Lựa chọn phương pháp thích hợp để tạo cộng hợp, xác định mật độ gắn OTA lên albumin huyết thanh bò (Bovine Serum Albumin, BSA) và đánh giá đáp ứng kháng thể tạo thành của cộng hợp OTA-BSA tự tạo so với OTA-BSA thương mại.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học CHẾ TẠO CỘNG HỢP OCHRATOXIN-ALBUMIN HUYẾT THANH BÒ BẰNG PHƯƠNG PHÁP ESTER HOẠT HĨA TRONG MƠI TRƯỜNG MICELLE Dương Ngọc Diễm*, Đỗ Thị Kim Yến*, Nguyễn Thị Nguyệt Thu* TÓM TẮT Đặt vấn đề: Ochratoxin A (OTA) hapten nên khơng có tính sinh miễn dịch Do đó, cần gắn OTA với chất có tính sinh miễn dịch để kích thích tạo kháng thể đặc hiệu Việc lựa chọn phương pháp cộng hợp xác định hiệu suất cộng hợp đóng vai trò đặc biệt quan trọng để chế tạo cộng hợp tốt dự đoán sớm kết gây miễn dịch Mục tiêu: Lựa chọn phương pháp thích hợp để tạo cộng hợp, xác định mật độ gắn OTA lên albumin huyết bò (Bovine Serum Albumin, BSA) đánh giá đáp ứng kháng thể tạo thành cộng hợp OTA-BSA tự tạo so với OTA-BSA thương mại Phương pháp nghiên cứu: Thiết kế thực nghiệm, OTA cộng hợp vào BSA phương pháp ester hoạt hóa môi trường micelle Xác định hiệu suất cộng hợp OTA lên BSA trực tiếp phương pháp hấp phụ quang, so sánh với phương pháp gián tiếp sử dụng 2,4,6-trinitrobenzensulfonic acid (TNBS) So sánh OTABSA tự tạo với OTA-BSA thương mại (3OTA/BSA theo công bố nhà sản xuất) cách gây miễn dịch thỏ đánh giá khả đáp ứng cột sắc kí lực miễn dịch (immuno affinity chromatography, IAC) Kết quả: OTA cộng hợp lên BSA với mật độ gắn cộng hợp OTA-BSA xác định phương pháp hấp phụ quang 5OTA/BSA Phương pháp TNBS không xác định mật độ gắn OTA lên BSA nhiễu phổ OTA Dung lượng cột IAC tương ứng OTA-BSA tự tạo thương mại 150 ng 50 ng Kết luận: Phương pháp hấp phụ quang đơn giản thích hợp để xác định hiệu suất cộng hợp OTA lên BSA Phương pháp cộng hợp môi trường micelle tạo cộng hợp OTA-BSA với tỉ lệ gắn 5OTA/BSA hiệu giá kháng thể cao so với OTA-BSA thương mại (3OTA/BSA) Từ khóa: cộng hợp OTA-BSA, ester hoạt hóa, micelle ngược, TNBS ABSTRACT PREPARE OF OTA-BSA CONJUGATE BY ACTIVATED ESTER METHOD IN THE MICELLAR MEDIUM Duong Ngoc Diem, Đo Thi Kim Yen, Nguyen Thi Nguyet Thu * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Vol 23 - No 3- 2019: 117 – 123 Background: Ochratoxin (OTA) is hapten that only elicit an immune response when attached to a large carrier protein such as BSA with a relevant method To prepare an effective hapten-protein conjugate for the desired immune response, it is important to select an optimize conjugate method and characterize the resulting hapten-protein conjugates and to determine the hapten density on carrier protein Objectives: OTA conjugated to Bovin serum albumin (BSA) Determination of the molar ratio and evaluation of immune response of OTA-BSA vs commercial conjugate Methods: Experimental design, coupling OTA with BSA by the activated ester method in the micellar medium The OTA-BSA conjugates were determined by direct