tam bội TriP1, TriP2 giống TriĐC cấy mô 4.13 Khảo sát ảnh hƣởng lƣợng phân đạm (N) mật độ trồng lên suất, phẩm chất dòng dƣa hấu tam bội TriP1 cấy mô 4.13.1 Khối lƣợng trái: Bảng 4.8 cho thấy, lượng phân đạm khác cho khối lượng trái khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1%, bón phân đạm với lượng 200 kg/ha cho khối lượng trái (2,20 kg) cao so với bón 150 kg N/ha (1,33 kg) Mật độ trồng ảnh hưởng đến khối lượng trái, khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1%, với 10.000 cây/ha cho khối lượng trái (2,11 kg) cao so với mật độ thấp (8.750 cây/ha) (1,42 kg) Tương tự, tương tác lượng phân đạm mật độ trồng có ảnh hưởng đến khối lượng trái, khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% Nghiệm thức M2N2 (10.000 cây/ha + 200 kg N/ha) cho khối lượng trái cao (2,65 kg) khác biệt thống kê so với nghiệm thức lại, nghiệm thức M1N1 (8.750 cây/ha + 150 kg N/ha) cho khối lượng trái thấp (1,09 kg) 4.13.2 Năng suất: Bảng 4.8 cho thấy, lượng phân đạm có ảnh hưởng đến suất khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% Trong đó, bón 200 kg N/ha cho suất cao so với bón 150 kg N/ha Trong loại phân vơ đạm loại phân quan trọng nhất, việc cung cấp đầy đủ đạm làm tăng hoạt động quang hợp, sinh trưởng mạnh dẫn đến suất tăng, tăng lượng đạm lên 1% suất tăng lên 0,25% (Phạm Hồng Cúc, 2007; Nguyễn Lê Hiệp, 2010) Mật độ trồng có ảnh hưởng đến suất khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% Trong đó, mật độ cao cho suất đạt 19,42 tấn/ha cao so với mật độ trồng thấp 13,06 tấn/ha Kết tương tự nghiên cứu Hồng Thị Thái Hòa et al (2012) nhận thấy, với mật độ trồng 9.000 cây/ha cho suất hiệu kinh tế cao với mật độ trồng từ 6.000 đến 8.000 cây/ha Có tương tác lượng phân đạm mật độ trồng lên suất, khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% Cụ thể, nghiệm thức M2N2 cho suất cao (23,19 tấn/ha), khác biệt thống kê so với nghiệm thức lại, nghiệm thức M1N1 cho suất thấp (10,85 tấn/ha) 21 4.13.3 Phẩm chất trái Độ Brix: Bảng 4.8 cho thấy, lượng phân đạm có ảnh hưởng đến độ Brix, khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% Trong đó, bón 200 kg N/ha cho độ Brix (10,45%) cao so với 150 kg N/ha (9,18%) Một nghiên cứu dưa hấu Hắc Mỹ Nhân trồng Cần Thơ cho thấy, lượng phân đạm tăng từ 100 đến 200 kg N/ha độ Brix tăng theo từ 10,84% đến 11,16%, không khác biệt thống kê (Trần Thị Ba et al., 2004) Mật độ trồng có ảnh hưởng đến độ Brix, khác biệt thống kê mức 5% Cụ thể: mật độ M2 (10.000 cây/ha) cho độ Brix đạt 10,12% cao mật độ M1 (8.750 cây/ha) đạt 9,51% Tuy nhiên, tương tác lượng phân đạm mật độ trồng cho độ Brix dao động từ 8,96% đến 10,82%, không khác biệt thống kê Bảng 4.8: Khối lượng, suất phẩm chất trái dòng dưa hấu