Bài viết trình bày thông báo một số kết quả khảo sát về sự biến động của hàm lượng DAB và 19-Hydroxy Baccatin III trong lá cây thông đỏ Taxus Wallichiana Zucc. mọc tự nhiên ở tỉnh Lâm Đồng theo thời gian thu hái trong năm nhằm xác định thời gian thu nguyên liệu tốt nhất.
29(4): 49-51 12-2007 Tạp chí Sinh học biến động hàm lợng 10-deacetyl baccatin III 19-hydroxy baccatin III theo thời gian thu hái thông đỏ Taxus wallichiana Zucc tỉnh lâm đồng nguyễn hữu toàn phan, nguyễn thị diệu Phân viện Sinh học Đà Lạt nguyễn công hào, châu văn minh Viện Hóa học hợp chất thiên nhiên Việt Nam, có loài thông đỏ Taxus chinensis (Pilg.) Rehd phân bố số tỉnh miền Bắc Taxus wallichiana Zucc tỉnh Lâm Đồng [1] Lá loài thông đỏ nguồn nguyên liệu để phân lập 10deacetyl baccatin III (DAB) - chất đầu cho bán tổng hợp taxol taxotere (hai số hoạt chất chống ung th hàng đầu giới) [2, 3] Do phải khảo sát thời điểm thu hái để có hàm lợng DAB cao nhất, Hala N ElSohly cs [4] khảo sát biến động hàm lợng số hợp chất taxoit theo thời gian thu hái (tháng 6-9 năm 1993 tháng 310/2004) thông đỏ T x media Hicksii trồng công ty Zelenka Nursery (Grand Haven, MI, Mỹ) Kết cho thấy, thông đỏ T x media Hicksii thu hái vào tháng có hàm lợng DAB cao (0,0913 %) Trong báo này, thông báo số kết khảo sát biến động hàm lợng DAB 19-hydroxy baccatin III (HB) thông đỏ Taxus wallichiana Zucc mọc tự nhiên tỉnh Lâm Đồng theo thời gian thu hái năm nhằm xác định thời gian thu nguyªn liƯu tèt nhÊt HO O H3C CH3 OH CH3 HO CH3 HO H BzO O AcO 10-deacetyl baccatin III AcO O H3C OH OH CH3 HO CH3 HO H BzO O AcO 19-hydroxy baccatin III i ph−¬ng pháp nghiên cứu Đối tợng nghiên cứu thông đỏ (Taxus wallichiana Zucc.) thu Núi Voi huyện Đức Trọng, tỉnh Lâm Đồng Lá thông đỏ đợc thu hái từ đến 13 ngày bao gồm toàn xanh Lá thông đỏ tơi đợc sấy khô nhiệt độ < 45oC, nghiền mịn, chiết lần với metanol bể siêu âm (4 giờ/lần chiết với tỷ lệ khô/metanol = 1/5) Gộp chung dịch chiết metanol, cô thu hồi dung môi dới áp suất thấp dạng cao tổng hợp Hòa tan cao dung dịch metanol - nớc 20% Lọc, loại bỏ phần không tan chiết loại chất màu với nhexan, sau chiết tổng hợp chất taxoit với cloroform Dịch chiết cloroform đợc cô thu hồi dung môi đến cắn khô Cắn khô từ dịch chiết cloroform đợc hòa tan metanol theo tỷ lệ 0,1-0,4 g cắn khô/5 ml metanol để tiến hành phân tích định lợng DAB HB máy sắc ký láng cao ¸p (HPLC) Agilent 1100 sư dơng cét Zorbax Eclipse XDB-C18 víi hƯ dung m«i (metanol/n−íc = 65/35) 49 ii kết nghiên cứu Độ ẩm thông đỏ theo thời gian thu hái năm Lá thông đỏ đợc thu từ 20 cá thể mọc tự nhiên, cá thể đợc thu 100 g tơi Thời gian thu hái từ tháng 5/2005 đến tháng 4/2006 Hỗn hợp tơi, sau đợc sấy khô, đợc xác định độ ẩm, tiến hành chiết toàn phần với metanol Độ ẩm thông đỏ theo thời gian đợc trình bày hình 72 70 Độ Èm (%) 68 66 64 62 60 58 10 11 12 Thời gian (tháng) Hình Độ ẩm thông đỏ theo thời gian thu hái năm Độ ẩm nguyên liệu tăng mạnh giai đoạn từ tháng đến tháng 10 sau giảm dần, phù hợp với mùa ma tỉnh Lâm Đồng Đồng thời, giai đoạn chồi phát triển non thông đỏ Hàm lợng DAB HB thông đỏ theo thời gian thu hái năm 0.045 Hàm lợng (%/lá khô) 0.040 0.035 0.030 0.025 DAB 0.020 HB 0.015 0.010 0.005 0.000 10 11 12 Thời gian thu hái (tháng) Hình Sự biến động hàm lợng DAB HB thông đỏ theo thời gian thu hái năm Cắn khô đợc hòa tan metanol HPLC để định lợng DAB HB máy sắc ký lỏng cao áp, có kèm với mẫu chuẩn Kết định lợng hợp chất theo 12 tháng liên tục đợc trình bày hình 50 Vào tháng 6-7, phát triển