spectrophotometry and compare with indirect method using TNBS Immune responses of OTA-BSA conjugate and commercial OTA-BSA were compared by using immune affinity chromatography column (IAC) * Viện Pasteur Thành phố Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: ThS Dương Ngọc Diễm ĐT: 0909966780 Email: ngocdiem99s@yahoo.com 117 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 23 * Số * 2019 Results: OTA was successfully conjugated to BSA The OTA/BSA molar ratio of the conjugate by spectrophotometric method was 5OTA/BSA TNBS method gave no data because of interfering of OTA spectrum The IAC capacity of self-produced and commercial OTA-BSA conjugate was 150 and 50 ng, respectively Conclusions: The spectrophotometric method was relevant and simple to detemine the molar ratio of OTABSA conjugate The OTA-BSA conjugate prepared in the micellar medium gave the ratio 5OTA/BSA and the antibody activity was higher than the commercial OTA-BSA (3OTA/BSA) Keywords: OTA-BSA conjugate, activated ester method, reversed micellar, TNBS method gây miễn dịch Để kiểm tra hiệu suất cộng hợp, ĐẶT VẤN ĐỀ sử dụng phương pháp đo độ hấp phụ trực tiếp Các phân tử nhỏ (hapten) độc tố vi nấm, cộng hợp OTA-BSA bước sóng đặc trưng kháng sinh, … khơng có tính sinh miễn dịch nên OTA so sánh với chuẩn OTA Một không tạo đáp ứng miễn dịch động phương pháp gián tiếp khác sử dụng vật thí nghiệm tiêm trực tiếp(3) Do đó, cần để xác định số lượng nhóm -NH2 tham gia cộng hợp chúng với protein mang có tính cộng hợp phản ứng trinitrophenyl hóa với sinh miễn dịch để kích thích tạo kháng thể Một 2, 4, - trinitrobenzensulfonic acid (TNBS)(4) quy trình cộng hợp lý tưởng tạo liên Mục tiêu nghiên cứu kết ổn định, cộng hợp khơng bị hoạt tính (2) Lựa chọn phương pháp thích hợp để tạo dễ thực Hapten trường hợp cộng hợp, xác định mật độ gắn OTA lên BSA ochratoxin (OTA) độc tố vi nấm, tan đánh giá đáp ứng kháng thể tạo thành nước nên trình cộng hợp thực cộng hợp OTA-BSA tự tạo so với OTA-BSA dung môi Một phương pháp tối ưu thương mại phát triển cộng hợp hapten vào albumin huyết bò (bovine serum albumin, ĐỐI TƯỢNG- PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU BSA) phương pháp ester hoạt hóa Đối tượng nghiên cứu mơi trường micelle(5) Việc sử dụng mơi trường Động vật thí nghiệm: thỏ có số ưu điểm: (a) protein ưa nước Ochratoxin A, AOT (Docusate sodium salt), hapten kỵ nước dễ dàng kết hợp thành dung BSA, DCC (N,N’-dicyclohexyl carbodiimide), dịch đồng protein hòa tan AOT NHS (N-hydroxysuccinimide), TNBS cộng micelle hapten nằm lượng dung môi hợp OTA-BSA thương mại (tỉ lệ gắn mol OTA/ lớn; (b) protein giữ nguyên cấu trúc chức mol BSA) cung cấp Sigma micelle; (c) protein bị biến tính có Dung mơi hữu (octane, N,N’-dimethyl thể dễ dàng tách khỏi hỗn hợp phản ứng formamide (DMF), acetone) đệm phosphate, phương pháp tủa với acetone; (d) số lượng phân carbonate đạt chuẩn phân tích tử hapten liên kết với phân tử BSA kiểm sốt thể