tam bội TriP1 cấy mô với lượng phân đạm mật độ trồng khác Khối lượng trái Năng suất Độ Brix Độ dày vỏ Nhân tố (kg) (tấn/ha) (%) (cm) Phân đạm (N) N1 1,33b 13,25b 9,18b 0,80 (kg/ha) N2 2,20a 19,23a 10,45a 0,97 M1 1,42b 13,06b 9,51b 0,92 Mật độ trồng M2 2,11a 19,42a 10,12a 0,85 M1N1 1,09d 10,85c 8,96 0,94 M1N2 1,75b 15,28b 10,07 0,90 N x mật độ M2N1 1,57c 15,66b 9,41 0,65 M2N2 2,65a 23,19a 10,82 1,04 FN ** ** ** ns Fmật độ ** ** * ns F(N x mật độ) ** ** ns ns CV (%) 3,11 3,03 4,13 22,9 Ghi chú: Các số có chữ theo sau giống cột hàng cột hàng khơng khác biệt thống kê qua phép thử Duncan; ns: không khác biệt thống kê, *: khác biệt thống kê mức ý nghĩa 5%, **: khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% Trong đó, N1: 150 kg N/ha, N2: 200 kg N/ha, M1: 8.750 cây/ha M2: 10.000 cây/ha Độ dày vỏ: Bảng 4.8 cho thấy, bón 150 kg N/ha 200 kg N/ha cho độ dày vỏ dao động từ 0,80 cm đến 0,97 cm, không khác biệt thống kê Mật độ trồng cho độ dày vỏ dao động từ 0,85 cm đến 0,92 cm, không khác biệt thống kê Tương tự, tương tác lượng phân đạm mật độ trồng cho độ dày vỏ dao động từ 0,65 cm đến 1,04 cm; không khác biệt thống kê Nhìn chung, với lượng phân 150-200 kg N/ha mật độ trồng 8.750 cây/ha 10.000 cây/ha có ảnh hưởng đến tiêu trái suất Chính thế, kết hợp 200 kg N/ha mật độ 10.000 cây/ha cho hiệu suất phẩm chất trái cao Kết phù hợp với nghiên cứu Maluki et al (2015) nhận thấy gia tăng lượng phân đạm (40, 80, 120 kg N/ha) cho khối lượng trái, suất tổng chất rắn hòa tan cao có ý nghĩa thống kê hai năm thử nghiệm 2012-2013 giống TPS Nguyên nhân, đạm làm tăng hoạt động quang hợp cây, giúp sinh trưởng phát triển tốt, thiếu đạm cho lóng ngắn, nhỏ, trái nhỏ (Nguyễn Mạnh Chinh Nguyễn Đặng Nghĩa, 2006; Jalali and Jafari, 2012) Bên cạnh đó, việc tăng mật độ trồng đồng nghĩa thu hẹp khoảng cách hàng làm tăng suất dưa không hạt giống thử 22 nghiệm năm 2006 2007, việc tăng mật độ làm tăng chi phí sản xuất chúng cho lợi nhuận cao sau thu hoạch (Walters, 2009) Tóm lại, hai loại hóa chất đa bội hóa colchicine oryzalin kết hợp với cơng nghệ nuôi cấy mô tạo tứ bội đạt tỷ lệ 4%-9% nguồn vật liệu để tiến hành lai tạo hạt dưa hấu tam bội Vi nhân giống điều kiện in vitro khắc phục nhược điểm hạt giống tứ bội tam bội (khó lưu trữ, sức nảy mầm kém…) sản xuất hàng loạt đồng mặt di truyền, bệnh rút ngắn thời gian nhân dòng, mang lại hiệu kinh tế so với phương pháp truyền thống Do đó, quy trình sản xuất dưa hấu tam bội cấy mơ (Hình 4.3) sở cho công tác chọn tạo nhân dòng tam bội khác Hạt nhị bội nảy mầm in vitro Xử lý đỉnh sinh trưởng với colchicine 0,01% ngày oryzalin 0,004%-54 Xác định tứ bội phương pháp dòng chảy tế bào Nhân dòng dưa hấu tứ bội in vitro - MS+BA (1,0 mg/L) - MS+ IBA (1 mg/L) Trồng