mạnh nên hàm lợng hai hoạt chất DAB HB tăng mạnh giai đoạn sau giảm dần đến tháng cuối năm Do vậy, để thu đợc thông đỏ với hàm lợng hai hoạt chất DAB HB cao nhất, cần thu vào giai đoạn tháng 6-7 Kết tơng tự nh nghiên cứu ElSohly loài T x media Hicksii Hàm lợng 19-hydroxybaccatin III thông đỏ khô tăng dần theo thời gian thu hái từ tháng đến tháng sau giảm dần tháng 12 Hàm lợng cao (0,032%) đạt đợc thu hái vào tháng III kết luận tài liệu tham khảo Độ ẩm thông đỏ (Taxus wallichiana Zucc.) dao động khoảng 59-71% đạt cao thời gian từ tháng đến tháng Hàm lợng 10-deacetylbaccatin III thông đỏ khô tăng dần theo thời gian thu hái từ tháng đến tháng 6-7 sau giảm dần tháng 12 Hàm lợng cao (0,037%) đạt đợc thu hái vào tháng tháng Bộ Khoa học, Công nghệ Môi trờng, 1996: Sách Đỏ Việt Nam (phần thùc vËt) Nxb Khoa häc vµ Kü thuËt, Hµ Néi J N Denis et al., 1988: J A C S., 110: 5917 Nguyễn Hữu Toàn Phan cs., 1998: Tạp chí Hóa học, 36(2): 76-78 Hà Nội Hala N ElSohly et al., 1997: Phytochemical Analysis, Vol.8: 124-129 SEASONAL EFFECTS ON THE 10-DEACETYLBACCATIN III AND 19-HYDROXYBACCATIN III CONTENTS OF THE NEEDLES OF TAXUS WALLICHIANA ZUCC IN LAMDONG PROVINCE NGUYEN HUU TOAN PHAN, NGUYEN THI DIEU THUAN NGUYEN CONG HAO, CHAU VAN MINH SUMMARY In Vietnam, there are two Taxus species (Taxus chinensis (Pilg.) Rehd in Northern provinces and Taxus wallichiana Zucc in Western Highland) Previous examinations show that content of taxoid compounds in the needles of T chinensis is lower than in the needles of T wallichiana, so that materials from T chinensis don’t meet the requirements of pharmaceutical industry Taxus wallichiana Zucc (Taxaceae) only distributes in Lamdong province of Vietnam Its needles were collected monthly from May 2005 to April 2006 The humidity of fresh needles was variety from 59 to 71 percent depending on seasonal conditions Uniformly dried samples of Taxus wallichiana Zucc were extracted and analyzed for their contents of two taxanes, namely 10-deacetylbaccatin III (DAB) and 19-hydroxybaccatin III (HB) using high pressure liquid chromatography instrument with the standard compounds The content of DAB in the dried needles gradually increases according to the harvest time from January to July and sequentially decreases to the end of year The maximum content of DAB is 0.037% in the dried needles collected in June or July The lowest level was reached in February – March (0.012%) Similarity, the highest content of HB is 0.032% based on dried needles collected in June The minimum level of HB is 0.014% on needles collected in January Data obtained from a seasonal study showed that the best time to harvest of the yew clippings for the production of these two taxanes is approximately one month from the start of flushing (June to July) At that time the clippings have reached reasonable size to provide high quality biomass Ngµy nhËn bµi: 16-7-2007 51 ... giảm dần, phù hợp với mùa ma tỉnh Lâm Đồng Đồng thời, giai đoạn chồi phát triển non thông đỏ Hàm lợng DAB HB thông đỏ theo thời gian thu hái năm 0.045 Hàm lợng (% /lá khô) 0.040 0.035 0.030 0.025... thời gian từ tháng đến tháng Hàm lợng 10-deacetylbaccatin III thông đỏ khô tăng dần theo thời gian thu hái từ tháng đến tháng 6-7 sau giảm dần tháng 12 Hàm lợng cao (0,037%) đạt đợc thu hái vào...ii kết nghiên cứu Độ ẩm thông đỏ theo thời gian thu hái năm Lá thông đỏ đợc thu từ 20 cá thể mọc tự nhiên, cá thể đợc thu 100 g tơi Thời gian thu hái từ tháng 5/2005 đến tháng 4/2006