tích micelle dựa lượng nước thêm vào dung dịch micelle Mật độ OTA cộng hợp thông số quan trọng để xác định hàm lượng chất lượng kháng thể tạo thành Hiệu giá kháng thể đặc hiệu cao hình thành số lượng hapten tối ưu protein mang - 30 phân tử(2) Chính vậy, đánh giá hiệu suất cộng hợp đóng vai trò đặc biệt quan trọng để lựa chọn cộng hợp tốt dự đoán sớm kết 118 Phương pháp nghiên cứu Thiết kế nghiên cứu Thực nghiệm so sánh Cộng hợp Ochratoxin A vào BSA phương pháp ester hoạt hóa mơi trường micelle ngược Hòa tan 10 mg OTA 330 l dung môi DMF chứa 6,1 mg DCC 4,5 mg NHS Để dung dịch phản ứng nhiệt độ phòng Ly tâm, thu nước Hút 2,5 ml dung dịch BSA 13 mg/ml Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 23 * Số * 2019 đệm phosphate, pH = 7,5 cho vào ml dung dịch Docusate sodium salt 0,3 M/Heptane Sau đó, thêm 330 l OTA ester hóa vào hỗn hợp BSA Khuấy dung dịch Tủa dung dịch sau cộng hợp thể tích acetone Ly tâm, thu tủa Hòa tan tủa dung dịch PBS Nồng độ dung dịch cộng hợp OTABSA xác định phương pháp Bradford với chất chuẩn BSA Thí nghiệm đối chứng OTA-BSA (-) thực song song với BSA điều kiện xác định Xác định số phân tử OTA gắn lên phân tử BSA cộng hợp OTA-BSA tạo thành Phương pháp hấp phụ quang trực tiếp Chuẩn bị dung dịch OTA ppm, OTABSA chứng âm cộng hợp OTA-BSA Mỗi dung dịch lặp lại lần Tiến hành quét phổ từ 200-550 nm để quan sát thay đổi phổ hấp phụ dung dịch OTA-BSA So sánh mức độ hấp phụ chuẩn OTA OTA cộng hợp OTA-BSA để tính số phân tử OTA gắn phân tử BSA Số phân tử OTA phân tử BSA = × ẩ × ẩ × ×[ ] Trong đó: AOTA-BSA: độ hấp phụ OTA-BSA bước sóng OTA AOTA chuẩn: độ hấp phụ OTA chuẩn (OTA chuẩn): nồng độ OTAchuẩn (mg/ml) (OTA-BSA): nồng độ OTA-BSA (mg/ml) 66000: trọng lượng phân tử BSA (g/mole) 403,81: trọng lượng phân tử OTA (g/mole) Phương pháp gián tiếp sử dụng TNBS Cho vào ống nghiệm dung dịch sau: 0,5ml TNBS 0,01%, 0,5ml Na2SO3 0,05M, 0,5ml NaHCO3 0,1 M, pH 8,5, 0,25ml mẫu OTABSA 0,2mg/ml Thực lặp lại lần Ủ 70°C 15 phút, tránh sáng Để nguội đến nhiệt độ phòng Đo dung dịch bước sóng 402nm (quét 250 - 550 nm) Hiệu suất cộng hợp OTA lên BSA tính theo cơng thức sau: Nghiên cứu Y học Hcộng hợp (%) = ứ Số phân tử OTA BSA = Hcộng hợp x35* Field Code Changed 100 ứ phân tử (*) Trên phân tử BSA có 35 nhóm NH2 tham gia phản ứng Ống đối chứng thực song song lặp lại tương tự chứa TNBS đệm tương ứng Tạo kháng thể kháng OTA Gây miễn dịch thỏ cộng hợp OTABSA tự tạo thương mại Hai nhóm thỏ gây miễn dịch da lần cộng hợp OTA-BSA với hàm lượng 100, 75, 50 g tá chất Mũi tiêm tá chất toàn phần cách tuần tá chất bán phần tuần sau mũi tiêm cuối, thu máu kiểm tra diện kháng thể kháng OTA Một nhóm thỏ gây miễn dịch tương tự, sử dụng cộng hợp OTA-BSA thương mại Kiểm tra kháng thể kháng OTA Tinh chế kháng thể ammonium sulfate từ huyết thỏ gây miễn dịch (25 ml huyết thanh/thỏ) Đối với kháng thể thỏ thực sau: Loại bỏ kháng thể kháng BSA cột CNBr-Sepharose 4B-BSA Cộng hợp kháng thể sau tinh chế lên gel