tứ bội cấy mô lai tạo hạt tam bội Hạt dưa hấu tam bội Nhân dòng tam bội in vitro - MS+BA (1,0 mg/L) - MS+ IBA (0,5 mg/L) + 2g/L than Cây tam bội cấy mơ Hình 4.3: Qui trình sản xuất dưa hấu tam bội cấy mơ 23 CHƢƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 5.1 Kết luận (1) Xử lý đa bội hóa colchicine 0,01% oryzalin 0,004% điều kiện in vitro lên đỉnh sinh trưởng chồi dưa hấu nhị bội tạo tứ bội Trong đó, xử lý colchicine ngày đạt 9% tứ bội xử lý oryzalin 54 đạt 4% tứ bội (2) Môi trường MS có bổ sung BA 1,0 mg/L cho hiệu nhân chồi bổ sung IBA mg/L cho hiệu rễ tốt dòng tứ bội, nhiên dòng cho khả cảm ứng khác Các dòng tứ bội cấy mơ trồng Hậu Giang lai tạo thành công hạt tam bội (3) Mơi trường MS có bổ sung BA 1,0 mg/L thích hợp cho việc nhân chồi dưa hấu tam bội với số chồi khỏe, không bị thủy tinh thể Môi trường bổ sung IBA 0,5 mg/L than hoạt tính 2,0 g/L thích hợp cho việc tạo rễ dòng dưa hấu tam bội Trong đó, hai dòng tam bội TriP1 TriP2 cho khả cảm ứng cao điều kiện in vitro Hai dòng dưa hấu tam bội TriP1, TriP2 giống đối chứng cấy mô trồng thử nghiệm ngồi đồng hai điểm Bình Thủy, Cần Thơ Châu Thành, Hậu Giang Kết cho thấy, hai dòng TriP1 (ruột vàng) TriP2 (ruột đỏ) cho kết dưa hấu tam bội tương đương với giống đối chứng khối lượng trái, suất phẩm chất trái (độ Brix độ dày vỏ) Cần Thơ Tuy nhiên, Hậu Giang dòng TriP1 cho khối lượng trái, suất cao TriP2 giống đối chứng phẩm chất trái tương đương (4) Với lượng phân đạm 200 kg/ha kết hợp mật độ trồng 10.000 cây/ha cho suất cao so với 150 kg N/ha mật độ trồng 8.750 cây/ha 5.2 Đề xuất Colchicine oryzalin cho hiệu tạo tứ bội mầm chồi dưa hấu nhị bội in vitro, oryzalin cho hiệu tứ bội nồng độ thấp thời gian ngắn colchicine, kết chưa cao Đề nghị tiếp tục nghiên cứu để nâng cao tỷ lệ tứ bội mầm chồi dưa hấu nhị bội oryzalin Áp dụng “qui trình sản xuất dưa hấu tam bội cấy mơ” (Hình 4.3) để lai tạo nhân nhanh nhiều dòng dưa hấu tam bội khác, góp phần đa dạng hóa nguồn giống dưa hấu có xuất xứ Việt Nam Tiếp tục mở rộng khảo sát sinh trưởng, phát triển dòng dưa hấu tam bội TriP1 TriP2 cấy mô vùng sinh thái khác đồng sông Cửu Long 24 ... thế, đề tài Nghiên cứu chọn tạo biện pháp nâng cao suất, phẩm chất dòng dƣa hấu (Citrullus vulgaris L.) tam bội in vitro thực 1.1 Mục tiêu luận án Mục tiêu chính: tạo dưa hấu tam bội Mục tiêu... thể: i) Tạo dòng dưa hấu tứ bội, tam bội ii) Xác định mơi trường thích hợp nhân nhanh dòng dưa hấu tứ bội, tam bội iii) Đánh giá sinh trưởng, suất chất lượng trái dòng dưa hấu tam bội tạo điều... tứ bội phương pháp dòng chảy tế bào Nhân dòng dưa hấu tứ bội in vitro - MS+BA (1,0 mg/L) - MS+ IBA (1 mg/L) Trồng tứ bội cấy mô lai tạo hạt tam bội Hạt dưa hấu tam bội Nhân dòng tam bội in vitro