Sepharose (10 mg kháng thể/ml gel) Nén vào cột sắc ký 0,1 ml gel Cho mẫu trắng (dung dịch đệm khơng có OTA) dung dịch đệm có OTA với lượng 500 ng qua hai cột sắc kí lực miễn dịch bắt OTA khác (cột IAC) Phân tích dịch thu sau giai đoạn rửa giải từ hai cột IAC phương pháp HPLC với đầu dò huỳnh quang KẾT QUẢ Cộng hợp OTA vào BSA OTA cộng hợp vào BSA phương pháp ester hoạt hóa mơi trường micelle Sau cộng hợp, OTA-BSA thu lại cách 119 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 23 * Số * 2019 tủa dung môi hữu nên OTA dư sau phản ứng loại bỏ Nồng độ OTA-BSA sau phản ứng định lượng phương pháp Bradford với chất chuẩn BSA hiệu suất thu hồi BSA đạt 28,87% Như phần lớn BSA bị qua bước tủa dung môi hữu Bảng 1: Hiệu suất thu hồi BSA sau phản ứng cộng hợp (n=3) Lượng BSA phản ứng (mg) Lượng BSA thu lại sau phản ứng theo Bradford (mg) Hiệu suất thu hồi BSA (%) 33 9.384 lượng phân tử OTA gắn phân tử BSA Kết xác định trường hợp phân tử OTA/phân tử BSA, cao so với cộng hơp OTA-BSA thương mại (3 phân tử OTA/phân tử BSA) (hình 2) Phương pháp sử dụng TNBS khơng xác định hiệu suất cộng hợp độ hấp phụ OTA-BSA sau phản ứng với TNBS cao độ hấp phụ OTA-BSA chứng âm với TNBS hàm lượng BSA (hình 3) 28.44 Sau cộng hợp vào BSA, mật độ gắn OTA lên BSA xác định theo hai phương pháp hấp phụ quang trực tiếp gián tiếp sử dụng TNBS Phương pháp hấp phụ quang thông qua việc quét phổ từ 250 - 550nm cho thấy đỉnh phổ đặc trưng OTA dịch chuyển tương ứng với dung dịch có pH khác pH 4,0, pH 7,0 pH 8,5 (hình 1) Căn vào dịch chuyển đỉnh phổ OTA tăng mật độ quang tương ứng, chọn dung dịch OTA-BSA pH 8,5 để xác nhận diện OTA BSA sử dụng kết quét phổ pH 8,5 để ước tính số Hình 1: Phổ hấp phụ OTA dung dịch đệm pH 4,62, pH pH 8,5 (n=3) b a Hình 2: Phổ hấp phụ OTA, OTA-BSA (+) OTA-BSA (-) đệm phoshat pH (a) đệm NaHCO3 pH 8,5 (b) 120 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học thực tiếp qui trình gây miễn dịch để thu kháng thể có lực cao kháng nguyên gây miễn dịch Kháng thể tạo thành tinh chế, loại bỏ kháng thể kháng BSA sử dụng tạo cột IAC (mỗi kháng thể thỏ làm cột) Xác định khả tóm bắt OTA cột IAC phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao với đầu dò huỳnh quang Kết tóm bắt OTA cột IAC từ cộng hợp OTA-BSA tự tạo thương mại 150ng 50ng (Bảng 2) Bảng 2: Khả tóm bắt OTA cột IAC từ OTA-BSA tự tạo thương mại (n=3) Hình 3: Phổ hấp phụ sau phản ứng TNBS OTABSA (+), OTA-BSA (-) blanc (n=3) Khả đáp ứng miễn dịch cộng hợp OTA-BSA tự tạo thương mại Để đánh giá hiệu cộng hợp OTABSA tự tạo, cộng hợp OTA-BSA tự tạo (5OTA/BSA) thương mại (3OTA/BSA) gây đáp ứng miễn dịch nhóm thỏ (3 thỏ cho nhóm) Tất thỏ gây miễn dịch cho phản ứng dương với kháng nguyên BSA (hình 4) Các thỏ chọn IAC từ OTA-BSA IAC từ OTA-BSA tự tạo thương mại Số phân tử OTA/BSA Nồng độ kháng thể 10 10 (mg/ml gel) Thể tích gel cột 0.1 0.1 (ml) Lượng OTA qua cột 500 500 (ng) Dung lượng bắt OTA 150 50 (ng) Huyết thỏ trước gây miễn dịch Huyết thỏ sau mũi tiêm nhắc lại thứ BSA Hình 4: Phản ứng khuếch tán kép thạch BSA huyết thỏ trưng OTA so sánh với chuẩn OTA Một BÀNLUẬN phương pháp gián tiếp sử dụng để Cộng hợp OTA vào BSA xác định số lượng nhóm -NH2 tham gia cộng Cộng hợp sử dụng để sản xuất kháng hợp phản ứng trinitrophenyl hóa với 2, 4, thể đặc hiệu với hiệu giá cao nên chứa 5-30 phân - trinitrobenzensulfonic acid (TNBS)(4) tử hapten liên kết với phân tử protein Phương pháp hấp phụ quang thông qua việc mang(2) Hapten trường hợp độc tố quét phổ từ 250 - 550nm cho thấy đỉnh phổ đặc vi nấm ochratoxin, tan nước nên trưng OTA dịch chuyển tương ứng với trình cộng hợp thực mơi trường dung dịch có pH khác Đỉnh OTA (5) micelle Số lượng OTA gắn lên BSA xác acid yếu pH 4.0 ~330nm, dung định phương pháp đo hấp phụ quang trực dịch trung tính pH 7,0 330nm 380nm, dung tiếp cộng hợp OTA-BSA bước sóng đặc 121 Nghiên cứu Y học dịch kiềm pH 8,5 ~380nm (hình 1) Sự chuyển dạng phổ thay đổi pH tính chất mở vòng OTA (hình 5) Tại pH 4, OTA tồn dạng proton hóa tương ứng với đỉnh 333nm Tại pH 7, OTA tồn hai dạng: proton hóa dianion tương ứng với đỉnh 333nm 380nm Ở pH 8.5, OTA chuyển sang dạng dianion dạng Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 23 * Số * 2019 OTA mở vòng (OP-OTA) khiến cho phổ OTA dịch chuyển sang bước sóng cao (khoảng 380nm) với tăng hấp phụ mol tương ứng Ở pH 12, tất chuyển dạng OP-OTA phổ dịch chuyển sang bước sóng cao (khoảng 385nm) với tăng mật độ quang tương ứng(1) Hình 5: Sự mở vòng OTA (tạo thành OP-OTA) điều kiện kiềm(1) OTA dung dịch pH kiềm 8,5 có đỉnh hấp Căn vào dịch chuyển đỉnh phổ phụ cao 325nm kết thúc 425nm OTA, chúng tơi chọn dung dịch OTA-BSA (OTA 5ppm có đỉnh hấp phụ 378nm với OD pH 8,5 để xác nhận diện OTA = 0,2053) Hỗn hợp dung dịch phản ứng TNBS BSA sử dụng kết quét phổ pH 8,5 có pH ≈ nên gây nhiễu làm tăng giá trị mật độ để ước tính mật độ gắn OTA lên BSA Tại pH 12, quang xác định hiệu suất cộng hợp dịch chuyển phổ mật độ quang cao TNBS bước sóng khoảng 335nm 402nm OTA Tuy nhiên, giá trị pH chế cho đánh giá sai lầm Do đó, phương pháp phẩm cộng hợp OTA-BSA bị tủa nên không xác hấp phụ quang trực tiếp sử dụng để ước định tỉ lệ cộng hợp tính mật độ gắn OTA lên BSA Đối với dung dịch OTA-BSA chứng âm pH pH 8,5, kết quét phổ cho thấy có đỉnh hấp phụ 280 nm Đối với cộng hợp OTA-BSA: bên cạnh đỉnh 280nm xuất thêm đỉnh 333nm 378nm pH 7, đỉnh 378nm pH 8,5 Đây đỉnh đặc trưng OTA Như vậy, OTA gắn vào BSA phương pháp ester hoạt hóa mơi trường micelle Mật độ gắn OTA lên BSA xác định phân tử OTA/phân tử BSA, cao so với cộng hơp OTA-BSA thương mại (3 phân tử OTA/phân tử BSA) (hình 2) Phương pháp sử dụng TNBS không xác định hiệu suất cộng hợp độ hấp phụ OTA-BSA sau phản ứng với TNBS cao độ hấp phụ OTA-BSA chứng âm với TNBS hàm lượng BSA (hình 4) Như bàn luận, 122 Khả đáp ứng miễn dịch cộng hợp OTA-BSA tự tạo thương mại Thỏ gây đáp ứng miễn dịch với cộng hợp OTA-BSA tự tạo cộng hợp thương mại cho kháng thể đặc hiệu với OTA BSA Giai đoạn đầu gây miễn dịch, lực kháng thể yếu, theo dõi đáp ứng miễn dịch phân tử lớn BSA dễ nhiều so với phân tử nhỏ OTA Sử dụng kỹ thuật khuếch tán kép thạch để kiểm tra đáp ứng với BSA Kỹ thuật có độ nhạy thấp nên thỏ cho kết dương tính thỏ có kháng thể kháng BSA cao (mg/ml) chọn để thu kháng thể Sau mũi tiêm cuối, lực kháng thể cao, tiến hành kiểm tra khả tóm bắt OTA kháng thể phương pháp IAC bao gồm: Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 23 * Số * 2019 tinh chế kháng thể, loại bỏ kháng thể kháng BSA gắn kháng thể lên gel tạo cột IAC Cho OTA chuẩn qua cột xác định khả tóm bắt OTA kháng thể cột IAC phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao với đầu dò huỳnh quang Kết tóm bắt OTA cột IAC từ cộng hợp OTA-BSA tự tạo thương mại 150ng 50ng (Bảng 2) Hiệu giá kháng thể đặc hiệu cao hình thành số lượng hapten tối ưu protein mang - 30 phân tử(2) Như vậy, cộng hợp OTA-BSA tự tạo có mật độ gắn phù hợp theo công bố đáp ứng miễn dịch thỏ tạo kháng thể kháng OTA có hiệu giá cao OTA-BSA thương mại KẾT LUẬN Chúng chế tạo cộng hợp OTABSA phương pháp ester hoạt hóa mơi trường micelle xác định tỉ lệ gắn 5OTA/BSA phương pháp hấp phụ quang trực tiếp Cộng hợp tạo thành có khả tạo kháng thể đặc hiệu với OTA dung lượng tóm Nghiên cứu Y học bắt OTA 150ng cao so với kháng thể từ cộng hợp thương mại 50ng ĐỀ NGHỊ Chúng đề nghị tiến hành cộng hợp lượng lớn để gây miễn dịch tạo kháng thể đặc hiệu với OTA tiền đề cho việc sản xuất cột sắc kí lực miễn dịch bắt OTA dùng tách chiết ochratoxin A thực phẩm TÀI LIỆU THAM KHẢO Bazin I et al (2013) Impact of pH on the Stability and the CrossReactivity of Ochratoxin A and Citrinin Toxins, 5(12): 2324-2340 Hermanson GT (2013) Bioconjugate techniques, 3rd edition Elsevier Science Publishing Co Inc, San Diego, United States Meulenberg EP (2012) Immunochemical Methods for Ochratoxin A Detection: A Review Toxins, 4(4):244-266 Yatsimirskaya EA et al (1993) Preparation of conjugates of progesterone with bovine serum albumin in the reversed micellar medium Steroids, 58(11):547-550 Venkataramana M et al (2015) Development of sandwich dotELISA for specific detection of Ochratoxin A and its application on to contaminated cereal grains originating from India Frontiers in Microbiology, 6(511):1-11 Ngày nhận báo: 08/11/2018 Ngày phản biện nhận xét báo: 04/12/2018 Ngày báo đăng: 10/03/2019 123 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 23 * Số * 2019 GIÁ TRỊ HOẠT ĐỘ ADENOSINE DEAMINASE TRONG ĐÁNH GIÁ HỘI CHỨNG CHUYỂN HÓA Huỳnh Thị Ngọc Ánh*, Võ Nguyên Trung**, Lâm Vĩnh Niên*** TÓM TẮT Đặt vấn đề: Adenosine deaminase xem dấu ấn cho tình trạng đề kháng insulin; nhiên chưa có nghiên cứu giá trị hoạt độ enzyme hội chứng chuyển hoá Mục tiêu: Xác định nồng độ adenosine deaminase người mắc hội chứng chuyển hóa so với nhóm người bình thường khơng có hội chứng chuyển hóa Tìm hiểu mối liên quan tương quan hoạt độ adenosine deaminase với thành tố hội chứng chuyển hóa Phương pháp: 60 bệnh nhân khám sức khỏe có đủ tiêu chuẩn chẩn đốn hội chứng chuyển hóa 60 người bình thường khơng có hội chứng chuyển hóa tiến hành đo hoạt độ adenosine deaminse Kết quả: Giá trị hoạt độ adenosine deaminase bệnh nhân có hội chứng chuyển hóa cao so với nhóm chứng Có mối tương quan thuận hoạt độ adenosine deaminase với nồng độ triglyceid, glucose, chu vi vòng bụng có mối tương quan nghịch hoạt độ adenosine deaminase với nồng độ HDL-C Kết luận: Định lượng hoạt độ adenosine deaminase giúp phát sớm bệnh nhân có hội chứng chuyển hóa góp phần ngăn ngừa biến chứng xảy Từ khố: adenosine deaminase, hội chứng chuyển hóa ABSTRACT VALUE OF SERUM ADENOSINE DEAMINASE LEVEL IN METABOLIC SYNDROME Huynh Thi Ngoc Anh, Vo Nguyen Trung, Lam Vinh Nien * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Vol 23 - No 3- 2019: 124-128 Background: Adenosine deaminase is a marker for insulin resistance; however, the its value on metabolic syndrome has not been investigated Objective: To determine serum adenosine deaminase concentration in people with metabolic syndrome, comparing with the group without metabolic syndrome We also explore the relationship between the activity of adenosine deaminase and the components of metabolic syndrome Methods: 60 outpatients qualified with the criteria for metabolic syndrome and 60 control people were recruited Blood adenosine deaminase activity was determined Result: The level of the adenosine deaminase activity of patients with metabolic syndrome was higher than the control group There was a positive correlation of adenosine deaminase activity with blood triglyceride and glucose levels, abdominal circumference and negative correlation of adenosine deaminase activity with HDL-C levels Conclusion: Determination of adenosine deaminase activity may help to early detect patients with the metabolic syndrome and prevent possible complications Key words: adenosine deaminase, metabolic syndrome *Khoa Xét nghiệm Y học, Trường Đại học Kỹ thuật Y–Dược Đà Nẵng **Khoa Ngoại, Cơ sở 2, BV Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh-Khoa Điều dưỡng Kỹ thuật y học, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh ***Khoa Y, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: PGS.TS.BS Lâm Vĩnh Niên ĐT: 0988846972 Email: nien@ump.edu.vn 124 ... rửa giải từ hai cột IAC phương pháp HPLC với đầu dò huỳnh quang KẾT QUẢ Cộng hợp OTA vào BSA OTA cộng hợp vào BSA phương pháp ester hoạt hóa mơi trường micelle Sau cộng hợp, OTA-BSA thu lại cách... ứng kháng thể tạo thành nước nên trình cộng hợp thực cộng hợp OTA-BSA tự tạo so với OTA-BSA dung môi Một phương pháp tối ưu thương mại phát triển cộng hợp hapten vào albumin huyết bò (bovine serum... trình cộng hợp lý tưởng tạo liên Mục tiêu nghiên cứu kết ổn định, cộng hợp khơng bị hoạt tính (2) Lựa chọn phương pháp thích hợp để tạo dễ thực Hapten trường hợp cộng hợp, xác định mật độ gắn